1 10 171 https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/7d2779ddad6c46950207ea6a7f0b37e4.pdf c3480c1bb80c11113d5559cb09b1e58c PDF Text Text Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza 4 Tropical EN BANANO: CAPACIDAD DIAGNÓSTICA DEL LABORATORIO DEL SENASA M.V. Fernández1, G. Ghersi 1, M. Calderón 1, V. Weingandt 1, A. Rodríguez 2, M. De Gracia 3. 1Dirección de Laboratorio Vegetal, SENASA 2Centro Regional Chaco-Formosa, SENASA 3Dirección de Información Estratégica Fitosanitaria, SENASA Mail: plagas@senasa.gob.ar INTRODUCCIÓN Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza 4 Tropical (Fusarium R4T) es una de las plagas más destructivas del cultivo del banano ya que bloquea el sistema vascular provocando marchitez y muerte de plantas. Categorizada como plaga cuarentenaria ausente en Argentina, su reciente detección en países de América (Colombia, Perú y Venezuela) advierte la importancia de esta nueva amenaza. Se conocen hasta el momento tres razas de F. oxysporum f. sp. cubense (1, 2 y 4), capaces de ocasionar la enfermedad conocida como Mal de Panamá en Musa spp. Pero sólo la R4 afecta a cultivares Cavendish (Grupo AAA) entre otros. En nuestro país se hallan dos regiones productoras: la región NEA, en la provincias de Formosa y Misiones; y la región NOA, en la provincia de Salta y Jujuy. Las variedades empleadas pertenecen al grupo Cavendish, destacando la variedad Nanica por su adaptación a las condiciones climáticas de la región subtropical Argentina. En Formosa además existen algunos cultivos de la “bananita oro” perteneciente al Grupo AAB que es susceptible tanto a Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza 4 como a Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza 1. Ambas razas producen idénticos síntomas. La Raza 1 no representa amenaza para el subgrupo Cavendish (AAA) ya que presenta resistencia al patógeno. OBJETIVOS RESULTADOS A fin de proteger el patrimonio fitosanitario y el sector bananero nacional, el SENASA busca fortalecer el sistema de detección temprana para prevenir el ingreso y establecimiento de esta plaga. Las muestras resultaron negativas para la presencia de Foc R4T mediante la PCR en tiempo real según Aguayo et al., (2017). Los aislamientos y cultivos monospóricos obtenidos fueron identificados como Fusarium oxysporum. En cuanto a la secuenciación de cultivos monospóricos se encontró una identidad superior al 99% con las secuencias correspondientes a Fusarium oxysporum para todos los genes analizados. MATERIALES Y METODOS En diciembre de 2024, en la Provincia de Formosa, el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (Senasa) y el Centro de Validación de Tecnologías Agropecuarias (Cedeva) capacitaron a inspectores fitosanitarios respecto a la enfermedad, sus síntomas y metodología de monitoreo. Complementariamente se tomaron muestras con sintomatología compatible a la enfermedad en bananita oro de la localidad de Laguna Naineck (Figura 1). El tejido vegetal se analizó por qPCR con primers y sonda FWB-R4T para la detección de Fusarium R4T. En paralelo, se obtuvieron aislamientos y cultivos monospóricos los cuales se caracterizaron morfológicamente en base a lo descripto por Nelson et al. (1983) y Leslie & Summerell (2006). Sobre estos se realizó extracción de ADN y posterior secuenciación con los primers TEF, ITS4, ITS5 y β-tubulina. A. B. Figura 2. Aislamientos de Fusarium oxysporum en APG. A. frente. B. reverso. Figura 3. Equipo de monitoreo Senasa - Cedeva DISCUSION Y CONCLUSIONES Se detectó la presencia de Fusarium oxysporum, que resultó negativo para Fusarium R4T por qPCR. El método molecular implementado resultó útil para realizar un diagnóstico rápido a partir de muestras de material vegetal con sospecha de presencia del patógeno. Como resultado de estas acciones, se concluye que el Laboratorio del SENASA se encuentra en condiciones de brindar el respaldo analítico ante la sospecha de la plaga. Referencias Figura 1. Toma de muestras con sintomatología compatible con Foc R4T en bananita oro - García-Bastidas; et al. (2020). Guía Andina Para el Diagnóstico de Fusarium Raza 4 Tropical (RT4) Fusarium oxysporum f.sp. cubense (Fusarium odoratissimum) Agente Causal de la Marchitez por Fusarium en Musáceas (plátanos y bananos). - Leslie, J. F. & Summerell, B.A. (2006) The Fusarium Laboratory Manual. Blackwell Publishing. Print ISBN:9780813819198 |Online ISBN:9780470278376 |DOI:10.1002/9780470278376. - Nelson, P.E.; Toussoun, T. A. & Marasas, W.F.O. (1983) Fusarium species : an illustrated manual for identification. Pennsylvania State University Press. USA. ISBN 0-271-00349-9. � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource <em>Fusarium oxysporum</em> f. sp.<em> cubense</em> raza 4 tropical en banano: capacidad diagnóstica del laboratorio del SENASA Creator An entity primarily responsible for making the resource Fernández, M.V Ghersi, G. Calderón, M.C Weingandt, V Rodríguez, A De Gracia, M Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2024 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Póster académico Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0182 Abstract A summary of the resource. Trabajo presentado en el 6° Congreso Argentino de Fitopatología, realizado en Cipolletti, Argentina entre los días 18 al 20 de Septiembre de 2024.. El presente trabajo describe acciones realizadas por el Laboratorio del SENASA que demuestran condiciones de brindar el respaldo analítico ante la sospecha de la plaga. https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/0e11340a637b06c3ae1f958a0f7cecd4.pdf 4f6f5b8500a167e9d91b10c236c244cb PDF Text Text TESIS PARA ACCEDER AL TÍTULO DE MAGISTER EN INVESTIGACION EN CIENCIAS DE LA SALUD _________________________________________________________________________ Título: ANALISIS PARASITOLOGICO DE IMPORTANCIA SANITARIA EN LOS CARACOLES GIGANTES AFRICANOS (Lissachatina Fulica) EN MISIONES Autor: M.V. Emiliano Reinante Directora de tesis: Dra. TEIBLER, Pamela Co-Directores: M.V. ALVAREZ, Darío; Mgter. VIZCAYCHIPI, Katherina A. Año: 2019 �Dedico esta tesis a Victoria y Alma AGRADECIMIENTOS: Al Director de la Regional COR-MIS (Corrientes Misiones), del Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA): Ing. Agr. Pedro Méndez; al Coordinador de Protección Vegetal (P.V.): Ing. Agr. Carlos Benzo; al Ing. Agr. Enrique Giménez, de la Oficina Local de P.V. de la localidad de Puerto Iguazú, Misiones. Al Coordinador de Inocuidad y Calidad Agroalimentaria: Dr. Marcelo Gorgo. Al personal SENASA destacado en los Puestos de barreras zoofitosanitarias de la provincia de Misiones. A la Facultad de Ciencias Veterinaria de la “Universidad Nacional del Nordeste” (UNNE). Ciudad de Corrientes. A la Facultad de Veterinaria de la “Universidad del Salvador” (USAL), Campus “S.R.G.S.C.” Gdor. Ing. V. Virasoro, Corrientes. 2 �COMO RESULTADO DE ESTE TRABAJO SE REALIZARON LAS SIGUIENTES PRESENTACIONES A CONGRESOS Y PUBLICACIONES:  Sesión Científica, poster en: XVIII Sesiones de Comunicaciones Técnicas y Científicas Estudiantiles - Facultad de Ciencias Veterinarias, UNNE (17 de octubre de 2019, Corrientes, Argentina). Titulo: Caracol gigante africano (Lissachatina fúlica) de Misiones, identificación morfológica y análisis de materia fecal. Autores: Saldivar S; Buyatti M; Acosta F; Reinante E; Álvarez D.  Sesión Científica, ponencia oral y poster en: I Congreso de Ciencias de La Salud (22 al 23 de noviembre de 2019, Universidad Autónoma de Encarnación (UNAE), Encarnación, Paraguay). Titulo: Caracol gigante africano – Lissachatina fúlica – Identificación morfológica y Análisis parasitológico. Misiones, Argentina. Autores: Reinante E; Álvarez D; Teibler P; Vizcaychipi K. (Ver ANEXO I a y b). 3 �RESUMEN El caracol Gigante Africano, Lissachatina fulica, está incluido en la lista de las 100 especies exóticas invasoras más dañinas del mundo, fue reportado por primera vez en Argentina en la ciudad de Puerto Iguazú, provincia de Misiones, Argentina (2010), más tarde, en la ciudad de Corrientes Capital (2013) y en el año 2019 fue detectado en dos localidades más de la provincia de Misiones (Wanda y Eldorado). Esta especie de caracol siendo hermafrodita, crece y se reproduce a gran velocidad, presentando una alta resistencia a variables ambientales, adaptabilidad a diferentes regiones, dieta polífaga y la ausencia o desconocimiento de depredadores naturales contribuyen a su dispersión, pudiendo producir daños importantes en cultivos agrícolas, hortícolas y ecosistemas nativos, como también, actuar de transmisor de parásitos que puedan afectar a la Salud Pública. El siguiente trabajo se realizó en los períodos comprendidos entre los meses de diciembre de 2018 y diciembre de 2019, donde se procedió a la identificación morfológica y recolección de las conchillas de moluscos de la especie Lissachatina fúlica y su materia fecal, para su posterior análisis parasitológico. Todos los moluscos fueron recolectados de la localidad de Puerto Iguazú, con el objetivo de detectar parásitos de implicancia sanitaria (médica y veterinaria). De un total de 201 moluscos se identificaron por género y especie tres grupos: Grupo 1 (G1): Lissachatina fulica n=199; Grupo 2: Helix aspera n:1 y Grupo 3: Bulimus sp. n:1. A todos los individuos del G1 se los clasifico según categorías de tamaños definidas como: Clase 1: individuos recién eclosionados (hasta 10 mm) n= 6; Clase 2: juveniles (10 a 40mm) n=149; Clase 3: adultos jóvenes (40 a 70 mm) n=35 y Clase 4: adultos (> 70 mm) n= 9. Del análisis parasitológico efectuado a los pooles de materia fecal de L. fulica, se encontraron taxones parasitarios predominando larvas del orden Strongylida y larvas de vida libre sin especificar, como también se observaron huevos de nematodes del genero Ancylostoma spp.. Se observaron protozoos correspondientes a quistes de Ameba 4 �spp.; Giardia spp. y ooquistes de Cystoisospora spp. Por su parte en el análisis de baba de 9 ejemplares adultos de L. fulicas se encontraron taxones parasitarios del Orden Strongylidamy del Orden Ascaridea Familia Toxocaridae compatibles con el genero Toxocara spp. En muestras de baba se observaron también cristales de oxalato de calcio. Por otra parte, en 11 (once) localidades fronterizas de la provincia Misiones, se realizaron 92 encuestas, con el fin de evaluar el grado de conocimiento de la población, donde se constató un desconocimiento de la problemática en un 67,4% de los casos encuestados. Teniendo en cuanto que los factores antrópicos son la principal causa de los saltos de dispersión de esta especie, es fundamental realizar trabajos de educación sanitaria para concientizar y prevenir futuras invasiones que conlleven a perjuicios sanitarios, al ecosistema y a la agricultura. En ese contexto, a cada encuestado se entregó material informativo y las recomendaciones brindadas por el parte del Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria de Argentina. Palabras claves: Caracol Gigante Africano – Morfología – Parasitología – Prevención – Vigilancia. 5 �SUMMARY The African Giant snail, Lissachatina fulica, is included in the list of the 100 most harmful invasive exotic species in the world, it was first reported in Argentina in the city of Puerto Iguazú, Misiones province, Argentina (2010), later, in the city of Corrientes Capital (2013) and in 2019 it was detected in two more locations in the province of Misiones (Wanda and Eldorado). This species of snail, being hermaphrodite, grows and reproduces at high speed, presenting high resistance to environmental variables, adaptability to different regions, polyphagous diet, and the absence or lack of knowledge of natural predators that contribute to its dispersion, potentially causing significant damage to agricultural crops, horticultural and native ecosystems, as well as acting as a transmitter of parasites that may affect Public Health. The following work was carried out in the periods between the months of December 2018 and December 2019, where the morphological identification and collection of the mollusk shells of the Lissachatina fulica species and their fecal matter were carried out, for subsequent parasitological analysis. All the molluscs were collected from the town of Puerto Iguazú, with the aim of detecting parasites of sanitary implication (medical and veterinary). From a total of 201 mollusks, three groups were identified by genus and species: Group 1 (G1): Lissachatina fulica n = 199; Group 2: Helix aspera n: 1 and Group 3: Bulimus sp. n: 1. All G1 individuals were classified according to size categories defined as: Class 1: newly hatched individuals (up to 10 mm) n = 6; Class 2: juveniles (10 to 40mm) n = 149; Class 3: young adults (40 to 70 mm) n = 35 and Class 4: adults (> 70 mm) n = 9. From the parasitological analysis carried out on the L. fulica stool poles, parasitic taxa were found, predominantly larvae of the Strongylida order and unspecified free-living larvae, as well as eggs of nematodes of the genus Ancylostoma spp. were observed. Protozoa corresponding to Ameba spp cysts were observed; Giardia spp. and oocysts of Cystoisospora spp. On the other hand, in the analysis of slime of 9 adult specimens of L. fulicas, parasitic taxa of the 6 �Order Strongylidamy of the Order Ascaridea Family Toxocaridae compatible with the genus Toxocara spp. Calcium oxalate crystals were also observed in slime samples. On the other hand, in 11 (eleven) border towns of the Misiones province, 92 surveys were conducted, in order to assess the degree of knowledge of the population, where a lack of knowledge of the problem was found in 67.4% of the surveyed cases. Considering that anthropogenic factors are the main cause of the dispersal jumps of this species, it is essential to carry out health education work to raise awareness and prevent future invasions that lead to health damage, to the ecosystem and to agriculture. In this context, informative material and the recommendations provided by the National Service of Agrifood Health and Quality of Argentina were delivered to each respondent. Keywords: African Giant Snail - Morphology - Parasitology - Prevention - Surveillance. 7 �ÍNDICE GENERAL 1. INTRODUCCIÓN 9 1.1. Presentación. Especies Exóticas Invasoras 9 1.2. Caracol Gigante Africano. Presentación 11 1.2.1. Biología y distribución geográfica 11 1.2.2. Aspecto ambiental/biodiversidad 14 1.2.3. Aspecto socioeconómico 16 1.2.4. Aspectos sanitarios. (Médico y veterinario) 17 2. JUSTIFICACIÓN 21 2.1 Implicancias de Caracol Gigante Africano 21 2.2 Planteamiento del Problema 22 2.3 Preguntas de Investigación 22 3. OBJETIVOS (Gral. y específicos) 23 3.1 Alcance e Hipótesis 23 4. ESTADO ACTUAL DEL TEMA 24 5. MARCO METODOLÓGICO 28 6. RESULTADOS 38 6.1 Estudio de situación, Provincia de Misiones 38 6.2 Análisis morfológico de los moluscos 41 6.3 Estudios parasitológicos 41 6.4 Evaluaciones cualitativas. Conocimiento del Caracol Gigante Africano (L. fulica) por parte de la población de Misiones 43 7. DISCUSION Y CONCLUSIONES 46 8. COMENTARIO FINAL 49 9. BIBLIOGRAFÍA (Citada y consultada) 50 10. ANEXOS 58 8 �1. INTRODUCCIÓN 1.1. Presentación. Especies Exóticas Invasoras Las especies exóticas invasoras (EEI) son animales, plantas o microorganismos transportados más allá de sus áreas de distribución natural que, una vez introducidos, consiguen establecer en el nuevo ambiente poblaciones autosostenibles y avanzar sin ayuda humana directa sobre ambientes con distinto grado de transformación, incluyendo con frecuencia áreas de alto valor para la conservación y la producción. A nivel global son reconocidas como la segunda causa más importante de pérdida de diversidad biológica, sólo precedida por la destrucción de los ambientes naturales. Muchas de ellas son responsables, asimismo, de daños económicos significativos, comportándose como plagas de cultivos, patógenos y parásitos de animales domésticos o competidores de especies de alto valor forrajero. Su introducción con frecuencia resulta también en efectos negativos directos o indirectos sobre la salud Pública. En Argentina los ejemplos de EEI con impactos severos sobre valores ambientales y socio económicos incluyen especies tan diversas como el castor que amenaza los bosques de Tierra del Fuego, los tamariscos que reducen el agua freática en regiones áridas del país, el alga didymo que afecta el valor turístico de los ríos patagónicos y el mosquito transmisor del dengue que amenaza la salud de miles de personas. Las actuales tendencias de globalización del comercio internacional y las consecuencias del cambio climático permiten prever que el problema de las invasiones biológicas aumente (Fisher et al., 2010). Según datos del Sistema Nacional de Información sobre Especies Exóticas Invasoras, existen en el país un total de 654 EEI de plantas, animales, vertebrados, invertebrados, algas y hongos. Organización de las Naciones Unidas para la alimentación y la agricultura (FAO). Recuperado de: www.argentina.gob.ar/ambiente/biodiversidad/exoticasinvasoras (2019). De esta manera, Achatina (Lissachatina) fúlica, (Bodwich, 1822), un gasterópodo terrestre originario del África oriental, en adelante el “Caracol Gigante Africano” (CGA), es 9 �considerado como una de las plagas más perjudiciales (Floyd et al., 2005), formando parte de las 100 EEI más importantes del mundo según la Unión Internacional para la conservación de la Naturaleza. Según Fisher et. al. (2010), el CGA fue introducido a la República Federativa del Brasil de manera intencional y con fines comerciales en el año 1988, a una feria agropecuaria realizada en Curitiba, estado de Paraná y con el objetivo de remplazar al escargot verdadero (Helix aspersa), al no prosperar la producción por falta de mercado, los moluscos fueron abandonados y liberados en distintos ambientes para que luego y gracias a sus características biológicas, el CGA logre en poco tiempo colonizar exitosamente los ecosistemas urbanos y rurales, con un relativo impacto negativo en la flora y fauna nativas y a nivel socioeconómico a menor escala (Virgillito et al., 2015). Uno de los principales intereses en Lissachatina fulica es su implicancia en la salud (Acha & Szyfres, 2003), ya que puede actuar como un hospedador intermediario de Metastrongylidae, nematodos de importancia médica y veterinaria. En la actualidad, el CGA se encuentra oficialmente en cuatro localidades Argentinas, tres de la Provincia de Misiones y la cuarta en la ciudad capital de la provincia de Corrientes. Según el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria de Argentina, de aquí en adelante: SENASA, a través de su Dirección de Vigilancia y Monitoreo de Plagas, dependiente de Dirección Nacional de Protección Vegetal, de aquí en adelante: DNPV, y de la Coordinación de Protección Vegetal (CRPV) -Regional COR-MIS. (Ver Planteamiento del Problema). 10 �1.2. CARACOL GIGANTE AFRICANO. PRESENTACIÓN 1.2.1 Biología y distribución geográfica El gasterópodo terrestre Lissachatina fulica perteneciente al Phylum Mollusca presenta la siguiente clasificación taxonómica: Clasificación Taxonómica: Phylum: Mollusca Clase: Gastropoda Subclase: Pulmonata Orden: Stylommatophora Familia: Achatinidae Género: Achatina Especie: Lissachatina Fulica Nombres comunes: Español: caracol gigante africano. Ingles: giant African snail, giant African land snail, kalutara snail. El CGA en su aspecto morfológico posee una conchilla cónico ovalada pudiendo medir unos 7,5 a 12cm y en casos excepcionales hasta 20cm de largo, con un diámetro de 6cm, pudiendo pesar hasta 600 gramos. Los adultos tienen color castaño claro, con bandas longitudinales anchas castaño oscuras. Los juveniles recién eclosionados y hasta los 4cm poseen una conchilla más clara y solo la mitad de la última vuelta tiene bandas longitudinales más oscuras, aunque más finas que en los adultos. Su abertura, tanto de juveniles como adultos, no es continua y se ve interrumpida por un pliegue o truncamiento de su eje interno o base de la columela (columna) (Fisher et. al., 2010) (Ver ANEXO II). Siendo hermafrodita simultáneo: cada individuo puede producir tanto esperma como óvulos, lo que posibilita la fecundación recíproca pero no puede auto fecundarse, 11 �hacen su puesta de 400 a 500 huevos cada dos meses, pudiendo llegar hasta los 1800 huevos al año, con una viabilidad del 85 a 95% (prácticamente todos eclosionan). Sus huevos miden unos 0,5cm son de color blanco y los entierra hasta 15cm bajo la superficie o los deposita entre las rocas, eclosionando en unas pocas horas hasta los 17 días Dependiendo de las condiciones climáticas, puede alcanzar la madurez sexual alrededor de 5 a 15 meses. Viven hasta 9 años, con 5 o 6 de promedio (Raut & Barker, 2002). Figura 1: Ciclo de vida de Lissachatina fúlica. (Adaptado de www.agrocalidad.gob.ec) 12 �Aunque son especies de zonas cálidas y algo áridas de clima tropical y subtropical, puede adaptarse a cualquier tipo de hábitat, desde las zonas intervenidas hasta los pantanos y zonas urbanas, donde exista vegetación, También, prefiere los ambientes que son ricos en carbonato de calcio, tales como piedra caliza, áreas con cemento u hormigón, incluso tienen el habito de ramonear paredes o conchillas de otros caracoles para obtener calcio (Gutiérrez Gregoric, 2011). Son omnívoros – Polífagos (herbívoros, necrófagos y carnívoro) pero se alimentan sobre todo de materia vegetal y pueden desarrollar la coprofagia (Salomón et. al., 2013), de gran voracidad y presentando hábitos de alimentación nocturna. Ésta especie prefiere sitios no expuestos directamente a la luz solar, con alta humedad ambiental (70%) y temperatura entre los 18 y 20°C. Sobreviven a condiciones adversas enterrándose y cubriendo el caparazón con una membrana o tapón mucoso semipermeable denominado epifragma, que disminuye la pérdida de agua permitiendo superar los períodos de sequía mediante un proceso de estivación, durante el que el animal permanece en el interior de la concha con metabolismo ralentizado e impidiendo el ingreso de posibles depredadores. Características biológicas que en conjunto, contribuyen a que el CGA sea una especie invasora exitosa. Estos caracoles son originarios de la costa africana oriental, en particular SubSahara (Raut & Barker, 2002). En países del continente africano se lo conoce bajo el nombre de “lambí”. La dispersión del CGA alrededor del mundo comenzó a principios del siglo XIX expandiéndose hacia la Costa Este de África, posteriormente a Madagascar, Mauritius y Seychelles. Este molusco ingresó a la India en 1847, expandiéndose luego a casi todo el continente asiático, llegando a Taiwán, Malasia, Japón, Sumatra y Filipinas a fines de 1930 (Valente, 2017). La introducción del CGA en el continente americano se inició en Hawai, en 1939, por una pobladora que provenía de Japón. Expandiéndose luego al continente americano, registrado en Florida (EEUU), a inicios de la década del 70 (Virgillito et. al 2015). 13 �A fines de 1988 se estableció en la Isla Martinica, para luego introducirse en Barbados y Santa Lucia (islas del Caribe). En Sudamérica, existen antecedentes de su presencia en Ecuador (Correoso Rodríguez, 2006), Colombia (De La Ossa-Lacayo et al., 2012), Venezuela, Paraguay (Secretaria del Ambiente Paraguay, S/F), el Perú (Borrero et al., 2009), en la República Federativa del Brasil se encuentra ampliamente distribuido, estando extendido en al menos 24 de los 26 estados brasileños (Maldonado Junior et al., 2010). 1.2.2 Aspecto ambiental/biodiversidad Los costos para el medio ambiente pueden incluir herbivoría; cambios físicos/químicos en agua y suelo por alteración en el ciclo de nutrientes asociado con grandes volúmenes de material vegetal que pasan a través del intestino de L. Fulica (Raut & Barker, 2002), como también por sus cuerpos en descomposición y por el carbonato de calcio de sus conchas que neutraliza los suelos ácidos, alterando las propiedades del mismo y los tipos de plantas que pueden crecer en el suelo (Mead, 1961). Otro punto importante es por desplazamiento de poblaciones de moluscos nativos por competencia (Correoso, 2006). Los caracoles gigantes africanos son competidores de hábitat y alimento, contribuyendo a una disminución en la biodiversidad y a un desequilibrio en el ecosistema (Beltramino et al., 2015). Su comportamiento voraz, gran capacidad reproductiva, el crecimiento acelerado y su resistencia a las condiciones ambientales desfavorables, les otorgan ventajas respecto a los caracoles indígenas. Aunque L. fulica es principalmente vegetariana, hay evidencia de que también puede actuar como un depredador de otros caracoles (Meyer et al., 2008). Es probable que, debido a los altos requerimiento de calcio en la dieta del CGA, éste se alimente del caparazón de otros caracoles. También pueden ocurrir efectos adversos indirectos sobre los gasterópodos autóctonos que pueden surgir a través del control del caracol (por ejemplo: uso indebido de 14 �molusquicidas) o a la destrucción de especies nativas como el Megalobulimus por desconocimiento. Figura 2: Conchilla de ejemplares adultos de Megalobulimus sp. (izquierda) y del CGA. Extraído de Gutiérrez G. & col. “Un gigante africano invade la Argentina” Artículo Vol. 22 número 129. p42. Facultad de Ciencias Naturales y Museo (UNLP). El CGA ha causado la extinción o declinación de especies de caracoles terrestres endémicos en islas (Cowie 1968; Holland et al., 2012). Aunque, es importante resaltar que muchas de las invasiones que han causado los mayores impactos tanto económicos como medioambientales fueron intencionales y planificadas. […]El caracol depredador de América Central, Euglandina rosea, por ejemplo, liberado en muchas islas del Pacífico para 15 �controlar al CGA ha causado la extinción de al menos treinta especies y subespecies endémicas de caracol en esas islas” (Wittenberg & Cock 2001). 1.2.3 Aspecto socioeconómico En la agricultura tropical el costo causado por el CGA es cuatro veces mayor. Primero está la pérdida del rendimiento del cultivo causada por la herbivoría la cual no sucede a gran escala. En varios países éste molusco es considerado una plaga de importancia agrícola, ya que posee una dieta polífaga (Albuquerque et al., 2008). Al no presentar preferencia sobre ningún cultivo en particular es capaz de alimentarse de más de doscientas especies vegetales, varias de éstas cultivables. (Raut & Barker, 2002), aunque si se conocen las plantas con mayor probabilidad de daño, que son las cucurbitáceas y las leguminosas (Mead, 1961). Nuestro país tiene una gran diversidad de especies cultivables y muchas de ellas son citadas en las bibliografías internacionales como hospedadores de ésta plaga, por ejemplo: el maíz (Zea mays), los cítricos (Citrus spp.), la soja (Glycine max) y numerosas hortícolas cómo la lechuga (Lactuca sativa), acelga (Beta vulgaris), entre otras (Virgillito, 2015). En segundo lugar, el daño puede ser causado por la propagación de enfermedades de plantas. L. fulica puede distribuir en sus heces esporas del hongo oomiceto Phytophthora palmivora (Raut & Barker, 2002). En tercer lugar, está el costo asociado con el control de la plaga. La erradicación de estos organismos es costosa (Mead 1961; Raut & Barker, 2002), los cuales pueden variar desde USD 60.000 dólares para un procedimiento de 7 meses, hasta más de USD 700.000 a un millón de dólares, utilizados para la erradicación en el estado de Florida. Simberloff 1996 en, Impacts of Introduced Species in the United States, Consequences 2(2), 13-23, 1996 / (Cap. V, p. 184) “Especies exóticas Invasoras: Una guía sobre las mejores prácticas de prevención y gestión”, estimo que en el mismo estado que de no ser controlado, el caracol gigante africano habría causado una pérdida anual de USD 11 millones en 1969 (USD 1982). 16 �En India alcanzó un grave estado de plaga, particularmente en 1946/1947, cuando apareció en proporciones epidémicas en Orissa y causó graves daños a los cultivos de hortalizas y arrozales (Pallewatta et al., 2002). Finalmente, hay oportunidades perdidas con los cambios forzosos en la práctica agrícola, como limitar los cultivos en una región a aquellos resistentes a la infestación de caracoles (Raut & Barker, 2002), como también, costos por traslado de tierra o arena provenientes de zonas seguras, como sucedió recientemente en el Parque Nacional de Iguazú, provincia de Misiones, donde las autoridades solicitaron la certificación de la arena que ingresaría para obras de cableado subterráneo a realizarse dentro de la Reserva Natural, la cual fue enviada desde 240 Km al Sur de Puerto Iguazú (Localidad de San Ignacio, Misiones), siendo la carga precintada y certificada en origen como libre del molusco, por funcionarios de la Dirección Nacional de Protección vegetal de la Regional COR-MIS, dependiente del Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (Ver ANEXO III). El caracol gigante africano en busca de fuentes de calcio ramonea paredes de yeso, piedras calizas por lo que se considera que impacta negativamente en la infraestructura (de la Ossa-Lacayo et al., 2012). 1.2.4. Aspectos sanitarios. (Médico y veterinario) El siguiente punto trata de las distintas implicancias sanitarias de L. fúlica, el cual puede actuar como hospedador intermediario en el ciclo de vida de dos nematodos perjudiciales para la salud humana: Angyostrongylus cantonensis (Chen, 1935,) y Angyostrongylus costaricensis (Morera & Céspedes, 1971). El primero es causante de la meningoencefalitis eosinofílica, y el segundo, agente causal de angiostrongilosis abdominal, una enfermedad que se extiende desde el sur de Estados Unidos hasta el norte de Argentina. (Oliveira et al., 2010). 17 �La familia Metastrongyloidea, en su mayoría, son parásitos pulmonares de mamíferos (hospedadores definitivos) y los gasterópodos son sus hospedadores intermediarios con muy pocas excepciones. Los adultos de Angyostrongylus cantonensis se localiza generalmente en las arterias pulmonares de las ratas (Rattus rattus y Rattus norvegicus), que actúan como hospederos definitivos y es la causa más frecuente de meningoencefalitis eosinofílica en el hombre (Alicata, 1991). Los adultos de Angyostrongylus costaricensis se localizan generalmente en las arterias mesentéricas. Las hembras eliminan huevos que eclosionan y producen juveniles de primer estadio (J1) en las ramas terminales de las arterias pulmonares, migran a la faringe, son deglutidas y eliminadas en las heces. En el exterior, los (J1) invaden un hospedador intermediario (caracoles o babosas) en el cual, en un período aproximado de dos semanas, sufren dos mudas hasta convertirse en juveniles de tercer estadio (J3) que resultan infectivos para los hospederos definitivos (mamíferos). Cuando los hospedadores definitivos ingieren el molusco o sus secreciones infectantes, los juveniles (J3) migran al cerebro donde sufren dos mudas larvarias más hasta llegar a convertirse en juveniles de quinto estadio (J5) o adultos jóvenes, lo que ocurre aproximadamente en cuatro semanas. Estos adultos jóvenes regresan al sistema venoso para llegar a las arterias pulmonares, donde, después de otras dos semanas, alcanzan la madurez sexual y pueden empezar a depositar huevos (Anderson, 2000) (Ver ANEXO IV). Según Dorta-Contreras et al. (2007) existen varias especies de animales que pueden actuar como hospedadores paraténicos o de transporte (ranas, camarones de agua dulce, cangrejos), ya que al ingerir caracoles o babosas infectados transportan los J3. Luego estos hospedadores paraténicos pueden ser ingeridos por un hospedador definitivo cerrando el ciclo del parásito. Los humanos, al igual que otros mamíferos, pueden comportarse como hospedadores definitivos accidentales al adquirir la infestación por la ingestión de caracoles o babosas crudas, con las secreciones de moluscos u otros animales (hospedadores paratenicos). Las 18 �personas generalmente se infectan al comer alimentos crudos o poco cocidos, contaminados con las larvas de A. cantonensis y A. costaricensis, o cuando manipulan huéspedes intermedios para la pesca (Ping-Wang et al., 2008; Romero-Alegría et al., 2014). La migración parasitaria en humanos se detiene en el cerebro y más raramente en los pulmones, donde los nematodes mueren, por lo cual el ciclo nunca termina de completarse. Los síntomas de éstas enfermedades pueden ser confundidos con una meningitis en el caso de Angyostrongylus cantonensis, causando Meningitis de tipo eosinofílica, (inducida por la respuesta de los eosinofios hacia los J3), cursando con fiebre, parestesia, vómitos, cefaleas, convulsiones, rigidez de nuca, aumento de la presión intracraneal y parálisis facial. También se conoce una forma Pulmonar y Ocular. Según Salomón et. al (2013): La dispersión global de A. cantonensis se encuentra asociada a la rápida propagación de L. fúlica. Varios casos clínicos de meningoencefalitis eosinofílica causada por éste nematodo fueron registrados en América del Norte, Centroamérica y América del Sur, muchos de los cuales llegaron a causar la Muerte. En el caso del Angyostrongylus costaricensis podrían confundirse con una peritonitis con dolor localizado en la fosa ilíaca y/o flanco derecho, cursando con vómitos, anorexia, diarreas y sangrado intestinal, pudiendo existir tanto perforación intestinal como oclusión, entre otros. (Acha & Szyfres, 2003). Por lo que, la capacidad del CGA de proliferar en ambientes urbanos (sinantropismo) y sus características polifágicas como la coprofagia, nos alerta frente al posible potencial epidemiológico como dispersor biológico o H.I. de nematodos de interés médico y veterinario. Por otro lado, las helmintiosis forman parte de las enfermedades tropicales desatendidas (Neglected tropical diseases-NTDs) y su casuística también se ven afectadas por el incremento en los indicadores bioclimáticos. Se han realizado estudios donde se comprueba la capacidad del CGA como portador y dispersor importante de protozoos, 19 �geohelmintos y bacterias de interés sanitario (médico y veterinario) (A. Morocoima, et al., 2014). Según Matinella et al., (2009): Lissachatina fulica ha sido mencionado como transportador mecánico de diferentes estados de dispersión de helmintos de importancia sanitaria como Schistosoma mansoni, Trichuris spp., Strongyloids spp., e Hymenolepis spp., las cuales se encuentran en heces y secreciones mucosas del hospedero definitivo”. Por lo tanto, la presencia de éste molusco en un área determinada puede ser utilizada como indicadora de riesgo de importancia sanitaria. Por otra parte (Valente et al., 2017) expresa que […] La presencia del caracol africano gigante A. fúlica en Puerto Iguazú se considera alarmante, no sólo por su efecto negativo en poblaciones de moluscos nativos, sino también, por su papel como huésped intermedio de parásitos de Importancia médica y veterinaria. Este estudio constituye el primer registro de un nematodo Metastrongyloidea en A. fúlica en Argentina y también destaca la susceptibilidad de este molusco como intermedio anfitrión de otros helmintos de importancia para la salud. Con respecto a la salud Animal, Angiostrongylus vasorum (Baillet, 1866) y Aelurostrongylus abstrusus (Railliet, 1898), son de importancia veterinaria, Angiostrongylus vasorum, produce infestación a nivel de la arteria pulmonar y el ventrículo derecho de los cánidos salvajes y domésticos. (Franco-Acuña et al., 2009; Maldonado Jr. et al., 2010). El Aelurostrongylus abstrusus causa la aelurostrongilosis’, también conocida como estrongiloidosis felina, con sintomatología variada como: Tos, estornudos, sibilancias, disnea, secreción ocular-nasal y pérdida de peso progresiva. Los gusanos adultos viven en los bronquiolos y conductos alveolares produciendo pulmonía granulomatosa subclínica en gatos (Headley, 2005), dependiendo de la carga parasitaria, edad y sistema inmune del animal. Aelurostrongylus abstrusus tiene una amplia distribución geográfica. (Bjork et al., 2000; Traversa et al., 2008; Barutzki & Schaper, 2013). 20 �En Argentina, se han reportado adultos de esta especie en gatos domésticos en Buenos Aires, Corrientes y Santa Fe (Idiart et al., 1986; Schiaffi et al., 1995). Varios gasterópodos han sido reportados como hospedadores intermediarios de A. abstrusus: Subulina sp; Arion sp; Cernuella virgata; Achatina fúlica; Helix aspersa y Rumina decollata (Hobmaier y Hobmaier, 1935; Thiengo et al., 2008; Ohlweiler et al., 2010; Di Cesare et al., 2013; Cardillo et al., 2014). L. fulica también fue reportada cómo hospedador intermediario de nematodos del género Strongyluris (Heterakidae) (Franco-Acuña et al.,2009), los cuales no tienen impacto sobre la salud humana y son parásitos principalmente de reptiles como ser: Strongyluris oscari Travassos y Tropidurus spinulosus en el noreste de Argentina. (Sutton et. al. 1998). 2. JUSTIFICACIÓN _______________________________________________________________ 2.1. Implicancias del Caracol Gigante Africano A nivel mundial las implicancias sobre la salud humana, animal, ambiental y la economía de las poblaciones afectadas por esta plaga invasora, estimularon la instalación de acciones de control en los países que exhiben esta problemática. En Argentina al día de hoy, por su rápida dispersión y riesgos que implica, se lo mantiene en la agenda de los Sistemas Sanitarios y ambientales como un problema que demanda vigilancia y control. En ese sentido y por lo reflejado en encuestas realizadas, aún se requiere de esfuerzos conjuntos entre organismos nacionales, provinciales y municipales para su mayor conocimiento, vigilancia y control, como también, en la difusión y concientización de la problemática. En este sentido se hace necesario aumentar el conocimiento científico sobre la biología de esta especie invasora y desarrollar estrategias de 21 �acción que lleguen a la comunidad y su conjunto, que permitan realizar las medidas preventivas para alcanzar de manera eficaz la protección de la salud en toda la población. 2.2. Planteamiento del problema En la Argentina, el caracol gigante africano fue detectado oficialmente en junio de 2010 en la provincia de Misiones (Gutiérrez Gregoric et al., 2011) y posteriormente en la ciudad de Corriente (Gutiérrez Gregoric et al., 2011). En abril de 2019, fue detectado en un barrio de la localidad de Wanda, Misiones (50 Km al sur de Puerto Iguazú) y en el mes de mayo del mismo año, en la Localidad de Eldorado (51 Km al sur de Wanda), por el SENASA – DNPV y Centro Regional NEA. La expansión del CGA actualmente en la ciudad de Puerto Iguazú se encuentra prácticamente en toda la localidad, afectando diferente puntos geográficos como ser: Ribera del Paraná y zonas del puerto, villa nueva, Santa Rosa, villa alta, villa 14, barrio las orquídeas, barrio alto de Iguazú, entre otros. A diferencia de Corrientes capital, en la cual el foco de infestación continúa acotado a una zona reducida, motivo por el cual, en éstos lugares se tienen que redoblar esfuerzos para su control y erradicación, como también, en la difusión y concientización de la problemática. 2.3. Preguntas de investigación ¿Cuál es el estado actual de dispersión del CGA? ¿Puede actuar el CGA como amplificador y hospedador intermediario de parásitos?, ¿Las muestras de materia fecal y moco de CGA, presentan protozoos y helmintos de importancia sanitaria? ¿La población de la Provincia de Misiones conoce los riesgos del CGA? ¿Puede diferenciarlo de un caracol nativo? 22 �3. OBJETIVOS ______________________________________________________________ Con el fin de conocer y contribuir al estado actual del caracol gigante africano, Lissachatina fúlica, en el transcurso de la presente tesis se plantearon los siguientes objetivos generales y específicos. 3.1. Objetivo general Evaluar la epidemiologia actual del caracol gigante africano y sus implicancias en la salud pública y ambiental de la provincia de Misiones, Argentina. 3.2. Objetivos específicos 1. Realizar un relevamiento de situación del caracol gigante africano en la provincia de Misiones, Argentina. 2. Colectar y realizar la identificación morfológica de tallas de las conchillas de caracoles gigantes africanos de Puerto Iguazú, Misiones, Argentina. 3. Buscar e identificar la presencia de parásitos de interés sanitario en secreciones y material de desecho de caracoles gigantes africanos. 4. Evaluar el grado de conocimiento y riesgos potenciales de la población de Misiones respecto al caracol Gigante Africano. 3.3 Alcance En la localidad de Puerto Iguazú, provincia de Misiones, Argentina el objetivo fue analizar morfológicamente y parasitológicamente los Caracoles Gigantes Africanos en el período de Diciembre 2018/Diciembre2019. Realizando además en el año 2019, una encuesta Epidemiológica en un total de once localidades de la provincia de Misiones. 23 �3.4. Hipótesis La presente tesis por optar por un diseño descriptivo- exploratorio carece de hipótesis inicial. No obstante al tener una connotación pronostica se plantea las siguientes hipótesis predictivas: 1). Con el conocimiento documentado, de que poblaciones humanas y animales de Misiones presentan parásitos zoonóticos de importancia sanitaria y por los hábitos de alimentación del Caracol Gigante Africano, nos planteamos si en Puerto Iguazú el respectivo molusco, Lissachatina Fulica, podría actuar como transportador mecánico de especies parasitas (con énfasis en helmintos) de interés sanitario. 2). El grado de conocimiento de la población inciden en la dispersión. 4. ESTADO ACTUAL DEL TEMA Valente (2017) en su Tesis Doctoral, evaluó la distribución, dispersión y parasitofauna del CGA, Lissachatina fulica en la ciudad de Puerto Iguazú, Misiones, y de las babosas nativas Phyllocaulis variegatus y Latipes erinaceus (Veronicellidae), con el fin de determinar su rol en la transmisión de helmintos parásitos, con especial énfasis en los nematodes Metastrongylidae. Realizando el muestreo principalmente en el área urbana durante los años 2013 – 2015. Concluyendo que la distribución espacial de L. fúlica en la ciudad de Puerto Iguazú, desde su introducción (2010) hasta la culminación de su estudio se incrementó, encontrándose durante este estudio nuevas áreas de focos, distantes 3 km del área foco inicial. Atribuyendo la dispersión entre otras causas a la influencia antrópica. Por análisis de mapas predictivos de distribución de nicho ecológico, Valente (2017) predice que L. fúlica en el 2050 se localizará por debajo de la línea del Ecuador, dispersándose a nuevas áreas que en la actualidad no poseen las características ambientales para su desarrollo. En relación a los parásitos, hallaron tres especies de helmintos parásitos en los hospedadores 24 �analizados: Brachylaima sp. (Digenea: Brachylaimidae), Strongyluris sp. (Nematoda: Heterakidae) y Aleurostrongylus abstrusus (Nematoda: Angiostrongylidae). En este trabajo, Valente sugiere que se continúe con el monitoreo del CGA y su parasitofauna, teniendo en cuenta la cercanía a zonas fronterizas con registros de Angiostrongyliasis. En otros trabajos desprendidos de su Tesis Doctoral, Valente y col., (2016, 2017) manifiestan que el tamaño de la concha se correlaciona con la prevalencia parasitaria, la intensidad media y abundancia media, indicando la existencia de una infestación constante en lugar de una accidental. Por otro lado, la ausencia de infección en el tamaño de concha más pequeño sugiere un umbral de tamaño a ser infectado. Todos los caracoles infectados pertenecían a la ciudad de Puerto Iguazú. Teniendo en cuenta las características morfológicas de las larvas encontradas en los citados estudios, Valente y col., concluyen que teniendo en cuenta que existen registros de CGA infectados por nematodos de importancia médica y veterinaria como Angiostrongylus y Aelurostrongylus en algunos Estados brasileños cercanos a Puerto Iguazú, enfatizan nuevamente en la necesidad de vigilancia epidemiológica de los caracoles gigantes africanos. En otra publicación Valente y col., (2018) integran y muestran la distribución actual de las especies de Angiostrongylus spp. En las Américas versus informes de enfermedades”. En el mismo concluyen que en Argentina, A. costaricensis se registró solo en una especie de roedor (A. montensis) en la provincia de Misiones, mientras que se notificó un caso humano único de enfermedad en la provincia de Tucumán (Demo & Pessat, 1986). Las características de los ambientes y las condiciones climáticas de ambos sitios geográficos son muy diferentes y la distancia cronológica entre estos informes es de 30 años. Este tiempo excede los períodos observados en el resto de los registros de esta especie (0-24 años). La falta de informes sobre anfitriones accidentales y definitivos en Argentina es paradójica, especialmente considerando que no hay datos precisos sobre la procedencia del paciente en el único caso humano registrado. Sin embargo, varios casos humanos registrados en Brasil desde 1990 se encuentran a 500 km de la provincia de Misiones. Por lo tanto, el 25 �riesgo potencial aumenta teniendo en cuenta que los límites entre las poblaciones de humanos y animales salvajes en el bosque atlántico se están volviendo cada vez más difusos. En el Estado de Nigeria, Igbinosa, (2016) en su trabajo “Parasites of edible land snails in Edo State, Nigeria”, encontraron larvas en el CGA de Angiostrongylus cantonesis, Fasciola gigantica y Schistosoma mansoni. Concluyendo que los caracoles terrestres son fuentes de proteínas para el hombre y son anfitriones de varios parásitos. El consumo de caracoles podría ser una ruta a la infección humana particularmente cuando se come crudo o poco cocido. En Venezuela, Libora y col., (2010) informaron que el CGA tiene la capacidad de albergar al parasito trematode S. mansoni que causa la esquistosomiasis intestinal en el hombre. Ovidio y col., (2019) en un estudio realizado en el Sur de Italia evalúa la ocurrencia de nematodos en los CGA mantenidos como mascotas. Evaluando muestras fecales y moco de los moluscos encontraron presencia de nematodos Rabditis sp. Los Rhabditidae incluyen nematodos saprófitos de vida libre, que se encuentran ampliamente en el suelo y los desechos orgánicos donde se alimentan principalmente de bacterias. Muchas especies de caracoles pueden servir como hospedadores definitivos. Sin embargo, varias especies de Rhabditis y Rhabditella se han asociado con vertebrados, incluidos los humanos. Aunque su presencia puede ser el resultado de la contaminación ambiental, estos nematodos pueden causar enfermedades en muchos animales y humanos. Rhabditis elongata, Rh.Hominis y Rh. Usuii, se han aislado larvas de heces humanas, orina y torundas vaginales. Estos autores concluyen, que todos los CGA pueden presentan huevos, larvas y nematodos rabdítidos adultos en las heces y, por lo tanto, pueden representar una fuente de infección para otras mascotas y humanos. En Brasil, Silva y col., (2019) en un estudio realizado en el Estado de Aracaju, Sergipe para verificar la ocurrencia del CGA y los riesgos potenciales asociados con su 26 �presencia. Concluyeron que el CGA era más representativo en áreas urbanas, especialmente en lotes baldíos con presencia de basura y materiales en descomposición. En los moluscos examinados se encontraron nematodos género Rhabditis, pero no se encontraron parásitos del género Angiostrongylus. Identificaron una relación significativa entre la humedad – frecuencia y la positividad de los nematodos y una correlación entre factores climáticos y la frecuencia de CGA. También observaron que cuanto más grande es el molusco, mayores son las posibilidades de infección por nematodos. Penagos – Tabares y col. (2019), en su trabajo “Angiostrongylus vasorum y Aelurostrongylus abstrusus: Parásitos desatendidos y subestimados en América del Sur”. Concluye que: teniendo en cuenta la amplia distribución de angiostrongilosis canina y aelurostrongilosis felina en América del Sur, es de gran interés que los médicos de práctica de pequeños animales y de vida silvestre consideren estas infecciones y las especies menos comunes como C. vulpis, T. brevior, T. subrenatus, A. chabaudi, A. felineus y O. rostratus; como diagnóstico diferencial en el caso de trastornos cardiopulmonares. En este mismo estudio Penagos – Tabares y col., refieren que los estudios filogenéticos también están pendientes para evaluar si A. vasorum de América del Sur en realidad representa un genotipo o especie distinto. Se requieren encuestas epidemiológicas en cánidos y felinos domésticos y salvajes, así como en hospedadores paraténicos e intermedios con una caracterización molecular precisa. Además, el impacto de los factores climáticos (por ejemplo, altitud, temperatura, precipitación anual, humedad relativa y región biogeográfica) en las interacciones huésped-parásito y parásito-huésped intermedio y la propagación de estos parásitos a regiones no endémicas son temas relevantes a considerar en futuras investigaciones en una de las regiones con mayor biodiversidad del planeta. 27 �5. MARCO METODOLÓGICO La investigación contó con la autorización por parte del SENASA, Regional CORMIS, Argentina. 5.1 Área de estudio 5.1.1. Características de la Provincia de Misiones La Provincia de Misiones con una superficie de 29.801 kilómetros cuadrados se localiza en el sector sudoccidental de la Gran Cuenca Sedimentaria del Paraná, ubicada entre los paralelos 25º 28´ y 28º 10´de Latitud Sur y los meridianos 53º 38´y 56º 03´de Longitud Oeste en la Región Nordeste de la República Argentina. El perímetro misionero, de 1.200 Km de longitud, ofrece 1.080 Km como fronteras internacionales: unos 330 km sobre el Río Paraná con Paraguay y unos 750 Km sobre los ríos Uruguay, Pepirí Guazú, San Antonio e Iguazú con Brasil. Una pequeña porción de 110 km de su territorio al sur es limítrofe con la Provincia de Corrientes (Instituto Geográfico Militar). Se encuentra organizada políticamente en 17 departamentos, divididos en 75 municipios. 28 �Figura 3: División política. Provincia de Misiones, Argentina (Fuente: Margalot J. A. Geografía de Misiones. 6 ed. Buenos Aires, 1994.) Ambiente, regiones naturales Desde el punto de vista fitogeográfico, Misiones se ubica en el Dominio Amazónico. Se caracteriza por un clima subtropical húmedo, con suelos lateriticos, con alto contenido de óxido de hierro y aluminio, materia orgánica y bajo tenor de sales solubles expresado en cloruros y sulfatos y reacción ácida. El total de lluvias anuales varía de 1000 a 2200 mm por año, y la temperatura media anual es de 16 – 20° C. El 35% de su territorio está ocupado por Selva Misionera o Selva Paranaense que cubre en la actualidad la zona central y norte de la provincia de Misiones, esta área posee una oferta de ecosistemas sumamente variada (Ministerio del Interior, 2010). La mayor parte de esta selva remanente yace dentro de lo que se denomina Corredor Verde, un área de conservación y uso sustentable de más de 1.100.000 hectáreas, creada mediante una ley provincial 3631 (García Fernández, 2002; Cinto & Bertolini, 2003) para evitar la fragmentación de la selva. La Provincia cuenta con 84 áreas protegidas, de las cuales 23 corresponden a la Selva misionera. 29 �Las áreas seleccionadas para el presente estudio corresponden: a la ciudad de Puerto Iguazú (25º36’S,54º35’O) para la etapa 1º del estudio. La misma se encuentra ubicada en la provincia de Misiones (Argentina) ocupando el punto extremo al noroeste de la Provincia en el cruce de fronteras con Paraguay y Brasil. Se halla rodeada por dos grandes ríos, el Paraná al oeste y el Iguazú al norte (Figura 4). Para la etapa 2º se seleccionaron ubicadas de Norte a Sur de la provincia. Figura 4: Imagen satelital de la ciudad de Puerto Iguazú, Misiones, 5.2. Universo Argentina El universo del presente estudio los constituyen los CGA obtenidos de la ciudad de Puerto Iguazú y la población humana de diferentes departamentos de la provincia de Misiones, como también el ambiente. 5.3. Diseño metodológico del estudio El diseño metodológico seguido fue de tipo exploratorio-descriptivo- observacional. 30 �5.4. Diseño muestral El diseño se basó principalmente en un diseño de campo de corte transversal con enfoque cualitativo – cuantitativo y una estrategia de muestreo intencional y de conveniencia. 5.5 Período de estudio El período bajo estudio fue entre diciembre 2018 a diciembre de 2019. 5.6 Criterios de inclusión / Criterios de exclusión Criterios de inclusión: - Se incluyeron para el muestreo moluscos que pertenecieran a la especie Lissachatina Fulica y sus materias fecales de la localidad de Puerto Iguazú. - Se incluyeron para las encuestas epidemiológicas: Localidades fronterizas de la provincia de Misiones. Criterio de exclusión: - Se excluyeron especies de moluscos nativos y sus excreciones. - Se excluyeron localidades sin pasos fronterizos con la República del Paraguay o con la República Federativa del Brasil. 5.7. Recopilación y análisis de la información Para la recopilación y análisis de información primaria, se realizaron colectas de moluscos, encuestas entrevistas y observaciones en terreno para relevar información sobre el CGA. Se realizó una búsqueda sistemática de literatura publicada sobre estudios de L. fulica en el mundo y a nivel regional y provincial: Biblioteca Virtual de Salud (BVS), 31 �Scientific Electronic Library Online (SCieLO), Red de Revistas Científicas de América Latina y el Caribe, España y Portugal (REDALyC) y Google Académico. Con el fin de complementar la identificación de los factores que influyen o podrían influir en la aparición o persistencia del CGA en Misiones se recolectaron los siguientes datos secundarios con sus respectivos indicadores: - Demográficos: Se obtuvieron por consulta de los datos de los Censos de Población y Viviendas. Al momento de redactar este manuscrito se actualizó con el último censo 2010. - Geográficos: Se recolectaron aquellos correspondientes a hidrografía, regionalización y topografía. Se utilizó información disponible en Bibliotecas regionales e Institutos Geográficos. - Edafológicos: Se estudió la cartografía y la composición de suelos a través de búsquedas en Bibliotecas de las Secretarías de Minería. - Agropecuarios: Se recurrió al Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA) y al Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). - Ambientales y Ecológicos: características del lugar, temperatura, clima, humedad relativa, ecosistema de la Provincia de Misiones. 5.7.1. TRABAJO DE CAMPO Las colectas de moluscos en la ciudad de Puerto Iguazú así como, las encuestas y observaciones, fueron realizadas en su totalidad por el investigador y personal de SENASA. 5.7.1.1. Recolección de moluscos. La colecta de caracoles bajo estudio, se llevó a cabo por el método de captura por remoción (Valente 2017) mediante colecta manual, ayudados por elementos de jardinería tales como rastrillos y palas. 32 �El cronograma de colectas del CGA, se estableció por criterios locales, climáticos y por accesibilidad geográfica. Los muestreos se realizaron durante los meses de enero a abril del año en estudio. Tanto la colecta, traslado y procesamiento de los mismos se realizaron bajo Normas de Bioseguridad establecidas por organismos competentes. Los ejemplares colectados de diferentes espacios que correspondieron a viviendas, suelo, paredes, vegetación, arbustos, hojarasca, rocas y troncos caídos fueron colocados en recipientes de plástico secos con tapa perforadas al cual se le agrego papel higiénico húmedo induciéndolos a entrar en un estado de estivación. Cada recipiente fue debidamente codificado según lugar de recolección y trasladados por personal de SENASA al laboratorio de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UNNE, Corrientes y la Facultad de Veterinaria de la Universidad del Salvador, Sede Gobernador Virasoro, Corrientes para ser procesados. Se colectaron un total de 201 ejemplares de moluscos. Figura 5: Colecta de moluscos en la Ciudad de Puerto Iguazú, Misiones, Argentina. 33 �5.7.1.2. Encuestas a la población. Para tener una aproximación del grado de conocimiento del CGA en la provincia, se trabajó con fuentes primarias de información (encuestas de tipo epidemiológicas) dirigidas a la población de 11 (once) localidades de la provincia de Misiones, entre los meses de Mayo y septiembre de 2019. El diseño del cuestionario estuvo constituido por 12 preguntas de tipo dicotómicas y de respuestas múltiples (Ver ANEXO V). En la Figura 5, se muestra el mapa de Misiones indicando las zonas evaluadas con y sin declaración Oficial de presencia de CGA. Se incluyeron además entrevistas verbales con apoyo de documentación fotográfica y muestras de especímenes que permitieron reconocer la presencia del CGA por parte de la población. Total de encuestas realizadas: 92 (noventa y dos) encuestas. A todos los encuestados se les entregaron folleto informativo. (Guía de reconocimiento en campo) sobre el CGA, cómo reconocerlos, diferencias con caracoles nativos y recomendaciones por parte del SENASA (Ver ANEXO VI a y b), a fin de sensibilizar y contribuir a la prevención del mismo. 34 �Figura 6: Mapa de la Provincia de Misiones indicando zonas evaluadas por encuestas epidemiológicas. 5.7.2. TRABAJO DE LABORATORIO 5.7.2.1. Estudios macroscópicos - morfológicos de los moluscos En el laboratorio los caracoles colectados fueron sometidos a la técnica de preservación, relajamiento y muerte con cristales de mentol, en el cual permanecieron entre 12 a 15 hs. Una vez transcurrido ese tiempo, se cambió el agua por formol al 10% para su fijación y ser posteriormente examinados, medidos y agrupados según se muestra a continuación: 35 �A. Agrupamiento por género y especie B. Clasificación en Clase según categoría de tamaños: Clase I: individuos recién eclosionados (hasta 10 mm) Clase II: juveniles (10 a 40mm) Clase III: adultos jóvenes (40 a 70 mm) Clase IV: adultos (> 70 mm) Figura 7: Identificación morfológica de los moluscos, estableciendo largo, ancho y alto. 5.7.2.2. Estudios parasitológicos Para la búsqueda de parásitos en: - Materia Fecal: Primeramente se realizó el procesamiento por pool de muestras, por cada grupo conformado. Se realizó la observación de parásitos en la materia fecal siguiendo el esquema propuesto: a). Observación Macroscópica: directa ayudados con una lupa, con el objeto de observar parásitos adultos. b). Observación Microscópica: previo procesamiento con técnicas ya descriptas, para Nematodos, protozoarios y cestodes de la flia. Anoplocephalidae, mediante flotación, (método de Willis y Sheather) y sedimentación (método de Teleman). 36 �- Baba: Se realizaron estudios en fresco entre porta y cubre objetos y además se concentraron las muestras mediante centrifugación y realizando el examen directo del sedimento según técnicas descriptas por otros autores. Durante el manejo de ambas muestras, en toda instancia se respetaron las normas de bioseguridad. Las observaciones se realizaron haciendo uso de dos microscopios con biocular micrométrico (Olimpus®, modelo CHS y Carl Zeiss). Para la identificación taxonómica de géneros y/o especies (protozoos y helmintos) se usaron criterios morfológicos (forma, cubierta, color, contenido) y métricos (longitud y diámetro) descriptos previamente (Acha et al 1986; Soulsby E., 1987; Bowman et al 2004; Manuales del Dto Parasitologia Malbran). Los resultados de las lecturas microscópicas fueron registrados en un formulario al final del cuestionario que contemplaba el código de cada colecta de moluscos. Finalizado el trabajo, todos los ejemplares fueron eliminados siguiendo las recomendaciones establecidas por el SENASA, que consiste en colocar los caracoles durante un tiempo mínimo de 4 horas en un recipiente con 3lts. de agua y 1kg de sal común. Al finalizar, fueron enterrados con cal a una profundidad mínima de 50 cm. 5.8. ANÁLISIS ESTADÍSTICO Los datos fueron cargados y procesados en los programas Microsoft Excel 2007, Acess 2007. Se utilizó la prueba estadística chi cuadrado y comparación de proporciones, trabajando con un nivel de confianza del 95% y una precisión del 5 %, utilizándose para su procesamiento el programa estadístico InfoStat® para la correlación de las variables y gráficos. 37 �6. RESULTADOS 6.1. ESTUDIO DE SITUACIÓN. PROVINCIA DE MISIONES. Los datos presentados a continuación, son conducentes para un análisis conjunto de información y el conocimiento respecto al CGA en la provincia de Misiones. Indicadores demográficos, gasto público, de recursos: su impacto. Demográficos Según los datos del censo de 2010 la provincia tiene 1.101.593 habitantes y una densidad poblacional de 37,0 hab/km2. Esto representa al 2,7% de la población nacional, y convierte a Misiones en la novena provincia más poblada, por delante de Chaco y por detrás de Salta. En referencia a la población por sexo, los varones representan 547.335 en la totalidad del mapa provincial (49.9%), mientras que las mujeres alcanzan el número de 554.158 personas (50.3%). Respecto al censo anterior, de 2001, la población creció un 14,1 %. Por otra parte, en el censo de 2010 el crecimiento demográfico sigue aglutinado en el sector urbano con una población de 812.554 habitantes, respecto a la población rural con 288.939 habitantes, representando el 26.2 % de la población. Del total de los pobladores rurales, el 81,2 % vive en zonas consideradas "dispersas" (parajes y picadas). Por otra parte, 33 son las jurisdicciones municipales de la provincia que cuentan con una población totalmente rural. Población de pueblos originarios: El porcentaje de la población que se autoreconoce como indígena o con algún antepasado perteneciente a algún pueblo originario (Mbya Guarani) es del 1,1 % (13.006 38 �personas). Un 49.97 % del total, viven en zonas rurales (Corredor verde Ecológico 23 %, predios privados 19 % y reservas ecológicas 4 %). Dentro de las estadísticas vitales de la población Mbya Guaraní, para el año 2010 se observó una tasa de natalidad por 1000 habitantes de 23,1 %; registro inferior al año 2004 (26,1 %). Población extranjera residente en Misiones Se estimó según Censo 2010, un total de 44.012 extranjeros residentes en la provincia: 20.870 varones y 23.142 mujeres. Los inmigrantes que más suman en las estadísticas son los oriundos de países limítrofes (40.660 personas): paraguayos, con 26.799 habitantes; brasileros, 13.000 personas. Los europeos, 2.063, en su mayoría españoles y alemanes. Por su parte, la comunidad asiática en Misiones alcanzó la cifra de 492 residentes; africanos 16 personas y los oriundos de Oceanía, 85. Viviendas y hogares El total de viviendas a nivel provincial es de 330.631, en tanto que el total de hogares es de 302.953. Del total de viviendas, 290.263 están habitadas, 39.786 se encuentran deshabitadas y las 582 restantes pertenecen a la categoría de viviendas colectivas. Del total de hogares en la provincia, 217.858 (71.9%) cuentan con provisión de agua mediante el suministro de la red pública. Analfabetismo Se observó una disminución del analfabetismo, pasando del 6,2% en el 2001 al 4,1% en el 2010. A nivel país, el índice de personas que no saben leer ni escribir disminuyó considerablemente, pasando del 2,6% en 2001, al 1,9% en 2010. 39 �Gasto público por finalidad y función El principal componente del gasto público de la provincia es la categoría Servicios Sociales, que insume el 49,5% del total. Dentro de este grupo se destaca Educación y Cultura, que insume el 29,2% del gasto total de la provincia de Misiones. Vivienda y urbanismo agrupa a otro 9,4%, y Salud a un 7,8%. La categoría Servicios económicos representó un 23,6% del gasto, mientras que Administración Gubernamental implicó otro 19,5%. Los servicios de seguridad insumieron un 5,2% del gasto provincial, y los servicios de la Deuda otro 2,3%. Indicadores de recursos y utilización de servicio de salud La provincia cuenta con 617 establecimientos, de los cuales 372 pertenecen al sector público. Entre los mismos, encontramos Postas, Unidades, y Puestos Sanitarios, Consultorios periféricos, consultorios externos y Hospitales. Población canina Para un total de 1.097.829 habitantes, se estiman 548.914 perros a nivel provincial (Programa Provincial Control de Enfermedades Zoonóticas, Ministerio Salud Publica de Misiones, 2013), con una relación de 1 perro cada 2 habitantes (Relación Mundial: 1/3 habitantes). Explotaciones agropecuarias (EAP): Según el Censo Nacional Agropecuario, 2018, la provincia de Misiones cuenta con 22.169 EAP, presentando casi el doble de unidades productivas que Chaco y Corrientes, y tres veces más que Formosa. 40 �6.2. ANÁLISIS MORFOLÓGICO DE LOS MOLUSCOS De los 201 moluscos analizados se identificaron 199 moluscos del género y especie L. fulica (tabla 1) en la ciudad de Puerto Iguazú, Misiones. Teniendo en cuenta el tamaño de los moluscos del Grupo I, en la tabla 2 se presenta la clasificación por clase de L. fulica colectados. Observándose que el mayor número presentan las formas juveniles (Clase II) con un rango de 10 a 40 mm, seguidas por formas juveniles (Clase III). Tabla 1. Identificación por grupo según género y especie de molusco evaluado. Pto. Iguazú, Misiones, Argentina. Género y especie de molusco Lissachatina fulica Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 199 Helix aspera 1 Bulimus spp. 1 Tabla 2. Clasificación por Clase según categoría de tamaños de moluscos del Grupo 1 evaluados. Puerto Iguazú, Misiones, Argentina. Clase I Grupo 1 6 Clase II 149 Clase III 35 Clase IV 9 6.3. ESTUDIOS PARASITOLÓGICOS Del análisis parasitológico efectuado a los pooles de materia fecal de L. fulica, se encontraron taxones parasitarios correspondientes a géneros del Phylum Nemata y del Phylum Protozoa (Figura 8). 41 �Entre la clase Secernentea predominaron larvas del orden Strongylida y larvas de vida libre sin especificar, como también se observaron huevos de nematodes del genero Ancylostoma spp. (60 µm x 40 µm). Los protozoos observados correspondieron a quistes de Ameba spp.; Giardia spp. y de la Clase Aplicomplexa a ooquistes de Cystoisospora spp. Por su parte en el análisis de baba de 9 ejemplares adultos de L. fulicas se encontraron taxones parasitarios de la Clase Nematoda Orden Strongylida: larvas de nematodes sin especificar (4/9) y del Orden Ascaridea Familia Toxocaridae: huevos de ascarideos (1/9) compatibles con el genero Toxocara spp. La relación entre zonas de muestreo y taxones parasitarios, no presentaron diferencias significativas (p>0,05). En 4 de 9 muestras de baba se observaron cristales de oxalato de calcio. Figura 8. Taxones parasitarios encontrados en Materia fecal y baba de CGA. Parte superior: larvas de Strongylida y de vida libre. Parte inferior: huevos de Ancylostoma spp, quiste de Giardia spp, oquiste de coccideo. 42 �6.4. EVALUACIONES CUALITATIVAS. Conocimiento del Caracol Gigante Africano (L. fulica) por parte de la población de Misiones. En la tabla 3 se muestra la distribución por localidades de las 92 personas encuestadas y el grado de conocimiento acerca del CGA. Observándose un 67.4 % de desconocimiento sobre la problemática (Gráfico 1). El promedio de edad de los encuestados fue de 43 años (86 – 21). Tabla 3. Conocimiento del Caracol Gigante Africano por parte de la población. Provincia de Misiones, Argentina. N° Escucharon Localidades Lo vieron Encuestados hablar 9 4 0 Corpus Montecarlo 12 0 0 Eldorado 10 2 1 Wanda 9 5 2 Pto. Iguazú 10 6 9 Andresito 5 3 0 San Antonio 8 1 1 B. de Iigoyen 9 5 3 El Soberbio 5 2 0 Alba Posse 10 2 0 San Javier 5 0 0 TOTAL 92 30 16 43 �Escuchó hablar del caracol? 0,7 0,7 0,6 0,6 0,5 0,5 0,4 0,4 0,3 0,3 Sí escuchó No escuchó Gráfico n° 1. Porcentajes de la población encuestada que escucharon o no escucharon hablar sobre el Caracol Gigante Africano. Respecto a la variable haber visto el CGA, solo un 17.4% de estos lo vieron en sus viviendas, patios, paredes, huertas o en las proximidades de las mismas (Gráfico nº 2), ocurriendo un 31.2% de estas observaciones en épocas de verano, un 18.7% en primavera y un 12.5% finales de verano e inicio de otoño. Por otra parte, de las personas que vieron el CGA en sus huertas 2 refirieron haberlos visto alimentándose de verduras de hojas. De esta variable un 0.03 % de los encuestados no respondieron a la pregunta. La correlación entre las personas que escucharon y los que vieron al caracol, fue estadísticamente significativa (p<0,0001). Por otra parte, con una alta significancia estadística (p<0,0002) se correlacionaron negativamente los datos entre los que escucharon y los que no vieron al caracol. 44 �Vió los caracoles? 0,8 0,8 0,7 0,6 0,6 0,5 0,4 0,3 0,3 0,2 0,1 Sí lo vió No lo vió Gráfico 2. Porcentajes de la población encuestada que vio al Caracol Gigante Africano. De las encuestas realizadas, también se desprende que el 61.9% de los encuestados presentan menores de 15 años en sus familias, con un promedio de 2 hijos por matrimonio, de los cuales el 45% andan descalzos en sus domicilios. En relación a la tenencia de mascotas, un 59.7% presenta mascotas en sus domicilios, perros (57.6%) y gatos (18.4%), con un promedio de 2 perros y 4 gatos por familia. Por otra parte, se resalta que un 18,4%, refirió ver ratas en su domicilio o peri domicilio. En cuanto al modo de eliminar al CGA de sus viviendas, solo un 4.34% (4/92) refirieron eliminarlos con sal o sal y fuego. 45 �7. DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES El CGA, es una de las especies invasoras más agresivas para la agricultura y la diversidad biológica a escala mundial. En Salud Publica, es catalogado de interés por actuar como vector y dispersor de diferentes especies de microorganismos entre ellos parásitos zoonóticos, de alta implicancia para la salud humana y animal. En la ciudad de Puerto Iguazú, entre otras localidades de la provincia de Misiones y de regiones vecinas, el panorama del CGA presenta una alta probabilidad de acrecentarse debido a su alta tasa de dispersión asociado a variables antrópicas. Algunas de las causas atribuibles por la cual se produjeron nuevos y múltiples focos en diferentes zonas de Puerto Iguazú, pueden estar relacionadas con los movimientos de suelo. Por el traslado de tierra para cubrir calles empedradas de distintos barrios, como también, se puede explicar la aparición del molusco en barrios aledaños al basural del municipio, ya que la gente al juntar a los CGA los desecha a la basura sin su correcta eliminación previa (por ej. por deshidratación con sal). En concordancia con Valente (2017), en el presente estudio se encontraron nuevas áreas de focos, distantes a 52 km de la localidad registrada inicialmente en 2010. Al igual que otros autores, se constató que sitios baldíos y basurales de zonas urbanas y periurbanas, son los lugares de mayor presencia de moluscos por metro cuadrado (Silva y col., 2019). Respecto a la presencia de parásitos en el CGA, en concordancia con los trabajos de (Valente et. al., 2016, 2017; Silva et. al., 2019), se observó que la carga parasitaria de los moluscos es directamente proporcional al tamaño, encontrándose en este estudio taxones parasitarios del orden Ascaridea y Strongylida, en los CGA en estado adulto joven y adulto. Aún, no habiéndose encontrado parásitos del género Angiostrongylus en estos especímenes, los CGA de mayor tamaño presentan un mayor riesgo epidemiológico al ser mayor su 46 �longevidad y oportunidad de contacto con ambientes contaminados con formas parasitarias eliminadas por heces de animales parasitados. Las variables climáticas son capaces de afectar prevalencias, intensidades y distribución geográfica, tanto directamente, influenciando sobre los estadios de vida libre, como indirectamente sobre los hospedadores/vectores (Mas-Coma et. al., 2009). Misiones, presenta todas las condiciones topográficas y climáticas para la persistencia de formas parasitarias y los hospederos o vectores adecuados para diseminarlas. En este trabajo queda demostrado que la baba de A. fulica utilizada para su locomoción y desplazamiento, también puede actuar por arrastre como dispersora de formas infectantes de parásitos zoonóticos, como ser huevos del genero Toxocara, hallados en el presente estudio y de importancia en la salud pública por el daño que ocasionan en el ser humano (Vizcaychipi et. al., 2006; 2014; 2016). Por otra parte, los hallazgos realizados por Igbinosa, (2016), en el Estado de Nigeria, África occidental y por Libora (2009) en Venezuela, demuestran la importancia de mantener una vigilancia epidemiológica constante respecto a los posibles cambios evolutivos entre parásitos y hospedadores, como por ejemplo: los trematodos de importancia sanitaria (médica y veterinaria) encontrados en los CGA. Los Trematodos Digénidos siguen un ciclo heteroxeno con un molusco como primer hospedador intermediario, comúnmente un gaterópodo terrestre o acuático. La Fasciola gigantica (parasito exótico) presente en Africa, Oriente Medio, Asia y Europa Oriental, comparte características biológicas idénticas con la Fasciola hepática, presente en nuestro país. Este último es causante de la distomatosis hepática, una zoonosis de importancia epidemiológica en la región Noreste de Argentina (Lobayan et. al., 2016). Por otra parte, el Schistosoma mansoni causante de la esquistosomiasis, enfermedad no reportada y en estado de vigilancia en la misma región, por presencia del vector gaterópodo. Si bien L. fúlica no es un molusco acuático o que comparte características biológicas con moluscos de los géneros Limnea spp o Biomphalaria spp, el 47 �sólo hecho de haber sido hallado trematodos en el CGA, amerita cautela y atención para futuras investigaciones. Otro trematodo exótico a nuestra región es el Dicrocelium, causante de la dicroceliosis, enfermedad de interés sanitario (médico y veterinario), más raro en humanos y con hospedadores intermediarios (moluscos), del género Helicella spp y Zebrina spp. Si bien son exóticos, comparten una característica con L. fúlica que es la coprofagia, necesaria para completar el ciclo biológico de la dicroceliosis, entre otras enfermedades parasitarias. Muchas de las enfermedades que hoy son endémicas, hasta hace poco eran exóticas. La posibilidad de que el CGA sea susceptible a estos trematodos, actuando como liberador de cercarias, sólo dependerá de su comportamiento evolutivo en el tiempo y del ciclo en constante dinamismo de las cadenas epidemiológicas y su relación huésped, agente y ambiente, resultando en constantes enfermedades emergentes y remergentes. En coincidencia con otros autores (Valente et. al., 2017,2018; Barratt & Ellis, 2019), se considera necesario continuar con el monitoreo y los estudios de parasitofauna en el CGA teniendo en cuenta factores epidemiológicos asociados, cercanía a zonas fronterizas con registros de Angiostrongyliasis entre otros parásitos zoonóticos de interés sanitario, así como también la presencia y valoración de la fauna animal representada principalmente por canidos, félidos y roedores. De las encuestas realizadas, se pudo constatar el escaso conocimiento de la población sobre el CGA, inclusive dentro de las áreas más afectadas. De la misma manera, se constató un insuficiente accionar por parte de las autoridades de los municipios en lo que respecta a educación sanitarias, prevención y control de la plaga; además se observó la necesidad de mayor coordinación conjunta y de accionar continuo entre los organismos municipales, provinciales y nacionales. 48 �8. COMENTARIO FINAL El desconocimiento tanto de las posibles implicancias sanitarias, ambientales o económicas de una plaga, como también, de los eslabones de la cadena epidemiológica, necesarias para el desenlace de una enfermedad, nos llevan a la imposibilidad de actuar en pos de la prevención, ya sea, del desarrollo de una enfermedad o para contrarrestar el avance del Caracol Gigante Africano y con mayor razón, si tiene como principal variable de expansión o saltos de dispersión a la actividad humana. De tal modo que resulta necesario afianzar en la educación y participación ciudadana como medidas preventivas para controlar esta especie invasora. Así mismo, se indican como medidas preventivas gubernamentales, el aprovechamiento de instrumentos legales existentes, y por sobre todo aprender a trabajar de forma integral y multisectorial entre todas las partes involucradas para su correcta vigilancia y control. 49 �9. 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Title A name given to the resource Análisis parasitológico de importancia sanitaria en los caracoles gigantes africanos (Lissachatina fulica) en Misiones Creator An entity primarily responsible for making the resource Reinante, Emiliano Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2019 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Teibler, Pamela (Directora de Tesis); Alvarez, Darío y Vizcaychipi, Katherina A. (Co-Directores) Rights Information about rights held in and over the resource Trabajo presentado para obtención del titulo Magíster en investigación en Ciencias de la Salud otorgado por la Universidad Nacional del Nordeste Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Tesis Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0178 Abstract A summary of the resource. El presente trabajo realiza una evaluación de la situación epidemiológica y parasitaria del caracol L. fulica y sus implicancias en la salud pública de Misiones, Argentina, a fin de conocer y contribuir al estado actual de la citada especie. https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/173404fe297d9f7e0db9c1ee14997455.pdf d9abce90fdb1d49a18aa5afed5b6dc55 PDF Text Text AUTODECLARACION DE ZONA LIBRE DE NECROSIS HEMATOPOYÉTICA INFECCIOSA, NECROSIS HEMATOPOYETICA EPIZOOTICA, ANEMIA INFECCIOSA DEL SALMON, NECROSIS PANCREATICA INFECCIOSA, SEPTICEMIA HEMORRAGICA VIRAL, ENFERMEDAD BACTERIANA RENAL Y PISCIRICKETTSIOSIS EN LA CUENCA ALTA DE RIO LIMAY QUE INCLUYE AL EMBALSE DE ALICURA, EN LA REPUBLICA ARGENTINA. 1. INTRODUCCIÓN El Objetivo del presente informe es presentar las evidencias de la ausencia de infección de Necrosis Hematopoyética Epizoótica (EHNV), Necrosis Hematopoyética Infecciosa(IHNV), Septicemia Hemorrágica Viral (VHS), Necrosis Pancreática Infecciosa (IPN), Anemia Infecciosa del Salmón (ISA), Enfermedad Bacteriana Renal (BKD) y Piscirickettsiosis en base al Capítulo 1.4 del Código Sanitario para los Animales Acuáticos 2009 y el Capítulo 1.1.4 del Manual de Pruebas de Diagnóstico para los animales acuáticos 2006 de la ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE SANIDAD ANIMAL (OIE), en la Zona Cuenca Alta de Rio Limay que incluye al Embalse de Alicura hasta la presa hidroeléctrica en la República Argentina. La zona libre, se ubica en la Región Patagónica de nuestro país, abarcando parte de las provincias de Neuquén y Río Negro. La misma está delimitada por el Lago Nahuel Huapi y sus afluentes que dan origen al Río Limay hasta la presa del Embalse Alicura, lo que dio lugar a la formación del lago del mismo nombre. La elección de este Embalse en la zonificación se debe a la importancia productiva que representa, con una producción que actualmente alcanza aproximadamente las 1200 tn de truchas arco iris, y un potencial futuro de producción cercano a 4000 tn, estimadas en forma conservadora. La producción total de salmónidos en todo el país es de 1600 tn/2009, representando el 58% de la producción total de su acuicultura. El sustento en que se basa la declaración de esta zona como “Zona Libre de Necrosis Hematopoyética Epizoótica, Necrosis Hematopoyética Infecciosa, Septicemia Hemorrágica Viral, Necrosis Pancreática Infecciosa, Anemia Infecciosa del Salmón, Enfermedad Bacteriana Renal y Piscirickettsiosis”, son las acciones citadas a continuación. Por medio de la Ley N° 3959 de Policía Sanitaria de los Animales, reglamentada por el Decreto de fecha 8 de noviembre de 1906, se declara la obligatoriedad de notificación ante la sospecha de presencia de enfermedades animales. La misma contempla a las enfermedades Necrosis Hematopoyética Epizoótica, Necrosis Hematopoyética Infecciosa, Septicemia Hemorrágica Viral, como de notificación obligatoria para la República Argentina. Las enfermedades Necrosis Pancreática Infecciosa, Anemia Infecciosa del Salmón, Enfermedad Bacteriana Renal y Piscirickettsiosis se encuentran en trámite de incorporación. Página 1 �2. SERVICIO VETERINARIO El Servicio Veterinario de Argentina es el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria, SENASA. Se trata de un organismo autárquico que depende del actual Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca de la Nación. Dicho Servicio se mantiene actualizado sobre los nuevos estándares, guías y recomendaciones internacionales en los temas de su incumbencia y armoniza su política y normativa de acuerdo a ellas, e inclusive en algunos de los temas participa como país miembro en discusiones para las actualizaciones (Código y Manual de OIE, Codex Alimentario y otros). La capacidad o competencia técnica de su personal como la capacidad financiera de recursos a su disposición (otorgados por medio de los instrumentos legales correspondientes: leyes, decretos y resoluciones) permiten un correcto funcionamiento del Servicio para mantener un sistema de vigilancia eficaz y la certificación de calidad en los alimentos, como así también, la posibilidad de enfrentar situaciones sanitarias de emergencia. Las políticas sanitarias están orientadas a la interacción con el sector privado para el cumplimiento de actividades que lleven al objetivo común de mejorar o mantener los estándares sanitarios actuales. Capacidad técnica El servicio posee: • Capacidad constante para incorporar los últimos avances científicos reflejados en la actualización de las normas y medidas dictadas por los organismos internacionales como OIE, Codex Alimentarius y el acuerdo de medidas SPS de la Organización Mundial de Comercio. • Capacidad diagnóstica propia y disponibilidad para acceder, en caso de necesidad por emergencias sanitarias, a redes internacionales de laboratorios de referencia. • Promueve la acreditación y auditoría de sus laboratorios para certificar la calidad de los diagnósticos, la toma de muestras y los procedimientos de envío. ▪ Capacidad para detectar y enfrentar eficientemente una emergencia sanitaria. A través del análisis de riesgo y la vigilancia epidemiológica, monitorea el estado sanitario en las poblaciones de riesgo de las enfermedades de importancia para la salud humana o de alto impacto económico. Evalúa el status sanitario de los países limítrofes o con los que tiene intercambio comercial, especialmente en lo que se refiere al Comité Veterinario Permanente (CVP) del Cono Sur, y de acuerdos bilaterales con los países que mantiene relaciones comerciales. A través de la Resolución 848/1998 se crea el Documento de Transito Animal (DTA), quién reemplaza al Permiso Sanitario para el Tránsito de Animales. Todo animal que transite por el territorio argentino debe estar acompañado de su correspondiente DTA y documentado en el Sistema de Gestión Sanitaria. En el año 2008 el SENASA desarrolló el Sistema Integrado de Gestión de Sanidad Animal (SIGSA), establecido por la Resolución N° 356/2008, el cual reemplaza al Sistema de Gestión Sanitaria (SGS). Es un sistema informático en red con el fin de administrar el Registro de Establecimientos con existencia de animales bajo Programas Sanitarios, el registro de eventos sanitarios, el registro de los movimientos de animales entre establecimientos, y el tránsito de mercancías en general, mediante la emisión del Documento de Tránsito Electrónico (DT-e). Actualmente conviven ambos sistemas (SGS-SIGSA), encontrándose en un período de transición. Página 2 �2.1. DESCENTRALIZACIÓN La descentralización administrativa por medio de la regionalización forma parte de la estrategia del cambio actual institucional del Senasa enfocada al fortalecimiento de las políticas nacionales en materia de sanidad animal y vegetal e inocuidad agroalimentaria. La Regionalización plantea la descentralización de las decisiones operativas. Es un avance hacia la delegación de acciones operativas del SENASA a nivel local. Permite al organismo contar con un ámbito adecuado para una más amplia y permanente articulación con los actores locales públicos y privados, mejorar la atención a los productores y ciudadanos, coordinar las acciones de campo y realizar el seguimiento de procesos y evaluación de impactos. Este organismo sanitario tiene en función 14 centros regionales cuyo accionar abarca la totalidad del territorio nacional. En este nuevo contexto, el nivel central con responsabilidad nacional se encargará de cumplir las funciones de normar, orientar, capacitar y auditar. Por tanto, la regionalización apunta a crear, de manera gradual y sustentada en el consenso de los actores institucionales, un Senasa centralizado para las cuestiones normativas y de control y federal en cuanto a su estructura de gestión. La Resolución 225/2006 del Senasa y sus modificatorias redefine la jurisdicción de las cinco regiones (Noreste, Noroeste, Nuevo Cuyo, Pampeana y Patagonia) integradas por un total de catorce (14) centros regionales. La Región NEA está integrada por los Centros Regionales de Misiones-Corrientes, Entre Ríos y Chaco-Formosa. La Región NOA tiene dos centros regionales, NOA-Norte (Salta, Jujuy) y NOA-Sur (Tucumán, Catamarca, Santiago del Estero). La Región Nuevo Cuyo también está dividida en dos centros regionales, Cuyo (La Rioja, San Juan, Mendoza) y La Pampa-San Luis. La Región Pampeana por su parte está integrada por cuatro centros regionales: Metropolitana, Buenos Aires Norte, Buenos Aires Sur, Santa Fe y Córdoba. Finalmente, la Región Patagonia incluye la regional Patagonia Norte (Río Negro, Neuquén) y Patagonia Sur (Chubut, Santa Cruz, Tierra del Fuego). Página 3 �La estructura funcional de las Regionales comprende: • Unidad Regional Operativa (URO) a nivel central, con una Coordinación de Desarrollo Regional y Apoyo Operativo y una Coordinación de Seguimiento y Evaluación Regional • Coordinación General Regional • Coordinación Temática Regional (una por cada área temática: Sanidad Animal, Protección vegetal, Fiscalización Agroalimentaria, Administración, Capacitación y Laboratorio) 2.2. ORGANIZACIÓN El SENASA es responsable de la implementación de las políticas con relación a la sanidad y calidad animal y vegetal, supervisando el cumplimiento de las regulaciones vigentes en relación a esos temas. Al mismo tiempo, es responsable por el tráfico nacional y el control de los animales que se importan y exportan, como así también de los productos animales y vegetales y sus derivados, los agroproductos, productos farmacológicos y veterinarios, agroquímicos y fertilizantes. El personal del SENASA está integrado por 5.000 funcionarios distribuidos entre todas sus áreas. Página 4 �REGIONALIZACION Centro Regional MisionesCorrientes Centro Regional Entre Ríos Centro Regional ChacoFormosa Centro Regional NOA-Norte Centro Regional NOA-Sur Centro Regional Cuyo Centro Regional La PampaSan Luis Centro Regional Santa Fe Centro Regional Córdoba Centro Regional Patagónia Centro Regional Metropolitano Norte Centro Regional Buenos Aires Centro Regional Patagónia Norte Sur Centro Regional Buenos Aires Sur Las áreas principales dedicadas a la Sanidad Animal son: • DIRECCION NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL (DNSA) • DIRECCION NACIONAL DE FISCALIZACION AGROALIMENTARIA (DNFA) • DIRECCION DE LABORATORIOS Y CONTROL TÉCNICO (DILACOT) Página 5 �DIRECCION NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL (DNSA) Responsabilidad primaria: Desarrollar las acciones de prevención, control y erradicación de las enfermedades de los animales, asegurando el cumplimiento de las normas legales vigentes. Objetivos generales: • Formula, propone y evalúa programas de lucha contra las enfermedades infecciosas y parasitarias de los animales y las zoonosis • Programa, ejecuta y audita planes sanitarios de lucha • Coordina las acciones epidemiológicas en enfermedades endémicas y exóticas o emergentes en el país. • Planifica y ejecuta acciones de vigilancia para determinar prevalencias o ausencias de las principales enfermedades que afectan a los animales • Fiscaliza el movimiento de animales, en los aspectos higiénico sanitarios, y otorga las certificaciones correspondientes. Su estructura funcional comprende las siguientes áreas: • DIRECCIÓN DE EPIDEMIOLOGÍA • DIRECCIÓN DE CUARENTENA ANIMAL • DIRECCIÓN DE LUCHAS SANITARIAS • COORDINACIÓN GENERAL DE CAMPO • COORDINACIONES TEMÁTICAS REGIONALES DE SANIDAD ANIMAL • SUPERVISIONES REGIONALES • OFICINAS LOCALES Dirección de Cuarentena Animal tiene como instancia asesora la Comisión Técnica Asesora de Cuarentena. Asimismo, la Dirección de Epidemiología cuenta con un órgano asesor, la Comisión Técnica Asesora de Epidemiología, formada por representantes del Instituto Nacional de Tecnología Agroalimentaria (INTA), Centro de Virología Animal (CEVAN), de distintas Facultades y del SENASA, creada por Resolución SENASA N° 369/2001. DIRECCIÓN DE EPIDEMIOLOGÍA Acciones: • Análisis epidemiológico de la situación sanitaria, control de casos y focos de enfermedad. • Coordinación de las acciones necesarias para el mantenimiento del sistema nacional de vigilancia epidemiológica. • Supervisión de la fiscalización del movimiento de animales en sus aspectos higiénico sanitarios. • Planificación de encuestas, muestreos diagnósticos y monitoreo serológico. • Análisis bioestadísticos • Contingencias sanitarias DIRECCION DE CUARENTENA ANIMAL • Intervenir o proponer planes, programas y normas sanitarias de prevención de enfermedades exóticas. • Formular, proponer y evaluar las acciones para la erradicación de enfermedades exóticas. • Desarrollar la investigación permanente sobre enfermedades exóticas e inexistentes en el país y difundir la legislación que regula su control sanitario y proponer las modificaciones vigentes en la materia. Página 6 �• Elaborar o intervenir en las propuestas de normas sanitarias de prevención del ingreso de enfermedades exóticas y/o de alto riesgo. • Coordinar la evaluación permanente de factores de riesgo de introducción o propagación de enfermedades notificables. • Intervenir en la modificación de los protocolos y convenios sanitarios internacionales respecto de los requisitos y certificaciones acordadas. • Proponer las pautas sanitarias tendientes a minimizar el riesgo de introducción de enfermedades exóticas y/o de alto riesgo en la importación de animales, material de reproducción, productos y subproductos de origen animal capaces de vehiculizar y/o favorecer la propagación de las citadas enfermedades. • Elaborar y mantener actualizada una base de datos con la información sobre la situación zoosanitaria mundial. • Organizar y mantener actualizados los Registros de competencia de la Dirección DIRECCIÓN DE LUCHAS SANITARIAS Acciones: •Planificación y diseño de campañas de prevención, de lucha y erradicación de enfermedades animales •Desarrollo de la investigación permanente sobre las enfermedades endémicas y propuesta de las modificaciones a la normativa vigente •Coordinación y asistencia técnica del proceso de implantación, control y auditoría de los diferentes programas de lucha COORDINACIÓN GENERAL DE CAMPO Acciones: •Coordinación y gestión del cumplimiento de las acciones de prevención, control y erradicación de enfermedades de los animales bajo programas de lucha •Control del cumplimiento de las acciones sanitarias, en aplicación de la ley de Policía Sanitaria y las normas legales en la materia •Fiscalización de los movimientos de animales, habilitación de instalaciones y certificaciones. COORDINADORES GENERALES REGIONALES Responsabilidades: •Coordinar, planificar y dirigir la ejecución de las acciones contempladas en los planes, programas y actividades de las diferentes Direcciones del SENASA a fin de asegurar el cumplimiento de la normativa aplicable en materia de sanidad animal y vegetal e inocuidad y calidad agroalimentaria. •Ejercer las acciones específicas de fiscalización y toda otra función delegada por la Dirección Nacional de Fiscalización Agroalimentaria en el ámbito de su jurisdicción. •Elaborar el presupuesto anual en forma conjunta con los coordinadores regionales temáticos y las Direcciones Nacionales, verificando su ejecución. •Intervenir en el área de su jurisdicción, en las relaciones institucionales y, ejercer la representación del SENASA ante organismos públicos y privados. •Entender en la administración y desarrollo de los recursos humanos disponibles, así como elevar las necesidades de personal, en concordancia con los coordinadores regionales temáticos. •Disponer las acciones técnico-administrativas correctivas que pudieran corresponder. •Proponer a la autoridad central las necesidades de capacitación del personal. •Mantener actualizados los registros técnicos y administrativos requeridos por las Direcciones del Organismo. Página 7 �•Mantener actualizado el registro de los bienes patrimoniales existentes en su jurisdicción. •Promover la difusión de las actividades en materia sanitaria y calidad agroalimentaria. COORDINADORES REGIONALES TEMATICOS Responsabilidades: •Planificar y Coordinar la ejecución de las acciones correspondientes a su área dentro de la jurisdicción, garantizando su implementación y seguimiento. •Entender en la elaboración y ejecución del presupuesto anual acorde a las necesidades de recursos operativos del área a su cargo y la proyección de los ingresos. •Controlar en el ámbito jurisdiccional la correcta aplicación de las normas legales vigentes que rigen en su área temática, interviniendo en la tramitación de las actuaciones originadas por infracciones a las mismas. •Entender en la planificación, coordinación y ejecución de tareas preventivas y de atención de emergencias sanitarias. •Calificar el personal a su cargo. •Elaborar y proponer a la autoridad regional las necesidades anuales de capacitación del personal. •Coordinar las tareas de gestión administrativa, los recursos humanos y bienes patrimoniales del área temática a su cargo. •Elevar en forma periódica o a requerimiento del Responsable del Centro Regional las novedades relacionadas a las actividades de su área. •Asistir al Responsable del Centro Regional, en las comisiones regionales y/o provinciales que ya estén conformadas o que se conformen en el futuro. SUPERVISORES REGIONALES Responsabilidades: • Supervisión de las acciones de prevención, control y erradicación de enfermedades en su jurisdicción y las acciones de vigilancia epidemiológicas • Supervisión y fiscalización del cumplimiento de las normas legales vigentes y la organización y funcionamiento de las oficinas locales. • Ejecución y evaluación del desempeño del personal de campo afectado a las mismas • Representación oficial del SENASA en su zona. VETERINARIOS LOCALES Responsabilidades: • Ejecución de las acciones de prevención, control y erradicación de los programas de lucha de su jurisdicción • Atención de las notificaciones, sospechas y focos de enfermedades y tareas de vigilancia epidemiológica y monitoreo permanente • Ejecución de acciones de policía sanitaria y cumplimiento de la normativa vigente • Control y fiscalización de los movimientos y transporte de ganado y emisión de las certificaciones correspondientes • Actualización de los registros documentales de productores, establecimientos, existencias ganaderas, movimientos, controles sanitarios y administrativos de su jurisdicción. Las Delegaciones son oficinas ubicadas en pequeñas localidades, dependientes de las Oficinas Locales y su función es facilitar ciertos trámites al productor. La implementación de las acciones en las jurisdicciones correspondientes se efectúa a través de los Veterinarios Locales, ubicados en 353 Oficinas Locales distribuidas estratégicamente en todo el Territorio Nacional, dependientes de 30 Supervisiones Página 8 �Regionales. Las Supervisiones Regionales dependen de las Coordinaciones Regionales Temáticas de cada Regional. DIRECCION NACIONAL DE FISCALIZACION AGROALIMENTARIA (DNFA). Interviene en el control, a nivel federal, del cumplimiento de las regulaciones higiénicosanitarias de los frigoríficos, plantas elaboradoras y/o depósitos de productos y subproductos de origen animal y vegetal, ya sean comestibles o de uso industrial. Asimismo, tiene a su cargo la aprobación de plantas faenadoras y/o procesadoras de productos y subproductos derivados de los animales domésticos. Los Servicios de Inspección Veterinaria son responsables de implementar dichos controles en plantas nacionales de faena aprobadas para exportación y consumo interno. Dentro de su estructura se encuentra la DIRECCIÓN DE TRÁFICO INTERNACIONAL con la COORDINACIÓN DE FRONTERAS Y TRÁFICO FEDERAL. DIRECCION DE LABORATORIOS Y CONTROL TECNICO (DILACOT) Es el Laboratorio Nacional de Referencia en la inocuidad de alimentos y la sanidad animal y vegetal; consta de dos Coordinaciones Generales: Laboratorio Animal y Laboratorio Vegetal; además cuenta con Laboratorios Regionales y una Red de Laboratorios Nacionales habilitados por el SENASA y distribuidos en todo el país. Como tal: • Establece los métodos y protocolos de análisis utilizados por él y por los laboratorios de la Red Nacional de Laboratorios del SENASA. • Interviene en la resolución de controversias. • Confirma los resultados positivos emitidos por los laboratorios de la Red Nacional. • Produce e interviene en ensayos interlaboratorios. • Ejerce el control periódico de la Red de Laboratorios. • Asiste a las otras direcciones del SENASA en la evaluación de los resultados analíticos. • Interviene en la actualización de la legislación de su incumbencia y participa en Foros Internacionales (Codex Alimentarius, MERCOSUR, OIE, etc.). El Laboratorio Animal de SENASA, ubicado en la localidad de Martínez, provincia de Buenos Aires, es el único autorizado a efectuar diagnósticos en la vigilancia de las enfermedades de los peces en estudio. 2.3. LEGISLACIÓN • Ley Nº 3959 de Policía Sanitaria de los Animales, reglamentada por el Decreto de fecha 8 de noviembre de 1906. Por medio de la cual se declara la obligatoriedad de notificación ante la sospecha de presencia de enfermedades animales. La actualización de incorporación de enfermedades se encuentra en trámite avanzado bajo el exp. N° 492332/2009. • Resolución SENASA N° 1354/1994 Requisitos de importación: Operatoria para autorizar la importación de animales vivos o su material reproductivo. • Predios de Cuarentena de Importación para Salmónidos: Proyecto de Resolución en trámite. Exp. N° 404167/2009. Página 9 �• Resolución SAGPyA N° 417/1997 crea el Registro Nacional Sanitario de Productores Agropecuarios (RENSPA) y sus modificatorias. • Resolución SENASA Nº 848/1998 Documento de Transito (DTA) aprueba el Documento de Tránsito Animal el cual sustituirá el Permiso Sanitario para Tránsito de Animales (PSTA), creado por la Resolución N° 473 del 12 de julio de 1995. • Resolución SENASA N° 299/1999 Indica los procedimientos de control en los pasos de frontera, terrestres, aéreos, marítimos, etc. que deben aplicarse a través del tránsito de personas, equipajes y vehículos. Su objetivo está dirigido expresamente a la prevención. • Resolución SENASA Nº 779/1999 Emergencias Sanitarias (SINAESA). Aprueba el Sistema Nacional de • Requisitos para Importación (m1062) de 2000 Circular de la Dirección de Cuarentena Animal de SENASA. Requisitos Zoosanitarios para amparar las operaciones de importación y tránsito de peces vivos y/o su material reproductivo a la República Argentina. • Requisitos Sanitarios de Importación de Material Acuícola Vivo: Proyecto de Resolución en trámite (reemplazará m1062).Exp. N° 282509/2007 • Resolución SENASA N° 21/2001 que crea el Programa de Enfermedades de los Animales Acuáticos en Argentina donde se determinan las patologías ictícolas presentes en el territorio nacional, se elaboran normas y se planifica y diseña la vigilancia activa de las enfermedades. • Resolución SENASA Nº 501/01 Establece los procedimientos operativos para el control en los puestos de frontera habilitados para el ingreso al país de animales, productos, subproductos, etc. de competencia del Servicio en el ámbito animal. • Resolución SENASA N° 895/2002 Plan Nacional de Prevención del Ingreso de Plagas y Enfermedades a través de residuos orgánicos. • Resolución SENASA N° 422/2003 que establece en el SENASA la adecuación a la normativa internacional vigente en cada materia sobre los sistemas de: notificación de enfermedades animales, de vigilancia epidemiológica y seguimiento epidemiológico continuo, análisis de riesgo, emergencias sanitarias y un dispositivo reglamentario que contemple todos los aspectos de protección y lucha contra las epizootias. • Resolución SAGPyA N° 1314/2004 Establece Normas que regulan la producción de Organismos Acuáticos Vivos en los emprendimientos/ establecimientos que se dediquen a la actividad de acuicultura, dentro del Territorio de la REPUBLICA ARGENTINA. • Colectiva de la Coordinación General de Campo N° 58/2007: Inscripción al RENSPA y movimiento con DTA para establecimientos acuícolas. • MEMORANDO Dirección de Luchas Sanitarias N° 12/2009: Comunica a los Centros Regionales la Acreditación de los Inspectores Sanitarios Acuícolas. Página 10 �• Colectiva de la Coordinación General de Campo N° 54/2009: Toma de muestras y envío al laboratorio. En la misma se describe el procedimiento ante la solicitud de muestreo previo a traslados u otros eventos que lo requieran. En los siguientes sitios web se puede encontrar la legislación citada anteriormente http://infoleg.mecon.gov.ar/infolegInternet/mostrarBusquedaNormas.do Página 11 �3. DESCRIPCIÓN DEL PAÍS Y DE LA ZONA 3.1. FRONTERAS ARGENTINAS Caracterización geográfica de las fronteras argentinas. La frontera terrestre argentina se puede dividir de la siguiente manera: Frontera con CHILE (Oeste y Sur). Frontera con BOLIVIA (Norte). Frontera con PARAGUAY (Norte). Frontera con BRASIL (Noreste y Este). Frontera con URUGUAY (Este). El único país que limita con la zona bajo estudio es la República de Chile, la cual se encuentra al OESTE, con un total de kilómetros de frontera (seca) de 4.591 Km. La Cordillera de los Andes acompaña todo el límite como frontera natural. 3.2. DESCRIPCIÓN GEOGRÁFICA DEL PAÍS La Argentina tiene una superficie total de 2.780.400 km2, comprende un territorio muy variado que incluye altas montañas, desiertos, vastas llanuras y bosques palustres. Las escarpadas montañas de los Andes se extienden a lo largo de la frontera occidental del país. Una meseta árida y azotada por vientos, la Patagonia, se extiende hacia el sur. La Pampa, una llanura herbosa y fértil cubre mitad del territorio. El extremo sur de la Argentina se encuentra a sólo 970 km de distancia de la Antártida en el Polo sur, mientras que el extremo norte tiene un clima subtropical. La frontera occidental del país sigue el relieve de los Andes, comenzando a partir de los Andes de la Patagonia en el sur, y continuando hacia la cordillera andina en la frontera norte con Bolivia. En el sur la altitud no sobrepasa los 3 600 m, mientras que en el norte esta supera los 6 400 m. Al este de los Andes, el terreno es generalmente plano o suavemente ondulado, y desciende gradualmente desde una elevación de 600 m, hasta el nivel del mar. La región del Chaco se sitúa entre el río Paraná al este, y las montañas más bajas de los Andes, al oeste. La región, cubierta sobre todo de matorrales, es seca durante la mayor parte del año, pero a menudo es objeto de fuertes lluvias durante el verano. La región denominada Mesopotamia se sitúa entre los ríos Paraná y Uruguay. Esta región tiene un clima cálido y húmedo, y posee tierra agrícola productiva en casi toda su extensión. La Pampa es una llanura sin árboles y alberga las regiones agrícolas más productivas del país. Esta llanura cubre un quinto del territorio nacional. En Patagonia, situada al sur de la Pampa, el terreno es una estepa árida y desolada, azotada por los vientos. Aunque ocupa más de un cuarto del territorio nacional, los suelos pobres y las escasas precipitaciones hacen de la Patagonia una tierra poco apropiada para la agricultura. Sus llanuras se usan sobre todo como pastos para el ganado ovino. La isla de Tierra del Fuego se sitúa en el extremo sur de América y el estrecho de Magallanes la separa de la tierra firme. Argentina y Chile comparten este territorio. La Argentina tiene un clima templado en casi todo el territorio, a excepción de una reducida área subtropical situada en el nordeste, el noroeste. (Fuente: FAO 2009) El Sector Cordillerano Austral, tiene una altura promedio de 2.500 metros sobre el nivel del mar, con profusión de lagos, que tienen gran importancia en la regulación de Página 12 �las cuencas hídricas. La altura va disminuyendo progresivamente desde la cordillera hasta la costa atlántica, constituyendo una extensa meseta semidesértica en la parte central. La zona de montaña (parte suroccidental) es húmeda o subhúmeda. En la Patagonia Andina las precipitaciones superan los 2.000 mm por año, disminuyendo hacia la zona atlántica, donde el promedio anual es de sólo 200 mm. Las grandes variaciones climáticas a lo largo del territorio nacional limitan la producción de salmónidos a las regiones frías del país así como también la distribución de los ejemplares silvestres introducidos a las diferentes cuencas hidrográficas. Página 13 �3.3. DESCRIPCIÓN DE LA ZONA LIBRE La zona bajo estudio se encuentra en la región patagónica de nuestro país. Abarca parte de las provincias de Neuquén y Río Negro. Entre las provincias nombradas anteriormente existen dos cuencas hidrográficas importantes: la cuenca del Río Neuquén y la cuenca del Río Limay, que con la anterior forman parte de la cuenca del Río Negro que desagua en el Océano Atlántico. Las cuencas de los ríos Limay y Neuquén suman una superficie de aproximadamente 70.000 km2 (Hidronor, 1978) Página 14 �El lago Nahuel Huapi, de origen glacial fue formado por el endicamiento de una morena frontal (Cordini, 1939) y se ubica a los 764 msnm, presentando una superficie de 529 km2. El área total que abarca su cuenca, es de 2951 km2. Se trata de un cuerpo de agua que posee una cubeta central, con siete áreas bien definidas, denominadas “brazos”, cada uno de ellos, con características propias. Tales brazos ubicados transversalmente (y también de origen glacial), se ocasionaron debido al desplazamiento de diferentes morenas, a partir de la Cordillera de los Andes, siendo los principales el del Campanario, de la Tristeza, Blest y Huemul. El agua del lago es de carácter OLIGOTROFICO (Luchini, L., 2004). La profundidad máxima del lago ha sido registrada a los 438 m y la media se considera de 157 m. El perímetro es de 357 km, presentando una forma muy irregular y su volumen alcanza los 83.053 hm3, con un recambio de agua total que se produce cada 11,6 años. Debido a su historia geológica, sus aguas son de bajo contenido mineral, con una conductividad media de 31,5 micro S/cm, respondiendo sus mayores iones a una relación bicarbonatada – cálcica. Su pH promedio es de 7,5, con un mínimo de 6,9 y un máximo, excepcional, de 8,1. En esta área, las precipitaciones anuales se presentan con un marcado gradiente de Oeste a Este, alcanzando más de 2000 mm en el sector plenamente cordillerano y hasta unos 700 mm en el sector oriental hacia la meseta patagónica, en el denominado “ecotono bosque-estepa”. Las temperaturas anuales del agua, oscilan entre los 8º C en invierno y hasta los 15º C en verano. Desde el punto de vista de su limnología, se lo considera como un lago monomíctico cálido (su temperatura no desciende por debajo de los 4º C). Muestra circulación invernal y presenta estratificación térmica directa en verano; ubicándose la termoclina entre los 40-55 m de profundidad (Pedrozo et al., 1997). En todas las áreas monitoreas sobre base Página 15 �anual, el Oxígeno Disuelto (OD) presentó concentraciones cercanas a la saturación en superficie y valores algo menores en profundidad (AIC-DPA, 2001-2002). De este lago nace el río Limay que marca el límite entre ambas provincias (Neuquén y Río Negro). Al represarse el río en varios tramos, quedaron constituidos una serie de embalses con determinadas características según sus tiempos de maduración, prácticas de manejo y uso. Los grandes embalses se denominan ALICURA (único dentro de la zona libre), PIEDRA del AGUILA, PICHI PICUN LEUFU y EZEQUIEL RAMOS MEXÍA. La finalidad fundamental de estos embalses es la producción de energía hidroeléctrica y como secundaria, la de regulación de los caudales para posibilitar el uso de tierras sujetas a la acción de los picos de crecientes de los ríos. Actualmente, diferentes empresas explotan las represas, siendo la cuenca del Limay sometida a la vigilancia medioambiental por la Autoridad Interjurisdiccional de Cuenca (AIC). La construcción de los embalses actuales fue llevada a cabo por la empresa Hidronor S.A., de carácter mixto, que fuera posteriormente privatizada. El primero en construirse fue el Chocón (1974) y el último, el de Pichi Picún Leufú (1999). Al ser la piscicultura en jaulas suspendidas, dentro de nuestro país de incipiente data, solamente el embalse de Alicura (con 18 años de haber sido construido) es el único de la serie que registra, actualmente, instalaciones de cultivos de muy diferente porte (desde 6 y hasta 700 TM de producción por productor) que producen en conjunto, un volumen aproximado de 1000 a 1200 tn en peces vivos, de la especie Oncorhynchus mykiss o trucha arco-iris. (Luchini, L., 2004). Página 16 �El río LIMAY próximo a su nacimiento en el paraje Rincón Chico, recibe desde el oeste al arroyo Newbery, el arroyo Chacabuco y por la margen derecha el arroyo La Fragua. En la zona denominada “el Anfiteatro” lo alcanza el arroyo del Corral. El río describe luego una curva hacia el este hasta la zona conocida como “Bajada de Mena”, sitio al que arriba el arroyo Carbón por margen izquierda y el arroyo Chacay por la derecha. El río Limay continua hasta el lugar llamado Confluencia, donde desemboca el río TRAFUL, el cual nace de los aportes que origina el río Pichileufú en la cordillera y que escurre hasta el lago Traful. A la salida del lago, el río Traful recibe los aportes de los ríos Mineros, Cuyin Manzano, Arroyo Blanco y Córdoba. (Alvarez, M., 2004) EMBALSE ALICURA El Embalse de Alicura es el primero de los cuatro localizados sobre el río Limay y el único incluido dentro de la zona libre, fue inaugurado en 1985. Su coronamiento se localiza en plena meseta patagónica (meseta de Alicurá), mientras que la zona correspondiente a la llamada “cola de embalse”, se encuentra situada en pleno ecotono, entre la estepa y el bosque andino-patagónico, donde desemboca el río Traful (Confluencia) proveniente del lago homónimo. El clima de la zona donde se encuentra el mayor porcentaje del espejo de agua, es de carácter semiárido. Las precipitaciones medias anuales alcanzan a 500 mm. Las temperaturas en enero muestran un promedio de 18° C, mientras que en julio oscilan cercanas a los 4°C (Alvarez, 2004) Dista 100 km. de la ciudad de San Carlos de Bariloche aproximadamente a los 40°35′S 70°45′O, y está ubicado a 705 msnm. Por sus características limnológicas es considerado un lago Oligotrófico u oligomesotrófico (Dir. Rec. Hídricos, 1995; Alonso, 2003; Diaz, et al 2007). La ubicación y características generales del embalse son las siguientes: Parámetro Valor Latitud 40°40’S Longitud Altitud Área km2 Volumen Km3 Z media (m) Cota max (msnm) Variación max nivel (m) Area ep % Tw año r (año-1) Lo (km) Z max (m) 71°00 ’W 705 msnm 65 3.27 48.3 705 13 17.6 0.36 2.8 183 115 Z media: profundidad media, Tw: Tiempo de residencia, r: Tasa de renovación, Z max: profundidad máxima (Fte: AIC, Alvarez 2004) Página 17 �MAPA DE LA ZONA LIBRE (en azul oscuro se muestra delimitada la parte de la cuenca que se declara libre y en gris se marca el límite terrestre) La zona libre se encuentra comprendida por la Cuenca Alta del Río Limay y el Embalse Alicura, actuando como barrera física la represa de Alicura. Página 18 �3.4. POBLACIÓN SILVESTRE DE LA REGIÓN PATAGÓNICA La comunidad de peces en la Patagonia continental se caracteriza por tener una muy baja riqueza específica autóctona, que incluye especies de distintos orígenes tales como el neotropical, circumpolar y un grupo importante de endemismo (Arratia et al 1983). Las especies autóctonas presentes en la región se encuentran representadas por siete Ordenes, diez Familias y un total de veintiún especies. A principio del año 1900 hubo una fuerte política de introducción de salmónidos provenientes de Estados Unidos de Norteamérica e Inglaterra impulsada por el gobierno nacional, en zonas consideradas con valor para la pesca deportiva. La trucha arco-iris (Oncorhynchus mykiss), introducida, ha sido la que se ambientó y diseminó con mayor éxito en gran parte de los ambientes acuáticos del territorio argentino, Ha contribuido en un alto porcentaje al turismo relacionado a la pesca deportiva, especialmente en los lagos cordilleranos patagónicos, junto a otras especies como la Salmo trutta o “trucha marrón”, la Salvelinus fontinalis o “trucha de arroyo” y el salmón Salmo salar. A diferencia del norte patagónico, en el sur de la provincia de Santa Cruz y en Tierra del Fuego, la especie que mejor se adaptó fue la trucha marrón que en parte es residente y en parte, migrante al mar. (Luchini, L., 2004) Dentro de las cuencas descriptas anteriormente, además de las especies exóticas enumeradas, existen especies autóctonas, como las percas: la criolla Percichthys trucha y P.vinciguerrai, la perca bocona (P.colhuapiensis); puyen pequeño (Galaxias maculatus), el pejerrey patagónico (Odonthesthis hatcheri), el bagre otuno y el bagre del torrente (Diplomystes viedmensis y Hatcheria macraei, respectivamente). Página 19 �4. ACTIVIDAD ACUÍCOLA EN LA ZONA 4.1. DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD ACUÍCOLA DE LA ZONA La acuicultura comercial de orden semi-industrial, es de muy reciente inicio en Argentina, tanto en aguas continentales templado-frías, como en aguas cálidotempladas y marinas. La rama de la “piscicultura de aguas frías” (específicamente referida al cultivo de trucha arco-iris) que es la más antigua, posee su mayor expresión en la amplia región nordpatagónica. A nivel artesanal, los cultivos se iniciaron aproximadamente, entre las décadas del ´70 al ´80 y a partir de la apertura de los embalses situados en dicha región (circa 1992) se incrementó la producción con el advenimiento de producciones generadas en jaulas flotantes, ya que estos cuerpos de agua presentan características ambientales ideales para un desarrollo intensivo, pudiendo aumentarse el volumen de los cultivos en peces Salmónidos y de hecho, su factibilidad de exportación con producto de excelente calidad.(Luchini, L., 2004) A partir de 1990, se instalaron en el Embalse de Alicurá las primeras jaulas flotantes para el cultivo intensivo de la trucha arco-iris, debido a las características favorables del ambiente para esta actividad (del Valle, 1996). Actualmente, la producción de trucha arco iris por cultivo, abarca once concesiones otorgadas, ocho de las cuales se encuentran en producción, con un volumen total estimado de 1000 ton a 1200 ton anuales promedio (Dirección de Acuicultura, 2009). Estos emprendimientos se encuentran localizados sobre la margen izquierda del embalse (margen de Neuquén), dado el acceso directo por la ruta nacional N° 237, por lo que responden a las normativas para acuicultura a la provincia del Neuquén. En el Embalse se realiza la fase de pre-engorde y engorde final de los animales en los 8 establecimientos de cultivo. La capacidad de producción sólo de este embalse, fue estimada en forma conservadora en alrededor de 3500 a 5000 tn/año (Wicki y Luchini, 1996). Actualmente, se encuentra en revisión. Las hatcheries que proveen alevines a estos establecimientos de engorde se encuentran distribuidas en su mayoría en la región nordpatagónica. Estas hatcheries iniciaron su producción de alevinos a partir de reproductores capturados en la zona bajo estudio. Por su parte, las ovas importadas se mantienen bajo cuarentena en establecimientos de ubicación extrazonal, a más de 1000km de distancia (ver importación y cuarentena). 4.2. REGISTROS DE ESTABLECIMIENTOS ACUÍCOLAS 4.2.1. RENSPA A través de la Resolución SENASA N° 417/97 se crea el Registro Nacional Sanitario de Productores Agropecuarios (RENSPA) en el ámbito de la Dirección Nacional de Sanidad Animal de SENASA, el cual es obligatorio para todos los productores pecuarios del país. Este registro incorpora datos del productor, características de la producción y ubicación geográfica del establecimiento, entre otros. De esta manera el servicio ubica al establecimiento y a los responsables de la sanidad de los mismos y fortalece a través de los datos, el control sanitario y epidemiológico así como los métodos de prevención y vigilancia diseñados por los programas sanitarios. En la zona existen 8 establecimientos de engorde y 3 hatcheries que abastecen alevinos los cuales se encuentran inscriptos a este registro, en las oficinas locales de Página 20 �SENASA de la jurisdicción correspondiente. Además existen 8 hatcheries extrazona que abastecen alvinos a los establecimientos de engorde dentro de la zona libre, los cuales también se encuentran inscriptos en este registro. 4.2.2. RENACUA La Resolución N° 1314 del 2004 de la ex Secretaria de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos crea el único Registro Nacional de Emprendimientos de Acuicultura en el ámbito de la Dirección de Acuicultura del actual Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca. El mismo es de carácter obligatorio y en la resolución se establecen las normas que regulan la producción de organismos acuáticos vivos en los establecimientos/emprendimientos de acuicultura. Los 19 establecimientos descriptos anteriormente también se encuentran inscriptos en este registro. En el país el 70% de los productores de salmónidos se encuentran ubicados en la región patagónica. Mapa satelital con los 8 establecimientos de engorde georeferenciados. Página 21 �4.3. CONTROL DE DESPLAZAMIENTOS Para poder movilizar animales vivos desde una hatchery a establecimientos de engorde, éstos deben estar acompañados de los siguientes documentos: • El Documento de Tránsito de Animales (DTA) que es extendido por las oficinas del SENASA, se encuentra reglamentado por la Resolución SENASA Nº 848/98. • La Guía de Traslado extendida por la autoridad competente de cada provincia, previa presentación del DTA. • Certificado de lavado y desinfección del transporte expedido en los lavaderos habilitados por el SENASA El entorno de controles se complementa con un registro de camiones habilitados para el transporte de animales de acuerdo a lo establecido en la Resolución SENASA Nº 97/99, y una forma de identificación que se efectúa por lote en la hatchery de procedencia. Además de esos requisitos, todo movimiento de animales hacia la zona libre debe ir acompañado de un Certificado sanitario, otorgado por la oficina local de origen de SENASA, en relación a las enfermedades de notificación obligatoria. Por este motivo se muestrean animales de los establecimientos y se les realiza análisis por PCR en el laboratorio oficial de SENASA. Como acción de policía sanitaria se realizan controles e inspecciones en puntos estratégicos • Control de la documentación. • Control de la identificación, categoría, especie, etc. Los controles y fiscalización los efectúa también el SENASA, por aplicación de la Resolución SENASA Nº 178/2001 de control de tránsito. Cualquier animal que transite sin el DTA correspondiente, es sometido a sacrificio sanitario en forma inmediata, de acuerdo a las reglamentaciones vigentes. Arribados los animales a su lugar de destino el productor debe denunciar el ingreso con el DTA correspondiente en la oficina local de destino dentro de las 48hs. 4.4. INDUSTRIA En el país existen 284 plantas frigoríficas para procesamiento de pescado proveniente de la pesca continental y marítima, los cuales pueden ser utilizados para procesamientos de pescado provenientes de la acuicultura. Las mismas cuentan con una habilitación otorgada por la Coordinación Temática de Fiscalización Agroalimentaria correspondiente, siguiendo las indicaciones de la Decreto N° 4238/1968 Capítulos 23 y 31. Además deben contar con habilitación provincial y municipal. A través de la Resolución SENASA N° 685/2005 de la Dirección Nacional de Fiscalización Agroalimentaria, se establecen auditorias sobre estas plantas. Página 22 �Gráfico de porcentaje de frigoríficos de productos de la pesca por provincia (República Argentina) Actualmente solo cinco plantas frigoríficas procesan los animales provenientes de la zona monitoreada, estas son: • Ahumados Patagónicos: Habilitación N° 4370 • Manila: Habilitación N° 4413 • Establecimiento Los Lagos: Habilitación N° 4618 • Río Manso: Habilitación N° 2878 • Harengus S.A.: Habilitación N° 2265 Las primeras cuatro plantas faenadoras se encuentran en la provincia de Río Negro y la última en la provincia de Chubut. En la siguiente tabla se detalla la cantidad de kilos de pescado enviados a faena a los establecimientos enumerados anteriormente durante los años 2007, 2008 y 2009 desde los establecimientos de la zona libre. Año 2007 - Ingresos de Materia Prima Rubro XLVI A E. Of. Establecimiento 4370 Ahumados Patagónicos 2878 Rio Manso SA Total Ene Feb Mar 1.470.715 136.457 121.455 146.215 1.065.903 88.731 82.865 97.223 404.812 47.726 38.590 48.992 Abr May 86.590 127.382 65.053 86.131 21.537 41.251 Jun Jul Ago Sep Oct Nov Dic 99.028 118.224 122.722 116.328 153.766 141.205 101.344 71.685 91.267 97.385 91.192 116.309 107.058 71.004 27.343 26.957 25.337 25.136 37.457 34.147 30.340 Año 2008 - Ingresos de Materia Prima Rubro XLVI A E. Of. Establecimiento 4370 Ahumados Patagónicos 2878 Rio Manso SA Total Ene Feb Mar Abr 1.164.775 112.404 129.677 114.303 111.648 896.169 68.133 104.239 92.873 84.624 268.606 44.271 25.438 21.430 27.024 May 97.179 80.859 16.320 Jun 82.173 65.416 16.757 Jul 66.234 57.978 8.256 Ago 58.566 41.659 16.907 Sep Oct Nov 96.644 109.120 107.995 72.468 85.024 86.049 24.176 24.096 21.946 Dic 78.832 56.847 21.985 Total Ene Feb Mar Abr May Jun 1.223.114 131.468 118.222 145.788 119.371 121.216 105.649 787.828 104.424 78.967 102.479 103.080 90.561 83.127 209.533 6.519 30.655 22.522 119.380 27.044 39.255 43.309 9.772 106.373 Jul 76.674 60.183 16.491 Ago 95.975 80.046 15.929 Sep 76.076 38.945 19.531 Oct 72.169 10.474 29.849 Nov 70.891 19.545 31.601 Dic 89.615 15.997 36.436 17.600 31.846 19.745 37.182 Año 2009 - Ingresos de Materia Prima Rubro XLVI A E. Of. 4370 4618 2878 4413 Establecimiento Ahumados Patagónicos Los Lagos SA Rio Manso SA Manila SA Ref: E. Of: Establecimiento Oficial (Fuente: Centro Regional Patagonia Norte, Coordinación Temática de Fiscalización Agroalimentaria, Supervisión Bariloche) Página 23 �Estas plantas son supervisadas por veterinarios de SENASA pertenecientes a la Coordinación Temática de Fiscalización Agroalimentaria de la Regional Patagonia Norte y Sur, los cuales participaron en los cursos de capacitación de patologías de salmónidos, y son quienes inspeccionan los animales al ingreso de la planta, por lo que son una fuente importante de notificación en la vigilancia epidemiológica de las enfermedades de declaración obligatoria. Página 24 �5. CAPACITACIÓN Programas de Capacitación e Información a la Comunidad La capacitación es uno de los ejes estratégicos del SENASA. Una Comisión Asesora de Capacitación integrada por referentes de cada una de la direcciones del organismo, por consejeros gremiales y por la Coordinación Técnica de Capacitación del SENASA elaboró el Plan Institucional de Capacitación que se desarrolla en el centro de capacitación del SENASA. Además, en el año 2006, SENASA y el INTA crearon el Centro Buenos Aires para la Capacitación de los Servicios Veterinarios (CEBASEV), el cual fue recientemente reconocido como centro colaborador de la OIE para la capacitación de los Servicios Veterinarios de habla hispana. El plan de Capacitación se desarrolla permanentemente a través, de cursos, charlas y talleres, que mantienen actualizado el conocimiento, dan entrenamiento y sensibilizan a los agentes de SENASA vinculados a la actividad. En línea directa con la Presidencia del SENASA la Unidad de Información y Comunicación Institucional realiza las actividades de prensa, relaciones públicas e institucionales, publicidad, comunicaciones internas, administración de los contenidos de la página web y centro de documentación. Esta Coordinación gestiona una política de comunicación y difusión por distintos medios acerca de las actividades de los programas de control, prevención y erradicación de las enfermedades animales. Su accionar incluye el asesoramiento y apoyo a los Veterinarios Locales para que a ese nivel se logre una comunicación homogénea y efectiva con los productores agropecuarios y público en general. Especialmente en acuicultura, se han realizado distintos cursos de entrenamiento para profesionales y de capacitación para productores por parte de la Dirección de Luchas Sanitarias, Dirección de Laboratorio y Control Técnico del SENASA junto a la Dirección de Acuicultura del Ministerio-MINAGRI: • • • • • Curso de Histopatología y PCR: Total 5 días, del 17 al 21 de septiembre del 2006 en la Dirección de Laboratorio y Control Técnico de SENASA. Asistieron al mismo 12 profesionales del SENASA, 2 del INIDEP (Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero), 2 de la Provincia de Neuquén y 1 de la Provincia de Río Negro. Curso práctico histopatología, dictado por profesionales de la Dirección de Acuicultura y del INIDEP. Total 4 días del 6 al 9 de Febrero del 2007 en el INIDEP Mar del Plata. Asistieron al mismo 3 profesionales del área de patología de la DILACOT- SENASA y 1 del CEAN de Neuquén. Capacitación continua en PCR por profesionales de la Dirección de Acuicultura, a los profesionales del DILACOT. Asistió en tres oportunidades para su capacitación una profesional del INIDEP para las siete enfermedades; y un técnico del CEAN asistió a una pasantía de una semana en el DILACOT para entrenamiento en Diagnóstico Molecular de ISA, SRS e IPN Capacitación continua en histopatología a los profesionales del Departamento de Patología de la DILACOT y un técnico del CEAN quién asistió en dos oportunidades por profesionales de la Dirección de Acuicultura. Seminario sobre Aspectos Sanitarios en producción de salmónidos en el año 2007 en el Centro Regional Universitario Bariloche organizado en forma conjunta con el Consejo Federal de Inversiones (CFI). Participaron un total de Página 25 �• • • 70 personas. Se trataron temas que abarcaron la ejecución del Plan Sanitario, aspectos clínicos de las enfermedades bajo estudio, técnicas de histopatología, biología molecular y manejo sanitario de los cultivos; además de los aspectos legales brindadas por las provincias. Curso para Inspectores Sanitarios Acuícolas, ofrecido en Diciembre del 2008, organizado en forma conjunta con el CFI en el Centro Regional Universitario Bariloche. Participaron un total de 46 personas que incluyo a productores, profesionales y técnicos en acuicultura, agentes del SENASA y agentes provinciales. A través de una evaluación, se acreditaron un total de 30 técnicos autorizados como inspectores honorarios. Curso de Vigilancia Epidemiológica: organizado por el CEBASEV. Total de días 5, del 24 al 28 de Noviembre de 2008 en la Dirección de Laboratorios del SENASA. Participó y aprobó el curso un agente del Programa de Enfermedades de los Animales Acuáticos. Taller de Discusión sobre Buenas Prácticas en producción de Trucha Arco Iris, 19 de Abril de 2010, Centro Regional Universitario Bariloche. Participaron 60 personas. Se elaboró una Guía de Buenas Prácticas en producción de Trucha Arco Iris a través de la contratación de un consultor externo por el Programa de Apoyo y Fortalecimiento Institucional de Senasa-UE (PAFIS). En el Taller se presentó esta Guía a los productores, técnicos, agentes provinciales y agentes de Senasa. Se entrego material de consulta durante los eventos, como manual de Aspectos Sanitarios del Cultivo de Salmónidos (Bariloche, 2007) Manual para la recolección de Muestras y procedimientos para Laboratorio en el diagnóstico de Enfermedades de peces (Bariloche, 2008) y Manual para Inspectores Sanitarios Acuícolas (Bariloche, 2008) y la Guía de Buenas Prácticas en producción de Trucha Arco Iris (Bariloche, 2010). En los siguientes sitios web se puede encontrar parte de la información sobre las actividades: www.senasa.gov.ar en el área de capacitación y en www.minagri.gob.ar en la página de Acuicultura. Página 26 �6. SISTEMA DE VIGILANCIA 6.1. ANTECEDENTES SANITARIOS El estado sanitario de los peces silvestres y los de cultivo del embalse de Alicurá, a partir del momento de la instalación de los primeros criaderos in situ y hasta el momento del inicio del relevamiento sanitario por parte de organismos nacionales, se conocía gracias a los informes referidos a los estudios de investigación llevados a cabo por el Laboratorio de Ictiopatología de la misma Universidad Nacional del Comahue (Centro Regional Universitario Bariloche - CRUB) o bien, por el Laboratorio de Patología del Centro de Ecología Aplicada del Neuquén - CEAN; durante los cuales no se registraron episodios sanitarios en peces Salmónidos provenientes de los establecimientos, en su mayoría a través de visitas periódicas de inspección efectuadas o bien, estudiados a partir de solicitudes de los mismos acuicultores asentados en dicho embalse. El CEAN, que depende de la Autoridad de Aplicación de la provincia del Neuquén, es el encargado de vigilar y regular a su vez la producción de acuicultura de los embalses en Neuquén, mediante la Ley Provincial de Acuicultura (Nº 1996) y sus disposiciones reglamentarias. Además de realizar visitas de inspección trimestrales a los establecimientos, el CEAN efectuó numerosos análisis referidos a las condiciones sanitarias (microbiológicos y virales) de los stocks de peces bajo cultivo. En las primeras investigaciones realizadas por este Centro en 1990, fueron detectadas solo la “enfermedad bacteriana de las branquias”, ataques por hongos y trastornos nutricionales; estas últimas debidas a la ausencia inicial de alimento adecuado a nivel comercial. A partir de 1991, la provincia normó sobre la introducción de huevos, que debían obligatoriamente provenir de padres certificados como exentos de VHS, IHN, IPN, BKD y del myxozoo Myxobolus cerebralis. En 1995, el personal del CEAN, efectuó una serie de inspecciones sobre trucha arco-iris (silvestre y de cultivo) y salmón del Atlántico, así como trucha marrón y de arroyo, de origen silvestre, empleando células CHSE-214 para detección de virus IHN, IPN y virus de herpes en Salmónidos, siendo los resultados NEGATIVOS en el sur de la provincia del Neuquén y el noroeste de la provincia de Río Negro, zona que abarcó en sus investigaciones preliminares. Las pruebas virales se efectuaron sobre peces juveniles y adultos y sobre partidas de huevos que debían ser liberados en la región. Las inspecciones abarcaron cultivos en tierra y en jaulas, todos ellos abastecidos por agua de diferentes ríos de la zona o del embalse de Alicurá. (Luchini, L., 2004). 6.2. IMPORTACIÓN Y CUARENTENA La normativa que rige para las importaciones de animales vivos y material reproductivo es la Resolución ex –Senasa N° 1354/94. Las importaciones de ovas de salmónidos se realizan principalmente desde los Estados Unidos. Previo a la aprobación de la importación se realiza un estudio de la hatchery interesada en realizar la exportación de esas ovas a nuestro país. A través de la normativa vigente el país de origen debe certificar al establecimiento como “libre” para aquellas enfermedades estudiadas en nuestro país y son motivo del presente informe; asimismo, entre otras medidas, se solicita la desinfección de las ovas por algún método recomendado a nivel internacional. Página 27 �En la siguiente tabla se detalla cantidad de ovas importadas por año desde 2005 a 2009 y origen: AÑO CANTIDAD DE OVAS ORIGEN 2005 215.000 Irlanda/ U.S.A 2006 260.000 U.S.A 2007 2.450.000 U.S.A 2008 800.000 U.S.A 2009 735.000 Dinamarca Actualmente, una vez que llegan las ovas a nuestro país, se realiza una inspección física y su correspondencia con la certificación de origen. Si supera favorablemente esa instancia, el personal oficial sella el contenedor de la mercancía e informa al veterinario oficial con jurisdicción en la zona a la que será destinada la mercancía y emite el Permiso de desembarque y el Permiso de Tránsito Restringido para el traslado de la misma, hasta el establecimiento de cuarentena. Actualmente los establecimientos de cuarentena se encuentran ubicados extrazona a más de 1000km de distancia de la zona bajo estudio. Una vez en el predio de cuarentena se realiza un muestreo sobre las ovas para ser analizadas por PCR en el laboratorio central de SENASA (ensayo no estandarizado internacionalmente) y previo a la liberación de la cuarentena se analizan los alevinos, ambos análisis para ratificar la ausencia de infección de las patologías estudiadas. Se muestrearon todos los lotes de importación, los cuales se analizan por las técnicas de Histopatología y PCR para las 7 (siete) enfermedades estudiadas en nuestro país. Aquellos que no superen satisfactoriamente las pruebas sanitarias a que fueran sometidos durante el período cuarentenario, no serán autorizados a movilizarse a cualquier destino dentro del País. En estos casos, se cita al interesado para la firma de las actas correspondientes, otorgándosele en la misma un plazo perentorio, que no podrá ser mayor de ocho (8) días corridos, para proceder a la reexportación del o de los animales. Vencido dicho plazo, y sin necesidad de nuevo aviso, el SENASA podrá proceder al sacrificio sanitario. Cabe señalar que hasta el momento no se han detectado ninguna de las enfermedades mencionadas en los lotes importados. 6.3. SISTEMA DE VIGILANCIA El sistema de vigilancia que se implementa en relación a las enfermedades de los animales acuáticos se basa tanto en actividades de vigilancia pasiva como activa. Dentro de la vigilancia pasiva, se incluye la denuncia de casos compatibles con enfermedades de notificación obligatoria por parte de productores, profesionales o toda persona relacionada con la tenencia o cuidado de animales en cautiverio o así como la ciudadanía en general en los casos de animales silvestres. Página 28 �En el caso de la vigilancia activa, las acciones más relevantes consisten en los muestreos llevados a cabo para la demostración de la ausencia de las enfermedades de denuncia obligatoria en la zona en estudio. Otras fuentes de información incluyen: inspecciones a los establecimientos productores e importadores, inspecciones en plantas de faena, estudios de investigación llevados a cabo por otras instituciones, etc. 6.4. SISTEMA DE NOTIFICACIÓN DE ENFERMEDADES La obligatoriedad de la notificación de enfermedades de importancia para los animales, exóticas y endémicas incluidas las zoonosis, está enmarcada en la Ley 3959 de Policía Sanitaria, y actualizada periódicamente por el Servicio Oficial. A través de la Resolución SENASA Nº 422/2003, se establece la adecuación a la normativa internacional vigente sobre los sistemas de notificación de enfermedades animales, de vigilancia epidemiológica y seguimiento epidemiológico continuo, así como análisis de riesgo; a la vez que actualiza la lista de enfermedades de notificación obligatoria de los animales terrestres y acuáticos. La norma establece que cada propietario o persona encargada de cuidar o asistir animales que tengan síntomas de alguna de las enfermedades listadas, tiene la obligación de comunicarlo al Servicio Oficial. Éste a su vez, tomará las medidas sanitarias que correspondan y efectuará las comunicaciones pertinentes. El veterinario oficial interviniente confecciona un protocolo de enfermedad denunciable en el que detalla todos los aspectos relacionados con la explotación afectada y los animales presentes en la misma. A su vez, en caso de ser necesario, toma muestras para diagnóstico y las envía al laboratorio de referencia nacional, de acuerdo a la especie y enfermedad que se trate. Si se confirma el caso, el protocolo elaborado luego de la intervención es enviado desde las oficinas locales al nivel Central (Dirección Nacional de Sanidad Animal), quien es el encargado de hacer las comunicaciones nacionales e internacionales que correspondan de acuerdo a la enfermedad detectada. En el caso de acuicultura, como fuente primaria de información y notificación de enfermedades se encuentran los productores, profesionales ligados a la actividad, Inspectores Sanitarios Acuícolas, Laboratorios, Plantas Frigoríficas, etc. 6.5. PAPEL DE LOS PRODUCTORES Y DE OTROS GRUPOS IMPORTANTES EN LA VIGILANCIA. 6.5.1. Asociación de productores Existe conformada con inscripción en trámite, una Asociación de Productores de Salmónidos (PROSALMON), sin fines de lucro, creada en el año 2005. Los fines de la misma son: a) Promover, fomentar, mejorar y desarrollar todo lo relacionado con la investigación, estudio y aplicación práctica de la acuicultura; Página 29 �b) Para cumplir el fin precedente, asociar a los profesionales que estén interesados en el objeto de la asociación y a quienes desarrollen actividades que los relacionen con esta disciplina ; c) Realizar actividades de orden científico y extensión universitaria tendientes al objeto mencionado en el inciso "a" del presente estatuto; d) Reunir y destinar fondos a dichos propósitos; e) Establecer relaciones e intercambio cultural y científico con otras entidades afines nacionales y extranjeras; f) Mantener relaciones con las autoridades científicas y técnicas nacionales, provinciales, municipales y universitarias. g) Gestionar el apoyo de las autoridades Nacionales, Provinciales, Municipales o Universitarias para la consecución de los fines; h) Reunir, adquirir y obtener instrumentos destinados a sus fines específicos; i) Contratar y emplear personal profesional, técnico o administrativo. Tanto los productores como los técnicos acuícolas han participado de los cursos dictados por SENASA y fueron capacitados para la detección de las principales patologías de los salmónidos, por lo que se encuentran preparados para realizar denuncias ante eventos sanitarios, toma de muestras y aparición de signos clínicos de algunas de las enfermedades de notificación obligatoria. Otros organismos tales como Guardapesca y Asociación de Pescadores Deportivos han sido comunicados para la eventual notificación de signos clínicos relacionados con las enfermedades estudiadas, colaborando de esta manera con la vigilancia Epidemiológica. 6.5.2. Organismos Nacionales y Provinciales intervinientes en el sistema de vigilancia A nivel nacional la Dirección de Acuicultura del Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca, trabaja en conjunto con el SENASA desde al año 2006 a través de un Acuerdo de Cooperación Técnica donde en una primer acta se definieron pautas de trabajo conjunto, estableciendo en una primera etapa el diseño y ejecución del Relevamiento Sanitario de Salmónidos en el Embalse Alicura. Dicho relevamiento tuvo como objetivo lograr la caracterización sanitaria del Embalse, en relación a las principales enfermedades ictícolas de mayor impacto económico y productivo. La Dirección de Acuicultura tiene entre sus funciones el seguimiento del RENACUA, que es el Registro Nacional de Acuicultura, en el cual deben inscribirse todos los productores a nivel Nacional. El mismo es de carácter obligatorio y a través de la Resolución 1314/2004, se indica cuales son los requisitos para su inscripción. A nivel provincial, Neuquén y Río Negro participan activamente en la normatización y control de la actividad. A través de sus instituciones provinciales, el Centro de Ecología Aplicada de Neuquén (CEAN) y la Autoridad Interjurisdiccional de Cuencas (AIC) y la Dirección de Pesca de la Provincia de Río Negro, llevan a cabo controles sobre calidad del agua y aspectos sanitarios de los peces de cultivo, entre otros. Las provincias otorgan las concesiones para cultivo en el embalse a los emprendimientos acuícolas y realiza controles sobre calidad del agua, capacidad de carga y control bacteriano y parasitario de los peces bajo cultivo. Página 30 �Las normativas de las provincias de la zona regulan tanto la actividad de producción de ovas y alevines (hatchery) como el engorde. Las leyes provinciales que regulan la actividad son las siguientes: • • • • • • Ley Nº 1.996 de Acuicultura, Decreto Reglamentario Nº 1.548/93 y Disposiciones Reglamentarias. Provincia del Neuquén. Ley Nº 1.875 (T. O. Ley Nº 2.267) de Medio Ambiente y Decreto Reglamentario Nº 2.267/99. Provincia del Neuquén. Ley Nº 899 Código de Aguas y Decreto Reglamentario 790/99. Provincia del Neuquén. Ley Nº 2829 de Acuicultura, Decreto 751 y Resolución 671. Provincia de Río Negro. Ley Nº 3266 de Procedimiento de Evaluación de Impacto Ambiental. Provincia de Río Negro. Ley Nº 2391. Régimen de Control de Calidad y Protección de los Recursos Hídricos Provinciales. Provincia de Río Negro. Las instituciones provinciales junto con el SENASA y la Dirección de Acuicultura de la Nación, han desarrollado las actividades de muestreo de peces y fueron capacitados para el acondicionamiento de muestras para envío al laboratorio del Senasa. 6.5.3. Inspectores Sanitarios Acuícolas Para complementar los alcances en los controles de la administración veterinaria en la República Argentina y debido a las características particulares de la actividad, fue necesario dar participación en las tareas de inspección sanitaria de las pisciculturas, a técnicos e idóneos especializados y con experiencia en producción piscícola. La figura técnica denominada Inspector Sanitario Acuícola (ISAc) fue creada a partir de la necesidad de incrementar las actividades para intensificar los controles sanitarios de los establecimientos de producción ictíca y la vigilancia epidemiológica. La acreditación otorgada por Senasa, es un aval del Organismo ante la idoneidad técnica del Inspector determinada mediante sucesivos encuentros teóricos y prácticos. Los Inspectores Sanitarios Acuícolas están autorizados a realizar las siguientes tareas: a) Inspección Sanitaria General de los establecimientos de producción. b) Asesoramiento sanitario y de buenas prácticas al productor respetando las Normas Técnicas establecidas. c) Actualización y suscripción de los registros sanitarios de los establecimientos. d) Recolección y acondicionamiento de muestras con validez oficial en los establecimientos de cría de salmónidos registrados. e) Concurrir inmediatamente a cualquier establecimiento dentro de la zona ante el conocimiento de novedades sanitarias y colaboración con la autoridad sanitaria nacional en la inspección oficial de establecimientos ante denuncias o sospecha de enfermedades y en otras actividades surgidas de las necesidades del momento. Actualmente hay acreditados 30 (treinta) Inspectores Sanitarios Acuícolas Página 31 �6.6. VIGILANCIA ACTIVA 6.6.1. Relevamiento sanitario de Salmónidos En base a las recomendaciones de la Sección 2. 1. Capítulo I. 1. de Enfermedades de los peces y cumpliendo con el Capitulo 1.1.4 del Manual de Pruebas de Diagnóstico de Animales Acuáticos 2006 y el Capítulo 1.4, Artículo 1.4.6 punto 3 del Código Sanitario para los Animales Acuáticos 2009, se diseño la vigilancia sobre los salmónidos de la zona bajo estudio. La Resolución SENASA N° 21/2001 crea el Programa de Enfermedades de los Animales Acuáticos en el ámbito de la Dirección de Luchas Sanitarias de la Dirección Nacional de Sanidad Animal, estableciendo acciones sanitarias para todos los animales acuáticos y en cuya etapa inicial se establecieron acciones para determinar la existencia o no de enfermedades ícticas de importancia en la acuicultura de salmónidos. Para dar cumplimiento a este objetivo se llevo a cabo un relevamiento sanitario de salmónidos en la zona descripta anteriormente, para la determinación del estatus sanitario del mismo, respecto de enfermedades que afectan a estas especies. Ante el desconocimiento de la situación sanitaria de la zona, se diseño un sistema de monitoreo continuo durante dos años (Noviembre 2006 a Diciembre 2008), realizando muestreos cada tres meses abarcando las cuatro estaciones del año. Actualmente se mantiene una vigilancia activa con un muestreo anual. A los fines de calcular el tamaño de la muestra se tomaron en cuenta los siguientes supuestos: Asegurar con un 95% de confianza que es posible detectar al menos un individuo positivo si la prevalencia esperada es igual o inferior al 2% para cada una de las enfermedades. Se muestrearon 150 animales por campaña entre animales silvestres y de cultivo. (Manual de diagnóstico para los animales acuáticos 2006) La zona bajo vigilancia fue descripta anteriormente. Dentro de la zona se seleccionó el embalse Alicura y sus principales afluentes, los ríos Limay y Traful para la toma de muestras de los peces. Debido a la cercanía de los establecimientos y al hecho de que comparten un mismo cuerpo de agua, se tomó la población como homogénea dividiendo en partes iguales las muestras de animales de cultivo y animales silvestres. Se muestrearon los ocho establecimientos que se encuentran actualmente en producción dentro del embalse Alicura y se establecieron 5 (cinco) puntos de muestreo para animales silvestres. Para esto se definieron 3 (tres) puntos dentro del embalse cabecera(Las Coloradas), medio (Malal Huaca) y Cola del Embalse y 2 (dos) por fuera del mismo, uno sobre el río Limay y otro sobre el río Traful. Página 32 �Ref: los puntos en rojo corresponden a los establecimientos de cultivo y los puntos verdes corresponden a los puntos de muestreo sivestres Esta elección se debió a la importancia productiva que presenta el embalse, con una producción que actualmente alcanza aproximadamente las 1200 tn de truchas arco iris, por lo que la densidad de peces en este embalse es mayor que en el resto de la zona bajo estudio. Así mismo los ríos Limay y Traful se toman como representativos de la población de peces silvestres susceptibles de los ambientes acuáticos, ya que existen migraciones de estos animales río abajo, por lo que los eventos sanitarios que sucedan en los lagos y sus afluentes, deberían ser detectados en estos puntos. La captura de los ejemplares silvestres fue realizada por personal de la autoridad de aplicación de las provincias de Río Negro y Neuquén, y de la Autoridad Interjurisdiccional de Cuencas, utilizando como artes de pesca la modalidad de spining, trolling y flycast, en algunos casos, por lo cual el número de animales silvestres muestreado por campaña varía del indicado según el diseño. En cuanto a los animales de cultivo, la captura fue realizada por personal de SENASA, dejando constancia de la misma en los establecimientos con actas de toma de muestras. Para complementar la vigilancia epidemiológica de la zona se incluyeron en el muestreo a las hatcheries (intra y extrazona) proveedoras de alevinos al embalse de alicurá para su engorde final. Página 33 �6.6.1.1. TOMA DE MUESTRAS Y ENVÍO AL LABORATORIO 6.6.1.1.1. Anatomopatología: procedimientos y toma de muestras • • • • • Al momento de la toma de la muestra los peces se encuentran vivos y se los sacrifica con dosis anestésicas letales de Benzocaína en polvo, diluida en sol. sobresaturada con Acetona o Alcohol 96º. Una vez muerto el animal se procede al pesaje y toma de medidas de LT (largo total) y LS (largo estándar). Se realiza una inspección externa del animal y se registra en el protocolo de toma de muestra. Luego se procede a la necropsia del mismo, posicionando al pez en decúbito dorsal y practicando una incisión desde delante del ano hasta delante de la aleta pectoral siguiendo la línea media del abdomen, y otro corte en forma semicircular hacia lateral y dorsal del pez que una los mismos puntos de la incisión anterior; exponiendo, de este modo, todos los órganos abdominales del animal y permitiendo la visualización e inspección de los mismos in situ. En el caso de ser alevinos se muestrearan enteros, pudiéndose realizar un corte pequeño en zona abdominal para favorecer la penetración del fijador. En forma rutinaria se colectan muestras de lo siguientes órganos: Bazo, Hígado, Pronefros, Metanefros, Corazón. También se muestrean otros órganos o tejido en caso de visualizarse alguna alteración macroscópica. 6.6.1.1.2. Procedimiento de toma de muestras para Histopatología Para el diagnóstico histopatológico se utilizan órganos conservados en formol al 20% bufferado. Los recipientes utilizados pueden ser plásticos o de vidrio y son de boca ancha y cierre hermético (para evitar derrames), con tapa a rosca o a presión pero para esto se coloca cinta adhesiva entorno a la unión tapa recipiente. Una vez muestreados todos los peces, todos los frascos son colocados en cajas de telgopor cerradas y rotuladas adecuadamente para su envío al laboratorio central del Dilab. En el caso de trozos muy pequeños (biopsias) se utilizan tubos de ensayo con tapón de goma. Las muestras procedentes de un mismo animal o necropsia se contienen en un mismo frasco. Excepto que requieran una individualización especial. 6.6.1.1.3. Procedimiento de toma de muestra para PCR En el mismo momento de la toma de muestras para histopatología, se procede a tomar muestras para PCR, de: Bazo, Hígado, Pronefros, Corazón, tomando las medidas de asepsia y esterilidad (limpieza con alcohol y flameado de instrumental) necesarias para minimizar las contaminaciones. Los trozos de órganos son colocados en crioviales (1 por cada órgano) debidamente rotulados y luego colocados en varillas metálicas (1 por animal), para finalmente ser colocados en termos con Nitrógeno Liquido, los que son transportados hasta el laboratorio de análisis en el DILAB. Una vez en el laboratorio las muestras son almacenadas en un Freezer de –70ºC hasta el momento de realizar el análisis de PCR. Página 34 �6.6.1.2. DIAGNÓSTICO El diagnóstico de Laboratorio de las enfermedades de Salmónidos estudiadas se realiza en el país en el Laboratorio Central de SENASA –Laboratorio Nacional de Referencia (LNR); sito en la Localidad de Martínez, Provincia de Bs.As, único Laboratorio autorizado actualmente. El laboratorio cuenta con instalaciones adecuadas para el diagnóstico de enfermedades por las técnicas de Histopatología y PCR convencional y PCR Real Time. El LNR está acreditado en su gestión bajo la Norma ISO 17025 (el alcance de esta norma no cubre los ensayos para la realización del presente estudio). Se cuenta con un Laboratorio de Bioseguridad Nivel 3 Agricultura (NBS3A), que cumple con los requisitos de Bioseguridad de la O.I.E, el mismo puede ser utilizado ante la eventual detección de alguna enfermedad exótica. 6.6.1.2.1. Tipo de pruebas realizadas Para determinación del estatus sanitario de la zona se seleccionaron métodos de diagnostico aplicados en serie: Histopatología (como prueba tamiz) y PCR, Inmunohistoquímica y Secuenciación (como confirmatorios). Durante los 2 primeros años (nov. 2006 a Dic. 2008) se realizó el análisis histopatológico de todas las muestras y se analizaron por PCR aquellos ejemplares que presentaban lesiones macroscópicas y/o microscópicas compatibles con una enfermedad infecciosa. De no hallarse alteraciones, se seleccionaron 10 ejemplares de cultivo y 10 ejemplares silvestres al azar en cada muestreo, para PCR. Para el muestreo 2009 Histopatología y PCR se aplicaron en paralelo para todas las muestras. Inmunohistoquímica y Secuenciación (como confirmatorios). 6.6.1.2.1.1. Métodos de análisis histopatológico • Las muestras fijadas en Formol Bufferado al 20 % durante 3 a 5 días como mínimo, son separadas del fijador, cortadas en trozos de 0,5 a 1,5 cm, colocadas en canastillas plásticas (casettes) identificados con el numero de muestra y pez. • Los casettes con las muestras de tejidos son colocados en una maquina procesadora automática de tejidos, programable, la que 24 horas después entrega las muestras deshidratadas e incluidas en parafina. • Se confeccionan los tacos, utilizando los mismos casettes ya identificados. • Los tacos con las muestras de tejidos se cortan en micrótomo rotatorio a 1 micra de espesor (los alevinos se procesan enteros y se cortan a 2,5 micras) • Los cortes son fijados a los portaobjetos y luego coloreados por la técnica de rutina de Hematoxilina y Eosina, montados con bálsamo sintético. • Todos los cortes son examinados al microscopio de luz transmitida y las lecturas registradas en las planillas de trabajo confeccionadas ad-hoc con la identificación del n° de muestra, n° de pez, lugar de origen del pez, tejidos examinados, etc, de tal forma que se mantenga la trazabilidad de los análisis y poder correlacionar estos con los análisis por Biología Molecular. Página 35 �• Todos los resultados son registrados en el sistema informático de mesa de entrada de muestras e informados a la DNSA-Programa de Enfermedades de los Animales Acuáticos. 6.6.1.2.1.2. Diagnóstico molecular por PCR Extracción de Ácidos Nucleícos ADN y ARN de tejidos de órganos blanco: Extracción de ADN: Para la extracción de ADN genómico total de los tejidos a analizar en las determinaciones de BKD, SRS, y EHNV: se procedió de acuerdo al protocolo de purificación, usando el kit DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen), el kit Wizard SV Genomic DNA purification system (Promega), o el kit Purelink Genomic DNA purification Kit (Invitrogen), según las recomendaciones del manual de diagnóstico de organismos acuáticos de la OIE 2006 y el NWFHS USA laboratory procedures manual 3.1 edition, Marzo 2006. Extracción de ARN: Para la extracción de ARN en las determinaciones de IPN, ISA, IHN, VHS, se procedió de acuerdo al protocolo de purificación de ARN total de tejidos animales usando el kit RNeasy Mini Kit (Qiagen), o SV Total RNA Isolation System (Promega). Según las recomendaciones del manual de diagnóstico de organismos acuáticos de la OIE 2006. En cada muestreo 2006-2008 se procedió de la siguiente manera para la extracción de ácidos nucleícos: Se procesaron, 40 extracciones de ADN de 2 órganos, bazo y pronefros, procedentes de 20 especimenes previamente estudiados por el tamizaje histopatologico + 10 % de Ctls Negativos (2 extracciones de bazo y 2 de pronefros de animales libres de patógenos certificados). 60 extracciones de ARN de 3 órganos, bazo, pronefros, y corazón, procedentes de 20 especimenes previamente estudiados por el tamizaje histopatológico + 10 % de Ctls Negativos (2 extracciones de bazo y 2 de pronefros de animales libres de patógenos certificados). Durante la campaña de vigilancia sanitaria realizada en el 2009 se extrajeron los ácidos nucleícos de los tejidos de los órganos blanco en pooles de tres individuos muestreados. Procesando en paralelo al análisis histopatologico los órganos blanco de los 171 individuos muestrados. Se procesaron, 57 extracciones de ADN (pooles de 3 pronefros, 171 individuos totales) + 10 % de Ctls Negativos (pronefros de animales libres de patógenos certificados). 114 extracciones de ARN (pooles de 3 pronefros, pooles de 3 corazónes, 171 individuos totales) + 10% Ctls Negativos (órganos de pronefros y corazón de animales libres de patógenos certificados). Controles de extracción e inhibición: Las extracciones de ADN total y ARN total de los órganos blanco (target), son controladas para determinar la integridad del acido nucleíco purificado, verificar si es amplificable y poder detectar posibles inhibiciones que pudiesen alterar las reacciones diagnosticas posteriores. En los dos primeros años de monitoreo, cada extracción de ADN y ARN procedentes de órganos blanco de 20 individuos previamente estudiados por el tamizaje histopatologico fue controlada. Página 36 �Durante la campaña de vigilancia sanitaria realizada en el 2009 se controlaron todas las extracciones de los tejidos de los órganos blanco (pronefros y corazón) en pooles, provenientes de tres individuos muestreados. En el caso de las extracciones de ADN total, estas fueron verificadas a través un control genómico de amplificación del gen constitutivo conservado de Salmo salar 5S rADN que contiene repeticiones en tándem. Primers 5S-1 forward 5’ TAC-GCC-CGATCT-CGT-CCG-ATC 3’ y reverse 5S-2 5’ CAG-GCT-GGT-ATG-GCC-GTA-AGC 3’, (14) dichos primers generan según la especie diferentes fragmentos de amplificación. En el caso de Oncorhyncus mykiss los fragmentos son de 294 bp y 350 bp, en el caso de Salmo salar 256bp y 525bp. La presencia de dichas bandas en el resultado, es indicativo que las muestras son aptas para ser procesadas por las PCR diagnósticas. Las muestras que no presenten este patrón son descartadas y se procede a una nueva purificación, para eliminar cualquier inhibición. Cada muestra de RNA total extraída fue verificada mediante una reacción de RT-PCR con primers conservados del ARN mensajero del gen β Actina de Salmo salar. A saber: β Actina forward 5′-CAG CCC TCC TTC CTC GGT AT-3 y β Actina reverse 5′GAT GTC CAC GTC ACA CTT CAT GAT-3 cuyo amplicón es de 80 bp.(2) La presencia de dicha banda en el resultado es indicativo que las muestras son aptas para ser procesadas por las RT-PCR diagnósticas; las muestras que no presenten este patrón son descartadas y se procede a una nueva purificación, para eliminar cualquier inhibición. En cada muestreo 2006-2008 se controlaron las extracciones de ADN: 40 extracciones de ADN total provenientes de 20 bazos, 20 pronefros. 20 individuos totales. A través de 40 determinaciones de PCR Ctl genómicos 5S rADN (Protocolo Go Taq polimerasa, Promega). Extracciones de de ARN: 60 extracciones de ARN total, provenientes de 20 bazos, 20 pronefros, 20 corazones. 20 individuos totales. A través de 60 determinaciones de RT-PCR de ARNm de β Actina, (Se utilizó el esquema general del protocolo del kit Access one step RT-PCR System, Promega Corp). En el 2009 se controlaron las extracciones de ADN de la siguiente manera: 57 extracciones de pronefros en pooles de 3. (171 individuos totales). Mediante 57 reacciones de PCR 5S rADN, como controles de amplificacion de ADN genómico total. (Protocolo Go Taq polimerasa, Promega). ARN: 114 extracciones de ARN total provenientes de 57 pronefros y 57 corazones en pooles de 3. (171 individuos totales). Mediante 114 determinaciones de RT-PCR de ARNm de β Actina, (Se utilizó el esquema general del protocolo del kit Access one step RT-PCR System, Promega Corp). Todas las extracciones de ADN y ARN que se controlaron y resultaron aptas, fueron analizadas mediante las técnicas de PCR diagnósticas de las enfermedades estudiadas. Técnicas moleculares aplicadas (Nested PCR, PCR, RT-PCR): En la aplicación de los métodos moleculares se siguieron las recomendaciones sugeridas por los protocolos establecidos por la OIE con las siguientes modificaciones. Nested PCR o PCR anidada en la detección de SRS Piscirickettsia salmonis y BKD Renibacterium salmoninarum (Protocolo Go Taq polimerasa, Promega). Página 37 �PCR en la detección del Virus de la Necrosis Hematopoyetica Epizootica (EHNV) (Protocolo Go Taq polimerasa, Promega). Reacción de RT-PCR en un paso para la detección de IPNV, IHNV, ISAV, VHSV (Se utilizó el esquema general del protocolo del kit Access one step RT-PCR System, Promega Corp). Criterios de aceptación e interpretación de resultados de PCR: Análisis de los resultados: Los productos de amplificación de cada determinación de PCR, RT-PCR se analizaron en geles de agarosa 2%, teñidos con bromuro de etidio. Posteriormente el gel es transiluminado con luz ultravioleta para visualizar las bandas de amplificación específicas. Aceptación e interpretación de resultados de PCR: No se deben observar bandas específicas en los controles negativos de SPF ni en el blanco de reacción. Por otra parte deben detectarse las bandas específicas correspondientes a los controles positivos de la reacción. Si se cumplen todas estas condiciones se considera que el ensayo se ha efectuado correctamente. La detección de una banda correspondiente al producto de la amplificación del agente etiológico estudiado, cumpliendo con los criterios anteriormente mencionados, son confirmatorios de la presencia de las secuencias especificas del mismo y se considera el resultado como POSITIVO. La falta de detección de estas bandas específicas en un ensayo efectuado correctamente es considerada como NEGATIVO. En caso de detección positiva se confirma por repetición de la misma muestra y nueva extracción de la muestra de tejido original en conservación. Además se analiza el caso con primers, o iniciadores confirmatorios accesorios. En los casos de SRS y EHN se confirma asimismo por análisis de restricción REA (Restriction endonuclease analysis). En todos los casos de detección se confirma identidad por secuenciación molecular y análisis de las secuencias obtenidas a través de métodos bioinformáticos (alineación de secuencias, BLAST). CONTROLES UTILIZADOS: Controles positivos: Los controles positivos para las determinaciones de PCR de las enfermedades que se encuentran bajo estudio, fueron solicitados por DILAB SENASA a los centros de referencia internacionales OIE, publicados en el manual de diagnóstico de organismos acuáticos OIE 2006 (anexo I). En el caso de las patología IPN que no figura en el capitulo 1.2.3. del código acuático OIE, los controles se obtuvieron del laboratorio CEFAS (Centre for Environment, Fisheries & Aquaculture Science, UK,) del Dr. Dixon y de un laboratorio local productor de vacunas. Con respecto a SRS que representa el mismo caso; los controles fueron provistos por el mismo laboratorio local. Todos los controles obtenidos fueron conservados a -80°C. Controles negativos: Los controles negativos se obtuvieron de peces SPF (specific pathogens free) libres de patógenos certificados, (anexo I) de las especies Salmo salar y Oncorhynchus kisutch, utilizando la misma metodología anteriormente descripta para la toma de muestras de Página 38 �los individuos a estudiar. Los órganos de los peces SPF extraídos se conservaron a 80º C. Selección de Iniciadores o Primers diagnósticos: Los primers o iniciadores utilizados en todas las enfermedades a monitorear salvo para el IPN, se seleccionaron de las secuencias publicadas en el manual de diagnóstico de organismos acuáticos de la OIE 2006. Los iniciadores para IPN se seleccionaron según Williams, K. Et al y Blake, S.L. et al.(3 & 15). Enfermedades producidas por bacterias: Bacterial Kidney disease (BKD) enfermedad bacteriana del riñón: Agente etiológico: (Renibacterium salmoninarum). Dos pares de primers se utilizan en un protocolo de reacción de PCR anidada o nested PCR, los mismos amplifican la secuencia publicada de la proteína p57 de R. salmoninarum (4 & 5). Primer round forward 75-93 5'-AGCTTC-GCA-AGG-TGA-AGGG-3'; P3 y reverse 438-458 5'-GCA-ACA-GGT-TTA-TTT-GCC-GGG-3; M21. Segundo round de amplificación: forward 95-119 5'-ATT-CTT-CCA-CTT-CAA-CAG-TACAAG-G3', P4 y reverse 394-415 5'-CAT-TAT-CGT-TACACC-CGA-AAC-C-3'; M38. El producto de amplificación con los primers del segundo round es de 320 bp (pares de base). SRS (Salmon Rickettsial Syndrome/Septicaemia), Piscirickettsiosis, o Síndrome/Septicemia, rickettsial del salmón: Agente etiológico: (Piscirickettsia salmonis). Se utiliza una reacción de nested pcr para detectar el ADN genómico de P. salmonis, (12) por medio de la amplificación del gen conservado 16S rADN de Eubacterias, durante el primer round, y los primers específicos de P. salmonis en el segundo round. Primer round; EubA (1518R) 5'-AAG-GAG-GTG-ATC-CAN-CCR-CA-3' y EubB (27F) 5'-AGA-GTT-TGA-TCM-TGG-CTC-AG-3'. Los específicos de P. salmonis 2do round tienen la siguientes secuencias: PS2S (223F) y PS2AS (690R): 5'-CTA-GGAGATGAG-CCC-GCG-TTG-3' y 5'-GCTAC-CCTGAA-ATT-CCA-CTT-3', respectivamente que generan un producto de amplificación de 476 bp (pares de base). Para confirmar la detección, los productos de amplificación del primer round se pueden analizar por restricción (REA) con EcoRI y Pst1 para identificar la cepa de P.salmonis. Primers confirmatorios complementarios: Recomendados por Marshall S., Heath S., Henriquez V. & Orrego C.(11) Enfermedades producidas por virus: Epizootic haematopoietic necrosis (EHN) Necrosis hematopoyetica epizoótica: Agente etiológico: (EHNV) (Fam: Iridoviridae gen: Ranavirus ADN doble cadena). La detección del Virus (EHNV) se realizó mediante el uso de la técnica de PCR directa. Se utilizaron dos juegos de primers específicos para la proteína mayor del cápside (MCP) de EHNV: MCP1 M151 forward 5’-AAC-CCG-GCT-TTC-GGG-CAGCA-3’, y M152 reverse 5’-CGG-GGC-GGG-GTT-GAT-GAG-AT-3’ y un segundo juego de primers MCP2 M153 forward 5’-ATG-ACC-GTC-GCC-CTC-ATC-AC-3’ y M154 reverse 5’-CCA-TCG-AGC-CGT-TCA-TGA-TG-3’. Los productos de amplificación son 321 bp y 625 bp respectivamente. Estos productos de amplificación se pueden seguir analizando por REA (restriction endonuclease analysis) con diferentes enzimas de restricción (PflM I, Hinc II, Acc I, Fnu4H I.) para diferenciar los subtipos de EHNV (10). Página 39 �Infectious haematopoietic necrosis (IHN) Necrosis hematopoyética infecciosa: Agente etiológico: (IHNV) (Fam: Rhabdoviridae gen: Novirhabdovirus ARN simple cadena). En la detección del virus (IHNV) se utilizó la técnica de RT-PCR (transcripción reversa -PCR) en un paso (one step) en un primer round y una PCR convencional con primers internos para el segundo round. Ambos primers son específicos de la nucleoproteína de IHNV y conservados para la mayoría de los aislamientos del virus (16). El par de primers del primer round son: forward 5'-TCAAGG-GGG-GAG-TCC-TCG-A-3' y reverse 5'-CAC-CGT-ACT-TTG-CTG-CTA-C-3'; que generan un producto de amplificación de 786 bp. Los primers del segundo round de amplificación son: forward 5'-TTC-GCA-GAT-CCC-AAC-AAC-AA-3'; y reverse 5'-GCGCAC-AGT-GCC-TTG-GCT-3'; cuyo producto de amplificación es de 323 bp. Durante el 2009 se incorporan al diagnóstico por RT-PCR los nuevos primers sugeridos en la nueva edición del manual de diagnóstico de organismos acuáticos de la OIE 2009 recomendados Dr J.R. Winton dirigidos a la región mid de la glicoproteína de IHNV que comprende todos los subtipos conocidos. Los primers confirmatorios complementarios son IHN3 & IHN4 según: Williams, K., Blake, A., Sweeney, A. (15). Viral haemorrhagic septicaemia (VHS) Septicemia hemorrágica viral: Agente etiológico: (VHSV) (Fam: Rhabdoviridae gen: Novirhabdovirus ARN simple cadena). Para identificar específicamente el Virus (VHSV) se utilizó la técnica de RTPCR (Transcripción reversa - PCR) en un paso. Utilizando un juego de primers conservados para la nucleoproteina de VHSV (16) forward 5'-GGG-GAC-CCC-AGACTG-T-3' y reverse 5'-TCT-CTG-TCA-CCT-TGA-TCC-3' el amplicón producto es de 811 bp. Primers confirmatorios complementarios: VHS3 & VHS4 según Williams, K., Blake, A., Sweeney, A.(15). Infectious pancreatic necrosis (IPN) Necrosis pancreática infecciosa: Agente etiológico: (IPNV) (Fam: Birnaviridae gen: Aquabirnavirus ARN doble cadena frag.). Los primers WB1 y WB2 específicos de birnavirus acuáticos (15) se utilizaron para la detección del virus IPNV a través de la técnica de RT-PCR one step. Los primers WB1, forward 5’CCG-CAA-CTT-ACT-TGA-GAT-CCA-TTA-TGC3’ y reverse WB2 5’ CGT-CTG-GTT-CAG-ATT-CCA-CCT-GTA-GTG3’reconocen un fragmento de cADN de 206 bp de gen VP2 que se mantienen conservados entre los 9 serotipos del grupo A. Primers confirmatorios complementarios: PrD1 & PrD2 según Blake, S.L., Schill, W.B., Mcallister, P.E., Lee, M-K, Singer, J.T. y Nicholson, B.L.(3). Infectious salmon anaemia (ISA) Anemia infecciosa del salmón: Agente etiológico: (ISAV) (Fam: Orthomyxoviridae gen: Isavirus ARN simple cadena frag.). En el caso de la detección del Virus (ISAV) varios sets de primers son recomendados por la OIE; en este diagnóstico se seleccionó el juego de primers ILA1 forward 5’-GGC-TAT-CTA-CCA-TGA-ACG-AAT-C3’ & ILA 2 5’- GCC-AAG-TGT-AAGTAG-CAC-TCC-3’que amplifican una región del segmento 8 del virus generando un amplicón de 155 bp (13) y como primers confirmatorios un set de primers diseñados por el laboratorio de referencia de OIE Seg 6U forward 5’GGA-ATC-TAC-AAG-GTCTGC-ATT-G-3’& Seg 6L reverse 5’CTT-CAA-AGG-TGT-CTG-ACA-CGT-A-3’que amplifican una región del segmento 6, cuyo producto de amplificación es de 130 bp. Primers confirmatorios complementarios: FA-3 & RA-3 según Devold M., Krossoy B., Aspehaug V. & Nylund A. (7). Página 40 �6.6.1.3. RESULTADOS El relevamiento sanitario de Salmónidos comenzó en el mes de Octubre de 2006 y finalizó en Octubre de 2008. Se muestrearon los ocho establecimientos que se encuentran actualmente en producción dentro del Embalse Alicura y se establecieron 5 (cinco) puntos de muestreo para animales silvestres. Para esto se definieron 3 (tres) puntos dentro del embalse cabecera(Las Coloradas), medio (Malal Huaca) y Cola del Embalse y 2 (dos) por fuera del mismo, uno sobre el río Limay y otro sobre el río Traful. RESUMEN DE MUESTRAS POR AÑO CAMPAÑA Estación Oct-06 Mar-07 Jun-07 Sep-07 MUESTRAS TOTAL verano otoño Invierno primavera MUESTRAS MUESTRAS CULTIVO SILVESTRES 173 151 153 153 82 86 87 83 91 65 66 70 75 83 80 84 75 68 79 75 630 AÑO I Dic-07 Mar-08 Jul-08 Oct-08 verano otoño invierno primavera 150 151 159 159 AÑO II 619 Se analizaron un total de 1249 individuos durante los dos años de muestreos. En el primer año se realizaron 4 campañas analizándose un total de 630 ejemplares correspondiendo 338 a establecimientos de cultivo y 292 a las obtenidas por captura de animales silvestres y durante el segundo año se realizaron otras 4 campañas analizándose un total de 619 ejemplares, correspondiendo 322 a las obtenidas en los establecimientos de cultivo y 297 a captura de animales silvestres. En cada muestreo se capturaron como mínimo 150 animales. Detalle de cantidad de animales muestreados por especie en cada campaña: Muestreo Fecha N° Total Muestrado 1° 2° 3° 4° 5° 6° 7° 8° Totales Oct-06 Mar-07 Jun-07 Sep-07 Dic-07 Mar-08 Jul-08 Oct-08 - 173 151 153 153 150 151 159 159 1249 Tai* Pisciculturas Tai* Silvestres 82 86 87 83 75 83 80 84 660 85 56 53 66 71 61 69 71 532 Marrón * Silvestres 6 9 12 4 4 5 10 4 54 Ss* Silvestres 1 2 3 Referencias: *Tai: Trucha arco iris (Oncorhyncus mykiss) *Marrón: Trucha marrón (Salmo trutta) *Ss: Salmon encerrado (Salmo salar var. sebago). Página 41 �Sobre el muestreo se indica que: 1. De cada muestreo se realizó el análisis histopatológico de TODAS las muestras y se analizaron por PCR aquellos ejemplares que presentaban lesiones macro o microscópicas compatibles con enfermedad infecciosa, de no hallarse alteraciones específicas, se seleccionan 10 ejemplares de cultivo y 10 ejemplares silvestres al azar. 2. El análisis histopatológico de los dos primeros muestreos se efectuaron en el INIDEP, el resto en la DILAB. 3. A partir del tercer muestreo se incorporó al diagnóstico la determinación de ISAV muestreándose además el corazón de cada individuo. 6.6.1.3.1. Resultados del Laboratorio: I- Análisis anatomopatológicos sobre muestras de 2006-2008 Sobre los 1249 individuos analizados por examen macroscópico y microscópico (histopatología) se observaron las siguientes lesiones expresadas en la siguiente tabla: Tabla de lesiones anatomopatológicas observadas Tipo de lesión observada cantidad Tasa % Reacción fibrosa de mesotelio 1 0,08 Necrosis focal hepática 17 1,36 Infiltrado inflamatorio periductal 5 0,12 Degeneración grasa de hepatocitos 5 0,12 Engrosamiento capsula hepática 2 0,16 Fibrosis hepática peri focal 11 0,88 Nódulos regenerativos de parénquima hepático 3 0,24 Focos de linfohematopoyesis con megaloblastía 1 0,08 Hiperplasia capsulara esplénica 37 2,96 Congestión esplénica 5 0,12 Fibrosis esplénica 23 4,24 Hemorragias focales esplénicas 6 0,48 Pliegue de la capsula esplénica 1 0,08 Hiperplasia capsular de pronefros 2 0,16 Infiltrado inflamatorio en grasa peri renal 1 0,08 Congestión y hemorragias focales en pronefros 6 0,48 Formaciones basófilas esféricas pequeñas en 1 0,08 pronefros Proliferación eosinófila peri vascular y células 4 0,32 con estructuras basófilos en pronefros Aumento de melanomacrófagos en pronefros 1 0,08 Material hialino en capsula de Bowman en 1 0,08 metanefros Quistes parasitarios (Eimeria) en metanefros 1 0,08 Mixosporidium en glomérulo renal en metanefro 1 0,08 Infiltrado de eosinófilos en túbulos del metanefro 4 0,32 Aumento de melanomacrófagos en metanefros 1 0,08 Página 42 Observaciones �Depósitos de calcio en vías túbulos y lesión granulomatosa proliferativa en el intersticio del metanefro 1 0,08 Granuloma focal intersticial en matanefro Deposito de calcio en túbulos renales de metanefro Edema pericárdico Exudado pericárdico con infiltración linfoidea Miocarditis focal con infiltración linfoidea crónica Congestión de vasos coronarios Pericarditis Hemorragia pericárdica Necrosis focal de miocardio Infiltración linfoidea difusa Parásitos en miocardio 1 1 0,08 0,08 2 1 5 1 6 4 1 5 1 0,16 0,08 0,12 0,08 0,48 0,32 0,08 Branquias con hiperplasia de laminillas primarias y secundarias con metaplasia escamosa y mucinosa sectorial. Hiperplasia distal de laminillas primarias y secundarias, en branquias, Parásitos macroscópicos en Bazo e Hígado 1 0,08 3 0,24 2 0,16 Fibrosis focal en músculo esquelético Enteritis necrótica en intestino delgado Piel con lesiones fúngicas 1 1 1 0,08 0,08 0,08 0,08 Sospecha de BKD, que resultó Negativo a PCR Diphylobotrium ssp Caso 172504 Diphylobotrium ssp Saproliniasis Conclusión: En 1249 peces analizados por anatomopatología no se observaron lesiones específicas o compatibles con ninguna de las enfermedades denunciables para la OIE. Solamente se observó un caso con lesiones microscópicas sospechosas de BKD, la cual se descartó por los análisis mediante las técnicas moleculares descritas. II- Resultados de análisis por Técnicas moleculares sobre muestras de 20062008 A continuación se presentan las tablas que resumen las cantidades de muestras procesadas por análisis moleculares y sus correspondientes resultados, discriminados por enfermedad, agente etiológico investigado, órganos procesados y resultados obtenidos: Página 43 �Tabla N° 1 Pruebas Diagnosticas de PCR sobre Bacterias y Virus ADN Enfermedad SRS Agente Etiologico BKD R. Salmoninarum P.Salmonis Organos ext.ADN EHN N°TOTAL EHNV Determinaciones RESULTADOS Bazo Pronefros Bazo Pronefros Bazo Pronefros por muestreo 1° 20 20 22 22 3° 20 20 4° 20 20 5° 20 20 6° 20 20 7° 20 20 8° 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 120 132 120 120 120 120 120 120 Negativo 2° 162 162 162 162 162 162 972 Negativo Muestreo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo N°TOTAL Determinaciones por enfermedad y organos blanco Tabla N° 2 Pruebas Diagnosticas RT-PCR sobre Virus ARN Enfermedad IHN VHS IPN ISA Agente Etiologico IHNV VHSV IPNV ISAV Organos ext.ARN N°TOTAL Determinaciones RESULTADOS Bazo Pronefros Bazo Pronefros Bazo Pronefros Bazo Pronefros Corazon por muestreo 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 Negativo 20 20 20 20 20 20 160 176 180 180 180 180 180 180 162 162 162 162 162 162 162 162 120 1416 Negativo Muestreo 1° 2° 3° 4° 5° 6° 7° 8° Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo N°TOTAL Determinaciones por enfermedad y organos blanco Sobre lo expresado en las tablas se indica lo siguiente: 1. Se analizaron 7 enfermedades de declaración obligatoria e importancia epidemiológica según las recomendaciones de manual OIE, para SRS, BKD, EHN, IPN, IHN, VHS, e ISA* Para cada diagnóstico se trabajo con tejido de los siguientes órganos; bazo, pronefros y además corazón (para los casos de ISAV) como material a procesar. 2. *Se evaluaron los dos primeros muestreos para ISAV sobre contra muestras de bazo y pronefros conservadas a - 80°C. Página 44 �Tabla N° 3 Prueba de control Controles de Extraccion de ADN y ARN sobre organos blanco PCR 5S rADN 5S Salmo salar RT- PCR ARNm gen β Actina Salmo salar Organos Corazon N°TOTAL Bazo Pronefros Bazo Pronefros 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 22 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 80 88 100 100 100 100 100 100 162 162 162 162 120 768 Muestreo Controles por muestreo 1° 2° 3° 4° 5° 6° 7° 8° N°TOTAL Controles ADN, ARN por organo Se indica que: • En cada muestreo se controlaron: 60 determinaciones por RT-PCR mARN β Actina de Salmo salar como controles de extracción, de ARN total e inhibición, de bazo, pronefros, y corazón. Además de 40 determinaciones como controles genómicos de ADN total de 5S rADN, bazo y pronefros. Resumen de los resultados por PCR durante 2006-2008: Campaña de Muestreo 1° 2° 3° 4° 5° 6° 7° 8° TOTA L N° de individuos analizados por muestreo por PCR, RT-PCR N° total de determinaciones diagnosticas sobre los órganos blanco por individuo PCR, y RT-PCR N° de Controles por órganos blanco por individuo PCR, y RT-PCR (ADN=2organos, ARN3=órganos) 20 22 20 20 20 20 20 20 162 280 308 300 300 300 300 300 300 2388 80 88 100 100 100 100 100 100 768 TOTAL de determinaciones RESULTADOS 360 396 400 400 400 400 400 400 3156 Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo - A través de las metodologías de amplificación molecular aplicadas, NO se han detectado las secuencias especificas de los agentes etiológicos responsables de las patologías estudiadas. Página 45 �6.7. MANTENIMIENTO DEL ESTATUS Habiendo cumplimentado las directrices del Capítulo 1.1.4 del Manual de Pruebas de Diagnóstico para los Animales Acuáticos 2006 para la demostración de ausencia de infección, y siguiendo las recomendaciones del punto 3 del mismo capítulo, durante el año 2009 se realizó un nuevo muestreo para mantenimiento del estatus. El mismo se llevó a cabo en el mes de noviembre donde se muestrearon los 8 establecimientos de engorde presentes dentro del embalse y se muestrearon los 5 puntos de captura de animales silvestres, establecidos en los muestreos de los años anteriores. El muestreo se diseño con un 95% de nivel de confianza y un 2% de prevalencia para una población mayor a 100.000 animales, determinando un tamaño muestreal de 170 individuos entre animales silvestres y de cultivo. En esta ocasión se estableció una nueva estrategia de screening diagnostico de las enfermedades de declaración obligatoria, e importancia epidemiológica, mediante las técnicas de biología molecular, con el objeto de abarcar a través de los diagnósticos de PCR y RT PCR todos los individuos muestreados durante la campaña de mantenimiento de la vigilancia. Se aplico la metodología de pooles de muestras; examinando los tejidos de los órganos blanco en pooles de tres, agrupándolos en una sola muestra a testear y en paralelo el análisis histopatologico a cinco órganos de cada uno de los 1249 individuos muestreados. Según la enfermedad a analizar, el tejido del órgano a procesar fue; pronefros (BKD, SRS, EHN, IHN, VHS, IPN) y corazón, pronefros (ISA). Ante la eventual detección de algún patógeno, agente etiológico, de las patologías estudiadas, se procede a abrir el pool y verificar individualmente las muestras, para identificar el o los individuos afectados. Una vez identificado el caso se continuará aplicando los mismos criterios de aceptación de resultados utilizados hasta ahora, para emitir un resultado confirmado. RESULTADOS Vigilancia 2009: A- MUESTRAS COLECTADAS: AÑO III 2009 Total muestras 171 cultivo 87 Silvestres 84 I- Resultados de anatomopatología aplicadas durante la vigilancia 2009 • • Todos los peces que componían la muestra de la vigilancia se procesaron en paralelo por los análisis anatomopatológicos procesando los órganos blanco provenientes de los 171 individuos. Resultados: No se observaron lesiones compatibles o específicas de las enfermedades infecciosas denunciables para la OIE Página 46 �II- Resultados Técnicas moleculares aplicadas durante la vigilancia 2009 Tabla N° 1 Pruebas Diagnosticas de PCR sobre Bacterias y Virus ADN Enfermedad SRS Agente Etiologico P.Salmonis Pronefros Organos ext.ADN Muestreo 2009 Pooles de a 3 BKD R. Salmoninarum EHN N°TOTAL EHNV Determinaciones RESULTADOS Pronefros Pronefros 57 57 171 Negativo 57 Tabla N° 2 Pruebas Diagnosticas RT-PCR sobre Virus ARN Enfermedad Agente Etiologico Organos ext.ARN IHN IHNV Pronefros Muestreo 2009 Pooles de a 3 57 Corazon VHS VHSV Pronefros 57 57 Corazon IPN IPNV Pronefros Corazon 57 57 57 ISA ISAV Pronefros Corazon 57 57 N°TOTAL Determinaciones RESULTADOS por muestreo 456 Negativo 456 Negativo N°TOTAL Determinaciones por 114 114 114 114 enfermedad y organos blanco Sobre los resultados obtenidos se indica que: • Durante la campaña de vigilancia sanitaria realizada en el 2009 se realizaron las pruebas diagnosticas de PCR, RT-PCR sobre las muestras de órganos blanco en pooles de a tres. Tabla N°3 Prueba de control Organos Muestreo 2009 Controles de Extraccion de ADN y ARN sobre organos blanco PCR 5S rADN Salmo salar RT- PCR ARNm gen β Actina Salmo salar Pronefros Pooles de a 3 57 N°TOTAL Controles ADN, ARN por organo 57 Pronefros Corazon 57 57 114 N°TOTAL Controles por muestreo 171 Sobre los resultados obtenidos se indica que: • Se controlaron las extracciones de ADN de pronefros en pooles de a 3 mediante 57 reacciones de PCR 5S rADN, como controles de amplificación de ADN genómico total. 171 individuos totales. 114 extracciones de ARN total provenientes de 57 pronefros y 57 corazones en pooles de a 3 mediante 114 determinaciones de RT-PCR de ARNm de β Actina. Página 47 �A través de las metodologías de amplificación molecular aplicadas, NO se han detectado las secuencias especificas de los agentes etiológicos responsables de las patologías estudiadas. 6.8. OTRAS ACTIVIDADES DE VIGILANCIA Control Sanitario previo a movimiento de alevinos Se realizaron análisis en todas las hatcheries que abastecen alevinos a los establecimientos de engorde del embalse durante el período 2006-2009, estén estas dentro o fuera de la zona bajo vigilancia. De cada establecimiento se tomaron 50 muestras de alevinos, de las cuales 25 se procesaron por histopatología y otras 25 de procesaron por las técnicas moleculares antes descritas. Se analizaron por cada establecimiento 25 ejemplares, (Alevinos enteros u ovas) en pooles de 5 a través de la técnica de PCR, empleando los mismos protocolos aplicados en el estudio epidemiológico de vigilancia sanitaria. Durante el desarrollo del plan sanitario además de aplicar las técnicas de diagnóstico molecular por PCR sobre tejidos de órganos y sobre alevinos enteros se trabajo en la puesta a punto de la extracción de ácidos nucleicos de ovas embrionadas y su posterior procesamiento por PCR y RT PCR con el objetivo de poder aplicar un control más sobre las importaciones de ovas en cuarentena. (Técnica aun no estandarizada internacionalmente) A través de las metodologías de amplificación molecular aplicadas, NO se han detectado las secuencias especificas de los agentes etiológicos responsables de las patologías estudiadas. En los análisis histopatológicos NO se observaron lesiones compatibles con enfermedades infecciosas, tras el examen de todos los órganos de cada uno de los alevinos estudiados. Página 48 �7. CONCLUSIONES La información incluida en el presente informe permite concluir que: 1. Las presentes conclusiones son específicas para la zona comprendida por la Cuenca Alta del Río Limay y el Embalse Alicurá, actuando como barrera física la represa de Alicurá, que es el lugar en donde se desarrollaron los estudios correspondientes al presente informe. 2. El diseño de los estudios epidemiológicos para las enfermedades virales y bacterianas correspondientes al presente documento, permiten asegurar con un 95% de confianza que es posible detectar al menos un individuo reactor (diagnóstico positivo) si la prevalencia esperada fuera igual o superior al 2% para cada una de las enfermedades en cuestión. 3. Los análisis de laboratorio determinaron la inexistencia de lesiones anatomo patológicas compatibles o especificas de las enfermedades infecciosas estudiadas. Tampoco se detectaron las secuencias especificas de los agentes etiológicos responsables de las mismas. 4. No se ha detectado la presencia de enfermedad clínica para Necrosis Hematopoyética Epizoótica (EHNV), Necrosis Hematopoyética Infecciosa(IHNV), Septicemia Hemorrágica Viral (VHS), Necrosis Pancreática Infecciosa (IPN), Anemia Infecciosa del Salmón (ISA), Enfermedad Bacteriana Renal (BKD) y Piscirickettsiosis (SRS) en la población de salmónidos silvestres y de cultivo en la zona de la Cuenca Alta de Rio Limay que incluye al Lago Nahuel Huapi, Lago Traful, ríos Limay y Traful y el embalse de Alicurá hasta la presa hidroeléctrica del mismo nombre. 5. Los resultados negativos obtenidos en todas las pruebas de diagnóstico, han demostrado la ausencia de infección y de actividad viral o bacteriana para las enfermedades EHNV, IHNV, VHS, IPN, ISA, BKD y SRS, de acuerdo con los supuestos enunciados para el diseño de los estudios epidemiológicos correspondientes al presente informe expresados en la conclusión Nº2. 6. El Servicio veterinario posee la capacidad o competencia técnica de su personal como la capacidad financiera de recursos a su disposición (otorgados por medio de los instrumentos legales correspondientes: leyes, decretos y resoluciones) que permiten un correcto funcionamiento del Servicio para mantener un sistema de vigilancia eficaz, y la posibilidad de enfrentar situaciones sanitarias de emergencia. 7. Se ha realizado capacitación permanente desde comienzos del presente plan de trabajo tanto a los agentes del servicio nacional de laboratorio y campo, como a productores, técnicos y profesionales involucrados. 8. Se cuenta con un Laboratorio Nacional de Referencia, el cual presenta instalaciones adecuadas para el diagnóstico de las enfermedades de salmónidos estudiadas por las técnicas de Histopatología y PCR convencional y PCR Real Time. 9. La Legislación vigente ampara las acciones de vigilancia y prevención de las 7 enfermedades estudiadas. Página 49 �10. Todos los establecimientos que se encuentran en la zona libre, así como también las hatcheries extrazona que abastecen alevinos a los establecimientos de engorde de la zona, se encuentran inscriptos en los Registros RENSPA y RENACUA, por lo que se hallan identificados y georeferenciados. 11. El movimiento de los animales se encuentra registrado en el sistema veterinario oficial a través del correspondiente Documento de Transito animal (DTA). 12. Las importaciones de ovas se encuentran controladas bajo un sistema de cuarentena y diagnósticos previos a la liberación de los procesos cuarentenarios de importación y el correspondiente traslado al establecimiento de destino final. 13. Las acciones de vigilancia activa y el diseño de muestreo se determinó en base a las recomendaciones de la Sección 2. 1. Capítulo I. 1. B de Enfermedades de los peces del Manual de Diagnóstico para los Animales Acuáticos 2006 y el Código Sanitario 2009 de la OIE. 14. El diseño llevado a cabo se considera suficientes para considerar a la Zona bajo vigilancia epidemiológica, antes definida, como Libre de las Enfermedades ya indicadas. 8. Glosario LOTE: grupo de la misma especie que comparte un mismo suministro de agua y que se origina de una misma descendencia o población reproductora. (Manual OIE, 2006) ZONA: desde el manantial de un río hasta una barrera que impide la introducción de una enfermedad. HATCHERY: Establecimiento de acuicultura donde se realiza la reproducción y cría de juveniles. Página 50 �9. Referencias Bibliográficas 1. Alvarez, M. A, 2005. Relevamiento de Lagos, Lagunas y Embalses de la Región Patagónica y su uso potencial en acuicultura. Dirección de Acuicultura, SAGPyA, 121 pp 2. Anna Wargelius. Per Gunnar Fjelldal. Tom Hansen. Heat shock during early somitogenesis induces caudal vertebral column defects in Atlantic salmon (Salmo salar) Dev Genes Evol (2005) 215: 350–357 3. Blake, S.L., Schill, W.B., Mcallister, P.E., Lee, M-K, Singer, J.T. y Nicholson, B.L. (1995). Detection and identification of Aquatic birnaviruses by PCR assay. Journal of Clinical Microbiology 33: 835-839. 4. Chase D.M. & Pascho R.J. (1998). Development of a nested polymerase chain reaction for amplification of a sequence of the p57 gene of Renibacterium salmoninarum that provides a highly sensitive method for detection of the bacterium in salmonid kidney. Dis. Aquat. Org., 34, 223-229. 5. Chien M.S., Gilbert T.L., Huang C., Landolt M.L., O'Hara P.J. & Winton J. (1992). Molecular cloning and sequence analysis of the gene coding for the 57 kDa major soluble antigen of the salmonid fish pathogen Renibacterium salmoninarum. FEMS Microbiol. Lett., 96, 259-266. 6. Código Sanitario para la Animales Acuáticos de OIE, 2009. 7. Devold M., Krossoy B., Aspehaug V. & Nylund A. (2000). Use of RT-PCR for diagnosis of infectious salmon anaemia virus (ISAV) in carrier sea trout Salmo trutta after experimental infection. Dis. Aquat. Org., 40, 9-18. 8. FAO 2009: http://www.fao.org/forestry/country/18310/es/arg/ 9. Luchini, L., 2004. Calidad Sanitaria en relación al cultivo de Salmónidos: Lago Nahuel Huapi, Embalses de Alicurá y Piedra del Águila. Dirección de Acuicultura, SAGPyA, pp 108. 10. Marsh I.B., Whittington R.J., O'Rourke B., Hyatt A.D. & Chisholm O. (2002). Rapid differentiation of Australian, European and American ranaviruses based on variation in major capsid protein gene sequence. Molec. Cell. Probes, 16, 137-151. 11. Marshall S., Heath S., Henriquez V. & Orrego C. (1998). Minimally invasive detection of Piscirickettsia salmonis in cultivated salmonids via the PCR. Applied and Environmental Microbiology 64, 3066–3069. 12. Mauel M. J., Giovannoni S.J. & Fryer J.L. (1996). Development of polymerase chain reaction assays for detection, identification, and differentiation of Piscirickettsia salmonis. Dis. Aquat. Org., 26, 189-195. 13. Mjaaland S., Rimstad E. & Cunningham C.O. (2002). Molecular diagnosis of infectious salmon anaemia. In: Molecular Diagnosis of Salmonid Diseases, Cunningham C.O., ed. Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, The Netherlands, 1-2 Página 51 �14. Pendas, A.M., Moran, P.& Garcia Vazquez, E. (1994) Chromosomal location and nucleotide sequence of two tanden reapeats of the Atlantic salmon 5S rDNA. Cytogentics and Cell Genetics 67, 31- 36. 15. Williams, K., Blake, A., Sweeney, A. (1999). Multiplex reverse transcriptase PCR assay for simultaneous detection of three fish viruses. Journal of Clinical Microbiology 37: 4139-4141. 16. Winton J.R. & Einer-Jensen K. (2002). Molecular diagnosis of infectious hematopoietic necrosis and viral hemorrhagic septicemia. In: Molecular Diagnosis of Salmonid Diseases. Cunningham C.O., ed. Kluwer, Dordrecht, The Netherlands. pp. 49-79 17. Tabashi Hibiya An Atlas of Fish Histology Normal and Pathologycal Features1982- Edit. Kodansha-ISBN 0-98574- 174-1. 18. Métodos Histotecnológicos AFIP-USA-1995- ISBN 1-881041-21-2 19. Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology- Third Edition-196820. Manual of Diagnostic Test for Aquatic Animals –OIE-2006- Fith Edition ISBN 92-9044-682-x.21. James R. Winton. Fish Health Management 22. Handbook of Trout and Salmon Diseases, 3th Edition-1997.23. Sloss- Kemp- Zajal, Veterinary Clinical Parasitology –Iowa State University Press / Ames-6th Edition-1994.24. Procedimientos Normalizados de Trabajo –PNTA- Edición 2- Instituto de Acuicultura, Universidad de Santiago de Compostela, España.- ANEXO I Laboratorios de Referencia de OIE: Controles Positivos para las pruebas de PCR, RT-PCR: Controles Positivos BKD R. salmoninarum: DNA purificado de cultivo BKD reconstituido en Tris 10 mM pH 8 provistos por: Dr J. Winton Western Fisheries Research Center, 6505 N.E. 65th Street, Seattle, Washington 98115, UNITED STATES OF AMERICA Tel.: (1.206) 526.65.87, Fax: (1.206) 526.66.54, E-mail: jim_winton@usgs.gov Controles Positivos SRS P. Salmonis: Página 52 �Cultivo P. Salmonis inactivado con Trizol (Invitrogen) Provistos por: Dr. Esteban Turic Biogénesis Bagó S.A. Argentina. Ruta Panamericana Km 38,2, Garín - Prov. de Bs.As. ARGENTINA Tel/Fax: (03327) 448333 Email: info@biogenesisbago.com Controles Positivos EHNV: DNA EHNV purificado liofilizado provistos por: Dr R. Whittington Faculty of Veterinary Science, University of Sydney, 425 Werombi Road, Private Bag 3, Camden NSW 2570, AUSTRALIA Tel.: (61.2) 93.51.16.11., Fax: (61.2) 93.51.16.18 E-mail: richardw@camden.usyd.edu.au Controles Positivos IHNV: Cultivo inactivado en buffer AVL Qiamp Viral RNA kit (Qiagen) provistos por: Dr J. Winton Western Fisheries Research Center, 6505 N.E. 65th Street, Seattle, Washington 98115, UNITED STATES OF AMERICA Tel.: (1.206) 526.65.87, Fax: (1.206) 526.66.54, E-mail: jim_winton@usgs.gov Controles Positivos cultivo VHSV: Cultivo inactivado RNAlater (Qiagen) provistos por: Dr N.J. Olesen Danish Institute for Food and Veterinary Research, Hangovej 2, DK-8200 Aarhus N, DENMARK Tel.: (45) 89.37.24.31, Fax: (45) 89.37.24.70 E-mail: njo@dfvf.dk Controles Positivos Cultivo IPNV: Cultivo inactivado (incubación a 60°C y congelación seca, heat 60ºC freeze dried) provistos por: Dr P. Dixon The Centre for Environment, Fisheries & Aquaculture Science (CEFAS), Barrack Road, Weymouth, Dorset DT4 8UB, UNITED KINGDOM Tel.: (44.1305) 20.66.42, Fax: (44.1305) 20.66.01 E-mail: peter.dixon@cefas.co.uk Página 53 �Controles Positivos IPNV: Cultivo inactivado con Trizol (Invitrogen) Provistos por: Dr. Esteban Turic Biogénesis Bagó S.A. Argentina. Ruta Panamericana Km 38,2, Garín - Prov. de Bs.As. ARGENTINA TEL/FAX: (03327) 448333 Email: info@biogenesisbago.com Controles Positivos Cultivo ISAV: Cultivo inactivado Buffer AVL Qiamp Viral RNA (Qiagen) y tejido de pronefros infectado en RNAlater (Qiagen) provistos por: Dr B. Dannevig National Veterinary Institute, Ullevålsveien 68, P.O. Box 8156 Dep., 0033 Oslo, NORWAY Tel.: (47.23) 21.64.04, Fax: (47.23) 21.63.01 E-mail: birgit.dannevig@vetinst.no Controles Positivos ISAV: Controles clonados cDNA ISAV purificado y RNA ISAV precipitado en etanol provistos por: Dr F. Kibenge Atlantic Veterinary College, Department of Pathology and Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine, University of Prince Edward Island 550 University Avenue, Charlottetown, Prince Edward Island, C1A 4P3 CANADA Tel: (1.902) 566.09.67 Fax: (1.902) 566.08.51 Email: kibenge@upei.ca Controles Negativos para las pruebas de PCR, RT-PCR: Los controles negativos se obtuvieron de peces SPF (specific pathogens free) certificados, libres de patógenos de las especies Salmo salar y Oncorhynchus kisutch, utilizando la misma metodología anteriormente descripta para la toma de muestras de los individuos a estudiar. Los órganos de los peces SPF extraídos se conservaron a -80º C, Los peces fueron provistos en el 2006 por: Dr. Esteban Turic Biogénesis Bagó S.A. Argentina. Ruta Panamericana Km 38,2, Garín - Prov. de Bs.As. ARGENTINA TEL/FAX: (03327) 448333 Email: info@biogenesisbago.com Laboratorio productor de vacunas de IPN y SRS. Página 54 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Autodeclaración de zona Libre de Necrosis Hematopoyética Infecciosa, Necrosis Hematopoyética Epizootica, Anemia Infecciosa del Salmón, Necrosis Pancreatica Infecciosa, Septicemia Hemorragica Viral, Enfermedad Bacterial Renal y Pisciricketsiosis en la cuenca alta del Rio Limay que incluye al Embalse de Alicura, en la República Argentina. Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2010 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0080 Abstract A summary of the resource. El objetivo del presente informe es presentar las evidencias de la ausencia de infección de Necrosis Hematopoyética Epizoótica (EHNV), Necrosis Hematopoyética Infecciosa(IHNV), Septicemia Hemorrágica Viral (VHS), Necrosis Pancreática Infecciosa (IPN), Anemia Infecciosa del Salmón (ISA), Enfermedad Bacteriana Renal (BKD) y Piscirickettsiosis en base al Cap ítulo 1.4 del Código Sanitario para los Animales Acuáticos 2009 y el Capítulo 1.1.4 del Manual de Pruebas de Diagnóstico para los animales acuáticos 2006 de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE), en la Zona Cuenca Alta de Rio Limay que incluye al Embalse de Alicura hasta la presa hidroeléctrica en la República Argentina. Enfermedades de los Peces https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/5ce2c4873d4be3ca9772f38b12e97700.pdf 55b1bc9f73a2338570f28f6ba0024d4b PDF Text Text SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL Y CALIDAD AGROALIMENTARIA DIRECCIÓN DE CONTROL DE GESTIÓN Y PROGRAMAS ESPECIALES AUTOGESTION ADHESION DE SERVICIOS INTERACTIVOS CON CLAVE FISCAL AFIP   Diciembre 2017 El siguiente documento tiene como finalidad brindarle al usuario una herramienta de capacitación que le facilite el trabajo con e ingreso al Sistema Integrado de Gestión de Sanidad Animal (SIGSA). � Contenido INTRODUCCION ........................................................................................................................................... 3  PRESENTACIÓN Y ACCESO AL SISTEMA.............................................................................................. 3  ADHESION DE SERVICIOS INTERACTIVOS .......................................................................................... 4  DELEGACION DE REPRESENTACION DE CUIT .................................................................................... 7  SOPORTE TÉCNICO-MESA DE AYUDA DEL SIGSA-CONTACTO ................................................... 11  2 �INTRODUCCION El presente manual muestra paso a paso la adhesión de SERVICIOS INTERACTIVOS en la página de AFIP con CLAVE FISCAL. En el ejemplo se muestra la adhesión de SIGSA, pero todos los Servicios se adhieren de la misma manera, solo debe seleccionar el correspondiente al listado de SERVICIOS INTERACTIVOS del organismo. PRESENTACIÓN Y ACCESO AL SISTEMA Para acceder al Sistema de Información de Sanidad Animal del SENASA se debe ingresar utilizando el navegador Mozilla Firefox. Acceda a la web de la AFIP: www.afip.gob.ar/ Ingresar a la Clave fiscal del titular, indicando CUIT y clave 3 �ADHESION DE SERVICIOS INTERACTIVOS Cuando ingrese con su clave fiscal elija al menú "Administrador de Relaciones de Clave Fiscal" como se indica en la imagen inferior. Una vez dentro del menú presionar el botón "ADHERIR SERVICIO" 4 �Seleccionar del listado de organismos disponibles "SENASA" Dentro del menú "Servicios Interactivos" buscar y seleccionar "SIGAD" o “SIGSA” 5 �Una vez seleccionado el servicio presionar el botón "CONFIRMAR" para finalizar la adhesión. Para confirmar la adhesion el sistema muestra un formulario con los datos correspondientes. 6 �Después de que se genere este formulario F3283/E debe cerrar la sesión y volver a ingresar a la CLAVE FISCAL para actualizar el menú principal, en donde aparecerán los "SERVICIOS" habilitados. DELEGACION DE REPRESENTACION DE CUIT Para delegar la representación de un SERVICIO INTERACTIVO a otro CUIT, ingresar al menú "ADMINISTRADOR DE RELACIONES DE CLAVE FISCAL". 7 �Dentro del menú, presionar el botón "NUEVA RELACION" En la ventana siguiente se visualizan los datos del autorizante (titular). Presionar el boton" BUSCAR" para seleccionar el "SERVICIO INTERACTIVO" a delegar. Seleccionar los servicios disponibles el que se quiere delegar. 8 �Una vez seleccionado el servicio se debe seleccionar el representante, para cargarlo se debe introducir el CUIT de la persona que lo representará y presionar el botón "BUSCAR", y una vez identificado el mismo presionar el botón "CONFIRMAR" Para finalizar la delegación confirmar SERVICIO y REPRESENTANTE presionando el botón "BUSCAR". 9 �Después de que se genere este formulario F3283/E debe cerrar la sesión y volver a ingresar a la CLAVE FISCAL para actualizar el menú principal, en donde aparecerán los "SERVICIOS" habilitados. El interesado deberá ingresar con su CLAVE FISCAL e ingresar al menú "ACEPTACION DE DESIGNACION" para aprobar la delegación del servicio en cuestión, luego cerrar la sesión, volver a ingresar para visualizar el menú principal el nuevo servicio adherido. 10 �MENU DE ACEPTACION DE DESIGNACION. SOPORTE TÉCNICO-MESA DE AYUDA DEL SIGSA-CONTACTO Para cualquier duda o consulta pueden comunicarse con la mesa de ayuda de SIGSA. Horario de atención telefónica de Lunes a Viernes de 8 a 16 hs Teléfonos: (011) 4121-5374/5634/5252 Guardias de fin de semana para URGENCIAS de 8 a 20 hs al corporativo (011)-15-4041-3614. 11 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Autogestión - Adhesión de Servicios Interactivos con Clave Fiscal AFIP Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2017 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Manual Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0088 Abstract A summary of the resource. El siguiente documento tiene como finalidad brindarle al usuario una herramienta de capacitación que le facilite el trabajo con el ingreso al Sistema Integrado de Gestión de Sanidad Animal (SIGSA). Table Of Contents A list of subunits of the resource. INTRODUCCIÓN PRESENTACIÓN Y ACCESO AL SISTEMA ADHESIÓN DE SERVICIOS INTERACTIVOS DELEGACIÓN DE REPRESENTACIÓN DE CUIT SOPORTE TÉCNICO-MESA DE AYUDA DEL SIGSA- CONTACTO https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/6f04e6b92be921e51ae0a4a0fc7e6f49.pdf 2041baabc7766fc161e45421099b9021 PDF Text Text Bagrada hilaris chinche pintada / chinche africana Ficha Técnica – Descriptiva Senasa Dirección Nacional de Protección Vegetal Dirección de Cuarentena Vegetal �2 IDENTIDAD DE LA PLAGA Nombre científico: Bagrada hilaris (Burmeister, 1835) Sinonimia: Bagrada cruciferatum Kirkaldi Bagrada picta Fabricius Posición taxonómica (CABI, 2014) Clase: Insecta Orden: Hemiptera Suborden: Heteroptera Familia: Pentatomidae Género: Bagrada Especie: Bagrada hilaris Nombres comunes: Castellano: Chinche pintada, Chinche bagrada, Chinche africana Inglés: Painted bug, Bagrada bug HOSPEDANTES Entre los hospedantes principales se encuentran especies de la familia Brassicaceae como coliflor, repollo y brócoli por cuales tienen preferencia, sin embargo se trata de una especia sumamente polífaga, para la cual se han citado más de 70 hospedantes de diferentes familias a nivel mundial. Entre los de mayor relevancia se cuentan rábano, kale, pack choi, papa, tomate, lechuga, espinaca, cebolla, alcaucil, zanahoria, poroto, maíz, moringa, palto. También se la ha encontrado en 13 especies diferentes de malezas y cinco especies ornamentales. DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA El insecto ha sido descripto en India, nativo del este y sur de Asia y África. Se encuentra presente en países de Asia, África, Europa y América. Asia: India, Pakistán y Taiwán entre otros África: Sudáfrica y otros Europa: Italia y Malta América: EE. UU., México y Chile (la detección en Chile es la primera para Sudamérica) VÍAS DE INGRESO Y DISPERSIÓN La dispersión hacia cultivos y malezas de zonas aledañas ocurre por vuelo a cortas distancias y locomoción propia del insecto. La dispersión a largas distancias se produce a través de material Destinatarios: Inspectores PIF Autor: DNPV-DCV - Responsable: FW Fecha: 06/12/2017 �3 infectado (hojas con oviposturas) o por la presencia del insecto como contaminante en diversos productos (artículos reglamentados) como por ejemplo material de embalaje y medios de transporte de productos vegetales, herramientas agrícolas, entre otros. IMPORTANCIA ECONÓMICA El daño se produce principalmente por la alimentación del adulto y las ninfas a través de su estilete. Causan reducción de los rendimientos al provocar marchitez, manchas necróticas y punteaduras. Cuando dañan los brotes de crecimiento pueden afectar a plantas como brócoli y coliflor dejándolas acéfalas, sin formación de coronas o con formación de múltiples coronas, lo que impide su comercialización. La plaga causa reducciones en la calidad y rendimiento de diferentes cultivos hospedantes, principalmente de crucíferas. Se han reportado pérdidas del orden del 4 al 20 % en cultivos de siembra directa y del 2 al 10% en cultivos por trasplante, debido principalmente a que las plántulas recién emergidas son altamente susceptibles. En los valles de California y Arizona provocó pérdidas de plantines de hasta el 60%. De acuerdo a estudios sobre el daño por B. hilaris en Arizona y California desde el 2010, cerca del 90% de la superficie sembrada de brócoli ha sido infestada por este insecto en diferentes etapas del ciclo del cultivo, con más del 10 % de pérdidas de rendimiento, teniendo en cuenta que la producción de brócoli, coliflor, repollo y otros cultivos de las crucíferas fueron valuados en más de un millón de dólares (CDFA, 2012, USDA- NAS, 2012), el impacto económico ocasionando fue de consideración. En Chile, en la Comuna de Lampa, el Instituto de Investigaciones Agropecuarias (INIA), en evaluaciones preliminares ha evaluado pérdidas de hasta 35 hectáreas cultivadas con distintas especies de brásicas a causa de la presencia de esta plaga. RIESGO FITOSANITARIO Debido a los hábitos del insecto y el daño económico que provoca a los cultivos hospedantes, la introducción de esta plaga a la Argentina causaría un impacto significativo en las principales regiones de producción hortícola del país. Estas se localizan en las provincias de Buenos Aires, Mendoza, Córdoba, Santiago del Estero, Misiones, Santa Fe, Corrientes, Tucumán, Formosa, Salta, Chaco, Jujuy, San Juan y Río Negro y son las que abastecen a los principales centros urbanos de consumo. Sin embargo, dado la gran diversidad de climas y regiones agroecológicas de nuestro país, la producción de hortalizas se da prácticamente en todo el territorio nacional, por lo cual también otras regiones se verían afectadas. Por otra parte, la presencia de Bagrada hilaris en Chile, representa un alto riesgo potencial de ingreso de esta plaga, por el intenso intercambio comercial con el vecino país así como el fluido tránsito de pasajeros, ingreso de vehículos y maquinarias. DAÑOS Y SÍNTOMAS Dependiendo el tipo de cultivo, el daño puede variar desde un punteado con manchas necróticas, retraso del crecimiento, pérdida de la dominancia apical, formación de múltiples cabezas e inclusive la muerte de la planta. En cultivo de mostaza (B. juncea) la plaga puede causar reducciones de 30 % en peso. Los daños son más significativos durante la etapa de formación de vainas y llenado de semilla (Singh et al., 2007). En brócoli los daños ocurren principalmente en la etapa de desarrollo Destinatarios: Inspectores PIF Autor: DNPV-DCV - Responsable: FW Fecha: 06/12/2017 �4 vegetativo y formación de cabeza (Boopathi y Pathak, 2012). En cultivos de Brasicaceae, las pérdidas en calidad y rendimiento son del 15-30 % (Palumbo y Natwick, 2010). Palumbo (2011), menciona que en Arizona, en crucíferas B. hilaris causó daños de hasta 20 % en cultivos de siembra directa y 10% en cultivos por trasplante, ya que las plántulas recién emergidas (con 1 hoja cotiledonal) son muy susceptibles. En mostaza, plántulas de 1-3 cm de tamaño y con poblaciones de 2-5 insectos por planta, éstas pueden morir en 2-4 días (Lal y Singh, 1993). Por otra parte, se incrementó el uso de insecticidas para su manejo. De 2009 a 2011 se incrementaron del 69-650 % el uso del grupo de piretroides, 10-39% el de carbamatos y 783-1087 % el de neonicotinoides). MORFOLOGÍA Huevos: Son de forma ovalada. Su color es blanquecino o blanco cremoso, tomando posteriormente un color rosado o anaranjado, con dimensiones aproximadas son 0.876 x 0.698 mm. Las hembras los depositan en la tierra, cerca de sus plantas hospedantes o bien sobre las hojas de éstas, donde pueden encontrarse adheridos de forma aislada o en pequeños grupos. Huevos de chinche pintada (Bagrada hilaris) Ninfas: Son de forma redondeada y coloración rojiza pero a medida que avanza su desarrollo van adquiriendo tonalidad negra. Presenta 5 estadios ninfales. El quinto estadio es muy similar al adulto, pero de menor tamaño. Los paquetes alares se desarrollan gradualmente, no se distinguen en los primeros estadios, son más evidentes durante el último Ninfas de chinche pintada (Bagrada hilaris) Destinatarios: Inspectores PIF Autor: DNPV-DCV - Responsable: FW Fecha: 06/12/2017 �5 Adultos: su tamaño oscila entre 6 y 7 mm. El macho es más pequeño que las hembras. Poseen forma de escudo, de coloración negra con manchas rojas y amarillas que forman un patrón característico. Adultos de chinche pintada (Bagrada hilaris) Adultos: Hembra (izquierda) Macho (derecha) SIMILITUDES CON OTRAS ESPECIES Bagrada hilaris puede confundirse con Murgantia histrionica (plaga presente en México, Estados Unidos, Guatemala y Honduras). Sin embargo, mientras que los adultos de B. hilaris son más pequeños, Murgantia histrionica es más grande y Destinatarios: Inspectores PIF Autor: DNPV-DCV - Responsable: FW Fecha: 06/12/2017 �6 presenta manchas oscuras con patrones en forma de bandas y en el dorso presenta una mancha amarilla en forma de cruz (Garrison, 2009). La hembra de Murgantia histrionica mide 7.12 x 3.94 mm, mientras que el macho 5.29 x 3.04 mm. Son en forma de escudo, predominantemente de color negro y con manchas rojas y amarillas en el cuerpo (Verma et al., 1993). Cuando son molestados tienden a arrojarse al suelo (Singh y Malik, 1993). Nimfa de chinche arlequín (Murgantia histrionica) Adulto de chinche arlequín (Murgantia histrionica) Fotografía James Castner, University of Florida Fotografía James Castner, University of Florida IZQ.: Chinche pintada (Bagrada hilaris) DER.: chinche arlequín (Murgantia histrionica) Destinatarios: Inspectores PIF Autor: DNPV-DCV - Responsable: FW Fecha: 06/12/2017 �7 BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA - - “La chinche Bagrada (Bagrada hilaris, Burmeister, 1835)”, presentación de Power-Point: Richard Bostock, Carla Thomas, Richard Hoenisch y Andrew Cogeshall – Universidad ed California, Davis “Bagrada hilaris, Burmeister, 1.835 – Hemiptera, Pentatomidae. 2017” Comisión Agricultura, Silvicultura y Desarrollo Rural, Servicio Agrícola Ganadero de Chile (SAG). Valparaíso, 02 de mayo 2017 “Chinche pintada - Bagrada hilaris, Burmeister, 1835 – Hemiptera, Pentatomidae” SAG – INIA, Chile “Bagrada hilaris Burmeister - Chinche Bagrada - Ficha Técnica No. 42”: SAGRPA, SENASICA - Programa de Vigilancia Epidemiológica Fitosanitaria, México “First Report in Mexico of the invasive stinkg bug Bagrada hilaris on cultivated crucifers in Saltillo” Sergio Sánchez Peña, Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro (UAAAN) “Bagrada bug now on Avocado” Author: Ben Faber, University of California Cooperative Extension- Agriculture and Natural Resources Ventura County http://ceventura.ucanr.edu/?blogstart=124&blogtag=avocado&blogasset=19305 Posted on Thursday, September 4, 2014 at 3:24 PM “Alimentación de Bagrada hilaris, en Moringa oleífera (Brassicales: Moringaceae) en México”: SENASICA Dirección General de Sanidad Vegetal Revista de Vigilancia fitosanitaria 2015 - Volumen 4 - Sección: Artículos Científicos, Página 9 http://sinavef.senasica.gob.mx/ALERTAS/scripts/revista.php?semana=38&anio =2017 Destinatarios: Inspectores PIF Autor: DNPV-DCV - Responsable: FW Fecha: 06/12/2017 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Bagrada hilaris (Chinche pintada / Chinche africana). Ficha Técnica - Descriptiva Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2017 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Dirección Nacional de Protección Vegetal / Dirección de Cuarentena Vegetal Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0005 Abstract A summary of the resource. Ficha técnica con datos de identidad de la plaga Bragada hilaris: nombre científico, sinonimia, posición taxonómica, nombres comunes, hospedantes, distribución geográfica, vías de ingreso y dispersión, importancia económica, daños y síntomas, riesgo fitosanitario, morfología y similitud con otras especies. Incluye fotografìas Control de Plagas https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/b150e15dba35b377c7d94ea018d931aa.pdf 98d02e2b6bbfde1a0bc51c24ffc4c3ff PDF Text Text ��autoridades Presidente Med. Vet. Marcelo S. Miguez Vicepresidente Med. Vet. José M. Romero Gerente General Ing. Agr. Eduardo Dillon Dirección Nacional de Inocuidad y Calidad Agroalimentaria Dr. Ernesto Ferrarese Dirección de Inocuidad de Productos de Origen Animal Dr. Leonardo J. Malvestiti Redactores Dr. Leonardo J. Malvestiti Dr. Carlos A. Vicari Dr. Julio C. Ball Dr. Gustavo Soto Kruse ��Índice INTRODUCCIÓN OBJETIVOS DESTINATARIOS CONCEPTO Y DEFINICIONES CONSTITUCIÓN DE UN SISTEMA DE TRAZABILIDAD 1. Estudio de los sistemas de archivo propios 2. Establecimiento de la relación con los proveedores y los clientes 3. Definición del ámbito de aplicación 3. I. Trazabilidad hacia atrás 3. II.Trazabilidad de proceso (interna) 3. III. Trazabilidad hacia delante 4. Definición de criterios para la agrupación e identificación de productos Agrupación e identificación de productos Tamaño del lote o de la agrupación 5. Establecimiento de registros y documentación necesaria Plazo de conservación de los registros 6. Establecimiento de mecanismos de validación / verificación por parte de las empresas 7. Establecimiento de mecanismos de comunicación entre empresas 8. Establecimiento de procedimientos para la localización, inmovilización y retirada de productos (recall) 9. Estudio de la legislación vigente y las exigencias de los distintos mercados en materia de recall GLOSARIO BIBLIOGRAFÍA ��INTRODUCCIÓN OBJETIVOS Durante los últimos años, la necesidad de información de los consumidores sobre los productos que adquieren ha resultado particularmente destacable. Es en este contexto que nace la expresión “del campo al plato”, un concepto que implica conocer, entre otros aspectos, el origen de los productos utilizados a lo largo de toda la cadena de producción, transformación y distribución, es decir, poder rastrear el inicio de las materias primas que dan forma a los productos de consumo, hacer un trazado a lo largo de toda la cadena comercial: hacer la trazabilidad de los alimentos. El propósito de este manual es explicar la definición, función y aplicación de los sistemas de trazabilidad para dar respuesta a las necesidades de los sectores que intervienen en la cadena agroalimentaria. Al mismo tiempo, procura ofrecer un modelo de constitución y aplicación para quienes deban implementar, controlar o supervisar estos sistemas, garantizando la información sobre la trazabilidad de los productos. Los sistemas de trazabilidad son estructuras de información destinadas a identificar, de forma individual y certera, cada una de las etapas que atraviesa un producto desde su producción hasta su distribución. Mediante la implementación de la trazabilidad se puede controlar de manera eficiente el tiempo real de la producción y comercialización de los alimentos, verificar el origen de los mismos y registrar sus localizaciones y traslados a lo largo de todo su recorrido. Con estos sistemas se pretende detectar todas aquellas anomalías que puedan generarse durante el circuito para garantizar a los consumidores la calidad y seguridad de sus alimentos. Seguir el rastro de los productos desde sus orígenes hasta su consumo ayuda a mejorar la eficacia del sistema de control de inocuidad a lo largo de toda la cadena. De esta manera, si aparece un problema, se dispone de la información necesaria para proceder a su localización dentro del circuito, identificar las causas, adoptar las medidas correctoras y, si es necesario, retirar la partida del mercado. Finalmente, se pretende alcanzar mayores avances en seguridad alimentaria a través del reconocimiento e implementación de una trazabilidad que permita identificar los productos en el circuito de forma rápida, eficaz y sin errores para que nuestros alimentos resulten seguros y confiables durante todas las etapas. DESTINATARIOS El presente documento está destinado a productores, distribuidores, consumidores y otros actores que intervienen en las etapas de la cadena por la que atraviesan los alimentos. CONCEPTO Y DEFINICIONES Según el Codex Alimentarius, “Trazabilidad es la capacidad para seguir el movimiento de un alimento a través de las etapa(s) especificada(s) de la producción, transformación y distribución”. Este concepto, por lo tanto, lleva inherente la necesidad de poder identificar cualquier producto alimenticio dentro de la empresa, desde la adquisición de las materias primas o mercancías de entrada –a lo largo de las actividades que desarrolle– hasta el momento en que el operador realice su entrega al siguiente eslabón en la cadena. En consecuencia, el objetivo de un plan de trazabilidad es que los operadores comerciales puedan identificar el recorrido de un producto. De esta forma, el sistema de control de la inocuidad a lo largo de la cadena agroalimentaria resulta más efectivo y, si aparece un problema, se cuenta con los medios para proceder a la localización del producto de consumo, identificar las causas del incidente, ejecutar las medidas necesarias y, según el caso, retirar la partida del mercado. �CONSTITUCIÓN DE UN SISTEMA DE TRAZABILIDAD En Argentina, las autoridades sanitarias establecen la necesidad del empleo de sistemas de trazabilidad en cada una de las etapas de la cadena agroalimentaria. Sin embargo, es importante destacar que no se detalla específicamente de qué forma, ni a través de qué medios se deben implementar. Por este motivo, las empresas pueden elegir una gran variedad de sistemas, herramientas (procedimientos, manuales, tecnologías con soportes informáticos, electrónicos, etc.) y formas de identificar los productos para recoger y almacenar la información citada –queda en manos de los propietarios de las empresas la organización y el grado de precisión con que realicen esta tarea–. A continuación, se establecen con carácter orientativo las fases y pautas de actuación que cada empresa deberá adaptar a sus circunstancias y características. 1. Estudiar los sistemas de archivos propios 2. Establecer la relación con los proveedores y los clientes 3. Definir el ámbito de aplicación 4. Definir los criterios para la agrupación e identificación de los productos 5. Establecer los registros y la documentación necesaria 6. Establecer los mecanismos de validación/verificación por parte de la empresa 7. Establecer los mecanismos de comunicación entre empresas 8. Establecer los procedimientos para la localización, inmovilización y retirada de productos 9. Estudiar la legislación vigente y las exigencias de los distintos mercados en materia de recall 1. Estudio de los sistemas de archivo propios En primer lugar, la empresa deberá estudiar detenidamente los procedimientos de archivo que está utilizando, como los libros de registro o el detalle del sistema APPCC, y evaluar si con ellos se cumple el objetivo de la trazabilidad. En estas circunstancias, algunas empresas podrían relevar que ya están realizando lo necesario para la implementación del sistema adecuado. Sin embargo, en otros casos podría resultar necesario generar nuevos archivos o adaptar los procedimientos existentes. En líneas generales, el criterio para una implementación establece que el mejor sistema de trazabilidad para una empresa es aquel que encaje con sus actividades de trabajo habituales y permita registrar información necesaria a la que se pueda acceder de forma rápida y fácil. Por lo tanto, su implementación no debe resultar compleja dado que, para las empresas, estudiar con detenimiento y eficacia sus sistemas les permitirá sacar beneficio de la información que resulte. No obstante, la implantación de un sistema de trazabilidad sólido, efectivo y apropiado �a las necesidades de cada caso demandará cierto tiempo y una determinada inversión. 2. Establecimiento de la relación con los proveedores y los clientes Previamente a la implantación del sistema es recomendable: • Establecer una relación concreta y fluida con proveedores y clientes. • Realizar consultas sobre sus sistemas de almacenamiento de información. • Habilitar la posibilidad de consultar sus registros para comprobar si su información de recepciones y expediciones es compatible con la de la empresa propia. • Disponer de un archivo de datos y localización actualizado al cual poder acudir en caso de que se produzca algún incidente. • Pedir consejo a otras partes implicadas como empresas, consultoras o autoridades de control. • Obtener información sobre recomendaciones o guías de trazabilidad para empresas del sector. 3. Definición del ámbito de aplicación El sistema de trazabilidad que se implemente en cada empresa –desde el primer hasta el último eslabón– debe mantenerse a lo largo de toda la cadena agroalimentaria. Por eso, en función de la actividad que se realice en cada sector, el sistema puede necesitar: I. Trazabilidad hacia atrás: conocer cuáles son los productos que entran en la empresa (materias primas, envases y otros materiales utilizados) y quienes son los proveedores de esos productos. Es decir, saber qué se recibe, cuándo, cuánto, de quién y qué se hizo con los productos al recibirlos. II. Trazabilidad interna o trazabilidad de proceso: conocer los productos dentro de la empresa y sus características, hacer su seguimiento, saber qué tratamientos recibieron, a qué circunstancias estuvieron expuestos, cuándo se dividen, cambian o mezclan, qué, cómo, cuándo y cuánto es lo que se crea, qué stock queda, si se cumple con el principio FIFO y cuál es la identificación del producto final. III. Trazabilidad hacia delante: identificar cuáles son los productos preparados para la expedición y quién es el cliente inmediato al que se le entregarán. Saber qué, cuándo y cuánto se ha vendido y si los tenedores intermedios cumplen con las condiciones de conservación y respetan las fechas de vencimiento. Es importante destacar que la relación entre las tres áreas de trazabilidad debe producirse de forma fluida y sin quiebres, transfiriéndose de forma continua del “campo al plato”. Por eso, para implementar un sistema de acuerdo con estas características, se deben considerar las siguientes cuestiones: • Para que se cumplan los objetivos del sistema de trazabilidad, es necesario vincular lo que entra con lo �que sale, es decir, disponer de una trazabilidad interna. • Independientemente de la actividad de una empresa, un sistema de trazabilidad –en líneas generales– no puede funcionar sin considerar la trazabilidad de proceso. • Se debe tener en cuenta el sistema de medios y/o transporte a lo largo de las diferentes etapas: qué tipos de transportes se utilizarán, si son propios de la empresa o se trata de servicios tercerizados, cuáles son las rutas, distancias y horarios a cumplir, si habrá controles durante el transporte, etc. 3. I. Trazabilidad hacia atrás Su implementación se refiere al ámbito de recepción de productos, en el cual los registros son la clave necesaria para que se pueda seguir el movimiento de estos hacia su origen y conocer su etapa anterior. En este momento, la información de trazabilidad implicará distintos datos sobre los productos y los proveedores. De esta forma, se podrá obtener la información sobre un producto hasta llegar al origen de las materias primas. Qué información conviene registrar: • De quién se reciben los productos: el origen de los mismos, detalles del contrato, formas de contactar al proveedor (nombre, dirección y teléfono). • Qué se ha recibido exactamente: PRODUCTO Tipo y estado de los productos (según corresponda: fresco, congelado, crudo, etc.), número de lote y/o número de identificación, fecha de elaboración, envasado y vencimiento. Asimismo, se deberá registrar información adicional como el detalle de los ingredientes utilizados, los controles de calidad que ha atravesado, etc. DOCUMENTOS Por un lado, se deberán utilizar remitos comerciales y/o facturas –siempre que faciliten datos concretos sobre la identidad del producto–; por otro lado, en el caso de productos certificados oficialmente, se deberá registrar la coincidencia entre los datos que brinda el operador y los que son avalados por esta certificación. • Momento de registro: se deberá detallar la fecha de recepción de los productos que ingresen a la empresa. • Cantidades de productos: según corresponda, es importante registrar la cantidad del producto recibido en kilogramos, litros, número de bultos, pallets, etc. • Destinos de los productos: deberá registrarse, por ejemplo, si los productos son almacenados en un determinado almacén o si se mezclarán con los productos de otro proveedor, si se destinarán directamente a elaboración, etc. Qué puede dificultar este trabajo: • Nuevas recepciones de producto que se utilicen para completar un depósito (por ejemplo, un tanque de aceite o un silo de harina). • Recepciones fuera de los horarios acordados y sin operarios calificados in situ. • Falta o limitación de información por parte de los proveedores (incumplimiento contractual). • Recepción de pequeños volúmenes con cantidades no estandarizadas (ejemplo: algunas especies compradas en mercados minoristas). 3. II Trazabilidad de proceso (interna) En este tramo se establecerá una relación entre los productos que se han recibido en la empresa –con los procesos que estos han seguido dentro de la misma (uso de equipos, líneas, cámaras, tratamientos de mezclado, división, etc.)– y los productos finales que salen de ella. Muchas empresas, en el acuerdo comercial con sus proveedores, demandan garantías relacionadas con la aplicación de un mecanismo de trazabilidad interna. Esta parte del sistema relativo al proceso interno al que es sometido el producto dentro de cada establecimiento puede ayudar en la gestión del riesgo y aportar beneficios para la empresa y para los proveedores. Qué información conviene registrar: • Modificaciones de productos: se deben generar registros sobre las divisiones, cambios, elaboraciones, almacenajes o mezclas que se produzcan. El detalle de �estas modificaciones generará datos de distintos tipos relacionados con los de control de procesado (como temperatura, pH, Aw, etc.) y que dependerán de la actividad de cada empresa. • Identificación de productos: registro de productos intermedios utilizados durante la actividad (aunque sea temporal) y del producto final entregado al cliente mediante el código que corresponda (ejemplo, número de lote), este útlimo deberá acompañar al producto en el momento de la entrega. • Tipos de productos: piensos, alimentos, ingredientes y aditivos, especias y todo producto incorporado. También se pueden utilizar los registros de control de stocks. • Cantidades de productos: es importante considerar que la cantidad que se elaborará de un producto no solo se genera desde un punto de vista comercial sino en función de evitar problemas posteriores con respecto al almacenaje o al depósito de lo elaborado. Qué puede dificultar este trabajo: • Interrupciones que atenten contra el proceso que garantice un registro normal y un seguimiento ordenado. • Reprocesado. • Almacenamiento de productos intermedios y finales en depósitos a granel que puede generar inconvenientes si la mercancía no está bien rotulada y diferenciada. 3. III. Trazabilidad hacia delante Esta fase permitirá conocer dónde se ha vendido y distribuido un producto determinado mediante información sobre su identificación, los lotes, las cantidades, la fecha de entrega y el destinatario. Por ese motivo, es fundamental saber qué se ha entregado y a quién considerando que, en algunos casos, a partir de este punto los productos quedan fuera del control de la empresa. Esta trazabilidad podrá llegar hasta la instancia de distribución, es decir, a la última entidad económica legal responsable antes del consumidor final. En aquellos casos en que la empresa despacha a mayoristas deberá llevar un registro de los productos, por el contrario, cuando los productos salen de la planta con destino a consumo directo, el mantenimiento de estos registros no es necesario. No obstante, el operador puede colocar en el rótulo definitivo los datos (tales como número de lote u otro tipo de código) que permitan identificar el origen de los ingredientes y demás componentes del alimento con el objetivo de mantener un buen control de stock en la empresa. Al despachar los productos, los registros deberán servir como vínculo con el sistema de trazabilidad de los clientes, esto se debe a que sin un adecuado sistema de registros de las entregas, la trazabilidad de la cadena agroalimentaria podría quebrarse completamente. Por este motivo, la información sobre la trazabilidad se debe dar de la forma más clara posible con el propósito de que el cliente relacione la identificación del producto con su propio sistema de registros. Qué información conviene registrar: • Entrega de productos: se deberá registrar la empresa o la persona responsable de la recepción física del producto, los detalles del contrato vinculante y las formas de contactar al cliente en caso de ser necesario. • Venta de productos: se deberán registrar los números de lote y/o de identificación y los recibos o documentos de acompañamiento junto con la orden de compra de los clientes. Además, se deben apuntar otros datos de interés como número de cajas, temperaturas –si corresponde–, condiciones de manejo de los productos, fechas de vencimiento, etc. • Cantidades de productos: es fundamental registrar la cantidad de producto entregado en la medida que corresponda (kilogramos, litros, número de bultos, pallets, etc). • Medios de transporte: los datos del transporte son indispensables para garantizar la trazabilidad (por ejemplo, identificación del transportista, el número de la habilitación, la patente del vehículo, los números del contenedor, el nombre del buque, la temperatura del transporte, los precintos o algún sistema de inviolabilidad para garantizar la integridad de la carga durante el trayecto, etc). �Qué puede dificultar este trabajo: • No registrar adecuadamente los despachos o productos entregados. • Procesos de nuevos etiquetados por parte del cliente, sin el procedimiento de registros correspondiente. • Incorrecta identificación del producto despachado (etiquetado). 4. Definición de criterios para la agrupación e identificación de productos Para poder aplicar de forma efectiva un sistema de trazabilidad, cada empresa debe agrupar a partir de un criterio determinado el conjunto de unidades que produce, elabora, envasa o maneja. Adicionalmente, debe llevar adelante un detalle de la forma en que se realizará dicha agrupación. Ejemplos de aplicación de sistemas de trazabilidad: • Empresas dedicadas a la producción primaria: requerirán un sistema basado en la trazabilidad hacia atrás (por ejemplo, en cuanto a la recopilación de información sobre piensos, proveedores, productos fitosanitarios, farmacéutico-veterinarios y biocidas); en la trazabilidad interna (con datos sobre administración de medicamentos o sobre las labores de cultivo realizadas – especialmente sobre aquellas prácticas que puedan tener una repercusión sobre la higiene y seguridad de los cultivos–); y en la trazabilidad hacia delante. • Empresas que procesan y distribuyen alimentos a otras empresas alimentarias: requerirán la aplicación de un sistema basado en trazabilidad hacia atrás, interna y hacia delante. • Empresas que elaboran comidas preparadas y las distribuyen a otras empresas: deberán implantar un sistema basado en trazabilidad hacia atrás, interna y hacia delante (por ejemplo, en el caso de las empresas de catering). • Empresas que elaboran comidas preparadas y las distribuyen exclusivamente al consumidor final: requerirán únicamente un sistema basado en trazabilidad hacia atrás e interna (como en el caso de los bares y restaurantes). • Establecimientos que solo distribuyen alimentos al consumidor final: necesitarán un sistema basado en la trazabilidad hacia atrás (este es el caso, por ejemplo, de las tiendas de ultramarinos). • Empresas que únicamente distribuyen productos a otras empresas o establecimientos: esto se refiere a empresas cuya actividad se basa en la repaletización de productos y/o disgregación de los pallets para su distribución y venta (incluye a distribuidores comerciales). Cuando distribuya a otras empresas, su plan requerirá la aplicación de trazabilidad hacia atrás, interna y hacia delante; por otro lado, si se trata de una distribuidora con sus propios establecimientos el sistema de trazabilidad es único. En este caso, al ser el consumidor final su siguiente eslabón no tiene que desarrollar, obligatoriamente, la trazabilidad hacia delante. En primer lugar, las empresas del sector primario deberán ligar e identificar cada partida obtenida con los productos empleados para su obtención: alimentos para animales, dietas, raciones, productos fitosanitarios, medicamentos veterinarios, lugar y forma de captura, etc. Por otro lado, las empresas transformadoras deberán asociar las unidades de producto elaborado con las materias primas y los ingredientes que se han utilizado. Finalmente, en las empresas distribuidoras se deberán registrar las nuevas agrupaciones que se realicen como resultado de la combinación de distintos productos identificados con sus propios códigos de agrupación (los cuales poseen toda la información inicial). Agrupación e identificación de productos Cada empresa debe agrupar el conjunto de unidades que maneja de acuerdo a criterios que dependerán de la actividad de cada establecimiento. Por ejemplo, las empresas elaboradoras y transformadoras pueden configurar sus agrupaciones según criterios como períodos de tiempo (horario, diario, semanal), líneas de producción, tipos de productos, origen (parcela, galpón proveedor, granja, etc.) o lugar y fecha de captura, entre otros. En aquellas empresas en las que se realizan nuevos procesos con los productos aportados por otras se generarán nuevos números de lote, estos deben garantizar el poder rastrear, de for- �ma sencilla y efectiva, todas las materias primas empleadas. Respecto a la identificación de los productos se debe considerar que ningún sistema de identificación es adecuado en todas y cada una de las circunstancias, de hecho, dentro de una misma empresa puede ser conveniente utilizar diferentes tipos de identificación. Por este motivo, existe una gran variedad de sistemas disponibles, desde etiquetas escritas a mano, Por otro lado, existen casos, como ocurre con los fabricantes de productos que venden a granel, en donde solo es posible definir el lote mediante una franja temporal, por ejemplo, la producción realizada durante el día; otros fabricantes o restauradores llegan a definir el lote como la unidad de venta individual. No obstante, la mayoría de la industria alimentaria adopta un enfoque que se encuentra entre estos dos extremos. 5. Establecimiento de registros y documentación necesaria En una empresa es conveniente que la documentación del sistema de trazabilidad implantado incluya: • Ámbito de aplicación • Descripción y características del sistema • Registros de las operaciones efectuadas • Ejercicios de simulacro de rastreo y trazabilidad • Procedimiento de revisión y actualización del sistema • Responsables La información del producto útil que derive de la implantación del sistema de trazabilidad puede registrarse en hojas de datos sobre papel o mediante tecnologías informáticas. Estas últimas poseen una gran capacidad de archivo en menor espacio y pueden incluir desde una recolección automática de datos hasta el uso de equipamiento necesario como impresoras de etiquetas y lectores de códigos de barras, que implican una ventaja en cuanto a la eficiencia operacional. hasta códigos de barras y chips de radiofrecuencia. La utilización de identificadores estandarizados facilitará la circulación de los datos a través de la cadena agroalimentaria. Tamaño del lote o de la agrupación Las empresas tienen la responsabilidad de definir el grado de precisión y el sistema de identificación a utilizar. La precisión con que se conforme una agrupación determinará, en última instancia, el tamaño de la misma. Generalmente, cuanto más acotada esté una agrupación menor será la cantidad de producto que habrá que inmovilizar o retirar en caso de que surjan problemas de seguridad alimentaria. En la práctica esto implica: Si una empresa elige la fecha de elaboración como sistema de identificación del lote o agrupación, todos los productos que lleven tal fecha deberán ser localizados, inmovilizados o retirados en caso de que se genere un incidente. Si una empresa, en cambio, elige la fecha de fabricación, la máquina en la que se ha fabricado y la hora de fabricación, solo la producción de esa fecha, máquina y hora deberá ser localizada, inmovilizada o retirada, en caso de que exista un problema. Por lo tanto, las empresas deberán considerar las ventajas y desventajas de acotar con mayor o menor precisión sus agrupamientos y datos en el momento de identificar sus productos. Se debe tener en cuenta que si las empresas cuentan con un sistema de autocontrol óptimo compuesto por registros adecuados, estos resultarán una herramienta fundamental de gestión de los riesgos alimentarios que podrá ayudar a la aplicación e implementación del sistema de trazabilidad. �Plazo de conservación de los registros En el caso de la legislación del Senasa, no se detalla expresamente un tiempo determinado de conservación de registros. En consecuencia, el periodo de conservación de los mismos dependerá en gran medida del destino final de la mercancía. Este destino solo se podrá conocer de forma precisa en aquellos productos que están destinados al consumidor final. En estos casos, se recomienda mantener un periodo de conservación de los registros que contemple, como mínimo, el periodo de vida útil del producto más un periodo adicional de seis meses. Sin embargo, en muchos casos, resulta casi imposible conocer el proceso completo que va a sufrir todo producto desde su producción primaria hasta su consumo final. Esto se debe a que existe un gran número de productos susceptibles de ser sometidos a uno o varios sistemas de conservación (congelación o ultracongelación) y/o transformación (esterilización, secado) que prolongan la vida útil de los mismos. Puntualmente, el decreto 4238/68 establece en su capítulo XXVII un periodo de conservación de uno a dos años para certificados sanitarios que amparan a los productos salientes y que son parte de la documentación en la trazabilidad. En conclusión, se sugiere conservar los registros y la documentación relacionada al menos por el tiempo normado considerando la recomendación sobre el periodo de vida útil de los productos. 6. Establecimiento de mecanismos de validación / verificación por parte de las empresas Periódicamente, es conveniente realizar revisiones del sistema para comprobar que funciona de forma efectiva y registrar que tal comprobación se ha producido. Por lo tanto, se deberá desarrollar un sistema de verificación teniendo en cuenta: • La exactitud de la información almacenada. • La eficiente comunicación a todos los actores, incluyendo a los consumidores. • El tiempo de respuesta (que deberá ser el mínimo posible, ya que pueden existir riesgos para la salud de las personas). • Los cambios que se realicen y el por qué de esos cambios. Para las empresas, será beneficioso realizar de forma regular un simulacro de demanda de la información sobre trazabilidad. Esto se podrá llevar a cabo eligiendo un producto, seleccionando los datos inherentes a la trazabilidad y verificando si se puede conocer el origen y las distintas intervenciones que ha atravesado. Los diferentes actores involucrados en la cadena de producción, transformación y distribución podrán participar y sugerir casos prácticos para comprobar que la información se puede obtener de forma eficaz y rápida. 7. Establecimiento de mecanismos de comunicación entre empresas Un sistema de trazabilidad efectivo comprende y compromete a toda la cadena, es decir, a todos los eslabones de producción. Por lo tanto, cada actor del circuito tiene la responsabilidad de evitar que se rompa la trazabilidad en el eslabón que representa, dado que si esto ocurriese podrían verse perjudicados los operadores que estén cumpliendo adecuadamente con el desarrollo del sistema en su establecimiento. Por este motivo, muchas empresas piden a sus proveedores que compartan con ellos la información de trazabilidad que poseen. De esta forma, diseñan y establecen protocolos o mecanismos comunes para compartir e identificar esta información. 8. Establecimiento de procedimientos para la localización, inmovilización y retirada de productos (recall) El objetivo y la obligación de las empresas alimentarias y de alimentos para animales es poner en el mercado productos seguros para los consumidores que cumplan con los requisitos legales que los competen. No obstante, se debe tener en cuenta que existen ocasiones en que se producen incidentes que requieren ejecutar acciones necesarias para proteger a los consumidores. En estos casos, las empresas deberán actuar rápidamente para conocer la naturaleza del incidente, tomar las medidas correctoras, eliminar las causas y evitar que vuelva a producirse. Frente a esta situación, existen ciertas acciones que deben ser consideradas y evaluadas antes de ser aplicadas por una empresa: • Informar a las autoridades competentes. • Conocer la naturaleza del incidente. • Localizar el producto afectado. • Adoptar medidas correctoras. • Informar a otros operadores económicos. • Realizar un informe posterior al incidente y sacar conclusiones. • Transmitir la información pública a través de diferentes medios de comunicación y difusión. 9. Estudio de la legislación vigente y las exigencias de los distintos mercados en materia de recall Las empresas deberán considerar y evaluar los requerimientos o exigencias normadas por cada destino que tengan sus productos. Por este motivo, los sistemas de trazabilidad que se implanten también deberán considerar las reglamentaciones específicas o las normativas vigentes de cada cliente o destino a lo largo de toda su cadena productiva. Se puede observar un ejemplo de esto en el Reglamento (CE) 178/2002 que exige que los operadores o productores tengan implantado un sistema de trazabilidad con registros y/o documentación que lo respalden para poder enviar sus productos a la Comunidad Europea. �GLOSARIO Agrupación de productos: Conjunto de unidades de un producto con un mismo código de identificación que permite gestionarlo como un todo en la cadena agroalimentaria. Documento comercial: Documento que genera el proveedor y que sirve de justificante de la entrega de mercancía al cliente (por ejemplo, el remito). Alimento: Sustancias o productos destinados a ser ingeridos por los seres humanos (independientemente de si han sido transformados entera o parcialmente). Por un lado, este término también designa a cualquier sustancia –incluida el agua– incorporada voluntariamente al alimento durante su fabricación, preparación o tratamiento. Por otro lado, no incluye a los piensos, los animales vivos –salvo que estén preparados para ser comercializados para consumo humano–, las plantas antes de la cosecha, los medicamentos, el tabaco y sus derivados, las sustancias estupefacientes o psicotrópicas, los residuos y los contaminantes. Auditoría: Examen sistemático e independiente para determinar si las actividades y sus resultados se corresponden con los planes previstos, si se aplican eficazmente y si son adecuados para alcanzar los objetivos. Cadena agroalimentaria: Sucesión continua de actividades que atraviesa un alimento llevada a cabo por agentes económicos, desde la producción primaria con la producción de piensos para animales hasta la venta o suministro de alimentos al consumidor final. Cliente: Persona u organización en la cadena agroalimentaria a quien se vende o facilita el producto. Codex alimentarius: Conjunto reconocido a nivel internacional de estándares, códigos, prácticas, guías y otras recomendaciones relativas a los alimentos, su producción y la seguridad alimentaria. Tiene como objetivo proteger la salud de los consumidores. Consumidor final: Último consumidor de un producto alimenticio que no empleará dicho alimento como parte de operaciones o actividades comerciales en el sector agroalimentario. Control: Realización de una serie programada de observaciones o mediciones a fin de obtener una visión general del grado de cumplimiento de la legislación sobre piensos y alimentos, así como de la normativa en materia de salud y bienestar de los animales. namiento, transporte o distribución de piensos; incluye a todo productor que realice estas acciones sobre piensos para alimentar animales. Factura: Documento que emite el proveedor para hacer efectivo el importe de la mercancía entregada al cliente. FIFO: Concepto utilizado usualmente en estructuras de datos. La sigla proviene de la frase en inglés first in, first out (primero en entrar, primero en salir ). En este contexto está utilizado para caracterizar el procedimiento de ingresos y salidas de los productos de una empresa. Incumplimiento: El hecho de no cumplir la legislación en materia de productos de consumo. Lote: Conjunto de unidades de venta de un producto alimenticio producido, fabricado o envasado en circunstancias prácticamente idénticas. Operador económico: Operador de una empresa alimentaria y/o operador de una empresa de piensos. Pienso: Cualquier sustancia o producto –incluidos los aditivos– destinado a la alimentación por vía oral de los animales, independientemente de si ha sido transformado entera o parcialmente. Prerrequisitos: Prácticas y condiciones que se necesitan antes y durante la implantación del sistema APPCC. Algunos de estos son: • Diseño y plan de mantenimiento • Formación del personal • Abastecimiento de agua • Limpieza y desinfección • Desinsectación y desratización • Eliminación de desechos • Control de proveedores • Trazabilidad • Manipulación Producto: Categoría que designa sustancias tales como alimentos, piensos, animales destinados a la producción de alimentos o sustancias destinadas a ser incorporadas en alimento o piensos. Proveedor: Persona u operador económico, inmediatamente anterior en la cadena agroalimentaria, que vende o facilita el alimento, insumo, materia prima y/o producto. Control oficial: Toda forma de control que efectúe la autoridad competente para verificar el cumplimiento de la legislación y las normas inherentes. Riesgo: La ponderación de la probabilidad de un efecto perjudicial para la salud y la gravedad de ese efecto como consecuencia de un factor de peligro. Empresa alimentaria: Toda empresa que lleve a cabo cualquier actividad relacionada con las etapas de producción, transformación y distribución de alimentos. Sistema APPCC: Sistema de análisis de peligros y puntos críticos de control. Identifica, evalúa y controla los peligros de importancia en seguridad alimentaria. Empresa de piensos: Toda empresa que lleve a cabo cualquier actividad de producción, fabricación, transformación, almace- Trazabilidad: También llamada rastreabilidad o rastreo. Posibilidad de encontrar y seguir el rastro de un producto a través de �todas las etapas de producción, transformación y distribución. Validación: Obtención de pruebas que demuestren que las medidas de control de un hecho de peligro, aplicadas en la higiene de los alimentos o piensos, son capaces de cumplir esta función de manera constante en el nivel especificado. Verificación: Confirmación, mediante examen y estudio de pruebas objetivas, del cumplimiento de los requisitos especificados. �BIBLIOGRAFÍA (2003). Recomendaciones AECOC de etiquetado para la trazabilidad. Carne de vacuno. (2009). Guía para la Aplicación del Sistema de Trazabilidad en la Empresa Agroalimentaria. Madrid: Ministerio de Sanidad y Consumo, Agencia Española de Seguridad Alimentaria. (2003). Recomendaciones AECOC de etiquetado para la trazabilidad. Carne de ovino-caprino. Código Internacional recomendado de prácticas principios generales de higiene de los alimentos CAC/RCP-1 (1969), Rev. 3 (1997), enmendado en 1999. “Sistema de análisis de peligros y de puntos críticos de control (HACCP) y directrices para su aplicación”. Anexo al Código Internacional recomendado de prácticas principios generales de higiene de los alimentos CAC/RCP-1 (1969), Rev. 3 (1997). “Anteproyecto de Directrices para la Validación de Medidas de Control de Higiene de los Alimentos”. Trámite 4, Programa conjunto FAO/OMS sobre normas alimentarias, signatura de documento CX/FH 04/9. Definición de la Rastreabilidad/Rastreo de los productos. Programa conjunto FAO/OMS sobre normas alimentarias, signatura de documento CX/GP 04/20/6. (2002). Manual de Gestión Coordinada de Crisis Alimentarias entre Industria y Distribución. Madrid: FIAB, ANGED, ASEDAS, AECOC. (2004). Guía de Aplicación de las Exigencias de Etiquetado y Trazabilidad de Alimentos y Piensos modificados genéticamente. AESA-MAPA-FIAB. (2003). Trazabilidad De Productos Envasados. Manual de Implantación de los Estándares EAN-UCC. AECOC. (2003). Recomendaciones AECOC de etiquetado para la trazabilidad. Carne freca de porcino. (2003). Tecnologías Moleculares de Trazabilidad Alimentaria. Informe de vigilancia tecnológica. Madrid: Genoma España. (2003). Estándares de Codificación y trazabilidad en el Sector Hortofrutícola. AECOC. Reglamento (CE) nº 178/2002 del Parlamento Europeo y del Consejo de 28 de enero de 2002 por el que se establecen los principios y los requisitos generales de la legislación alimentaria, se crea la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria y se fijan procedimientos relativos a la seguridad alimentaria. Directiva 2001/95/CE del Parlamento Europeo y del Consejo, de 3 de diciembre de 2001. Directiva 93/43/CEE del consejo de 14 de junio de 1993 relativa a la higiene de los productos alimenticios. Reglamento (CE) Nº 852/2004 del Parlamento europeo y del Consejo de 29 de abril de 2004 relativo a la higiene de los productos alimenticios. Reglamento (CE) nº 853/2004 del Parlamento europeo y del Consejo de 29 de abril de 2004 por el que se establecen normas específicas de higiene de los alimentos de origen animal. � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Base para la implementación de un sistema de trazabilidad Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2013 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Manual Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0040 Abstract A summary of the resource. El propósito de este manual es explicar la definición, función y aplicación de los sistemas de trazabilidad para dar respuesta a las necesidades de los sectores que intervienen en la cadena agroalimentaria. Al mismo tiempo, procura ofrecer un modelo de constitución y aplicación para quienes deban implementar, controlar o supervisar estos sistemas, garantizando la información sobre la trazabilidad de los productos. Se pretende alcanzar mayores avances en seguridad alimentaria a través del reconocimiento e implementación de una trazabilidad que permita identificar los productos en el circuito de forma rápida, eficaz y sin errores para que nuestros alimentos resulten seguros y confiables durante todas las etapas Table Of Contents A list of subunits of the resource. Introducción Objetivos Destinatarios Concepto y definiciones Constitución de un Sistema de Trazabilidad 1. Estudio de los sistemas de archivo propios 2. Establecimiento de la relación con los proveedores y los clientes 3. Definición del ámbito de aplicación 3. I. Trazabilidad hacia atrás 3. II.Trazabilidad de proceso (interna) 3. III. Trazabilidad hacia delante 4. Definición de criterios para la agrupación e identificación de productos Agrupación e identificación de productos Tamaño del lote o de la agrupación 5. Establecimiento de registros y documentación necesaria Plazo de conservación de los registros 6. Establecimiento de mecanismos de validación / verificación por parte de las empresas 7. Establecimiento de mecanismos de comunicación entre empresas 8. Establecimiento de procedimientos para la localización, inmovilización y retirada de productos (recall) 9. Estudio de la legislación vigente y las exigencias de los distintos mercados en materia de recall Glosario Bibliografía https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/82ad2ce2857065a0eb185534519f324e.pdf 0515d8d7d97451523ace3e5824d30063 PDF Text Text GUÍA Bienestar animal en la producción ovina Material de capacitación para veterinarios acreditados en pequeños rumiantes �El Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (Senasa) es un organismo descentralizado, responsable de ejecutar las políticas nacionales en materia de sanidad y calidad animal, vegetal y de la inocuidad de los alimentos de su competencia, así como de verificar el cumplimiento de la normativa vigente en la materia. Equipos de trabajo Programa Nacional de Bienestar Animal Programa Nacional de Enfermedades de los Pequeños Rumiantes Dirección Nacional de Sanidad Animal Coordinación General de Comunicación Institucional Edición 2026 �Contenido Introducción 4 Objetivo 4 Definición 4 Importancia 5 Normativa Nacional 7 Resolución Senasa N.° 1697/2019 7 Agua y alimento 7 Sanidad animal 8 Ambiente, instalaciones y equipos 9 Maniobras zootécnicas dolorosas 11 Personal 11 Manejo de los animales y prohibiciones 11 Transporte 13 Resolución Senasa N.° 723/2025 14 Resolución Senasa N.° 924/2020 15 Resolución Senasa N.° 329/2017 16 Corrales 16 Normativa internacional 18 Bienestar animal durante la esquila 20 Contacto 21 GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 3 �Introducción El bienestar animal (BA) es un área de estudio compleja y multidisciplinaria en la que intervienen aspectos científicos, éticos, legales, económicos, políticos, culturales, sociales y religiosos. En las últimas décadas, se ha evidenciado un interés creciente por esta temática a nivel mundial, donde consumidores prestan especial atención al trato que reciben los animales (tanto en general como en aquellos criados para la producción), además, muchos productores lo consideran una parte esencial para elevar la calidad de sus productos. Este concepto no se trata de un requisito más que se debe cumplir por imposición de los mercados, sino de una herramienta complementaria dentro de las cadenas de valor que tiene como fin promover la calidad e inocuidad de los productos, así como el trato ético hacia los animales. Por tal motivo, el BA debe cuidarse de manera integral a lo largo de la cadena pecuaria para minimizar los problemas, salvaguardar la inversión y propiciar el desarrollo sostenible de cada actividad, atendiendo además a la demanda del público en general y de los consumidores de productos de origen animal en particular. Objetivo La presente guía tiene como objetivo abordar la noción de bienestar animal, su normativa vigente en la Argentina para el ámbito de la producción ovina y las recomendaciones internacionales en la materia. Definición El BA puede definirse como el estado de un animal en relación a sus intentos por hacer frente al ambiente (Broom, 1986)1. Esto significa que las condiciones del ambiente en el que se encuentren los animales influirán directamente en su bienestar a tres niveles: • El funcionamiento biológico, es decir, su estado de salud. • El comportamiento. • Los estados afectivos: confort, placer, satisfacción, sufrimiento, dolor, frustración, etc. Broom D. 1986. Indicators of poor welfare. British Veterinary Journal. 142(6):524 26. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/0007193586901090 1 GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 4 �La Organización Mundial de Sanidad Animal (OMSA) señala que el BA designa el estado físico y mental de un animal en relación con las condiciones en las que vive y muere. La salud animal es un componente esencial del BA, pero no es el único. Las buenas condiciones de BA exigen que los animales se críen en situaciones de mínimo estrés, dolor o temor; que se les permita satisfacer sus necesidades nutricionales, sanitarias y comportamentales; que se prevengan sus enfermedades y se les administren tratamientos veterinarios apropiados; que se los proteja, maneje y alimente correctamente; y que se los manipule y sacrifique de manera compasiva. En definitiva, el BA se refiere al estado del animal y puede ser evaluado de manera científica, independientemente de consideraciones morales. Un animal está en buenas condiciones de bienestar si se encuentra sano, cómodo, bien alimentado, seguro, puede expresar formas innatas de comportamiento y si no padece sensaciones desagradables de dolor, miedo o sufrimiento. Importancia El actual enfoque, conocido como “un bienestar”, reconoce los vínculos directos e indirectos existentes entre el bienestar humano, el BA y la integridad del ambiente. Así como la salud humana y la sanidad animal son interdependientes y están vinculadas a los ecosistemas en los cuales coexisten, preservar y mejorar el BA tiene diversas conexiones (directas e indirectas) con el bienestar de las personas y con temas ambientales. Por lo tanto, existen diferentes áreas en las que el bienestar de animales y personas se interrelacionan y confluyen con la sostenibilidad de los ecosistemas. Es necesario destacar que los animales tienen un papel importante en la subsistencia humana al ser fuente de comida, ingresos, condición social e identidad cultural, al igual que de compañía y seguridad. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 5 �BIENESTAR ANIMAL SUSTENTABILIDAD DEL ECOSISTEMA BIENESTAR SOCIAL Algunas investigaciones presentan el vínculo existente entre las condiciones en que son mantenidos los animales de granja y la salud de los animales, las personas y el ambiente. Cuando los animales son criados en pobres condiciones, sin acceso a una nutrición adecuada, hacinados, incómodos, de manera poco higiénica y bajo malos tratos por parte de sus responsables, el estrés asociado con estas condiciones aumenta su vulnerabilidad a las enfermedades. Un informe publicado por la Comisión de Producción Industrial de Animales de Granja (PEW) destaca cómo el contacto cercano entre los animales facilita el intercambio y la evolución de los patógenos, y que el estrés inducido por el confinamiento denso aumenta la probabilidad de infección y enfermedad. Los patógenos que circulan en estas poblaciones animales pueden provocar enfermedades a las personas, incluso pueden ser un eslabón importante en la aparición de enfermedades infecciosas emergentes. Los animales estresados son más susceptibles a las infecciones por una baja de sus defensas, mientras que aquellos criados y mantenidos en condiciones que promueven el BA presentan niveles más bajos de estrés y están mejor preparados para afrontar las condiciones adversas que los pueden enfermar. Cuando se resguarda el BA en cada eslabón de la cadena pecuaria, todos los actores se ven beneficiados ya que: • minimiza el estrés y el sufrimiento de los animales; • disminuye la mortalidad, las enfermedades y las lesiones en los animales; • facilita las rutinas de trabajo diarias, disminuye los riesgos para el personal y califica el trabajo del cuidador; • maximiza la productividad y la rentabilidad de la actividad; • reduce la necesidad de uso de antibióticos y con ello colabora en combatir la resistencia antimicrobiana; • mejora la percepción pública, como consecuencia del trato digno y humanitario con los animales; • aumenta la competitividad frente a mercados nacionales e internacionales. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 6 �Normativa nacional En la República Argentina existen normativas que regulan diversos aspectos del BA relacionados con la producción. En este sentido, es fundamental profundizar sobre la normativa general a todas las especies –que incluye a los ovinos–, con énfasis en la producción primaria. Las normas generales a todas las especies en relación a las exigencias mínimas de bienestar animal (Res. Senasa N.º 1697/2019), al marco reglamentario para la habilitación de establecimientos pecuarios de engorde a corral (Res. Senasa N.º 329/2017), a los predios concentradores de hacienda (Res. Senasa N.º 924/2020); y al transporte de hacienda (Res. Senasa N.º 723/2025) pueden ser consultadas en la bibliografía complementaria de esta guía. Resolución Senasa N.° 1697/2019 Esta norma establece las medidas que deben tomar los responsables de los animales en relación con los diversos aspectos que son importantes para el bienestar animal, aplicables en los siguientes contextos: • Ámbito pecuario, en todas sus etapas hasta la faena inclusive. • Animales de trabajo utilizados en el ámbito agropecuario. • Equinos destinados a participar en actividades deportivas. Acceder a la normativa completa. Agua y alimento El titular/responsable de los animales debe garantizar que reciban una alimentación en cantidad y calidad adecuada a su edad, especie y estado fisiológico, con el fin de mantener su buen estado de salud y satisfacer sus requerimientos nutricionales. Salvo situaciones particulares en donde se encuentra indicado el ayuno o la restricción alimentaria, todo animal debe tener acceso libre al alimento o a intervalos adecuados a sus necesidades fisiológicas. Además, los animales deben tener libre acceso a una cantidad suficiente de agua, de calidad adecuada para mantener un buen estado de salud, o deben poder satisfacer su ingesta líquida por otros medios. Aún en invierno, el libre acceso al agua debe ser constante. En épocas de heladas y en determinadas zonas del país, es necesario recorrer las aguadas para asegurarse de que el hielo no les impida acceder a ella. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 7 �Bebedero con hielo en temporada invernal. Sanidad animal Los animales mantenidos bajo condiciones en las que su bienestar dependa de atención humana deben ser controlados con frecuencia (como mínimo, una vez al día). Aquellos animales criados o mantenidos bajo otro tipo de condiciones deben ser controlados a intervalos suficientes para evitarles cualquier sufrimiento. Los animales que se observen enfermos o heridos deben recibir una atención inmediata y los cuidados necesarios, bajo la práctica o supervisión de un veterinario. En caso de requerirse, los animales enfermos o heridos deberán alojarse en condiciones de aislamiento y confort, lo antes posible. Cuando no sea posible el tratamiento, los animales deben someterse a sacrificio humanitario, bajo supervisión de un profesional. El personal a cargo del manejo de los animales debe asegurarse de prevenir la ocurrencia de enfermedades y lesiones, brindar atención veterinaria y tratamiento sanitario adecuado (en caso de enfermedad) y minimizar el sufrimiento que puedan ocasionar las prácticas de manejo. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 8 �Personal a cargo del manejo de ovinos. Ambiente, instalaciones y equipos Los materiales que se utilicen para las instalaciones y equipos, y que puedan estar en contacto con los animales, deben ser seguros e inocuos para los mismos, y poder limpiarse y desinfectarse. Los establecimientos deben contar con instalaciones y facilidades diseñadas para un manejo adecuado, sin riesgos para el bienestar animal. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 9 �La limpieza, la desinfección y el control de plagas deben realizarse con la frecuencia necesaria para salvaguardar la bioseguridad y prevenir enfermedades o lesiones. Las instalaciones, los equipos y los accesorios para manejar a los animales deben diseñarse, construirse y mantenerse de forma tal que no presenten bordes afilados ni salientes que puedan provocar heridas a los animales. En ovinos lecheros, la práctica de ordeñe se debe realizar respetando una rutina horaria, con personal entrenado y en instalaciones adecuadas, evitando accidentes y cuidando la higiene. El manejo de los animales debe realizarse de forma lenta y tranquila, sin golpes y con tono de voz baja y suave. En los sistemas productivos en confinamiento permanente o temporario, la circulación del aire, el nivel de polvo, la temperatura, la humedad relativa del ambiente, la concentración de gases y los niveles de ruido deben mantenerse dentro de límites que no sean perjudiciales para los animales. Los animales que deban permanecer en espacios cerrados no pueden ser mantenidos en oscuridad permanente ni estar expuestos a la luz artificial sin una interrupción adecuada. Además, se debe disponer de iluminación apropiada (fija o móvil) para poder llevar a cabo una inspección completa de los animales en cualquier momento. Cuando los animales se encuentren bajo condiciones de confinamiento continuo o regular, se les debe proporcionar un ambiente adecuado y/o prácticas de manejo que permitan satisfacer sus necesidades fisiológicas y comportamentales. Los equipos para el suministro de alimentos y agua deben ser construidos y ubicados de manera tal que estén accesibles para todos los animales y eviten la competencia por el recurso. En la medida en que sea necesario, el animal mantenido al aire libre debe contar con protección contra las inclemencias climáticas y los depredadores. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 10 �Todos los ovinos deben ser protegidos de los predadores. Los productores responsables del cuidado animal deben estar al tanto de los riesgos existentes y tomar las medidas necesarias para prevenir lesiones o la muerte. Maniobras zootécnicas dolorosas Cuando no se puedan evitar las prácticas dolorosas, el dolor resultante debe ser minimizado, refinando los métodos disponibles y ser llevados a cabo por personal idóneo. Personal La totalidad de las personas involucradas en el manejo de los animales deben tener la idoneidad necesaria sobre aspectos básicos de bienestar animal, de acuerdo con sus responsabilidades. Además, la cantidad de personas involucradas debe dimensionarse en función de lo que requieren las acciones que se realizan. Manejo de los animales y prohibiciones El manejo de los animales debe promover una relación humano–animal positiva y no debe ocasionar heridas, miedo duradero ni estrés evitable. En tal sentido, se prohíbe azuzar a los animales mediante el empleo de instrumentos o prácticas que –sin ser de simple estímulo– puedan causarles daños, mortificación o lesiones orgánicas o funcionales. Solo se permite la utilización de inductores del movimiento, siempre que su uso se ajuste a lo establecido por la normativa vigente. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 11 �Manejo de los animales. La zona de fuga describe un espacio en torno a un animal que, en caso de ser invadido, provoca que el animal se aleje. Su tamaño dependerá de la raza y de la experiencia previa con las personas. El punto de balance, ubicado a la altura de la cruz, se puede usar para moverlos hacia atrás o adelante. Si el operador ingresa a la zona de fuga por delante del punto de balance, el animal retrocederá. Si se para a la altura del punto de balance, el animal se quedará quieto. Si ingresa a la zona de fuga por detrás del punto de balance, el animal avanzará. El conocimiento de la zona de fuga también puede utilizarse en el manejo de animales dentro de una manga. Manejo de animales dentro de la manga. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 12 �El uso de perros queda restringido a animales entrenados, que deberán estar bajo la supervisión permanente. Queda prohibido el uso de perros que muerdan a los animales. Transporte En forma previa a su carga en el transporte, todo animal debe ser inspeccionado por un operario idóneo que evaluará su aptitud para viajar. En caso de duda sobre dicha aptitud, el animal debe ser examinado por un profesional veterinario. Los animales que no sean considerados aptos para viajar no deben ser cargados, a menos que sea necesario transportarlos para realizarles el tratamiento veterinario correspondiente. Aquellos no aptos para su traslado deberán manejarse humanitariamente; es decir, en caso de corresponder, deben recibir inmediatamente un tratamiento apropiado para aliviar su dolencia o enfermedad o, cuando el tratamiento no sea posible, ser sometidos a un sacrificio humanitario. Se considera que un animal no se encuentra apto para viajar si: • es incapaz de moverse por sí mismo o de desplazarse sin ayuda; • presenta una herida abierta grave o un prolapso; • se trata de hembras preñadas que hayan superado el 90 % del tiempo de gestación previsto o de hembras que hayan parido la semana previa; • se trata de animales recién nacidos, cuyo ombligo no ha cicatrizado completamente. Está prohibida la carga de animales en vehículos que no reúnan las especificaciones técnicas establecidas en la Resolución Senasa N.º 723/2025. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 13 �Transporte de ovinos. El traslado de los ovinos se debe realizar en vehículos habilitados y especialmente diseñados para el trasporte de ganado, bajo la conducción de personal capacitado y garantizando en todo momento el bienestar animal. Resolución Senasa N.° 723/2025 La norma establece el marco regulatorio para la Habilitación Sanitaria de Medios de Transporte de Animales Vivos y Mercancías de Origen Animal. Acceder a la normativa completa. La misma abroga la ex-Resolución Senasa N.° 503/2022 y, en su Anexo III, establece los requisitos técnicos que deben reunir los transportes para trasladar animales. Además, en su Anexo VII, contiene la tabla de densidades de carga por especie (tabla 1). GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 14 �Ovinos/Caprinos Para viajes de más de 12 horas Para viajes de hasta 12 horas Peso promedio en kilogramos (kg) Superficie en metros cuadrados (m2) Esquilada Sin esquilar 20 Esquilada 0.27 Sin esquilar 0.33 25 0.22 0.28 0.32 0.38 35 0.28 0.35 0.40 0.47 45 0.33 0.42 0.47 0.56 55 0.38 0.48 0.54 0.64 65 0.42 0.54 0.61 0.72 75 0.46 0.59 0.67 0.79 85 0.51 0.64 0.72 0.86 95 0.55 0.69 0.78 0.93 Tabla 1. Límites máximos de carga para ovinos, según normativa vigente. Resolución Senasa N.° 924/2020 Esta norma establece los requisitos mínimos sobre habilitación de locales destinados a predios feriales, mercados concentradores y todo otro lugar de concentración de animales. En su artículo 11, en materia de bienestar animal, indica que será de aplicación la Res. Senasa N.° 1697/2019. Ovinos en manga. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 15 �Durante el encierre y acopio de ovinos para venta, la majada deberá ser alojada respetando los criterios de densidad específicos, tener acceso a agua y alimento permanente, y ser manejados por personal entrenado que minimice el estrés. Acceder a la normativa completa. Resolución Senasa N.° 329/2017 Esta norma establece los nuevos requisitos de instalaciones, bioseguridad, higiene y manejo sanitario, para el registro y la habilitación de establecimientos de engorde a corral que presentan confinamiento de bovinos, bubalinos, caprinos y ovinos, sin acceso a pastoreo. En su anexo, profundiza en los requisitos técnicos y de infraestructura que deben cumplir los establecimientos de engorde a corral. Acceder a la normativa completa. Corrales Los engordes a corral deben contar con corrales de adaptación, un corral lazareto y corrales de estadía o engorde que posean las siguientes características • Dimensión: cada corral debe asegurar que los animales posean libre acceso a los comederos y bebederos, así como espacio suficiente para echarse, descansar y satisfacer sus necesidades comportamentales/sociales, garantizando un medio ambiente adecuado para su bienestar. • Superficie: los pisos deben ser lo suficientemente compactos, con el fin de evitar infiltraciones o anegamientos. No se considerará aceptable que la cantidad de barro supere la línea de la corona de los miembros de los animales durante el período de tiempo que permanecen en el corral. • Drenaje: debe presentar una pendiente adecuada para el escurrimiento efectivo de los residuos hacia una canalización o colecta de efluentes a la que los animales no tengan acceso. • Los espacios libres que rodean todas las instalaciones deben estar limpios, libres de malezas, desperdicios y sin agua acumulada. • Reparo y sombra: en condiciones climáticas que así lo requieran, los corrales deben disponer de espacios con reparo y sombra con dimensiones suficientes para que todos los animales puedan acceder a estos. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 16 �• Contar con bebederos en buen estado, sin salientes ni bordes capaces de generar injurias a los animales, deben estar ubicados en zonas altas del corral o en lugares que presenten un buen drenaje, de tamaño adecuado para que todos los animales tengan fácil acceso y suministro constante de agua de bebida para evitar la competencia. • Contar con comederos en buen estado, sin salientes ni bordes capaces de generar injurias a los animales, de un tamaño adecuado para que todos tengan fácil acceso a los alimentos para evitar la competencia. Ovinos en engorde a corral. En el caso de que los animales sean confinados para engorde, se debe cumplir con lo establecido en la Resolución Senasa N.º 329/2017. La capacidad de cada corral no puede superar los 500 animales y se debe respetar la superficie mínima para cada categoría: Categoría Superficie mínima (m2) Cordero 4,00 Oveja con cría 8,00 Oveja sin cría 5,00 Capón 5,00 Carnero 6,66 Tabla 2. Superficie mínima que se debe respetar por categoría en corral. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 17 �En caso de ser necesario el agarre de un animal individual, se deberá sujetar un brazo por debajo o alrededor del cuello para dirigir el movimiento y el otro por detrás, rodeando la parte posterior del animal para empujarlo por detrás. Agarre de ovino. Normativa internacional La Organización Mundial de Sanidad Animal (OMSA) publicó las primeras normas sobre BA en el año 2004 en el Código Terrestre y en el 2008 en el Código Acuático. Estas normas se actualizan con regularidad en función de la evolución de los conocimientos científicos y se completan progresivamente, con el fin de abarcar diferentes aspectos del BA. El capítulo 7.1 del Código Terrestre establece las recomendaciones para el bienestar de los animales. El mismo se encuentra disponible para su lectura en la bibliografía complementaria. Bienestar animal durante la esquila Los animales deben ser esquilados al menos una vez al año por personal entrenado y habilitado para la tarea, previo a la época de verano utilizando el protocolo PROLANA. Están exentas del cumplimiento de este estándar las explotaciones que utilizan razas desprovistas de lana. Entre las consideraciones principales de bienestar animal durante la esquila, se debe tener en cuenta: • Realizar la esquila desmaneada, utilizando métodos como Bowen, Tally Hi, o New Pattern, ya que estos contribuyen a la comodidad del animal y del esquilador, permitiendo obtener el vellón entero sin generar dobles cortes. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 18 �• Los animales podrán ser encerrados la noche previa reservando el equivalente al primer turno de esquila bajo techo. • En cuanto a las esquilas preparto, las mismas deben realizarse con 20 a 30 días de anticipación a la fecha probable del inicio de parición. Si se efectúan durante épocas de bajas temperaturas y en áreas con escaso reparo, se deberá utilizar el peine de nieve o la tijera, dejando un remanente de 1 cm de lana. • Las esquilas posparto deben realizarse al menos 3 meses después de la parición, a los fines de disminuir el riesgo de pérdida de corderos por “aguachamiento” (abandono). • Luego de la esquila, los animales deben tener acceso a agua y alimento lo antes posible. • Los contratistas de esquila deberán desinfectar el equipamiento entre establecimientos para evitar o disminuir el riesgo de propagación de enfermedades. • El personal responsable del manejo de los animales debe monitorear el pronóstico del tiempo y no realizar la esquila si existe riesgo de temporal, a menos que pueda garantizarse el refugio y alimento adicional para la majada. • Los animales que sufran lesiones durante la esquila deben ser tratados inmediatamente, con alivio del dolor. En caso de que no puedan recuperarse, deberán ser sacrificados humanitariamente, (con el menor sufrimiento posible). Esquila de ovinos. Se debe realizar la esquila desmaneada al menos una vez al año utilizando el protocolo PROLANA. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 19 �Protocolo de esquila en ovinos. PROLANA. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 20 �Contactos Para otras consultas, comunicarse con el Programa Nacional de Bienestar Animal al correo electrónico bianimal@senasa.gob.ar. GUÍA. BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN OVINA 21 �� Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Bienestar animal en la producción ovina. Material de capacitación. Guía Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2026 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Programa Nacional de Bienestar Animal Programa Nacional de Enfermedades de los Pequeños Rumiantes Dirección Nacional de Sanidad Animal Coordinación General de Comunicación Institucional Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Manual Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0200 Abstract A summary of the resource. La presente guía tiene como objetivo abordar la noción de bienestar animal, su normativa vigente en la Argentina para el ámbito de la producción ovina y las recomendaciones internacionales en la materia. Table Of Contents A list of subunits of the resource. Introducción Objetivo Definición Importancia Normativa Nacional Resolución Senasa N.° 1697/2019 Agua y alimento Sanidad animal Ambiente, instalaciones y equipos Maniobras zootécnicas dolorosas Personal Manejo de los animales y prohibiciones Transporte Resolución Senasa N.° 723/2025 Resolución Senasa N.° 924/2020 Resolución Senasa N.° 329/2017 Corrales Normativa internacional Bienestar animal durante la esquila Contacto Bienestar Animal Ovinos https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/6e08af17ba71abf0bc5ee5b59f5c72a0.pdf c204e9750a69ce188ad0bd0950ae68f4 PDF Text Text BIENESTAR ANIMAL OVINO Estándares de bienestar animal para la cria, la faena y el transporte de ovinos Guía de aplicación Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca Presidencia de la Nación �M.O. Mesa Ovina Nacional ��Editores Juan Mauricio Álvarez EEA Valle Inferior-UIISA Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria Ministerio de Agroindustria de la Nación Universidad Nacional de Río Negro Débora Racciatti Coordinadora de Bienestar Animal Servicio Nacional de Sanidad Animal Punto Focal de la OIE para el Bienestar Animal en Argentina Paula Roselli Dirección de Ovinos, Caprinos y Camélidos Subsecretaría de Ganadería Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca de la Nación Autores Álvarez, Juan Mauricio (INTA Valle Inferior) Vargas, Paola (INTA Santa Cruz) Racciatti, Débora (SENASA) Pena, Sergio (INTA Santa Cruz, Consejo Profesional de Ingeniería Agronómica) Bain, Ingrid (INTA Chubut) Lynch, Gloria (Universidad Nacional de Lomas de Zamora) Odeón, Mercedes (INTA Bariloche) González Ruíz, Eduardo (Cámara de Frigoríficos de la Patagonia) Roselli, Paula (Dirección de Ovinos, Caprinos y Camélidos, Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca de la Nación) Marino, Virginia Analía (Dirección de Ovinos, Caprinos y Camélidos, Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca de la Nación) Ceballos, Demian (INTA Esquel) Villa, Martin (INTA Esquel) Apostolo, Romina María (INTA Esquel) Allona, Milagros (Federación Lanera Argentina) �Índice Estándares de Bienestar Animal en Ovinos TABLA DE CONTENIDOS 09 1. Prefacio Proceso de 15 4.desarrollo 11 2. Propósito La Ganadería 16 5.Argentina Ovina en 13 3. Alcance 22 6. Principios de bienestar animal 6.1. Comportamiento natural y aspectos específicos de los ovinos 24 7. Estándares de Bienestar Animal y guía para alcanzarlos 7.1. Cuidado ético y responsable por parte del personal 7.2. Nutrición 7.3. Manejo del riesgo de eventos climáticos extremos y desastres naturales 7.4. Comportamiento natural 7.5. Exposición al medio ambiente y estrés térmico 7.6. Predación 7.7. Sanidad y prácticas de manejo dolorosas o estresantes 7.8. Manejo reproductivo 7.9. Manejo general, arreo y confinamiento para engorde 7.10. Esquila 7.11. Instalaciones y facilidades para el manejo de los animales 7.12. Ordeñe 7.13. Transporte de los ovinos 7.14. Concentración de ovinos para venta 7.15. Faena de ovinos en el campo 7.16. Faena de los ovinos en mataderos y frigoríficos 36 41 10. Resumen de estándares y medios de verificación para acopiadores 42 11. Resumen de estándares y medios de verificación para transportistas. 44 12. Resumen de estándares y medios de verificación para frigoríficos 8. Bibliografía Resumen de 38 9.estándares y medios de verificación para productores 07 �Prefacio Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 01 09 Prefacio La definición de los Estándares de Bienestar Animal es parte de un proceso de innovación en la cadena de producción ovina. Constituyen una parte central del programa de aseguramiento de la calidad impulsado por el gobierno junto a los productores, transportistas y la industria. Para redactar este documento se realizó una consulta a especialistas de los diferentes eslabones de la cadena, a científicos y a referentes de organizaciones de defensa de derechos de los animales. En consecuencia, los estándares propuestos se basan en el estado actual del conocimiento científico, las prácticas de manejo productivo e industrial recomendadas y las expectativas de la sociedad. Antes de su publicación se realizó una extensa consulta pública en la que se recogieron las sugerencias de productores, industriales y organizaciones de protección animal. La incorporación de estas sugerencias ayudó a mejorar el manuscrito, elevar el nivel de los estándares propuestos y enriquecer las recomendaciones. �Propósito Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 02 11 Propósito El propósito de este documento es brindar los estándares certificables de bienestar animal para la producción ovina en Argentina. El documento incluye a todos los agentes con responsabilidad en el cuidado y manejo de los ovinos. Los estándares y recomendaciones presentadas reflejan el estado del conocimiento actual respecto al bienestar animal, las prácticas ganaderas típicas de Argentina, las expectativas de la sociedad nacional e internacional y los estándares aplicados en otros países. Los estándares son acompañados de una guía que especifica una serie de recomendaciones y requerimientos que deben ser cumplidos, verificados e incorporados en los programas de aseguramiento de la calidad de los agentes comerciales que pretendan acreditar el cumplimiento del bienestar animal. Estos requerimientos aplican a los productores, acopiadores, transportistas y frigoríficos. �Alcance Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 03 Alcance Los estándares y recomendaciones se aplican a todas las empresas productoras de ovinos, desde sistemas extensivos hasta sistemas confinados, a las empresas proveedoras de los servicios de esquila, a los transportistas, acopiadores y comercializadores de hacienda y a los frigoríficos. En consecuencia, son aplicables a todas aquellas personas físicas o jurídicas con responsabilidad en el manejo y cuidado de los ovinos que quieran certificar la aplicación de los Estándares de Bienestar Animal. 13 �Proceso de Desarrollo Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 04 15 Proceso de desarrollo La redacción de este documento fue realizada por un grupo de especialistas de organizaciones gubernamentales como el Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), la Secretaría de Agroindustria, el Servicio Nacional de Sanidad Animal (SENASA), del sector privado representado por la Federación Lanera Argentina, la Cámara de Frigoríficos y las organizaciones de productores. También participan del grupo de redactores especialistas de las principales universidades nacionales que desarrollan líneas de investigación relacionadas con el bienestar animal. Los lineamientos y estándares volcados en este protocolo se basan en los estudios realizados a nivel nacional e internacional, publicados en artículos científicos, así como en la experiencia colectiva de los diferentes eslabones de la cadena de producción ovina. Los principios generales que se utilizaron para definir estos estándares están basados en los siguientes aspectos: • Expresan las expectativas de la sociedad en cuanto al tratamiento de los ovinos. • Consideran que el bienestar de los ovinos se interconecta con el bienestar humano y el ambiente (un único bienestar). • Permiten lograr más producto y de mejor calidad para los consumidores. • Son aplicables por todas las personas y empresas involucradas en el tratamiento de los ovinos desde su nacimiento. Los productores, acopiadores, transportistas, industriales, gobierno y la comunidad en general pueden realizar comentarios y aportes mediante un proceso de consulta pública. Finalmente el resultado es presentado a las autoridades provinciales y nacionales como documento de referencia para generar legislación específica así como para implementar un programa de aseguramiento de calidad. �Ganadería Ovina en Argentina Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 05 17 La Ganadería Ovina en Argentina Argentina presenta una elevada heterogeneidad ecológica, la cual sumada a la transformación antrópica condujo al desarrollo de sistemas de producción muy diferentes. Los ovinos son criados en sistemas extensivos sobre pastizales naturales o pasturas implantadas, el confinamiento generalmente se restringe a 5.1. Patagonia 5.2. Mesopotamia 5.3 Pampa Húmeda 5.4 Otras regiones Figura 1. Ubicación de las regiones productivas. Fuente: Elaboración propia (2019). Figura 2. Distribución del rebaño nacional por regiones. Fuente SENASA (2018). momentos puntuales del ciclo como el engorde de corderos o animales adultos. También existe un grupo menor de emprendimientos de cría en confinamiento que generalmente se orientan a la producción de leche y/o carne. En todos los casos los animales son libres de pastorear y desarrollar su comportamiento normal y la actividad tiene una bajo uso de insumos externos. A continuación se describen las principales regiones de producción del país. �Ganadería Ovina en Argentina Estándares de Bienestar Animal en Ovinos 18 5.1. Patagonia 19 5.2 Mesopotamia Esta región incluye a las provincias y partidos ubicados al sur del Río Colorado (Figura 2), comprendiendo al partido de Patagones de la provincia de Buenos Aires y las provincias de Río Negro, Neuquén, Chubut, Santa Cruz y Tierra del Fuego. La mayoría de su territorio presenta un clima árido y frío. El rango de las precipitaciones es de 150 a 400 milímetros por año y durante el invierno se producen nevadas en la mayor parte de la región. Las isohietas decrecen en sentido oeste-este, los valores mínimos de precipitación se registran en el centro de la región y luego se recuperan en la costa atlántica alcanzando valores de 250 a 400 milímetros anuales. La ganadería ovina es la producción pecuaria de mayor importancia y ha sido motivo de asentamiento poblacional desde el principio del siglo pasado (Correa Falcón y Klappenbach, 1924; Williams, 2004; Álvarez, 2007). La población ovina es de 8,5 millones de animales (SENASA, 2019), los sistemas de producción Ganadería Ovina en Argentina Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Figura 3. Ubicación de la región de la Patagonia. principalmente son extensivos, están orientados a la producción de lana y el recurso forrajero utilizado es el pastizal natural. En áreas de mayor potencial forrajero adquiere importancia la producción de carne. Existen diferencias dentro de la región. En el sur de la Patagonia predominan las grandes empresas, los inviernos son más rigurosos y las nevadas son frecuentes. En el centro y norte, en cambio, existe un equilibro entre pequeños y medianos productores y las nevadas se limitan a la región cordillerana. En el noreste predominan los sistemas mixtos agrícolaganaderos y los ovinos tienen acceso a recursos forrajeros de mayor productividad y generalmente se crían junto con bovinos. Por otro lado, en los márgenes de los principales ríos existen valles irrigados, donde se desarrollan sistemas de producción basados en el uso de pasturas implantadas de alto rendimiento y el engorde en confinamiento durante cortos períodos de tiempo. Las condiciones ambientales de la región imponen una marcada estacionalidad de la producción. La Mesopotamia comprende las Provincias de Misiones, Corrientes y Entre Ríos y es una importante cuenca de producción ovina. Las existencias actuales son de 1,7 millones de animales y la actividad está en expansión (SENASA, 2019). Es una región de clima subtropical con precipitaciones de 1000 a 1600 milímetros anuales. Figura 4. Ubicación de la región de la Mesopotamia. La cría de ovinos se concentra en el centro y sur de la provincia de Corrientes y norte de Entre Ríos, donde los suelos presentan serias limitaciones para la explotación agrícola (Álvarez Mithieux et al., 1992). La explotación se realiza sobre pastizales naturales compuestos por gramíneas de ciclo primavera-veranootoño, bajo una modalidad de pastoreo mixto ovinobovino (Gambetta y Pueyo, 2004). �Ganadería Ovina en Argentina Estándares de Bienestar Animal en Ovinos 20 5.3 Pampa Húmeda Ganadería Ovina en Argentina 5.4 Otras regiones En el resto de las regiones del país (Noroeste, Cuyo y Sierras pampeanas), existen 2,2 millones de ovinos (SENASA, 2019), criados en sistemas mixtos con otros rumiantes menores como cabras y llamas o con bovinos. La mayor parte de los productores son agricultores familiares que producen carne para los mercados locales y fibras para el mercado textil artesanal. Figura 5. Ubicación de la región de la Pampa Húmeda. La Pampa Húmeda comprende las provincias de Buenos Aires, Córdoba, Santa Fe y parte de La Pampa. La región posee una gran variación climática, encontrándose situaciones de clima templado hasta subtropical. El rango de precipitaciones es de 600 a 1200 milímetros por año y los suelos presentan una gran variación en la aptitud de uso. En último censo realizado se registraron 2,6 millones de animales (SENASA, 2019). La actividad ovina se concentra en la provincia de Buenos Aires. Los establecimientos comerciales se ubican en los partidos del sur de la provincia (Álvarez et al., 2013). La cría de ovinos se desarrolla en sistemas mixtos, combinada con la agricultura y/o ganadería bovina. Los principales recursos forrajeros utilizados son el pastizal natural, verdeos, pasturas cultivadas y rastrojos de cereales. Los sistemas están orientados a la producción de corderos y el servicio se realiza en otoño. En esta región también se ubica la mayoría de las explotaciones orientadas a la producción de leche ovina. Figura 6. Ubicación del área que comprende a otras regiones. 21 �Principios de Bienestar Animal Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 06 Principios de bienestar animal El término bienestar animal designa el estado físico y mental de un animal en relación con las condiciones en las vive y muere (OIE, 2018). En consecuencia, las personas encargadas del manejo de los ovinos en cada eslabón de la cadena son responsables del tratamiento ético y del bienestar de los mismos. Para lograr resultados favorables es necesario que adquieran conocimientos, experiencias y habilidades para implementar procedimientos y técnicas de manejo tendientes a garantizar el bienestar de los animales. Los principios de un manejo ético adecuado deben considerar las necesidades sociales, de comportamiento y fisiológicas de los ovinos contemplando los siguientes aspectos: alimento adecuado para mantener una adecuada salud y bienestar, atendiendo a las necesidades fisiológicas. tratamientos sanitarios adecuados, lo cual puede incluir el sacrificio humanitario si fuera necesario. • Deben acceder a una provisión de agua de calidad y en cantidad suficiente para satisfacer sus requerimientos fisiológicos. • Debe minimizarse el riesgo de predación en todas las etapas del ciclo productivo. • Los procedimientos de manejo deben minimizar el riego de lesiones o enfermedades. • Si son confinados deben contar con suficiente espacio para acostarse, pararse, estirar sus extremidades y desarrollar patrones normales de comportamiento. • Los ovinos son animales gregarios que prefieren vivir con otros ovinos formando majadas. • Deben ser manejados en instalaciones y con equipos adecuados que minimicen el estrés. • Necesitan un suministro de • Deben ser provistos de 6.1. Comportamiento natural y aspectos específicos de los ovinos Los ovinos son especies de naturaleza sociable, vista aguda, excelente audición y fuerte tendencia gregaria. Esta última condición debe ser aprovechada para manipularlos y transportarlos. Al separarlos del grupo para inspecciones individuales, los animales se agitan y forcejean para volver a la majada. Conviene evitar toda actividad que pueda asustar, herir o agitar a los animales. Se pueden mostrar hostiles a la introducción de nuevos individuos en el grupo, provocando víctimas, sea por agresiones físicas o porque los animales más débiles son impedidos del acceso al agua y a los alimentos. Las ovejas son • Ante una situación de disminución brusca y repentina de la disponibilidad de forraje deben acceder a fuentes suplementarias de alimento, por lo cual es necesario contar con un plan de contingencia para emergencias climáticas. • Evitar procedimientos que impliquen sufrimiento a menos que sea estrictamente necesario y, en ese caso, extremar las precauciones para que sea lo menos intenso y prolongado posible. 23 Figura 7. Zona de fuga de los ovinos. conscientes de sus alrededores (potreros, vegetación, aguadas, instalaciones, perros, personas y actitudes) y pueden reconocer los rostros de diversos individuos y si estos son amigables o no. A su vez reconocen voces y olores que, junto con las expresiones faciales y corporales del hombre, forman un complejo sistema que debe funcionar lo más adecuadamente para no provocar estrés y resistencia, garantizando un trabajo más eficiente y en menos tiempo. Así mismo, reconocen a sus congéneres y se establecen relaciones grupales, familiares entre hembras, hijas y camada, así como entre otras camadas, que el hombre debe respetar y no tratar de romper. Al igual que en las otras especies, su movimiento se puede generar invadiendo su zona de fuga (Figura 2). Si deseamos que avancen debemos situarnos levemente por detrás del punto de balance pero fuera de la zona ciega. Si queremos que retroceda nos debemos situar levemente por delante del punto de balance. Los grupos de ovinos se movilizan haciendo curvas, comportamiento que se debe considerar al momento de arrear a una majada. �Estándares y Guía Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 07 balance forrajero en base a los recursos disponibles y la carga animal debe establecerse en función de la disponibilidad de alimento y puntos de bebida. Se deberán utilizar métodos validados por el INTA. G7.2.3. Si no se puede proveer de alimento y agua suficiente a los animales se los debe reubicar, trasladarlos a otro campo o venderlos. Estándares de Bienestar Animal y guía para alcanzarlos 7.1. Cuidado ético y responsable por parte del personal Estándar 1: Todas las personas a cargo del cuidado de los ovinos deben conocer sus responsabilidades y ser capaces de desarrollar las acciones requeridas para asegurar el bienestar de los animales bajo su cuidado. Guía: G7.1.1 Las empresas deben contar con un plan de inducción de personal tendiente a internalizar el concepto de bienestar animal y adquirir las herramientas para minimizar los riegos para el bienestar. bienestar animal. Guía: G7.1.2. Los operarios deben conocer la normativa vigente a nivel local y nacional relacionada con el bienestar animal. G7.1.3. Los animales se deben manejar con las facilidades, instalaciones y técnicas que permitan disminuir las situaciones de estrés. 7.2. Nutrición Estándar 2: Los animales deben tener acceso a alimento y agua suficiente en calidad y cantidad para minimizar el riesgo de sufrimiento y alteración del G7.2.1. Los animales deben tener acceso a alimento y agua diariamente, salvo en aquellos casos en que las prácticas de manejo requieran un periodo de ayuno para evitar riesgos relacionados con el bienestar animal. Se consideran prácticas que requieren ayuno el destete, la esquila, la preparación para venta, el transporte, la inseminación y la faena. En ningún caso el ayuno deberá ser mayor a 24 hs. G7.2.2. Se debe realizar un relevamiento de pastizales y un chequeo anual o un G7.2.4. Se debe monitorear regularmente el estatus nutricional de los animales mediante la condición corporal. Al menos deben realizarse dos registros anuales, uno antes del servicio y otro antes de la parición. En este caso puede coincidir con la esquila. Aquellos animales que presenten una condición corporal menor a 2,5 antes del servicio y/o parto deberán recibir un tratamiento nutricional diferencial tendiente a asegurar condiciones adecuadas para la gestación disminuir el riesgo de mortalidad corderos al parto o inmediatamente después. G7.2.5. El servicio debe planificarse de manera tal que el pico de los requerimientos de la majada coincida con la época de mayor oferta. En caso contrario deberá procurarse que la asignación de forraje por animal sea lo suficiente para cubrir los requerimientos, debiéndose recurrir a la suplementación si fuera necesario. G.7.2.6 Durante la suplementación deben cumplirse los requerimientos de espacio de comederos y bebederos establecidos en el punto 7.9.18 de la presente guía, además deben estar en condiciones adecuadas de mantenimiento, para evitar competencia, pisoteos, lesiones. G7.2.7. Las transiciones a nuevas dietas deben ser acompañadas de un periodo de acostumbramiento tal que permita una adecuada adaptación, previniendo la ocurrencia de trastornos digestivos. 7.3. Manejo del riesgo de eventos climáticos extremos y desastres naturales Estándar 3: Las personas encargadas del manejo de los ovinos deben realizar las acciones necesarias para mitigar el efecto negativo de sequías, inundaciones, calor extremo, nevadas, incendios, inundaciones o erupciones volcánicas, asegurando condiciones razonables de bienestar. Guía: G7.3.1. Los establecimientos deben utilizar un sistema de alerta temprana como elemento de soporte de decisiones de manejo. G7.3.2. Los establecimientos deben contar con un monitoreo periódico de la disponibilidad de forraje y agua considerando los requerimientos según la edad y estado fisiológico y productivo de la majada. G7.3.3. Además deben contar con un plan de contingencia para eventos climáticos extremos que incluya los siguientes ítems: • Definición de eventos climáticos extremos más 25 probables. • Umbrales de efectos u ocurrencia a partir de los cuales se desencadenan acciones de contingencia (ej.: intensidad de la nevada, disminución de las precipitaciones, etc.). • Lista de contactos de emergencia. • Acciones de contingencia para cada evento climático (sequía, inundaciones, golpes de calor) que permitan proveer la cantidad y calidad de forraje y agua que las distintas categorías de ovinos necesiten de acuerdo a sus requerimientos. • Acciones de contingencia para desastres naturales (incendios, erupciones volcánicas). 7.4. Comportamiento natural Estándar 4: Las personas a cargo del manejo de los animales deben proveer el espacio y las facilidades para puedan desarrollar su comportamiento natural. Guía: G7.4.1. Los animales deben contar con suficiente espacio y oportunidades para desarrollar su comportamiento natural, caminar, descansar, rumiar y alimentarse con otros animales dentro de un grupo social. G7.4.2. Los animales deben mantenerse en grupos sociales razonablemente estables. G7.4.3. Los animales no deben alojarse en corrales �Estándares y Guía Estándares de Bienestar Animal en Ovinos individuales a menos que sea necesario por razones sanitarias. De ser posible deben tener contacto visual con otros individuos. 7.5. Exposición al medio ambiente y estrés térmico Estándar 5: Los animales deben tener, en la medida de lo posible y dependiendo del sistema de explotación, el resguardo suficiente para lograr minimizar las situaciones de estrés térmico. Guía: G7.5.1. Las ovejas preñadas deben tener la oportunidad de aislarse del resto para parir y de acceder a los lugares de menor exposición a clima extremo o contar con reparos provistos por la vegetación natural (arbustos, árboles) o reparos artificiales (refugios, cobertizos). G7.5.2. En lugares o meses de altas temperaturas deben tener acceso a sombra provistos por vegetación natural (arbustos, árboles) o reparos artificiales (refugios, cobertizos). 7.6. Predación Estándar 6: Todos los ovinos deben ser protegidos de los predadores. Los productores responsables del cuidado animal deben estar al tanto de los riesgos existentes y tomar las medidas necesarias para prevenir lesiones o la muerte. Guía: G7.6.1. En casos de riesgo se debe implementar un control de predación utilizando una combinación de las mejores prácticas disponibles. G7.6.2 Como opciones de manejo se recomienda: a)Uso de perros pastores correctamente adiestrados para tal fin. b)Uso de luces y sonidos antipredadores. c)Disponer a las madres y sus corderos en los potreros con menor probabilidad de presencia de predadores. d)Recorrer frecuentemente los cuadros y levantar los animales muertos. G7.6.3 No está permitido el uso de venenos para el control de predadores. 7.7. Sanidad y prácticas de manejo dolorosas o estresantes Estándar 7: El personal a cargo del manejo de los animales debe asegurarse de prevenir la ocurrencia de enfermedades y lesiones, brindar atención veterinaria y tratamiento sanitario adecuado en caso de enfermedad y minimizar el sufrimiento debido a prácticas de manejo. La ganadería ovina argentina es libre de la operación de mules por lo cual no se presentan lineamientos al respecto. Guía: G7.7.1. Los establecimientos deben contar con un plan sanitario firmado por un profesional competente que incluya las vacunaciones contra las principales enfermedades que afectan a los ovinos, así como las 26 medidas preventivas y terapéuticas más adecuadas. Los tratamientos realizados se deben registrar en un libro de Registro de Tratamientos. G7.7.2. Se debe realizar un monitoreo periódico del estado de salud general de los animales mediante la observación de la majada e inspección individual durante las prácticas de manejo. Ante la detección de síntomas que indiquen algún tipo de padecimiento en los animales, se deberá contactar al veterinario. La sospecha o presencia de Sarna, Melofagosis, Pediculosis Ovina u otra de las enfermedades de notificación obligatoria debe ser denunciada ante el SENASA, como lo establecen las Resoluciones N° 445/1995, 42/2002 y 369-E/2017 y 422/03: G7.7.3. Los establecimientos deberán contar con un registro de mortandad para evaluar la toma de decisiones y en caso de ser necesario para resolver el problema. G7.7.4. Los establecimientos ovinos productores de leche deben ser libre de brucelosis (Resolución SENASA 545/15) y tuberculosis (Resolución SENASA 128/12). G7.7.5. Los tratamientos sanitarios como vacunaciones o desparasitaciones deben ser realizados por personal entrenado para evitar lesiones. Estándares y Guía Estándares de Bienestar Animal en Ovinos G7.7.6. Si no es posible la recuperación de los animales, aun habiendo sido tratados, se debe practicar la eutanasia humanitaria, sin demora, evitando el sufrimiento prolongado. El sacrificio debe realizarse luego de la pérdida de conocimiento. Las personas responsables del cuidado de los animales deben ser capaces de reconocer cuando se requiera la eutanasia de un animal y proceder en consecuencia. G7.7.7. Deben respetarse los tiempos de carencia de cada droga utilizada en los animales antes de la faena u ordeñe. G7.7.8. Las ovejas en ordeñe (tambo) que estén bajo tratamiento con drogas y requieran abstinencia de leche deben continuar ordeñándose regularmente y en forma separada de la majada. G7.7.9. Se debe realizar periódicamente el Test de California u otro similar para detectar tempranamente lesiones e infecciones mamarias, ayudar al tratamiento e impedir el contagio. G7.7.10. El descole y la castración se deben aplicar para beneficiar el bienestar a largo plazo de los animales, evitando la formación de miasis y las preñeces fuera de término. Estas prácticas deben realizarse luego de que se ha generado el vínculo con la madre (48 hs) y antes de las 12 semanas de vida. Durante estas prácticas deben garantizarse condiciones de higiene y desinfección para minimizar el riesgo de infecciones. G7.7.11. Los machos destinados a faena antes de las 12 semanas o de la pubertad no deben ser castrados. G7.7.12. Deben aplicarse antibióticos y/o antiparasitarios para evitar la ocurrencia de enfermedades infecciosas y parasitarias secundarias. G7.7.13. Los animales deben ser tratados únicamente con productos veterinarios aprobados por la autoridad competente, respetando la dosis, los intervalos y la duración del tratamiento según el criterio del veterinario actuante. G7.7.14. El descole debe realizarse por personal entrenado, utilizando preferentemente una pinza cauterizante o anillo de goma para evitar el sangrado. Debe realizarse entre las articulaciones a partir de la tercera articulación palpable. G7.7.15. La cola remanente debe tener un largo suficiente para cubrir la vulva en las hembras y una longitud equivalente en los machos. G7.7.16. Se debe utilizar el método de castración menos doloroso aplicable al sistema de producción, preferentemente anillo de goma. G7.7.17. La castración de animales adultos debe ser realizada por un profesional competente incluyendo el uso de drogas para aliviar el dolor. G7.7.18. De ser necesario debe realizarse el descorne para aliviar futuras lesiones. En caso de realizarse debe ser efectuado por personal entrenado. G7.7.19. La señalada, identificación mediante caravanas o tatuajes debe ser 27 realizada por personal entrenado minimizando el riesgo de infecciones. G7.7.20. En los establecimientos orientados a la producción de lana y/o carne el destete de los corderos deber realizarse a una edad aproximada de 100 días en condiciones normales pero puede anticiparse en situaciones de restricciones nutricionales provocadas por sequías u otro tipo de eventos. G7.7.21. En los establecimientos orientados a la producción de leche se recomienda el destete a los 30 días y el manejo de los corderos con el sistema media leche, en el cual las ovejas permanecen 12 horas por día con sus corderos y son apartadas 12 horas antes del ordeño. G7.7.22. En sistemas de manejo más intensivos se puede retirar a los corderos de sus madres después del consumo de calostro y se pueden criar con sustituto lácteo en corrales colectivos. G7.7.23. Aquellos productores inscriptos como proveedores de ovinos para faena con destino a la Unión Europea deben identificar a todos los animales con caravanas como lo establecen las Resoluciones Nº 1280/2008 y 876/2006 del SENASA 7.8. Manejo reproductivo Estándar 8: Los animales deben tener la �Estándares y Guía Estándares de Bienestar Animal en Ovinos oportunidad de desarrollar su comportamiento reproductivo natural. Las prácticas reproductivas artificiales deben ser realizadas por personal competente, minimizando los riesgos para el bienestar animal. Guía: G7.8.1 El personal a cargo del manejo de los animales debe tener conocimientos acerca de la reproducción y comportamiento de ovejas y carneros. G7.8.2 La época y duración del servicio deber ser tal que asegure una adecuada provisión de alimento durante el final de la gestación y la lactancia. G7.8.3. Los carneros y ovejas deben ser revisados antes del servicio separando aquellos animales con lesiones o en un estado corporal tal que no aseguren un adecuado desempeño reproductivo. G7.8.4. Los animales deben manifestar su comportamiento reproductivo natural sin privación de realizar prácticas reproductivas artificiales, extracción de semen, inseminación artificial o transferencia de embriones. G7.8.5. Las prácticas reproductivas artificiales deben ser realizadas por profesionales competentes y en condiciones de higiene y seguridad adecuadas. G7.8.6. La extracción de semen debe realizarse con vagina artificial, la extracción con electroeyaculador está prohibida. G7.8.7. La inseminación laparoscópica y transferencia embrionaria deben realizarse utilizando anestesia y drogas para prevenir infecciones y aliviar el dolor posterior, bajo prescripción veterinaria. G7.8.8. Las ovejas deben ser monitoreadas durante la parición sin generar disturbios. G7.8.9. En caso de observar problemas durante el parto (distocia) o lesiones (prolapso de útero) el personal a cargo de los animales debe asistirlos utilizando técnicas adecuadas o acudir a un veterinario en caso de ser necesario. Si no es posible la recuperación de los animales luego de la intervención humana se debe practicar la eutanasia humanitaria. 7.9. Manejo general, arreo y confinamiento para engorde Estándar 9: Los animales deben ser manejados por un número suficiente de personas competentes de manera tal que se minimicen los riesgos de sufrimiento, lesiones o enfermedades. La violencia y el maltrato están complemente prohibidos. Guía: G7.9.1. El personal debe tener la pericia y el entrenamiento necesarios para mantener el bienestar animal durante todo el proceso productivo. Deben tener conocimientos acerca de las necesidades y el comportamiento normal de los ovinos incluyendo conceptos específicos como la zona de fuga y puntos de balance. G7.9.2. El personal debe trabajar en condiciones dignas, contar con las herramientas adecuadas 28 y bien mantenidas para realizar todas las prácticas de manejo. Además debe tener conocimiento acerca de las políticas del establecimiento respecto al bienestar animal. G7.9.3. Las prácticas de manejo deben realizarse de forma lenta y tranquila, con tono de voz baja y suave evitando el riesgo de dolor, lesiones o angustia. El maltrato de los animales es inaceptable. G7.9.4 .Se deben evitar situaciones de pánico o estrés innecesario. G7.9.5. Se debe aprovechar el carácter gregario de los ovinos para la junta y el arreo. G7.9.6. La velocidad del arreo estará definida por aquella que imponga el animal más lento del grupo, especialmente corderos, ovejas preñadas o animales más vulnerables. Se debe permitir la marcha más lenta durante el arreo de aquellos animales que presenten agitación excesiva. G7.9.7. Los animales deben permanecer el mínimo tiempo posible en los corrales de manejo y se recomienda que tengan acceso libre a comida y bebida inmediatamente después de ser manipulados. G7.9.8. De ser necesario el aislamiento de un animal, este debe ser durante el menor tiempo posible y permitir el contacto visual con otros ovinos para evitar estrés, excepto en el caso de cuarentenas. G7.9.9. Los animales no deben pasar más de 24 horas sin comer. G7.9.10. Se debe prevenir el ahogo o sofoco por amontonamiento, prestando especial atención a los corderos. G7.9.11. Luego de que los animales entren al corral, deben descansar un tiempo de manera que no sientan miedo y no ocurra agitación en la manipulación. G7.9.12. Para facilitar el desplazamiento de los animales se puede recurrir al uso de inductores visuales, como por ejemplo, banderas o bolsas. Estos elementos deben ser de materiales que no contaminen la lana. No se debe inducir el desplazamiento mediante sonidos como por ejemplo silbatos, gritos o golpes. G7.9.13. El uso de perros queda restringido a animales entrenados, que deben estar bajo la supervisión permanente. Se prohíbe el uso de perros que muerdan a los animales. G7.9.14. No se debe arrastrar a los ovinos por los cuernos, las patas, el vellón, la cabeza, las orejas, la cola, de ninguna manera, ni dejarlos caídos. G7.9.15. En caso de ser necesario el agarre de un animal individual , se deberá sujetar un brazo por debajo o alrededor del cuello para dirigir el movimiento y el otro por detrás, rodeando la parte posterior del animal para empujarlo por detrás G7.9.16. Es inaceptable golpear, patear, dejar caer o tirar a los animales. Se deberá tener especial cuidado con corderos, ovejas preñadas, animales enfermos o lesionados. Estos últimos no deben ser juntados y 29 Estándares y Guía Estándares de Bienestar Animal en Ovinos arreados, en caso de ser necesario deberán transportarse usando carros, lonas o vehículos preparados para el transporte. G7.9.17. El maneado solo deberá ser utilizado si es estrictamente necesario para evitar que los animales se lesionen y deberá practicarse por un tiempo mínimo. acceso diario a agua y alimento de calidad evitando la competencia entre individuos. Deben respetarse las especificaciones siguientes: Comederos: Categoría Frente (cm) Acceso doble Acceso simple G.9.18. Se deben evitar las juntas o arreos en condiciones de extremo calor. Cordero 15 30 Oveja con cría 25 50 G7.9.19. Se prohíbe el uso de picanas para el arreo. Oveja sin cría 20 40 Capón 20 40 Carnero 25 50 G7.9.20. El ovino debe tener suficiente espacio en los corrales para alejarse de los operarios u otros animales. G7.9.21. En el caso de que los animales sean confinados para engorde, se debe cumplir con lo establecido en la Resolución Senasa Nº 329/2017. Además, se debe considerar la capacidad de los corrales no superando los 500 animales por corral y se debe respetar la superficie mínima para cada categoría detallada a continuación: Categoría Sup. mín. (m2) Cordero 4,00 Oveja con cría 8,00 Oveja sin cría 5,00 Capón 5,00 Carnero 6,66 Cuadro 1: Superficie mínima que se debe respetar por categoría G7.9.22. Durante el confinamiento para engorde los animales deben tener Cuadro 2: Especificaciones de los comederos que deben respetarse al momento del confinamiento. Bebederos: Se debe respetar un frente de 30 cm más 1,5 cm por animal confinado, a una altura de 40 cm, asegurar una disponibilidad de 4 litros/cordero/día y 7 litros/adulto/día incrementándola un 50 % en los meses de verano. G7.9.23. Los animales confinados durante el engorde deben tener libre acceso a reparos y sombra para protegerlos del clima extremo. G7.9.24. Los bebederos y comederos deben limpiarse periódicamente eliminando el excedente de alimento no consumido, mojado o contaminado. G7.9.25. Los animales que presenten síntomas de subnutrición, enfermedad o �Estándares y Guía Estándares de Bienestar Animal en Ovinos lesiones durante el confinamiento deben ser aislados y tratados apropiadamente. Cuando su recuperación no sea posible deben ser sacrificados humanitariamente. G7.10.5. En esquilas preparto realizadas en épocas de bajas temperaturas y áreas con escaso reparo, se debe utilizar el peine de nieve o la tijera dejando un remanente de 1 cm de lana. G7.9.26. Todo personal externo que se encuentre trabajando en el establecimiento debe conocer las pautas de bienestar animal que se cumplen en el mismo. G7.10.6. Las esquilas postparto deben realizarse 3 meses luego la parición para disminuir el riego de pérdida de corderos por “aguachamiento”. 7.10. Esquila G7.10.7. El personal a cargo del manejo de los animales debe monitorear el pronóstico del tiempo y no se debe realizar la esquila si existe riesgo de temporal, a menos que pueda garantizarse refugio y alimento adicional para el ganado. Estándar 10: Los animales deben ser esquilados al menos una vez al año previo a la época de verano utilizando el protocolo PROLANA. Están exentos del cumplimiento de este estándar las explotaciones que utilizan razas desprovistas de lana. Guía: G7.10.8. Los animales que sufran lesiones durante la esquila deben ser tratados inmediatamente, con alivio del dolor en lesiones severas y si no pueden recuperarse deben ser sacrificados humanitariamente. G7.10.1. Los animales deben ser esquilados al menos una vez al año por personal entrenado y habilitado para la tarea. G7.10.9. Los animales deben tener acceso a agua y alimento lo antes posible luego de la esquila. G7.10.2. Se debe realizar la esquila desmaneada utilizando métodos como Bowen, Tally Hi, o New Pattern, ya que éstos contribuyen la comodidad del animal así como a la del esquilador, permitiendo obtener el vellón entero y evitando además dobles cortes. G.10.10. Los contratistas de esquila deberán desinfectar el equipamiento entre establecimientos para evitar o disminuir riesgo de propagación de enfermedades. G7.10.3. Los animales podrán ser encerrados la noche previa reservando el equivalente al primer turno de esquila bajo techo. G7.10.4. Las esquilas preparto deben realizarse con 20 a 30 días de anticipación a la fecha probable de inicio de partos. 7.11. Instalaciones y facilidades para el manejo de los animales Estándar 11: Los establecimientos deben contar con instalaciones y facilidades diseñadas para un manejo adecuado, sin riesgo para el bienestar animal. Guía: G7.11.1. El diseño y construcción 30 de los corrales debe considerar el comportamiento de los ovinos y debe tener en cuenta la topografía para favorecer un adecuado drenaje. El tamaño de corrales debe tener en cuenta el tamaño de la majada y el porcentaje que se debe alojar durante las prácticas de manejo. situaciones de pastoreo. G7.11.2. Los alambrados y cercos no deben tener elementos cortantes o salientes que generen riesgo de lesiones. Estándar 12: En ovinos lecheros la práctica de ordeñe se debe realizar respetando una rutina horaria, por personal entrenado y en instalaciones adecuadas, evitando accidentes y cuidando la higiene. El manejo de los animales debe realizarse de forma lenta y tranquila, sin golpes y con tono de voz baja y suave. G7.11.3. Las mangas y corrales no deben contener alambre de púas u otro elemento cortante. G7.11.4. El piso de los corrales debe ser de tierra o de un material antideslizante, y permitir el drenaje. G7.11.5. Los establecimientos deben contar con mangas y corrales para el aparte de los animales. La manga debe ser de madera o caño, no pudiendo utilizarse mangas de alambre. G7.11.6. De utilizarse alambrados eléctricos o cercos virtuales los animales deben ser entrenados previamente para disminuir la exposición a estímulos aversivos. G7.11.7. El galpón de esquila debe tener bretes de espera y piso antideslizante. G7.11.8. Los bebederos deben estar distribuidos de manera tal que permitan un libre acceso a los mismos en Estándares y Guía Estándares de Bienestar Animal en Ovinos G7.11.9. El embarcadero debe presentar una rampa de ascenso cuya pendiente que no supere el 30 % y la posibilidad de modificar la altura de la misma, para acoplarla a vehículo de transporte. 7.12. Ordeñe G7.12.1. El personal encargado del ordeñe de los animales debe conocer los aspectos relacionados con el tratamiento ético de los ovinos y contar con entrenamiento específico para aplicar normas de bienestar animal. G.12.2. La sala de ordeñe debe ser usada exclusivamente para tal fin, con paredes y pisos de fácil limpieza para evitar la acumulación de contaminantes. Debe estar bien iluminada sobre todo en la zona de trabajo sobre la ubre y ventilada para brindar comodidad y salud tanto al operador como a las ovejas. G7.12.3. El sector de ordeñe y el corral de espera deben contar con un suministro de agua limpia, reparo de las inclemencias, sombra y tener un drenaje adecuado. G7.12.4. Los pisos de la sala de ordeñe deben ser antideslizantes para evitar que los animales se resbalen y a la vez deben facilitar la limpieza. Las calles de acceso a las salas de espera y/o ordeñe deben estar firmes y libres de barro. G7.12.5. La máquina de ordeñe debe estar lo suficientemente insonorizada, correctamente dimensionada y calibrada para la especie, debe tener un cronograma de mantenimiento y debe ser revisada periódicamente su buen funcionamiento, libre de roturas en especial elementos de gomas, plásticos, siliconas y mangueras y correcta limpieza. G.7.12.6. El nivel de vacío según el tipo de ordeñadora deberá oscilar entre 28 y 36 Kpa. Una vez establecido el nivel de vacío este deberá permanecer constante con la menor cantidad de fluctuaciones y la máquina deberá contar con un vacuómetro a la vista para verificar el correcto funcionamiento. G.7.12.7. Las pulsaciones se deben ajustar a en 120 ppm (pulsaciones por minuto). Teniendo en cuenta las razas que se utilizan en Argentina, el tiempo de ordeñe y masaje, puede variar entre 50-50 o 4060. G.7.12.8. el ordeño debe ser lo suficientemente frecuente como para garantizar que las ovejas no se queden sin alivio.. El ordeño debe realizarse al menos una vez al día. G7.12.9. Previo al ordeñe y de ser necesario, se deben limpiar los pezones y la zona de inserción en la ubre, en caso de tener que mojarlos se deberán secar con elementos limpios, es recomendable eliminar la leche 31 contenida en la cisterna del pezón ayudando a bajar la carga bacteriana de la leche y maniobra que permite evaluar posibles anomalías de la leche. G.7.12.10. Si bien no hay un tiempo establecido, el mismo debe estar en función de cada animal evitando sobre ordeño o sub ordeño; es recomendable la apertura de vacío lo más próximo a los pezones y es fundamental el cierre de vacío antes del retiro de pezonera. G7.12.11. En los tambos en que la rutina incluye la estimulación, el vuelco debe hacerse evitando golpes, apretones y tirones. G7.12.12. Es recomendable la aplicación de sella pezón para evitar infecciones. 7.13. Transporte de los ovinos Estándar 13: El transporte de los ovinos debe realizarse en vehículos habilitados, diseñados específicamente para el trasporte de ganado, conducido por personal entrenado y garantizando el bienestar de los animales. Guía: G7.13.1. El transporte de animales debe hacer siguiendo la normativa establecida por el SENASA en la Resolución Nº 581/2014 G7.13.2. Los vehículos para transporte debe estar diseñados para tal fin �respetando las siguientes especificaciones: a)El piso debe ser metálico o de otro material, resistente, lavable e impermeable, que resulte antideslizante para los animales, sin cuadrícula o nervaduras pero con rugosidad suficiente. b)El frente debe ser cerrado hasta 20 cm antes del techo de la jaula y los laterales cerrados desde el piso hasta una altura de 120 cm (+/- 20 cm) para unidades de un piso y 80 cm (+/- 10 cm) en los doble piso. Por encima debe tener aberturas longitudinales continuas de ventilación en cada lado, o con perforaciones laterales circulares de un diámetro de al menos 7 cm (+/- 1 cm) y con 6 - 7 perforaciones por metro lineal a partir de una altura del piso de 40 cm (+/- 10 cm). c)La parte posterior debe tener el mismo diseño que los laterales pero sin perforaciones de ventilación en los primeros 120 cm. d)Las puertas deben tener un ancho mínimo 90 cm, y si es “puerta rampa” de una altura mínima de 160 cm, piso antideslizante y un ángulo de operación menor a los 30°. En todos los casos deben instalarse rodillos giratorios internos y externos de diámetro no menor a 6 cm desde los 20 cm del suelo hasta los 120 cm de altura. Están permitidas las puertas laterales. e)Las separaciones internas, en caso de ser adoptadas, deben proveer una separación completa entre espacios. f)El techo debe tener un enrejado que permita la inspección superior y cuente con la/s pasarela/s según sea una única central o una a cada lado. Su altura debe considerar por lo 32 Estándares y Guía Estándares de Bienestar Animal en Ovinos menos 20 cm por encima de la cabeza de un ovino adulto parado en su posición natural. Además debe contar con cobertor para proteger la condición ambiental de transporte de los animales en caso de ser necesario. g)En caso de vehículos de 2 pisos, los mismos no deben tener conexión entre los pisos, y su diseño debe impedir que caigan deyecciones sobre los animales de los pisos inferiores. G7.13.3. El trasporte debe ser realizado por personal entrenado con conocimientos del comportamiento natural de los ovinos y de bienestar animal. G7.13.4. Los animales que van a ser transportados deben ser agrupados 4 a 6 horas antes de la carga respetando su característica gregaria. G7.13.5. No deben trasladarse animales que presenten lesiones o enfermedad, excesiva agitación, en un estado corporal pobre y que no puedan sostenerse en pie de manera prolongada o tengan impedimentos para desplazarse, hembras con preñez avanzada o parto inminente y animales que hayan recibido un tratamiento de ectoparásitos mediante baño en las 24 hs previas. G7.13.6. Durante la espera los animales deben recibir sólo agua respetando un tiempo de ayuno mínimo de 12 hs y máximo de 24 hs cuando el destino final es la faena. Si la duración del viaje hasta el destino final supera las 24 hs, deberán realizarse paradas intermedias para que los animales coman y beban. G7.13.7. Deberá respetarse la siguiente superficie por animal de acuerdo al peso y si están esquilados o tienen lana: Peso medio (kg) Sin lana Con lana densa 27 0,20 0,21 36 0,23 0,24 45 0,26 0,27 54 0,30 0,31 Sup. (m2/animal) Cuadro 3: Superficie por animal de acuerdo al peso y lana. G7.13.8. El transporte deberá contar con divisiones para facilitar el traslado de los animales y separar individuos de diferentes categorías. Se deben separar los animales astados de los mochos, los corderos de los adultos y los animales con estados corporales marcadamente diferente. es posible su recuperación. 7.14. Concentración de ovinos para venta Estándar 14: Durante el encierre y acopio de ovinos para venta, los animales serán alojados respetando los criterios de densidad específicos, tendrán acceso a agua y alimento permanente y serán manejados por personal entrenado, minimizando el estrés. G7.14.6. Durante el evento de comercialización los animales deben ser manejados con calma, por personal entrenado y, en el caso de utilizar perros, éstos deben estar entrenados específicamente para el manejo del ganado. otros animales. G7.15.2. Los animales deben ser insensibilizados previamente. Se puede utilizar armas de fuego para insensibilizar o sacrificar al animal si no existiera otro método disponible. El operador debe estar debidamente entrenado, habilitado y tener competencia para utilizar el arma con garantías de seguridad propia y para terceros. G7.14.7. Se debe monitorear permanentemente los corrales de alojamiento, identificando animales que presenten lesiones o síntomas de enfermedad. Estos animales deben ser aislados y recibir tratamiento adecuado o ser sacrificados humanitariamente cuando su recuperación no sea posible. G.7.15.3 La muerte debe ser confirmada por observación de la pupila, latidos y respiración antes de continuar la faena. Guía: G7.14.1. El establecimiento concentrador debe estar habilitado para tal fin y contar con instalaciones adecuadas para la descarga, alojamiento y carga de los animales. G7.13.9. Si el trasporte se efectúa en condiciones extremas de temperatura o lluvia deberán utilizarse cobertores para proteger al ganado. G7.14.2. El manejo de los animales debe ser realizado por personal entrenado con conocimiento del comportamiento de los ovinos y de bienestar animal. G7.13.10. La descarga deberá realizarse con luz natural o artificial para facilitar el descenso de los animales. La rampa de descenso no podrá tener una inclinación superior a los 30º° y la velocidad de descenso debe ser igual al ritmo de marcha normal de los animales. G7.14.3. Se debe garantizar el alojamiento de animales aptos respetando la densidad recomendada para cada categoría. G7.13.11. Durante la descarga debe observarse el estado y comportamiento de los animales apartando aquellos individuos que presenten lesiones, para su tratamiento adecuado o eutanasia humanitaria si no G7.14.5. Los corrales de alojamiento deben respetar los siguientes espacios de acuerdo al peso, categoría y si están esquilados o no (Cuadro 4). G7.14.4. Los animales deben tener libre acceso a agua y alimento diariamente. Se deberá contar con reservas de agua y alimento. 7.15. Faena de ovinos en el campo 7.16. Faena de los ovinos en mataderos y frigoríficos Estándar 15: Los animales faenados para consumo en el establecimiento deberán ser insensibilizados y luego sacrificados garantizando el menor sufrimiento posible. Categoría Oveja con cría Oveja sin cría Cordero Carnero Debe proveerse además reparo o sombra. 33 Estándares y Guía Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Peso (kg) Estándar 16: Los animales deben ser manejados garantizando su Espacio (m2/animal) Con lana Sin lana 45-60 1,10-1,20 0,95-1,00 60-90 1,20-1,40 1,10-1,20 45-60 1,30-1,70 1,20-1,45 60-90 1,40-1,80 1,20-1,50 20-30 0,70 0,60 30-40 0,80 0,70 40-50 1,00 0,85 65-90 1,90-2,80 1,60-2,40 90-135 2,80-3,00 2,40-2,55 Cuadro 4: Espacios de los corrales de acuerdo al peso, categoría y si están esquilados o no. Guía: G7.15.1. Los ovinos faenados en el establecimiento deben sacrificarse fuera de la vista de bienestar durante la descarga y espera hasta la faena. Deberán ser insensibilizados antes �Estándares y Guía Estándares de Bienestar Animal en Ovinos del sacrificio garantizando el menor sufrimiento posible. El procedimiento de faena debe realizarse de acuerdo a lo establecido en la Ley Nacional 18819-1970, el Reglamento de Inspección de Productos, Subproductos y Derivados de Origen Animal, aprobado por el Decreto N° 4.238 y la Resolución SENASA 46/2014. Guía: G7.16.1. El frigorífico debe contar con instalaciones apropiadas para la descarga y espera de los animales. G7.16.2. El manejo de los animales debe ser realizado por personal competente con conocimientos específicos del comportamiento de los ovinos y de bienestar animal. G7.16.3. Los corrales de espera deben respetar los espacios especificados en el punto G7.14.5. G7.16.4. Los animales deberán permanecer en los corrales de espera por un tiempo mínimo de 6 hs y un máximo de 24 hs. Los corrales deben tener una superficie techada que permita a los animales refugiarse de la lluvia y del sol. G7.16.5. Los animales deben ser trasladados con calma hasta el sector de prefaena donde serán sujetados e inmovilizados para su insensibilización. G7.16.6. Se acepta la insensibilización mediante electronarcosis. G7.16.7. La insensibilización mediante electronarcosis debe realizarse con la corriente regulada en 1,0 amp para adultos y 0,7 amp para corderos, en ambos casos por un tiempo mínimo de 3 segundos. La adecuada insensibilización se evidencia porque el animal no intenta levantarse o levantar la cabeza, no parpadea (de manera espontánea o al tocarle los ojos), no presenta respuesta al pellizcar o pinchar el hocico o la oreja, no respira, no hace ruido, los músculos están rígidos o extendidos, con las patas contrayéndose o pateando. G7.16.8. El tiempo transcurrido entre insensibilización y faena no debe ser superior a 30 segundos. G7.16.9. Una vez insensibilizado el animal, se debe colgar por un miembro posterior e introducir el cuchillo en la base del cuello para cortar grandes vasos y corazón, a efectos de producir un sangrado rápido. G7.16.10. El personal debe tener conocimientos para reconocer los signos de recuperación de conciencia en los animales, en cuyo caso deberán repetir la insensibilización. G7.16.11. No se debe pasar a la siguiente etapa de la faena, sin haber completado el sangrado, tomando como plazo mínimo de referencia los treinta (30) segundos y un promedio de un (1) minuto para la sangría. Siempre se debe comprobar la inconsciencia antes de continuar la rutina de faena. G7.16.12. Para el caso particular del ritual religioso de faena Kosher, el degüello debe efectuarse inmediatamente después de la sujeción cómoda y suave de la cabeza y cuerpo mediante un cajón de inmovilización, minimizando la generación de estrés en el animal. 34 G7.16.13. En el caso del ritual de faena Halal el degüello se realizará luego de la insensibilización. �Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 08 Bibliografía 37 Bibliografía • Álvarez, J.M. 2007. Introducción de razas ovinas de carne en los sistemas extensivos del noreste de la Patagonia. Tesis Doctoral, 220 pp. Universidad Politécnica de Valencia. • Álvarez, J.M., Rodríguez Iglesias, R.M., García Vinent, J.C., Giorgetti, H., Rodríguez, G. and M. Baselga. 2013. Introduction of sheep meat breeds in extensive systems of Patagonia: Lamb carcass characteristics and survival. Small Ruminant Research. 109: 9 -14. ISSN: 0921-4488. • Álvarez Mithieux, M. C., Gambetta, R., Ordenavía, R. A., Pueyo, J. M. y Volpato, L. A. 1992. Producción ovina en la Mesopotamia argentina. En: Müeller, J y Späth, E. J. A. (Ed). Congreso Mundial de Ovinos y Lanas. Asociación Argentina de Producción Animal. 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Año 4(7): 22 – 26. �Resumenes Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 09 39 Resumen de estándares y medios de verificación para productores ESTÁNDAR Medios de verificación Descripción Código Plan de capacitación del Todas las personas a cargo del cuidado de los ovinos deben conocer sus responsabilidades y ser capaces de desarrollar las acciones requeridas para asegurar el E1 personal y certificados de aprobación. Certificados de bienestar de los animales bajo su cuidado. capacitación del personal. Los animales tienen que tener acceso a alimento y agua Evaluación de pastizales, chequeo anual o planificación forrajera realizada por un profesional competente. suficiente en calidad y cantidad para minimizar el E2 riesgo de sufrimiento y alteración del bienestar animal. Registro de existencias en la base de SENASA. Los animales deben ser manejados para minimizar el Plan de contingencia realizado impacto negativo de eventos climáticos extremos y desastres naturales como sequías, inundaciones, calor E3 por un profesional competente. extremo, nevadas, incendios, inundaciones o erupciones Indicador: Reservas de alimento volcánicas. planificadas. Los animales deben ser capaces de desarrollar su comportamiento natural. E4 Auditoría predial de bienestar animal Los animales deben tener, en la medida de lo posible y dependiendo del sistema de explotación, el resguardo suficiente para lograr minimizar las situaciones de estrés E5 Auditoría predial de bienestar animal térmico. En aquellos casos en los que exista riego de predación se debe implementar un plan para minimizar el riesgo. Auditoría predial de bienestar E6 Plan sanitario firmado por un profesional competente El personal a cargo del manejo de los animales debe asegurarse de prevenir la ocurrencia de enfermedades y lesiones, que reciban tratamiento sanitario adecuado en caso de enfermedad y minimizar el sufrimiento debido a prácticas de manejo. animal. E7 Declaración jurada de prácticas sanitarias realizadas firmada por un profesional competente Certificados de capacitación de los operarios �Resumenes Estándares de Bienestar Animal en Ovinos ESTÁNDAR 40 Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 10 Medios de verificación Descripción Código Declaración jurada de servicio. Los animales tienen oportunidad de desarrollar su comportamiento reproductivo natural y las prácticas reproductivas artificiales minimizan el riesgo de bienestar E8 Planilla de Inseminación Artificial y/o Transferencia Embrionaria. Los animales deben ser manejados por un número suficiente de personas competentes de manera tal que se minimicen los riesgos de sufrimiento, lesiones o E9 Certificados de capacitación del personal Auditoría predial de bienestar animal. enfermedades. La violencia y el maltrato están complemente prohibidos. Los animales deben ser esquilados al menos una vez al año previo a la época de verano utilizando el protocolo PROLANA. Están exentos del cumplimiento de este E10 Auditoría de esquila. estándar las explotaciones que utilizan razas desprovistas de lana. Los establecimientos deben contar con instalaciones y facilidades diseñadas para un manejo adecuado, sin E11 Auditoría de predial de bienestar animal. riesgo para el bienestar animal. En ovinos lecheros la práctica de ordeñe se debe realizar Certificado de habilitación de respetando una rutina horaria, por personal entrenado y tambo ovino emitido por en instalaciones adecuadas, evitando accidentes y cuidando la higiene. El manejo de los animales debe E12 SENASA. realizarse de forma lenta y tranquila, sin golpes y con Auditoría de predial de tono de voz baja y suave. bienestar animal. sacrificados garantizando el menor sufrimiento posible. ESTÁNDAR Medios de verificación Descripción Código Plan de capacitación del Todas las personas con a cargo de la cuidado de los Los animales faenados para consumo en el establecimiento deberán ser insensibilizados y luego Resumen de estándares y medios de verificación para acopiadores E15 Auditoría predial de bienestar ovinos conocen sus responsabilidades y son capaces de animal. desarrollar las acciones requeridas para asegurar el E1 personal y certificados de aprobación. bienestar de los animales bajo su cuidado. El transporte de los ovinos debe realizarse es vehículos habilitados, diseñados específicamente para el trasporte E13 de ganado, conducido por personal entrenado Certificado de habilitación del transporte. .garantizando el bienestar de los animales. Certificado de capacitación del transportista. Durante el encierre de y acopio de ovinos para venta los Certificado de habilitación del animales serán alojados respetando los criterios de densidad específicos, tendrán acceso a agua y alimento establecimiento acopiador. E14 permanente y serán manejados por personal entrenado Auditoria de bienestar animal minimizando e riesgo de estrés. de establecimientos acopiadores. �Resumenes Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 11 43 Resumen de estándares y medios de verificación para transportistas ESTÁNDAR Medios de verificación Descripción Código Plan de capacitación del Todas las personas con a cargo de la cuidado de los ovinos conocen sus responsabilidades y son capaces de desarrollar las acciones requeridas para asegurar el E1 personal y certificados de aprobación. bienestar de los animales bajo su cuidado. El transporte de los ovinos debe realizarse es vehículos habilitados, diseñados específicamente para el trasporte E13 de ganado, conducido por personal entrenado Certificado de habilitación del transporte. garantizando el bienestar de los animales. Certificado de capacitación del transportista. Los animales deben ser manejados garantizando su Auditoria de bienestar animal bienestar durante la descarga y espera hasta la faena. Deberán ser insensibilizados antes del sacrificio garantizando el menor sufrimiento posible. E16 para transportistas. �Resumenes Estándares de Bienestar Animal en Ovinos Estándares de bienestar animal para la cría, transporte y faena de los ovinos en argentina 12 45 Resumen de estándares y medios de verificación para frigoríficos ESTÁNDAR Medios de verificación Descripción Código Plan de capacitación del Todas las personas con a cargo de la cuidado de los ovinos conocen sus responsabilidades y son capaces de desarrollar las acciones requeridas para asegurar el E1 personal y certificados de aprobación. bienestar de los animales bajo su cuidado. Los establecimiento deben contar con instalaciones y facilidades diseñadas considerando el comportamiento E11 natural de los ovinos que permitan un manejo Auditoría predial de bienestar animal: Relevamiento de instalaciones adecuado sin riesgo para el bienestar. Certificado de habilitación del El transporte de los ovinos debe realizarse es vehículos habilitados, diseñados específicamente para el trasporte de ganado, conducido por personal entrenado E13 transporte. Certificado de capacitación del garantizando el bienestar de los animales. transportista. Los animales deben ser manejados garantizando su Auditoria de bienestar animal bienestar durante la descarga y espera hasta la faena. Deberán ser insensibilizados antes del sacrificio garantizando el menor sufrimiento posible. El procedimiento de faena debe realizarse de acuerdo a lo establecido en la Ley Nacional 18819-1970, el Reglamento de Inspección de Productos, Subproductos y Derivados de Origen Animal, aprobado por el Decreto N° 4.238 y la Resolución SENASA 46/2014. E16 para transportistas. � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Bienestar animal ovino: Estándares de bienestar animal para la cría, faena y el transporte de ovinos. Guía de aplicación. Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2019 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Coordinación de Bienestar Animal Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S0007 Abstract A summary of the resource. El propósito de este documento es brindar los estándares certificables de bienestar animal para la producción ovina en Argentina. El documento incluye a todos los agentes con responsabilidad en el cuidado y manejo de los ovinos. Los estándares y recomendaciones presentadas reflejan el estado del conocimiento actual respecto al bienestar animal, las prácticas ganaderas típicas de Argentina, las expectativas de la sociedad nacional e internacional y los estándares aplicados en otros países. Los estándares son acompañados de una guía que especifica una serie de recomendaciones y requerimientos que deben ser cumplidos, verificados e incorporados en los programas de aseguramiento de la calidad de los agentes comerciales que pretendan acreditar el cumplimiento del bienestar animal. Estos requerimientos aplican a los productores, acopiadores, transportistas y frigoríficos. Table Of Contents A list of subunits of the resource. 1. Prefacio 2. Propósito 3. Alcance 4. Proceso de desarrollo 5. La ganadería ovina en Argentina 6. Principios de bienestar animal 6.1 Comportamiento natural y aspectos específicos de los ovinos 7. Estándares de Bienestar Animal y Guía para alcanzarlos 7.1 Cuidado ético y responsable por parte del personal 7.2 Nutrición 7.3 Manejo del riesgo de eventos climáticos extremos y desastres naturales 7.4 Comportamiento natural 7.5 Exposición al medio ambiente y estrés térmico 7.6 Predación 7.7 Sanidad y prácticas de manejo dolorosas o estresantes 7.8 Manejo reproductivo 7.9 Manejo general, arreo y confinamiento para engorde 7.10 Esquila 7.11 Instalaciones y facilidades para el manejo de los animales 7.12 Ordeñe 7.13 Transporte de los ovinos 7.14 Concentración de ovinos para venta 7.15 Faena de ovinos en el campo 7.16 Faena de los ovinos en mataderos y frigoríficos 8. Bibliografía 9. Resumen de estándares y medios de verificación para productores 10. Resumen de estándares y medios de verificación para acopiadores 11. Resumen de estandares y medios de verificación para transportistas 12. Resumen de estandares y medios de verificación para frigoríficos https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/a968c6500b5eac13e0f424c8f6c2bd6d.pdf 60dcb5c94cc035d07eb95346590ae6e0 PDF Text Text ��Bioseguridad en explotaciones porcinas �MANUAL PARA LA BIOSEGURIDAD EN EXPLOTACIONES PORCINAS Autoridades Ing. Agr. Diana María Guillén Presidenta Med. Vet. Luis Ángel Carné Vicepresidente Med. Vet. José Luis Ferro Dirección Nacional de Sanidad Animal Med. Vet. Gustavo Comesaña Dirección de Programación Sanitaria Autores Vet. Pablo Borrás Vet. Mariela Monterubbianesi Programa de Enfermedades de los Porcinos Dirección de Programación Sanitaria Dirección Nacional de Sanidad Animal Senasa Agradecimientos Dres. Alejandro Pérez y Yanina Laksman Departamento de Porcinos de la Dirección de Laboratorio Animal del Senasa Dr. Javier Cappuccio INTA Castelar Dr. Alberto Armocida UNICA Dr. Javier Sarradell Facultad de Veterinaria de Casilda Asociación Argentina de Productores Porcinos (AAPP) 4 • Senasa �Programa de Enfermedades de los Porcinos Introducción 06 Objetivo 06 Bioseguridad. Generalidades 07 Medidas de bioseguridad: factores a tener en cuenta 08 Ubicación 08 Instalaciones 09 Personas 10 Limpieza y desinfección 11 Sistema de producción 14 Introducción de genética: reproductores y semen 15 Provisión de alimento y agua 16 Control de plagas: roedores, aves e insectos 16 Tratamiento de efluentes y cadáveres 18 Anexo 19 Senasa • 5 �MANUAL PARA LA BIOSEGURIDAD EN EXPLOTACIONES PORCINAS Introducción Existen numerosas enfermedades de los cerdos que atentan no solo contra los parámetros de la producción, sino también contra la obtención y/o mantenimiento de mercados de animales y productos derivados. Ante estas situaciones, los servicios veterinarios oficiales de los países llevan a cabo numerosas actividades en el marco de programas de prevención del ingreso, control y erradicación de enfermedades y se desarrollan sistemas para la detección precoz y contención en caso necesario. En la Argentina, estas funciones son llevadas adelante por el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (Senasa) que se encarga de prevenir, erradicar y controlar enfermedades de animales que pueden afectar a la producción agropecuaria del país; y verificar la inocuidad de los alimentos. La aplicación de medidas de bioseguridad adecuadas juega un rol fundamental para disminuir el riesgo de ingreso de enfermedades a la granja y, a su vez, para prevenir su diseminación. Las acciones de prevención del ingreso de enfermedades a un país se basan en controles en fronteras, elaboración y actualización de los requisitos zoosanitarios para animales y productos importados, y actividades de capacitación y sensibilización a productores y profesionales, entre otras. Una vez que una enfermedad exótica ingresa al país, la dispersión y sus consecuencias dependerán de factores tales como el tipo de agente etiológico, el tiempo de detección (que trascurre desde que los animales manifestaron 6 • Senasa signos clínicos y hasta que el servicio veterinario es notificado e interviene para su contención), el éxito de las medidas de contención aplicadas, los movimientos realizados antes de su detección (tanto de animales, como de personas y de vehículos), la cantidad de animales afectados, la ubicación del establecimiento, la cantidad y la distancia con respecto a establecimientos vecinos, entre otros. En ese sentido cobra relevancia el nivel de bioseguridad aplicado por cada uno de los establecimientos de producción de porcinos. Cuando una granja aplica medidas de bioseguridad tiene menores probabilidades de que ingrese una enfermedad, ya sea por cercanía, personas, vehículos, etcétera. Objetivo El objetivo general de este manual es describir las medidas de manejo fundamentales a aplicar para prevenir la introducción y transmisión de enfermedades infecciosas a un establecimiento de cría de porcinos. �Programa de Enfermedades de los Porcinos Bioseguridad. Generalidades El concepto de bioseguridad tiene varias definiciones. Básicamente se refiere al conjunto de medidas que son aplicadas con el objetivo de evitar el ingreso de enfermedades al establecimiento, su diseminación dentro del mismo y hacia otros establecimientos [MADEC, 2001, Levis 2011, Canadian Swine Health Board]. La adecuada aplicación de medidas de bioseguridad, cualquiera sea el nivel de producción, permite garantizar una producción sustentable y económicamente rentable. El empleo de normas de bioseguridad ayuda a mantener el estado sanitario de la granja mediante la prevención del ingreso y la diseminación de nuevas enfermedades que pueden ser introducidas y transmitidas de forma directa y/o indirecta. La forma directa, que es por contacto directo o indirecto entre animales, se da a través de la introducción de porcinos de reemplazo, repoblamiento y de madres a hijos. Las formas indirectas pueden darse a causa del viento, los vehículos, las personas, los equipos, el agua, los alimentos y el contacto con animales domésticos y salvajes ajenos al establecimiento. Los niveles de bioseguridad y de las prácticas de manejo aplicados en los establecimientos con porcinos tienen impacto en el estado sanitario y por consiguiente, en sus niveles productivos. Es por ello que la bioseguridad y las prácticas de manejo son tenidas en cuenta al momento de diseñar estrategias para los programas de prevención, control y erradicación de las enfermedades. Por ejemplo, mediante el relevamiento nacional de la enfermedad de Aujeszky, el Senasa detectó falencias importantes en lo relacionado a la bioseguridad, como faltas de controles de los ingresos, presencia de residuos y roedores, ausencia de asesoramiento veterinario y manejo sanitario inadecuado. Existe normativa nacional sobre las condiciones de tenencia y alimentación de los cerdos en la que se detallan las mínimas condiciones que debe cumplir un establecimiento de producción porcina: 88 88 88 88 88 88 Los predios con cerdos para cualquier fin deben contar con las instalaciones necesarias y adecuadas para permitir el control permanente de los animales alojados. Los predios deben instalarse solamente en las zonas permitidas por las autoridades municipales o provinciales. El lugar o predio donde se alojan los porcinos debe estar limitado de tal manera que asegure su adecuada contención y evite el escape hacia otra propiedad o hacia la vía pública. A su vez, esto impedirá el ingreso de animales ajenos al establecimiento. Las condiciones estructurales, edilicias y de manejo, no deben favorecer la existencia de roedores (ratones o ratas) y se deben implementar sistemas para su control. Las instalaciones deben ser las adecuadas para la realización de maniobras sanitarias (inspección, vacunación, sangrado, tratamientos) e identificación de porcinos. El propietario de los porcinos debe poseer el boleto de señal a su nombre, otorgado por la autoridad competente que certifique la propiedad sobre los animales. La producción porcina en nuestro país ha variado considerablemente durante los últimos años. El advenimiento de sistemas tecnificados de cría intensiva obliga a los productores, y más aún a los emprendimientos empresariales, a aplicar planes de bioseguridad y prevención de ingreso de enfermedades para que su producción sea rentable y sustentable. Senasa • 7 �MANUAL PARA LA BIOSEGURIDAD EN EXPLOTACIONES PORCINAS Independientemente del tamaño y la tecnificación de la explotación con porcinos, resulta necesario contar con controles sanitarios y un plan de bioseguridad. El tamaño o tipo de explotación (confinada, a campo, etcétera) no es una limitante, ya que con un asesoramiento adecuado es posible elaborar normas de bioseguridad apropiadas a cada situación y nivel de producción. No existe el protocolo de bioseguridad perfecto, ni un modelo único. Teniendo en cuenta las condiciones básicas detalladas en este manual, cada establecimiento debe elaborar su propio protocolo de bioseguridad específico de acuerdo a sus características. Su aplicación permitirá, además de llevar a cabo una producción sustentable y rentable, cumplir con los requisitos para comercializar sus animales y productos derivados. Medidas de bioseguridad: factores a tener en cuenta Ubicación Al diseñar las granjas porcinas, la ubicación es el principio más importante para garantizar la bioseguridad. Entre los factores que deben considerarse están: 8 • Senasa  Presencia de otras granjas La situación ideal es que las granjas se instalen como mínimo a 5 kilómetros de distancia entre sí. Se considera que densidades de más de 1000 cerdos por km2 representan un alto riesgo. A su vez, resulta relevante evaluar la disposición de los corrales o galpones en función de los vientos, montes, arboledas, caminos y rutas nacionales, entre otros factores. El riesgo también dependerá del tipo de establecimiento vecino: una granja de ciclo completo constituye un riesgo menor que una granja de engorde de flujo continuo, que constantemente introduce animales de diferentes orígenes.  Presencia de un frigorífico o matadero En un radio inferior a 1 km representa un riesgo elevado ya que se trata de un predio donde se concentran animales de sitios variados, estatus sanitarios heterogéneos y con un mayor tránsito de camiones con cerdos.  Tipo de terreno En general, los terrenos sinuosos o montañosos, cercanos al mar o protegidos de los vientos, son preferibles a las zonas planas, sin árboles u otra clase de barrera física. Es importante evitar zonas anegadas.  Rutas La presencia de rutas o caminos situados a menos de 50 metros de la granja y con una alta densidad de vehículos, que podrían transportar cerdos o insumos para la producción de porcinos, representa un alto riesgo de contaminación. Se considera adecuada una distancia de 400 a 800 metros con las rutas y caminos vecinales. �Programa de Enfermedades de los Porcinos  Medio ambiente Un clima frío y húmedo es el menos recomendable, ya que garantiza la supervivencia de los microorganismos en el medio ambiente durante más tiempo. Además, resulta importante evaluar arboledas, vientos, declives, etcétera. Instalaciones  Cercas perimetrales El predio debe poseer cercas que delimiten el perímetro de la granja o, al menos, el área limpia que aloja a los cerdos del área sucia con alto riesgo de contaminación. La cerca, cualquiera sea su tipo, deberá prevenir la entrada de animales silvestres. El uso de una cortina de árboles o cerco verde protege contra infecciones aerógenas provenientes de animales en tránsito.  Entrada principal Esta debe permanecer cerrada en todo momento. Se deben utilizar carteles para advertir el acceso restringido por razones sanitarias y en el mismo debe figurar un teléfono de contacto. Debe haber un registro para el control de los visitantes y de los camiones o vehículos que ingresen transportando animales, alimento, etcétera.  Galpones La maternidad es el sitio más sensible del establecimiento, por eso, no deben existir fallas en la bioseguridad. Se recomienda, por lo tanto, que esta área esté separada al menos 2000 a 3000 metros del resto de la granja, y que se encuentre alejada de la entrada principal. El personal, los insumos y la indumentaria deben ser exclusivos de este sector.  Vestuarios y oficinas Los galpones deben estar separados del resto del establecimiento por un cerco perimetral interno. La plantación de árboles alineados forma una barrera vegetal para disminuir el efecto del viento y el transporte de agentes patógenos. Los vestuarios y las oficinas deben estar situados dentro del área limpia, es decir, por dentro de la cerca perimetral. Las duchas y áreas intermedias deben demarcar el área limpia del área de vestuario en donde permanecerá la ropa de la calle. La oficina debe estar situada en el área limpia y contar con una comunicación con el exterior que permita el intercambio de documentos, equipos, etcétera. El intercambio se debe realizar por medio de una cabina sanitaria y no por los vestuarios y oficinas. Para las empresas de genética o los grandes criaderos comerciales es fundamental la ducha obligatoria al entrar y al salir del sitio donde se alojan animales, y dejar todo fuera del sitio Senasa • 9 �MANUAL PARA LA BIOSEGURIDAD EN EXPLOTACIONES PORCINAS (anillos, ropa interior, celulares, etcétera). Para el resto de los establecimientos es primordial el cambio de ropa y calzado, ya que esto se puede cumplir en cualquier tipo de sistema. difusores de enfermedades y se les recomendará, en la medida de lo posible, que no transiten por rutas en donde haya gran concentración de cerdos. Para el caso de autos de visitas, se asignará un estacionamiento en la entrada de la granja alejado del área de producción y por fuera del alambrado perimetral. Los sistemas para lavar los vehículos con productos desinfectantes, ya sean manuales o fijos (rodoluvios y picos de aspersión), reducen la probabilidad que estos participen como vehículos de patógenos; estos sistemas deberían estar presentes luego del ingreso al Los vestuarios son un paso obligado para el acceso de las personas a los sectores donde están los animales.  Zona de carga y descarga: acceso de vehículos Los camiones que transportan cerdos y sus choferes son factores de alto riesgo ya que pueden acarrear agentes patógenos de un establecimiento a otro, inclusive entre grandes distancias. Por lo tanto, no deberán ingresar a la granja. Se definirá claramente la zona de carga de animales y el límite entre la zona sucia y la zona limpia de la granja, preferentemente por un cerco perimetral que no esté en contacto directo con los galpones que contienen animales. Los choferes o el personal de dichos vehículos nunca deberán entrar a la zona limpia así como el personal de la granja no debe ingresar al vehículo. Es recomendable que el lugar donde se estacionan los camiones esté ubicado al menos a 20 metros del área que aloja los animales de la granja. Se educará a los transportistas para que tomen conocimiento del rol que cumplen como agentes 10 • Senasa establecimiento en el paso obligado de todo vehículo. Es fundamental controlar en forma estricta la dosificación del producto activo para que sea efectivo.  Maquinarias y equipos No deben intercambiarse equipos, maquinarias, elementos entre los establecimientos y, de ser posible, debería haber equipamiento específico para cada sitio (herramientas, hidrolavadoras, insumos veterinarios). Personas  Personal trabajador El personal que trabaja en la granja debe estar capacitado e informado sobre las medidas de bioseguridad aplicadas y esta capacitación debe ser continua. Al armar un plan de bioseguridad, se recomienda conocer la opinión del personal, ya que será quien deberá cumplir las normas y, sin su participación y compromiso, el riesgo de que las medidas de bioseguridad resulten ineficaces será mayor. Entre las reglas fundamentales que debe cumplir el personal, se destacan el uso de las duchas y de ropa exclusiva para la granja, no tener cerdos en �Programa de Enfermedades de los Porcinos los hogares, ni visitar otros establecimientos con porcinos. Asimismo, no se debe permitir ingresar ni consumir alimentos a base de carne de cerdo o subproductos porcinos. En presencia de gripe, es recomendable que los trabajadores que estén en contacto con los cerdos estén vacunados contra las cepas circulantes de influenza. El objetivo es disminuir la circulación viral y la probabilidad de ingreso del virus, ya que el cerdo es susceptible a los virus de influenza humanos, por eso, es altamente recomendable no permitir el acceso de trabajadores con síntomas gripales. Las normas de bioseguridad planteadas también deberán ser cumplidas por todo el personal de la empresa (dueño, gerente, responsable sanitario) y por los visitantes (asesores técnicos, asesores comerciales, personal de mantenimiento contratado).  Visitas Se deben restringir al mínimo las visitas. En caso de ser necesario su ingreso, deberán acatar las normas de bioseguridad sin excepciones. El contacto de las visitas con los animales o los galpones donde se crían los animales debería limitarse al mínimo y solo permitirse en caso de ser necesario. Todos los ingresos deben registrarse en un libro de visitas, detallando nombre, fecha y hora de visita, motivo, etcétera. Las personas deben cumplir un periodo de vacío entre 12 y 72 hs, es decir, no deben haber tenido contacto con cerdos durante ese periodo, con el objetivo de reducir el riesgo de portar o diseminar enfermedades. Esta declaración de vacío sanitario deberá dejarse asentada por escrito. No se debe permitir que las visitas estén solas, siempre deberán estar acompañadas. Limpieza y desinfección El proceso de limpieza y desinfección de los galpones es importante para reducir la carga microbiana y, por lo tanto, para el control de la exposición de los cerdos a agentes patógenos en su ambiente. La limpieza incluye una etapa de limpieza en seco, en la que se retira la materia orgánica grosera, y luego una etapa de limpieza húmeda con agua a presión para arrastrar las partículas finas y adheridas. Es importante que la superficie se seque antes de efectuar la etapa de desinfección. El personal de la granja debe trabajar con ropa adecuada y de uso exclusivo. La desinfección con productos adecuados, utilizando las dosis correctas, inactiva a la mayoría de los microorganismos. El producto desinfectante debe estar aprobado por el Senasa y ser efectivo para virus, bacterias y hongos. También existen productos aprobados para Senasa • 11 �MANUAL PARA LA BIOSEGURIDAD EN EXPLOTACIONES PORCINAS enfermedades específicas del cerdo, como el síndrome respiratorio reproductivo porcino (PRRS) o el circovirus porcino de tipo II (PCVII). Un programa efectivo de bioseguridad interna debe incluir la limpieza, la desinfección y el secado completo de cada corral o edificio entre grupos, con un vaciado sanitario de al menos cuatro días. El corral o edificio debe estar seco por completo antes de introducir al siguiente grupo de cerdos, ya que el proceso de secado reduce la probabilidad de que sobrevivan los agentes patógenos en el ambiente. Cuando se selecciona un desinfectante, se deben tener en cuenta los siguientes aspectos: tipo de superficie a desinfectar, destino de uso (rodoluvios, pediluvios, pulverización de superficies), temperatura y tipo de superficies, dureza del agua, eficacia sobre enfermedades específicas, tiempo de contacto, toxicidad en humanos y animales, cantidad de materia orgánica presente y costos. Es importante leer atentamente el rótulo y respetar la forma de uso y las concentraciones que recomienda el fabricante. Prácticamente todos los desinfectantes son corrosivos o irritantes, por lo que el operario debe protegerse utilizando gafas y guantes, y leyendo cuidadosamente las instrucciones de uso para evitar potenciales riesgos. Equipos de desinfección de vehículos. En explotaciones más pequeñas puede ser reemplazado por una mochila de desinfección. 12 • Senasa �Programa de Enfermedades de los Porcinos Composición química y modo de uso de los principales desinfectantes utilizados en granjas porcinas Nótese que el cuadro es de referencia y siempre se debe consultar el rótulo del producto comercial aplicado. Se recomienda usar el desinfectante con la concentración más alta de las acciones recomendadas. Por ejemplo, si el rótulo indica al 1% como viricida, al 1.5% para bactericida y al 2% como fungicida, se sugiere utilizar el porcentaje mayor, en este caso, una concentración al 2%. Es importante conocer las homologaciones del producto y la lista de virus, bacterias, hongos sensibles a dicho desinfectante. Senasa • 13 �MANUAL PARA LA BIOSEGURIDAD EN EXPLOTACIONES PORCINAS Producción confinada en galpones. Las instalaciones deben mantenerse limpias y con la densidad adecuada de animales. terminación). Esto permite cumplir con el sistema “todo adentro, todo afuera”, con un consecuente vaciado sanitario, que resulta más efectivo para interrumpir el ciclo de algunas enfermedades y disminuir el riesgo de transmisión de otras. Según el tamaño de la granja, la producción se lleva a cabo como ciclo completo o como multisitio. Esta última modalidad de producción, sumada al mantenimiento de las diferentes categorías en establecimientos, también contribuye a un mejor manejo de las enfermedades. Independientemente del sistema de producción, el flujo de movimientos (animales, personas, insumos) debería ser unidireccional, esto quiere decir que se deben planificar las instalaciones para que durante el trabajo diario se pueda recorrer la granja desde los animales de menor edad hacia los de mayor edad: 1º, maternidad; 2º, destete; 3º, desarrollo/engorde. Producción de cerdos al aire libre. Se debe procurar contar con reparos para la temperatura y exposición al sol. El lugar debe mantenerse libre de malezas, residuos y desperdicios que favorezcan la presencia de roedores. Se recomienda el uso de 0.3 litros de solución desinfectante por m² de superficie desarrollada, que se calcula como 4 veces la superficie del piso del galpón. Por ejemplo, una sala o galpón de 60 m de largo x 15 m de ancho posee una superficie de 900 m². Entonces, 900 x 4 resulta en 3600 m² de superficie desarrollada. Para esta superficie se calculan 3600 m x 0.3 litros; por lo tanto, se deben emplear 1080 litros de solución desinfectante con la concentración elegida según el producto. Sistema de producción En los sistemas de producción intensivos es recomendable aplicar el manejo en bandas, lo que garantiza la organización de los diferentes sectores (gestación, lactancia, recría, crecimiento y 14 • Senasa La toma de muestras permite el seguimiento del estado sanitario de los animales. �Programa de Enfermedades de los Porcinos Introducción de genética: reproductores y semen tiempo, los machos no se pondrán en contacto con otras categorías.  Introducción de animales nuevos El tiempo de permanencia en la cuarentena debe ser como mínimo de treinta días y la de aclimatación entre treinta y noventa días, dependiendo de las enfermedades presentes en la granja. También, de ser necesario, será el momento de aplicar tratamientos antimicrobianos y vacunaciones. La adquisición de animales nuevos debe hacerse de manera tal que evite la introducción de nuevas enfermedades infecciosas. Cerca del 90% de la entrada de enfermedades es a causa del ingreso de animales nuevos al establecimiento. En consecuencia, se recomienda que el nivel sanitario de la granja de origen de los animales sea igual o superior al de la granja compradora, y evitar la adquisición de animales de reemplazo adultos y hembras preñadas. Por el contrario, la población de reemplazo debería tener menos de cinco meses y provenir de cabañas habilitadas para su comercialización. Deberá solicitarse un historial sanitario de la granja de origen, específicamente, las certificaciones de establecimiento libre de la enfermedad de Aujeszky (Resolución exSAGPyA Nº 474/2009) y brucelosis porcina (Resolución Senasa Nº 63/2013). Al ingresar animales nuevos, se debe respetar el periodo de cuarentena, aislamiento y las determinaciones diagnósticas que aseguren la introducción de animales libres de otras enfermedades determinadas. Contar con un área de cuarentena permite mantener aislados a los animales nuevos, detectar posibles enfermedades y chequear la presencia de infecciones crónicas y/o realizar tratamientos antes de que sean introducidos a la granja. Asimismo, resulta importante respetar el proceso de aclimatación para que los animales ingresados logren un nivel inmunológico adecuado, según los patógenos presentes en la granja. Este proceso se realiza generalmente entre la segunda y tercera semana de la cuarentena. Durante este La toma y el análisis de muestras en la cuarentena disminuye la probabilidad de introducir enfermedades a la granja a través de animales nuevos.  Sector de cuarentena Este sector debe encontrarse alejado del área de producción (entre 100 y 150 metros) y debe ser el último lugar a visitar. Es importante que el personal y los equipos e implementos utilizados sean de uso exclusivo para esta área. Las duchas y el sistema de desagüe deben ser independientes de la granja principal. Una vez finalizada la cuarentena de las hembras de reposición, se debe realizar la correcta limpieza y desinfección así como permitir un tiempo de descanso hasta recibir al nuevo grupo. Senasa • 15 �MANUAL PARA LA BIOSEGURIDAD EN EXPLOTACIONES PORCINAS Bebederos tipo chupete. Evitan el desperdicio de agua.  Calidad del agua de bebida Se debe garantizar el acceso al agua apta para consumo animal, ya sea corriente o pozo. En ambos casos debe ser analizada y si fuera necesario, tratada. Sistema automatizado de alimentación de cerdos en confinamiento. Provisión de alimento y agua  Alimento Resulta importante garantizar la calidad del alimento y las buenas prácticas para la provisión y el manejo del alimento balanceado, ya sea comprado o elaborado en el mismo establecimiento. Siempre se debe verificar el origen del producto adquirido y que el alimento nunca sea transportado en el mismo camión utilizado para animales. Además, no se deben utilizar alimentos importados porque algunas bacterias y virus pueden sobrevivir al procesamiento y se sabe que han sido fuente de infecciones en países distantes de su lugar de origen. El almacenamiento del mismo debe hacerse en zonas adecuadas y sin posibilidad de contacto con animales, manteniendo el lugar limpio y acopiado adecuadamente. 16 • Senasa Trampa de roedores colocada en los alrededores de los galpones. Control de plagas: roedores, aves e insectos El control de plagas –como insectos, aves y roedores– debe contar con un plan integral de aplicación sistemática. Además de actuar como vectores o portadores de enfermedades, estos animales producen daños en los galpones y destruyen las instalaciones eléctricas, aislantes, etcétera, generando la contaminación del alimento de los cerdos con sus excretas. �Programa de Enfermedades de los Porcinos o Roedores Los roedores (ratas y ratones) tienen hábitos nocturnos por lo que la observación de los mismos durante el día puede indicar que el problema es grave. Para evaluar la situación es importante realizar inspecciones nocturnas con linterna. El control de los roedores se basa en cuatro pilares: impedir la entrada a las instalaciones y edificios, ajustar las normas de manejo de la alimentación animal para evitar, entre otros aspectos, las pérdidas de alimento que implican proliferación de roedores, prevenir que haya o Aves Para evitar el contacto con las aves el método de control es a través de la exclusión. Algunas de las recomendaciones consisten en colocar mallas o telas protectoras en las ventanas, limpiar las áreas que reciben alimento, cubrir los recipientes que tengan alimento balanceado y mantener las puertas cerradas. Se debe tener en cuenta que existen diferentes leyes y reglamentos que protegen a las palomas, con lo cual es necesaria la utilización de productos no tóxicos, para eso se sugiere revisar la legislación de cada provincia. sitios donde puedan vivir y aplicar tratamientos estratégicos para reducir las poblaciones de roedores. Diferentes sistemas para el compostaje. Galpones con mallas y cortinas intactas para evitar ingreso de aves y alimañas. o Insectos Para evitar la proliferación de insectos, principalmente de moscas, se debe evitar que dentro y fuera de las instalaciones se acumulen sectores con basura y desperdicios. Las oficinas, Senasa • 17 �MANUAL PARA LA BIOSEGURIDAD EN EXPLOTACIONES PORCINAS depósitos y bodegas deben contar con puertas y ventanas protegidas con tela mosquitera y mantener las instalaciones ordenadas y limpias. Es importante el lavado de los pisos, la eliminación de malezas y evitar la acumulación de materia orgánica que favorece la postura de huevos de moscas. Se recomienda cubrir con lonas los lugares donde se acumula estiércol o la cama de animales. o Otros animales La presencia de gatos y perros en la granja es frecuente. El contacto de estos animales con los cerdos debe evitarse, ya que estos animales pueden ser portadores y propagadores mecánicos indirectos de agentes infecciosos y parasitarios (transportando cadáveres, fetos y placentas). Además, pueden generar estrés en los cerdos debido al continuo ladrido o movimiento entre los animales confinados. Tratamiento de efluentes y cadáveres Se debe contar con sistemas apropiados para la recolección y el tratamiento de efluentes y para la eliminación adecuada de animales muertos, ambos acordes a la regulación local, regional y nacional. Los desagües con residuos líquidos no deben estar abiertos y deben drenar en fosas o lagunas ubicadas fuera del perímetro de la granja. Debe considerarse la implementación de tratamiento de efluentes, desde separadores de sólidos hasta biodigestores, pasando por las lagunas y el compostaje. Este último tratamiento es recomendable para el manejo de cadáveres. 18 • Senasa Sistema de fosa cerrada. La eliminación de cadáveres puede realizarse por incineración, enterramiento o composta, aunque los productores en cada caso deben ajustarse a lo establecido por las normas locales, regionales o nacionales. Los incineradores, fosas o puntos para recolección de los cadáveres deben estar ubicados fuera del perímetro de la granja y cercados, a fin de evitar el acceso de animales domésticos y silvestres. Todos estos tratamientos no solo mejoran la bioseguridad y favorecen el control de plagas, sino que mejoran la biosustentabilidad de la producción. El área reservada para necropsias debe estar fuera de la cerca perimetral y debería ser de fácil limpieza y desinfección. �Programa de Enfermedades de los Porcinos Anexo Lista de chequeo Medidas generales de bioseguridad SI NO Observaciones INSTALACIONES (GENERAL) Cerca perimetral Puerta de acceso señalizada Barreras naturales (árboles) Desmalezado CONTROL DE INGRESOS Sector de carga y descarga por fuera del perímetro de la granja Desinfección de vehículos (vado, arco, otro) Vestuarios en el ingreso Duchas Provisión de botas y mamelucos exclusivos GALPONES Pediluvios o bandejas con desinfectante en la entrada de galpones Recipientes para desechos en cada galpón Telas mosquiteras en buen estado Mallas antipájaros Posee galpón de cuarentena MANEJO – ALIMENTO - PLAGAS Agua apta para consumo animal (corriente o tratada) Almacenaje de alimento: limpio y fumigado Sistema de retiro o tratamiento de cadáveres Sistema de gestión y/o tratamiento de efluentes/residuos sólidos y líquidos Laguna/s Programa y registro de limpieza y desinfección Uso de productos aprobados Análisis de las soluciones utilizadas El personal conoce sobre su uso Principio todo adentro, todo afuera Senasa • 19 �MANUAL PARA LA BIOSEGURIDAD EN EXPLOTACIONES PORCINAS Vacío sanitario Plan de desratización/control de roedores y su registro Trampas y cebos Utiliza empresa especializada Restricción de acceso de perros y gatos a los galpones MANUALES - REGISTROS Manual de bioseguridad Registro de visitas Registro de limpieza, desinfección y control de plagas Registro de tratamientos 20 • Senasa ��� Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Bioseguridad en explotaciones porcinas Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Dirección Nacional de Sanidad Animal Dirección de Programación Sanitaria Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0078 Abstract A summary of the resource. El objetivo general de este manual es describir las medidas de manejo fundamentales a aplicar para prevenir la introducción y transmisión de enfermedades infecciosas a un establecimiento de cría de porcinos. Table Of Contents A list of subunits of the resource. Introducción Objetivo Bioseguridad. Generalidades Medidas de bioseguridad: factores a tener en cuenta Ubicación Instalaciones Personas Limpieza y desinfección Sistema de producción Introducción de genética: reproductores y semen Provisión de alimento y agua Control de plagas: roedores, aves e insectos Tratamiento de efluentes y cadáveres Anexo Enfermedades de los Porcinos https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/171320ae3fd098c7f3a9be4124bab5a3.pdf b7bee07ed84f1d586b1873d82a860fe8 PDF Text Text BRUCELOSIS (B. abortus, B. melitensis, B. suis) 2019 Laboratorio de Referencia OIE/FAO para Brucelosis Coordinación de Bacteriología Dirección de Laboratorio Animal Dirección General de Laboratorios y Control Técnico �Brucelosis MANUAL DE DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO (B. abortus, B. melitensis, B. suis) Versión 4.0/2019 Elaborado por: Departamento Brucelosis (Laboratorio de Referencia para OIE/FAO) Ana M. Nicola, M.V., MSc. Sebastián Elena, M.V., MSc. Cristina Franco, Vet., MSc. Aprobado por: Bernardo Alonso, M.V. Coordinación Bacteriología Eduardo Maradei, M.V. Dirección Laboratorio Animal Carlos Zenobi, M.V., MSc. Dirección General de Laboratorios y Control Técnico �OBJETIVO El presente Manual tiene como objetivos: ▪ Colaborar con el mejor desempeño y competencia de los Laboratorios que realizan el diagnóstico serológico de la Brucelosis en diferentes especies animales inscriptos en la Red de Laboratorios de SENASA. ▪ Proporcionar a la Red de Laboratorios de SENASA un instrumento que facilite el desarrollo adecuado, sistematizado y estandarizado de los procedimientos técnicos que se realizan en los laboratorios. ▪ Contribuir a la aplicación de las medidas de bioseguridad y controles de calidad que deben cumplirse, cuando se desarrolle un procedimiento técnico. ▪ Contar con un instrumento que sirva de guía para la evaluación y monitoreo de las actividades del laboratorio. Las técnicas diagnósticas descriptas en el presente Manual son las internacionalmente reconocidas y recomendadas por la ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE SANIDAD ANIMAL (OIE) y EL SENASA. Página 2 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �INDICE Definiciones y Abreviaturas 4 Medidas Generales de Bioseguridad y Seguridad en el Laboratorio 5 Introducción Brucelosis 9 Procedimientos de Trabajo (ingreso/rechazo de muestras) 14 Prueba de screening con antígenos tamponados en placa (BPAT y RBT) 17 Prueba de seroaglutinación lenta en tubo (SAT y 2-ME) 20 Prueba de anillo en leche 26 ELISA Indirecto 29 ELISA por competición / bloqueo 32 Ensayo de Polarización Fluorescente 35 Fijación de complemento 38 Normativa vigente 57 Informe de la Subcomisión Técnica de la Comisión Nacional de Brucelosis 58 Anexo I Lavado y desinfección de manos 60 Anexo II Modelo de Planilla de emisión de resultados 62 Bibliografía 64 Página 3 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �DEFINICIONES / ABREVIATURAS � Ag: Antígeno � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � � Biovariedad: bv BPAT (Buffered plate antigen test): Aglutinación con antígeno bufferado en placa CELISA: Enzimoinmunoensayo competitivo C’: Complemento de cobayo DILAB: Dirección General de Laboratorios y Control Técnico DLA: Dirección de Laboratorio Animal DNSA: Dirección Nacional de Sanidad Animal DT: Dilución de Trabajo ELISA: Enzimoinmunoensayo FCT: Fijación de Complemento test FPA: Ensayo de Polarización Fluorescente GR: Glóbulos Rojos IELISA: Enzimoinmunoensayo Indirecto IgG: Inmunoglobulina G IgM: Inmunoglobulina M LPS: Lipopolisacárido 2-ME: 2- Mercaptoethanol M: Molar mP: milipolarización MRT (PAL): Prueba de anillo en leche OIE: Organización Mundial de Sanidad Animal PAC: Poder anticomplementario RBT: Rosa de Bengala Test RENSPA: Registro Nacional Productor Agropecuario SAT: Seroaglutinación lenta en tubo SENASA: Servicio de Sanidad y Calidad Agroalimentaria SH: Sistema Hemolítico UI/ml: Unidades Internacionales por mililitro UIFCT/ml: Unidad Internacional fijadora del complemento Test por mililitro UA: Unidad de Antigeno UC: Unidad de Complemento UH: Unidad de Hemolisina Página 4 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �MEDIDAS GENERALES LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD Y SEGURIDAD EN EL Se entiende por Bioseguridad: "La disciplina que trata el manejo seguro y la contención de microorganismos infecciosos y materiales biológicos peligrosos". La práctica del manejo seguro de microorganismos patógenos y sus toxinas en el laboratorio biológico se realiza a través de la aplicación de los principios de contención y la evaluación de riesgos. Principios de Bioseguridad: El término “contención” se utiliza para describir métodos seguros para manejar materiales infecciosos en el medio ambiente del laboratorio, donde son manipulados o conservados. El objetivo de la contención es reducir o eliminar la exposición de quienes trabajan en laboratorios u otras personas, y del medio ambiente externo a agentes potencialmente peligrosos. La contención primaria, la protección del personal y del medio ambiente inmediato del laboratorio de la exposición a agentes infecciosos, es provista tanto mediante buenas técnicas microbiológicas como a través del uso de Equipos de Protección Personal (EPP) de seguridad adecuados. La aplicación de vacunas al personal cuando corresponda, puede brindar un mayor nivel de protección del personal. La contención secundaria, la protección del medio ambiente externo al laboratorio de la exposición a materiales infecciosos, se logra a través de una combinación del diseño de la instalación y prácticas operativas. Por lo tanto, los tres elementos de contención incluyen prácticas y técnicas de laboratorio, equipos de seguridad y el diseño de la instalación. La evaluación del riesgo del trabajo a realizar con un agente específico determinará la combinación apropiada de estos elementos. Prácticas y Técnicas de Laboratorio. El elemento más importante de la contención es el cumplimiento estricto de las prácticas y técnicas microbiológicas estándares. Las personas que trabajan con agentes infecciosos o materiales potencialmente infectados deben conocer los riesgos potenciales, y también deben estar capacitados y ser expertos en las prácticas y técnicas requeridas para manipular dichos materiales en forma segura. El director o la persona a cargo del laboratorio es responsable de brindar u organizar la capacitación adecuada del personal. Cada laboratorio está obligado a desarrollar o adoptar un manual de operaciones o de bioseguridad que identifique los riesgos que se encontrarán o puedan producirse, y que especifique las prácticas y procedimientos destinados a minimizar o eliminar las exposiciones a estos riesgos. Se debe alertar al personal acerca de los riesgos especiales y se le debe exigir que lea y cumpla las prácticas y procedimientos requeridos. El personal capacitado y bien informado acerca de las técnicas de laboratorio adecuadas, procedimientos de seguridad y riesgos asociados a la manipulación de agentes infecciosos debe ser el responsable de la conducción de los trabajos con cualquier agente o material infeccioso. Esta persona tiene la obligación de consultar a profesionales especializados en bioseguridad u otros profesionales de la salud y seguridad respecto de la evaluación del riesgo. Cuando las prácticas de laboratorio estándares no son suficientes para controlar los riesgos asociados a un agente o a un procedimiento de laboratorio particular, quizás sea necesario aplicar medidas adicionales. El director del laboratorio es responsable de seleccionar prácticas de seguridad adicionales, que deben guardar relación con los riesgos relacionados con el agente o procedimiento. Prácticas operativas seguras y hábitos personales ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ El acceso al laboratorio debe ser limitado o restringido. El laboratorio debe ser diseñado para que su limpieza sea sencilla. Las superficies de las mesas de trabajo deben ser impermeables al agua y ser resistentes al calor moderado y a solventes orgánicos, ácidos, álcalis y productos químicos utilizados para descontaminar la superficie de trabajo y los equipos. Los muebles de laboratorio deben tener la capacidad de soportar cargas y usos previstos. Los espacios entre las mesas de trabajo, gabinetes y equipos deben ser accesibles para su limpieza. Cada laboratorio debe contener una pileta para el lavado de manos. La iluminación debe ser adecuada para todas las actividades, evitando los reflejos y el brillo que puedan molestar la visión. Si el laboratorio tiene ventanas que se abren hacia el exterior, deben estar provistas de mosquiteros. Se debe usar ambos, delantales, batas o uniformes de laboratorio de protección adecuados durante la permanencia en el mismo. Se debe retirar y dejar esta ropa de protección en el laboratorio antes de dirigirse a otras áreas (por ejemplo, cafetería, biblioteca, oficinas administrativas), se debe usar además, calzado cerrado y cabello recogido. Página 5 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Se debe usar guantes cuando es probable que las manos entren en contacto con materiales infecciosos, superficies o equipos contaminados. Puede ser apropiado el uso de dos pares de guantes. Se deben descartar los guantes cuando están contaminados, y se retiran cuando se completa el trabajo con los materiales infecciosos o, cuando está comprometida la integridad del guante. Los guantes descartables no se lavan, no se vuelven a usar, ni se utilizan para tocar superficies “limpias” (teclados, teléfonos, picaportes, entre otros), y no se deben usar fuera del laboratorio. No está permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto, maquillarse o almacenar alimentos para uso humano en áreas de trabajo. Se debe utilizar protección ocular para los procedimientos en los que se puedan producir salpicaduras de microorganismos u otros materiales peligrosos. Las personas que usan lentes de contacto en laboratorios deben también utilizar antiparras o un protector facial. Las personas deben lavarse las manos luego de manipular materiales viables, luego de quitarse los guantes y antes de retirarse del laboratorio. (Ver Anexo I). Los alimentos se almacenan fuera del área de trabajo en gabinetes o refrigeradores designados y utilizados con este único fin. Está prohibido pipetear con la boca; se debe utilizar dispositivos de pipeteo mecánicos. Se debe aplicar políticas para el manejo seguro de objetos cortantes o punzantes. Todos los procedimientos se llevan a cabo con precaución a fin de minimizar la creación de salpicaduras o aerosoles. Las superficies de trabajo se descontaminan como mínimo una vez por día, luego de finalizar las tareas y ante todo derrame de material viable. Todos los cultivos, stocks y otros desechos reglamentados se descontaminan antes de ser desechados mediante un método de descontaminación aprobado, como por ejemplo, mediante autoclave. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio inmediato son colocados en un recipiente duradero, estanco y cerrado para su transporte desde el laboratorio. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio inmediato se embalan de conformidad con las normas locales, estatales y federales aplicables antes de retirarlos del establecimiento de acuerdo a las indicaciones de la Ley 24.051 de Residuos Peligrosos. Hojas de seguridad: (en inglés, Material Safety Data Sheet o MSDS) es un documento que indica las particularidades y propiedades de una determinada sustancia para su uso más adecuado. El principal objetivo de esta hoja es proteger la integridad física del operador durante la manipulación de la sustancia. Esta hoja o ficha contiene las instrucciones detalladas para su manejo y persigue reducir los riesgos laborales y medioambientales. El laboratorio debe tener las hojas de cada sustancia química que utiliza en el Laboratorio impresas y capacitar al personal sobre las mismas. Limpieza y desinfección del Laboratorio Todo Laboratorio debe tener un programa con métodos de limpieza y desinfección bien definidos a fin de disminuir los riesgos de contaminación con materiales peligrosos acorde a las características del laboratorio y volumen de trabajo. La limpieza de los laboratorios incluye a los equipos, mesas de trabajo, heladeras, freezer, aberturas, etc. Dentro de la limpieza de los laboratorios se debe incluir control de insectos y roedores. Eliminación de residuos peligrosos (patológicos/químicos) El Laboratorio debe elaborar un procedimiento de la manipulación, clasificación y descarte de los residuos peligrosos. Los residuos peligrosos pueden causar daño, directa o indirectamente, a seres vivos o contaminar el suelo, el agua, la atmósfera o el ambiente en general. Se consideran residuos patológicos al material biológico de diversos orígenes que puede no tener características infecciosas pero sí de toxicidad. Un residuo se considera tóxico cuando es capaz de, a determinadas dosis, provocar una acción química o químico-física que cause daño en la salud, luego de estar en contacto con la piel o las mucosas o de haber penetrado en el organismo por cualquier vía. Los residuos serán acumulados en recipientes colocados convenientemente y en cantidad suficiente en el lugar de generación de los mismos. Los mismos se podrán tratar mediante los siguientes métodos: Incineración, enterramiento por relleno de seguridad, esterilización por autoclave, ya sea por el mismo laboratorio o por empresas dedicadas a ese fin. Se ajustará a la normativa establecida por la jurisdicción donde se encuentra el laboratorio. Página 6 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD EN EL LABORATORIO Se debe cumplimentar la reglamentación vigente de acuerdo a las BPL (Buenas Prácticas de Laboratorio), requisitos particulares de SENASA y la Norma ISO/IEC 17025 (última versión vigente) según la categoría del Laboratorio. Para que los resultados del diagnóstico sean uniformes, confiables y trazables, deben efectuarse siguiendo técnicas estandarizadas, con operadores capacitados en la realización e interpretación de los resultados, utilizando equipos y reactivos controlados. Los procedimientos de laboratorio están sujetos a múltiples causas de error que deben ser detectados para poder aplicar acciones correctivas y /o preventivas. Los procedimientos se pueden monitorear mediante controles internos, con la utilización diaria de sueros controles internos con títulos conocidos y, el control externo que se refiere al realizado por un laboratorio de referencia. Este último se puede hacer mediante auditorías que revisen los métodos analíticos, la organización del trabajo del laboratorio y los procedimientos de control de calidad internos implementados y la realización de inter laboratorios. El control permanente de la calidad de los resultados junto a las buenas prácticas de laboratorio que incluye la utilización de técnicas evaluadas, personal capacitado y operaciones estandarizadas, garantizan el resultado confiable del diagnóstico. Control de calidad de insumos Todos los insumos y reactivos que se utilizan en el laboratorio deben estar establecidos con fórmulas y procedimientos detallados en manuales disponibles en el área de trabajo. La composición, tipo de envase, identificación y lugar de almacenamiento debe ser la indicada en los manuales. No introducir cambios que no estén registrados y autorizados por el responsable del laboratorio. Todos los insumos y materiales de referencia deben cumplir con las especificaciones registradas. Los reactivos biológicos que se emplean en las técnicas de ensayo, deben utilizarse de acuerdo a las especificaciones del Manual de Procedimientos Operativos, respetando las indicaciones para la conservación, almacenamiento y titulación. Los reactivos para el diagnóstico de Brucelosis que se comercializan en la República Argentina, deben cumplir la normativa vigente de SENASA y aprobar el control de calidad de cada lote o serie indicado en la estampilla correspondiente. Se debe llevar un registro de cada lote de antígeno/kit que se utiliza con la fecha de uso. En los laboratorios se requiere usar agua con mínimo de impurezas. Los requisitos de calidad o pureza se encuentran establecidos en base a diferentes normas o criterios, dependiendo de las instituciones u organismos internacionales que establecen las referencias. Entre éstas se encuentran la American Society for Testing and Materials (ASTM), British Standards Institution (BSI) y la International Organization for Standardization (ISO). Actualmente están definidos los diferentes niveles de pureza del agua en función de los parámetros físicos químicos, tales como conductividad eléctrica, resistividad, contenido de carbono, oxígeno o sílice. Clasificación del agua de acuerdo a su característica fisicoquímica. Especificaciones según ISO 3696 Página 7 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �CLASIFICACION DE LOS TIPOS DE AGUA SEGÚN NC- ISO 3696: 2004 Grado 1- Exenta básicamente de contaminantes constituidos por iones disueltos o coloidales y materias orgánicas. Es apropiada para los requisitos de análisis más exigentes, incluyendo la cromatografía líquida de alta definición. Se puede preparar por un tratamiento adicional del agua de grado 2 (por ejemplo osmosis inversa o desionización seguida de filtrado a través de una membrana con tamaño de poro de 0,2 µm para separar las partículas, o por redestilación en un aparato de sílice fundido). Grado 2- Con muy pocos contaminantes inorgánicos, orgánicos o coloidales. Es apropiada para análisis delicados, incluyendo la espectrometría de absorción atómica (EAA) y la determinación de componentes en cantidades mínimas. Se puede preparar por destilación múltiple o por desionización u osmosis inversa seguida de destilación. Grado 3- Apropiada para la mayoría de los trabajos de química en laboratorios por vía húmeda y la preparación de soluciones de reactivos. Se puede preparar mediante una sola destilación, por desionización o por osmosis inversa. Salvo indicación en contrario, se puede utilizar para el trabajo normal de análisis. Equipos El laboratorio debe tener inventario del equipamiento y un programa de control y mantenimiento de los equipos que emplea en el laboratorio. Página 8 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �INTRODUCCIÓN: BRUCELOSIS (Capítulo 3.1.4.- Manual Organización Mundial de Sanidad Animal -OIE)- versión 2016. http://www.oie.int/fileadmin/Home/esp/Health_standards/tahm/3.01.04_BRUCELL.pdf Brucelosis es el nombre genérico que se aplica a las infecciones, humanas o animales, causadas por distintas especies del género Brucella, principalmente Brucella abortus, B. melitensis y B. suis. La infección del ganado ovino por B. ovis se describe por separado en el Capítulo 3.7.7 Epididimitis ovina (Brucella ovis) del Manual de la OIE. Agente: Brucella (B. abortus, B. melitensis, B. suis) El género Brucella forma parte de la familia Brucellaceae, que a su vez forma parte del orden Rhizobiales, en la clase Alphaproteobacteria. Presenta una estrecha relación genética con ciertos agentes patógenos de las plantas y simbiontes de los géneros Agrobacterium y Rhizobium, así como con agentes patógenos de animales (Bartonella) y bacterias oportunistas o del suelo (Ochrobactrum). La evidencia genética e inmunológica indica que todos los miembros del género Brucella están estrechamente relacionados. Sin embargo, teniendo en cuenta que existen diferencias relevantes entre las principales variantes en cuanto al tipo de hospedador y a la epidemiología, así como evidencias moleculares de variaciones genómicas, el Comité Internacional de Sistemática de Procariotas, Subcomité de Taxonomía de Brucella, adoptó en 2005 una decisión firme sobre el retorno a las posiciones anteriores a 1986 en lo relativo a la taxonomía de Brucella; la consecuencia de ese posicionamiento es la re aprobación de las seis especies de Brucella con sus biovariedades reconocidas. Los nombres clásicos relacionadas con las seis especies de Brucella están publicados en las Listas Autorizadas de Nombres de Bacterias de 1980, y las cepas típicas designadas aparecen asociadas a esos nombres publicados y validados: Brucella abortus, B. melitensis, B. suis, B. neotomae, B. ovis y B. canis. Las tres primeras se subdividen en biovariedades por sus características de cultivo y serológicas. En la última década se han aislado cepas de Brucella de mamíferos marinos que no pueden adscribirse a ninguna de las especies ya reconocidas. Hay estudios en curso destinados a establecer su posición en la taxonomía de este género y se ha propuesto que podrían clasificarse en dos nuevas especies, B. ceti y B. pinnipedialis. Recientemente se ha aislado una nueva cepa, denominada Brucella microti, en el topillo campesino (Microtus arvalis) y en zorros y suelo de Europa Central (Scholz et al., 2008). También se han descrito por primera vez ciertas cepas aisladas de infecciones humanas de implantes mamarios y de pulmón, aunque todavía no está claro cuál es el reservorio natural de las mismas. Aunque solo se han descrito dos cepas de cada nuevo tipo, formalmente se han publicado como décima y onceava especies de Brucella, B. inopinata y B. papionis, respectivamente (Scholz et al., 2010; Whatmore et al., 2014). Por último, las cepas aisladas de roedores, zorros y ranas se han caracterizado como cepas atípicas de Brucella claramente diferenciables de las especies descritas actualmente, pero todavía no se han aprobado como nuevas especies de Brucella. Descripción de la enfermedad Infección por Brucella en ganado bovino La infección por Brucella en el ganado bovino suele estar causada por biovariedades (bv.) de Brucella abortus. En algunos países, sobre todo del sur de Europa, África y Asia occidental, en los que el ganado bovino se cría en estrecha relación con ganado ovino o caprino, la infección también puede deberse a B. melitensis (Verger, 1985). En ocasiones, B. suis puede causar una infección crónica de la glándula mamaria del ganado bovino, pero no se ha observado que cause aborto ni que se transmita a otros animales. La infección por Brucella en ganado bovino se transmite a nivel mundial, pero varios países del norte y centro de Europa, así como Canadá, Japón, Australia y Nueva Zelanda se consideran libres tanto de B. abortus como de B. melitensis. Esta enfermedad suele ser asintomática en animales de corta edad y en hembras no gestantes. Tras la infección por B. abortus o B. melitensis, las hembras adultas gestantes presentan placentitis, que suele dar lugar a aborto entre el quinto y el noveno mes de gestación. Incluso en ausencia de aborto, en la placenta, los líquidos fetales y las secreciones vaginales producen una profusa excreción del microorganismo. La glándula mamaria y los ganglios linfáticos relacionados también pueden resultar infectados, y es posible que se excreten microorganismos con la leche. Las siguientes gestaciones suelen llegar a término, pero la infección uterina y mamaria reaparece, con cantidades bajas de microorganismos Página 9 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �tanto en los productos del parto como en la leche. En las infecciones agudas, el microorganismo se encuentra presente en la mayoría de ganglios linfáticos principales del organismo. Los bovinos machos adultos pueden presentar orquitis / epididimitis y la brucelosis puede ser una causa de infertilidad en ambos sexos. Los higromas, que suelen afectar a las articulaciones de las extremidades, son un signo frecuente en caso de brucelosis en algunos países tropicales y pueden ser el único indicador manifiesto de infección; el líquido de los higromas suele estar infectado por Brucella. Infección por Brucella en ovejas y cabras La infección por Brucella en ovejas y cabras (excepto la infección por B. ovis) está causada principalmente por las biovariedades de B. melitensis. En ovejas y cabras se han observado infecciones esporádicas causadas por B. abortus o B. suis, pero estos casos son extremadamente infrecuentes. La infección por Brucella en ovejas y cabras es endémica en la región del Mediterráneo, pero se dan casos en todo el mundo. América del Norte (excepto México) se considera libre del agente, del mismo modo que el norte y el centro de Europa, el sudeste asiático, Australia y Nueva Zelanda. Patológica y epidemiológicamente, la infección por B. melitensis en ovejas y cabras es muy similar a la infección por B. abortus en ganado bovino. En la mayoría de los casos, las vías principales de transmisión de Brucella son la placenta, los líquidos fetales y las secreciones vaginales expulsadas por las ovejas y cabras infectadas, ya sea al abortar o al parir a término. La expulsión de Brucella también es frecuente en las secreciones de la ubre y en el semen, y puede aislarse Brucella de distintos tejidos, como los ganglios linfáticos de la cabeza, el bazo y los órganos asociados a la reproducción (útero, epidídimo y testículos), así como de lesiones artríticas (Alton et al., 1988). Infección por Brucella en cerdos La infección por Brucella en cerdos está causada principalmente por las biovariedades 1, 2 o 3 de B. suis. En cerdos también se han observado infecciones esporádicas por B. abortus o B. melitensis, pero estos casos son muy infrecuentes. La enfermedad tiene lugar en muchos países en los que se crían cerdos. En general, la prevalencia es baja, pero en algunas regiones, como América del Sur o el sudeste asiático, la prevalencia puede ser mucho más alta. En algunos países, la brucelosis porcina puede ser un problema grave, aunque actualmente no reconocido. Se ha observado infección por la bv 1 de Brucella suis en jabalíes de algunos estados del sur de EE.UU., así como de Queensland (Australia) y de otros países de Oceanía. En estos países, se han documentado varias infecciones humanas en personas que practicaban la caza y manipulaban material obtenido de jabalíes. En general, la enfermedad se transmite por la ingesta de alimento contaminado por productos del parto o de un aborto, o bien por secreciones uterinas. Los cerdos se comen de inmediato los fetos abortados y las membranas fetales. La transmisión durante la copula también es frecuente, y la excreción de B suis en el semen tiene implicaciones para el personal que lleva a cabo la inseminación artificial. En los cerdos, como en los rumiantes, tras la bacteriemia inicial, B. suis coloniza las células del tracto reproductor de ambos sexos. En las hembras, resultan invadidas la placenta y los fetos, mientras que en los machos la invasión tiene lugar en uno o más de los siguientes tejidos: testículos, próstata, epidídimo, vesículas seminales o glándulas bulbouretrales. En los machos, las lesiones, que suelen ser unilaterales, empiezan con una hiperplasia que puede avanzar a absceso; la fase final se caracteriza por esclerosis y atrofia. Pueden aparecer artritis en varias articulaciones, y a veces tiene lugar una espondilitis. En las cerdas, el signo más frecuente de brucelosis es el aborto en cualquier momento de la gestación, aunque es más habitual entre los días 50 y 110. La secreción vaginal no suele ser evidente y, en los rebaños infectados de forma crónica, el signo clínico más relevante es la infertilidad, no el aborto. En los machos, la brucelosis tiene más probabilidades de ser persistente, y ocasiona lesiones en el tracto genital que a menudo dan lugar a una interferencia con la actividad sexual, que puede ser temporal o irreversible. El verraco puede excretar Brucella con el semen sin ninguna anomalía aparente en los órganos sexuales ni interferencia con la actividad sexual. En ambos sexos puede aparecer una tumefacción articular y de las vainas de los tendones, cojera y, en ocasiones, parálisis posterior. Un porcentaje considerable tanto de cerdos como de cerdas se recupera de la infección, a menudo en un plazo máximo de 6 meses, pero muchos quedan infectados de por vida (Olsen et al., 2012). La infección causada por la bv 2 de B. suis difiere de la causada por la bv 1 y la bv 3 en cuanto a la gama de hospedadores, la distribución y la patogenicidad. Históricamente, la distribución geográfica de la bv 2 de B. suis ha sido un amplio territorio situado entre Escandinavia y los Balcanes. La prevalencia en jabalíes parece ser Página 10 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �alta en toda Europa continental (EFSA, 2009). En los brotes de Europa, los jabalíes intervienen como fuente de transmisión de la bv 2 a cerdos criados en el exterior, y se consideran el principal reservorio salvaje de esta infección (EFSA, 2009). La bv 2 de Brucella suis causa lesiones miliares, sobre todo en tejidos reproductivos, que a menudo se vuelven purulentas. Hasta la fecha, la bv 2 se ha documentado en muy pocos casos como causa de brucelosis humana. No obstante, sí se han observado infecciones por la bv2 en cazadores con inmunocompromiso que hayan estado excesivamente expuestos debido a prácticas como el destripado y despellejado de jabalíes o liebres. Asimismo, en ganado bovino y ovino de Europa expuesto a jabalíes infectados, se han observado casos, aunque muy infrecuentes, de infección por la bv 2 de B. suis sin signos clínicos. Infección por Brucella en otras especies: domésticas, salvajes en cautiverio, o salvajes en libertad. Se ha observado infección por B. abortus y B. melitensis en el dromedario (Camelus dromedarius) y en el camello (C. bactrianus), así como en camélidos de América del Sur: la llama (Lama glama), la alpaca (Lama pacos), el guanaco (Lama guanicoe) y la vicuña (Vicugne vicugne), y se ha relacionado con el contacto con rumiantes grandes y pequeños infectados por B. abortus y B. melitensis. Asimismo, se ha observado brucelosis en el búfalo doméstico (Bubalus bubalis), el bisonte americano y el europeo (Bison bison y B. bonasus, respectivamente), el yak (Bos grunniens), el elk/wapiti (Cervus elaphus), el búfalo africano (Syncerus caffer) y varias especies de antílopes de África. Los signos clínicos de brucelosis en estos animales son similares a los que se observan en el ganado bovino, ovino y caprino. La infección por Brucella melitensis en rumiantes salvajes puede tener lugar cuando estas especies se encuentran en estrecho contacto con ovejas y cabras de zonas enzoóticas. Los signos de la brucelosis en estos animales son similares a los que se observan en bovinos, ovinos y caprinos, pero en varias especies de rumiantes salvajes (como el rebeco [Rupicapra rupicapra], el íbex alpino [Capra ibex] y la cabra ibérica [Capra pyrenaica] salvaje), se ha observado artritis purulenta o calcificada y orquitis, así como uveítis y problemas neurológicos. Estas especies se consideran portadores terminales, que no pueden transmitir la enfermedad, la cual suele desaparecer de forma natural en cuanto la infección por Brucella se ha erradicado del ganado doméstico, a no ser que tengan lugar efectos antropogénicos. Existen dos tipos distintos de situación epidemiológica respecto a la infección por B. suis en otras especies no porcinas. En el primer caso, la infección por B. suis tiene lugar en animales que no son el hospedador natural de la infección concreta mediante la ingesta de materiales contaminados o por co-habitación con hospedadores naturales infectados. Por ejemplo, zorros y lobos del ártico pueden contraer la bv 4 de B. suis del reno; los perros y los roedores, como ratas o ratones, pueden contraer otras biovariedades de B. suis por cohabitación con hospedadores infectados; y el ganado bovino y los caballos pueden resultar infectados por cohabitación o interacción con porcinos infectados. Las bacterias infectantes pertenecen siempre a las biovariedades definidas de especies hospedadoras naturales. En el segundo caso, los hospedadores naturales de B. suis o microrganismos similares a B. suis son especies salvajes. Un ejemplo es la denominada brucelosis murina de la Comunidad de Estados Independientes (CIS) y los países bálticos, donde pequeños roedores resultan infectados por la bv 5 de B. suis. Una situación similar se ha observado en Australia, donde, a partir de roedores, se han aislado cepas parecidas a B. suis pero con características distintas; finalmente se ha considerado que son distintas de B. suis en base al perfil genético. Además del jabalí, la liebre común europea (Lepus europaeus) también se considera reservorio de la bv 2 de B. suis y se ha observado que interviene como posible fuente de transmisión al ganado doméstico. En la liebre común europea, la enfermedad se caracteriza por la formación de nódulos, de tamaños variables comprendidos entre el de una semilla de mijo y el de una cereza o incluso mayor; a menudo se vuelven purulentos. Estos nódulos pueden tener lugar en casi cualquier lugar, a veces en el tejido subcutáneo o intramuscular, en el bazo, el hígado o los pulmones y en los órganos reproductivos de ambos sexos. La condición corporal de la liebre puede quedar sorprendentemente intacta. Otras especies también pueden resultar infectadas por cohabitación con cerdos, jabalíes o liebres infectados por la bv 2 de B. suis. El destripado o despellejado de jabalíes en explotaciones bovinas podría ser una vía de transmisión al ganado bovino. La bv 4 de Brucella suis causa una zoonosis grave en renos salvajes o domesticados (Rangifer tarandus y sus distintas subespecies) en toda la región del Ártico, incluidos Siberia, Canadá y Alaska. Rangifer tarandus es muy susceptible a la infección por B. suis, que causa fiebre, abatimiento y distintos signos locales, como aborto, Página 11 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �retención de placenta, metritis, a veces con secreciones sanguinolentas, mastitis, bursitis y orquitis. La transmisión al ser humano puede tener lugar por contacto directo o por el consumo de leche cruda u otros productos cocidos de manera insuficiente procedentes del reno, especialmente la médula ósea. Riesgo zoonótico y requisitos de bioseguridad La infección por Brucella es fácilmente transmisible al ser humano, en el que causa un proceso febril (fiebre ondulante) que puede avanzar a una forma más crónica y también producir complicaciones graves que afecten a los sistemas músculo esquelético, cardiovascular y al sistema nervioso central. Deben aplicarse medidas de precaución para prevenir la infección humana. La infección se contrae básicamente por vía oral, respiratoria o conjuntival, pero la ingesta de productos lácteos crudos constituye el principal riesgo para el público general en los lugares en los que la enfermedad es endémica. Existe un riesgo ocupacional en veterinarios, trabajadores de mataderos y ganaderos que manipulen animales/canales infectados y fetos abortados o placentas. La brucelosis también es una de las infecciones de laboratorio más fáciles de contraer, y todas las manipulaciones de laboratorio relacionadas con cultivos vivos o material que pueda estar infectado o contaminado deben realizarse a un nivel de bioseguridad y contención adecuado, que se determinará a partir de un análisis del riesgo biológico Se han realizado recomendaciones específicas relativas a las precauciones en materia de bioseguridad que deben aplicarse con los materiales infectados por Brucella (se ofrece más información en Alton et al., 1988; Comité Mixto FAO/OMS de Expertos en Brucelosis, 1986; OMS, 1953; OMS, 2004). Todos los abortos en el ganado deben considerarse como casos sospechosos de brucelosis y deberían investigarse. El cuadro clínico no es patognomónico, aunque la historia del rebaño puede servir de ayuda. El diagnóstico inequívoco de infecciones por Brucella solo puede hacerse por aislamiento e identificación de Brucella, pero en situaciones en las que no es posible el análisis bacteriológico, el diagnóstico puede basarse en métodos serológicos. TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO Pruebas serológicas No existe una prueba única que permita la identificación de Brucella. Normalmente se necesita una combinación de los métodos serológicos y bacteriológicos. Ninguna prueba serológica aislada es adecuada en todas y cada una de las situaciones epidemiológicas, presentando limitaciones en el análisis de animales individuales. Se deben considerar todos los factores que influyen en la relevancia del método de prueba y de sus resultados para una aplicación o interpretación diagnóstica específica. Los métodos serológicos que se describen en esté manual son métodos estandarizados y validados, con características de realización adecuadas para ser consideradas pruebas obligadas o alternativas en el comercio internacional. Esto no impide el uso de pruebas modificadas o similares o la utilización de reactivos diferentes. Sin embargo, los métodos y reactivos descritos en esté manual suponen un estándar de comparación respecto a la realización esperada del diagnóstico. Debe resaltarse que la prueba de seroaglutinación lenta en tubo (SAT) se considera inadecuada a efectos del comercio internacional. La prueba de fijación de complemento (FCT) es más específica que la SAT para el diagnóstico y además posee un sistema estandarizado de unidades. Para el control de la brucelosis a nivel nacional o local, son adecuadas para el análisis las pruebas con antígeno tamponado de Brucella, es decir, la prueba con rosa de bengala (RBT) y la prueba de aglutinación tamponada en placa (BPAT), así como el Enzimoinmunoensayo (ELISA) y el Ensayo de Polarización Fluorescente (FPA). Las reacciones positivas deben volverse a analizar utilizando una estrategia confirmatoria adecuada. En otras especies, como por ejemplo en búfalos (Bubalus bubalus), bisonte americano y europeo (Bison bison, Bison bonasus), yak (Bos grunniens), elk/wapiti (Cervus elaphus), camellos (Camelus dromedarius, C.bactrianus) y camélidos sudamericanos, la infección por Brucella sigue un curso similar al del ganado bovino. Para estos animales pueden utilizarse los mismos procedimientos serológicos, pero cada uno debe ser validado en el animal estudiado. Página 12 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Tabla 1. Métodos analíticos disponibles para el diagnóstico de infección por Brucella abortus, melitensis o suis. (Manual OIE 2016) Propósito Método Demostrar ausencia de infección en la población Demostrar ausencia de infección en animales individualesa Contribuir a las políticas de erradicaciónb Confirmar casos clínicos sospechososc Determinar la prevalencia de la infección – vigilancia en el rebaño / manada Determinar el estado inmunitario en animales individuales o en poblaciones tras la vacunación Identificación del agente Métodos de tinción - - - + - n/a Cultivo - - - +++ - n/a - - - +/++ - n/a d PCR Detección de la respuesta inmune BBAT (RBT o BPAT) +++ ++ +++ + +++ n/a FPA ++ ++ + ++ ++ n/a CFT ++ ++ +++ ++ +++ n/a I-ELISA +++ ++ +++ ++ +++ n/a C-ELISA ++ + + + ++ n/a BST ++ - + +++ ++ n/a SAT ++ + + - + n/a Pruebas basadas en el NH y proteínas del citosole - - + ++ - n/a Prueba en leche de tanquef IELISA en leche o prueba de anillo en leche +++ - +++ + +++ n/a Clave: +++ = método recomendado; ++ = método adecuado; + = puede utilizarse en ciertas situaciones, pero el costo, la fiabilidad u otros factores limitan su aplicación; - = no adecuado para esta finalidad; n/a = no aplicable. PCR = reacción en cadena de la polimerasa; BBAT = pruebas con antígeno tamponado de Brucella (es decir, RBT [rosa de bengala] y BPAT [prueba de aglutinación en placa tamponada]); CFT = fijación de complemento; I- o C-ELISA =enzimoinmunoanálisis indirecto de competición; FPA = prueba de polarización de la fluorescencia; BST = prueba de la brucelina; SAT = prueba de aglutinación en suero; NH = hapteno nativo a Solo aplicable a rebaños / manadas, países o zonas libres de la infección por Brucella. bp Para aumentar la eficiencia de las políticas de erradicación en rebaños/manadas, se recomienda combinar pruebas para aumentar la sensibilidad en cuanto al diagnóstico, es decir, al menos dos pruebas serológicas, como BBAT o FPA y CFT o IELISA. La sensibilidad aumenta aún más si se aplica simultáneamente serológica y BST. c En zonas de prevalencia baja o casi libres, el valor predictivo de los resultados positivos en las pruebas serológicas puede ser muy bajo. En tales situaciones, para confirmar casos clínicos suele ser necesario identificar el agente causal. En rebaños/manadas infectados, un resultado positivo en cualquier prueba serológica puede considerarse una confirmación de un caso clínico. Todo animal que dé positivo en cualquier prueba debe considerarse infectado, incluso en ausencia de signos clínicos. En zonas de prevalencia baja o casi libres, los resultados positivos aislados pueden confirmarse mediante cultivo (o PCR) o BST. En países o zonas libres, los animales sospechosos son los que dan positivo tanto en una prueba serológica de cribado como en una confirmativa (pruebas en serie) y pueden confirmarse mediante cultivo (o PCR) y/o BST. d Es posible que se obtenga falsos positivos. e En las zonas en las que se practica la vacunación subcutánea con S19 o Rev. 1, esta prueba puede ayudar a diferenciar entre los anticuerpos generados a partir de la vacunación y los generadores a partir de la infección. f Solo ganado lechero. Página 13 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �PROCEDIMIENTOS DE TRABAJO PARA EL DIAGNÓSTICO DE BRUCELOSIS EN EL LABORATORIO DE RED REGISTRO DE ENTRADA DE MUESTRAS Todo laboratorio debe contar con un instructivo o procedimiento de recepción, manejo y rechazo de muestras. Es responsabilidad del veterinario acreditado que envía las muestras asegurarse la correcta identificación, embalaje y documentación que acompaña a las mismas. Los laboratorios deben contar con un registro de entrada de muestras (en papel o software con backup), en el que figure como mínimo la siguiente información: ▪ Fecha de recepción de muestras. ▪ Cantidad de muestras. ▪ Especie. ▪ Fecha de extracción de muestras. ▪ Procedencia: establecimiento, número de RENSPA. ▪ Localidad: Departamento, Partido, Provincia. ▪ Remitente: veterinario acreditado, nombre y número de registro, otorgado por la Dirección Nacional de Sanidad Animal (DNSA), SENASA. ▪ Motivo del envío: • DOES (Determinación Obligatoria del Estatus Sanitario), • MuVe (Muestreo de Vigilancia Epidemiológica Para Mantenimiento del Estatus), • SAN (Saneamiento de Rodeo Bajo Plan), CSM (Certificado de Seronegatividad para el Movimiento), • Control Interno (Según Requerimiento de Veterinario Acreditado), • Re-muestreo, otros. CARACTERISTICAS Y CONDICIONES DE LAS MUESTRAS Condiciones de "recepción" de las muestras: ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Sangre entera o suero refrigerados. Suero congelado. Leche para PAL refrigerada (No congelada) Leche para IELISA refrigerada/congelada Tubos con identificación clara, de preferencia sobre cinta de papel o similar adherida al tubo; otra opción es la marcación firme e indeleble en el cuerpo del tubo. Planillas/protocolo completas de toma de muestras (Anexo II, Resolución SENASA 67/2019). Condiciones de "rechazo" o demora del procesamiento de las muestras: ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Falta de planillas/protocolo o planillas incompletas de toma de muestras (Anexo II, Resolución SENASA 67/2019). Falta de la firma del veterinario acreditado en la planilla de extracción, responsable de la toma de muestra. Sangre entera congelada. Leche para PAL congelada, contaminada. Sangre entera o suero, contaminados. Sueros hemolizados. Tubos no identificados. Volumen insuficiente. Página 14 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Los Laboratorios reconocidos y autorizados deben ser exigentes con la calidad de las muestras a procesar, como así también con la planilla de toma de muestra firmada por el veterinario acreditado actuante que debe acompañar a las muestras. Informes de resultados Los informes que elabore el Laboratorio deben ser precisos para poder desarrollar adecuadamente las acciones de saneamiento (Ver modelo Anexo II del presente Manual). En el informe de resultados debe constar: ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Logo del Laboratorio/Dirección/Tel/email/ Nº de L N° de Protocolo interno. Fecha de extracción de muestras. Fecha de recepción de muestras. Fecha de informe o emisión de resultados. Cantidad de muestras. Especie. Procedencia: establecimiento, número de RENSPA. Localidad: departamento, partido, provincia. Remitente: Veterinario acreditado, nombre y número de registro, otorgado por la Dirección Nacional de Sanidad Animal (DNSA), SENASA. Motivo del envío: DOES (Determinación Obligatoria del Estatus Sanitario), MuVe (Muestreo de Vigilancia Epidemiológica Para Mantenimiento del Estatus), SAN (Saneamiento de Rodeo Bajo Plan), CSM (Certificado de Seronegatividad para el Movimiento), Control Interno (Según Requerimiento de Veterinario Acreditado), Remuestreo. Columnas con la información del tubo/caravanas/edad/fecha de vacunación/pruebas utilizadas/Resultados con los valores obtenidos (SAT-2ME, ELISA, FCT, FPA), valor de corte e interpretación cuando corresponda. Información de los antígenos/kits utilizados. Firma del Director Técnico del Laboratorio. Observaciones. Paginación x de y. Que conste en todas las páginas N° del protocolo y N° de RENSPA. Página 15 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Figura 1: Diagrama de diagnóstico serológico de Brucelosis en la República Argentina Animales a examinar: Hembras vacunadas mayores de 18 meses Animales no vacunados mayores de 6 meses * * Solo en bovinos Página 16 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �PRUEBAS SCREENING CON ANTÍGENO TAMPONADO EN PLACA (BPAT y RBT) PARA LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA Brucella spp Son pruebas tamiz de aglutinación en placa. Se fundamentan en la inhibición de las aglutininas inespecíficas a bajo pH. Detectan anticuerpos IgG y algunos IgM específicos. DESARROLLO Materiales ▪ ▪ ▪ ▪ Micropipetas de10-100 µl. Gradillas. Caja de lectura o aglutinoscopio (aproximadamente de 45cm de largo x 35 cm de ancho x 15 cm de profundidad) con tapa, provista de una placa de vidrio marcada con cuadrados de aproximadamente 4 cm de lado, que se apoya cerca de la parte superior de la caja de manera que pueda quitarse y ponerse fácilmente. La caja debe estar iluminada de modo que la luz incida oblicuamente y por debajo (cubiertas parcialmente), de la mezcla de suero y antígeno. El interior de la caja debe pintarse de negro opaco. Debe colocarse dentro del aglutinoscopio una pequeña cámara húmeda para evitar la evaporación de las muestras. Mezcladores de acero o plástico. Equipos ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Heladera con temperatura controlada (5 ± 3 ºC). Freezer con temperatura controlada (-20ºC ± 5°C). Vórtex. Centrífuga. Timer. Reactivos ▪ ▪ Antígeno BPAT con volumen celular aprox. de 11%. Antígeno Rosa de Bengala, volumen celular aprox. de 8%. Conservar el Antígeno en la heladera a 5 ±3 °C. No se debe congelar, lo cual lo inutiliza, ya que se modifica la sensibilidad. ▪ ▪ ▪ Suero control interno positivo. Suero control interno negativo. Cada Laboratorio debe preparar sus sueros controles internos de trabajo positivo y negativo, codificarlos, utilizarlos cada día de trabajo y registrarlos. EJECUCIÓN DEL ENSAYO DE BPAT ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Descongelar y mezclar bien los sueros utilizando vórtex. Llevar las muestras de suero y antígeno a temperatura ambiente (22 ± 4 ºC) como mínimo unos 45-60 minutos previos a la realización del ensayo. Garantizar la homogeinización del antígeno, agitando suavemente por inversión durante no menos 10 minutos (No usar vórtex). Colocar sobre el aglutinoscopio (con cámara húmeda), la placa de vidrio (limpia y seca), se recomienda pasar papel absorbente embebido en alcohol 70º de ambos lados de la misma. Con micropipeta automática apoyada sobre la placa de vidrio, se depositan 80 µl de suero, previo mezclado con vortex. Utilizar un tip o punta de pipeta para cada suero. Con micropipeta descargar 30 µl de antígeno próximo a la gota del suero, con la precaución de no tocar el suero para no contaminar con el tip el frasco de antígeno. Página 17 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �▪ ▪ Mezclar bien, con mezclador de acero o plástico, el suero con el antígeno abarcando una superficie circular aproximada de 3 cm de diámetro. Se retira la placa de vidrio y se imprimen 3 movimientos en forma rotativa hasta homogeinizar la mezcla. Se coloca la placa sobre el aglutinoscopio con cámara húmeda y se tapa, permaneciendo la luz apagada. Se efectúa una nueva rotación, pasados 4 minutos. A los 8 minutos, rotando de nuevo la placa y con la luz encendida, se procede a la lectura. Figura 2: Aglutinoscopio EJECUCIÓN DEL ENSAYO DE ROSA DE BENGALA ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Colocar la placa de vidrio sobre el aglutinoscopio, como se indicó en la prueba de BPAT. Con micropipeta automática apoyada sobre la placa de vidrio, se depositan 30 µl de suero. Utilizar un tip para cada suero. Con micropipeta descargar 30 µl de antígeno próximo a la gota de suero. Se mezcla bien, con mezclador de acero o plástico, el suero con el antígeno, abarcando una superficie circular de aproximadamente 2 cm. de diámetro. Se retira la placa de vidrio y se imprimen movimientos en forma rotativa durante 4 minutos a razón de 10 a 12 movimientos por minuto. Esto se puede hacer en forma manual o con rotadores diseñados especialmente. Finalizados los 4 minutos y rotando la placa sobre la caja de lectura o aglutinoscopio con la luz encendida, se procede a la lectura sobre fondo blanco. En el caso de muestras de sueros caprinos y ovinos, la OIE recomienda utilizar la prueba de Rosa de Bengala modificado (RBTm), el cual consiste en mezclar 75 µl de suero y 25 µl de antígeno. Lectura a los 4 minutos, como se detalle en la explicación anterior. Página 18 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Lectura e interpretación de resultados de las pruebas de screening con antígeno tamponado en placa Las reacciones se clasifican en: POSITIVAS: Cuando se forman grumos, aún siendo finos (no confundir con aglutinaciones inespecíficas producidos por impurezas, hemólisis, etc.). Estas muestras deben someterse a las pruebas confirmatorias de SAT/2-ME, FPA, CELISA o FCT. NEGATIVAS: Cuando la mezcla suero-antígeno es de turbidez homogénea y sin grumos. Estas muestras se informan como negativas y no se realizan las pruebas complementarias. Figura 3: Lectura BPAT/RBT BPAT RBT Informe de resultados Se aceptan las siguientes expresiones de resultados en las planillas Positivo Negativo + - POS NEG P N Criterios de aceptación del resultado En paralelo a las muestras problemas se dispensan los sueros controles internos negativo y positivo. Para aceptar los resultados, ambos controles deben arrojar la lectura correspondiente. Si los controles no arrojan la lectura esperada, se debe revisar las posibles causas, calidad de los sueros controles, antígeno, calibración de pipetas, etc. Página 19 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �PRUEBAS DE SERO-AGLUTINACIÓN LENTA EN TUBO (SAT/ 2-ME) Las pruebas de seroaglutinación detectan la presencia de los anticuerpos IgM e IgG. Los anticuerpos IgM aglutinan más intensamente que los IgG ya que, al ser las moléculas pentavalentes, poseen un mayor número de sitios de unión. El título de un suero se determina por la inversa de la dilución más alta que causa un determinado grado de aglutinación y se expresa en unidades que corresponden al recíproco de esa dilución. La prueba de 2-Mercaptoethanol es una prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG, se basa en que los anticuerpos IgM, con configuración de pentámero, se degradan en cinco subunidades semejantes por la reducción de enlaces disulfuro, debido a la acción de ciertos compuestos que contienen el radical tiol, tales como el 2- mercaptoethanol. Estas subunidades conservan sus características de antigenicidad, pero pierden la actividad de anticuerpo plurivalente y se comportan como univalentes. Aún cuando las subunidades están integradas por dos cadenas pesadas y dos livianas, al combinarse con el antígeno no originan complejos suficientemente grandes como para aglutinar, probablemente como consecuencia de algún impedimento estérico. Las moléculas de IgG, en cambio, no sufren un efecto obvio que altere su actividad para dar reacciones objetivas como la aglutinación. La prueba se usa, por lo tanto, como evidencia presuntiva de la presencia de anticuerpos de la clase IgG. DESARROLLO Materiales ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Micropipetas de10-100 µl. Gradillas. ▪ Caja de lectura o aglutinoscopio (aproximadamente de 45cm de largo x 35 cm de ancho x 15 cm de profundidad) con tapa. La caja debe estar iluminada de modo que la luz incida oblicuamente y por debajo (cubiertas parcialmente). El interior de la caja debe pintarse de negro opaco. Tubos de serología: tipo Wasserman de 13 por 100 mm o tubos de Khan de vidrio. Probetas (100ml y 1000ml). Pipetas 1, 2, 5 y 10ml. Recipientes de vidrio de volúmenes variados. Propipetas. Dispensador automático o pipetas graduadas de 1-10ml. Reactivos 1. Antígeno SAT, volumen celular aprox.4.5%. Conservar el Antígeno en la heladera a 5 ±3 °C. No se debe congelar, lo cual lo inutiliza, ya que se modifica la sensibilidad 2. Suero control interno positivo. 3. Suero control interno negativo. Cada Laboratorio debe preparar sus sueros controles internos de trabajo positivo (determinar el título) y negativo, codificarlos, utilizarlos cada día de trabajo y registrarlos. Página 20 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Equipos: ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Heladera con temperatura controlada (5 ± 3 ºC). Freezer con temperatura controlada (-20ºC ± 5°C). Estufa con temperatura controlada (37ºC ± 2). Balanza. Vórtex. Centrífuga. Timer. Termómetro calibrado. Drogas y Soluciones: (Tener copia impresa de la hoja de seguridad de cada droga) ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Cloruro de Sodio p.a. Fenol p.a. 2- Mercaptoethanol p.a. Solución salina al 0.85%. Solución salina fenolada al 0,5%. Ejecución del ensayo a) Consideraciones generales: ▪ ▪ Las muestras que resulten positivas a BPAT o RBT deben confirmarse por las técnicas de SAT y 2-Mercaptoethanol, CELISA, FPA o FCT. La existencia de hemólisis excluye el empleo del método de tubo y placa. La presencia de hemólisis en las muestras de suero interfiere en la prueba de aglutinación en tubo, no sólo porque la coloración puede enmascarar la reacción de aglutinación, sino porque se forma un precipitado como resultado de la acción del fenol que contiene la solución de antígeno sobre la hemoglobina libre. Es muy difícil distinguir esta falsa reacción, de la aglutinación específica de la unión antígeno-anticuerpo. b) Desarrollo: Ambas pruebas (SAT y 2-ME) se realizan simultáneamente procediendo de la siguiente manera: ▪ Descongelar y mezclar bien los sueros utilizando vórtex. ▪ Llevar las muestras de suero y de antígeno a temperatura ambiente 22 ± 4 ºC al menos una hora antes de la ejecución del ensayo. ▪ Garantizar la homogeneización del antígeno, agitando suavemente por inversión durante no menos de 10 minutos (No usar vórtex). ▪ Por cada muestra de suero problema positivo a BPAT, colocar en una gradilla 1 hilera de 8 tubos de 13 x 100 mm o tubos de Khan. Identificar la gradilla con el número de protocolo. ▪ Identificar el primer tubo de cada hilera con el número correspondiente al suero problema. En los primeros 4 tubos se realiza la prueba de SAT; se deja un espacio libre y en los 4 tubos siguientes de la misma hilera, se realiza la prueba de 2-ME. ▪ Por cada muestra de suero debidamente identificada, se utilizan tubos en los cuales se dispensa con micropipeta 80 µl de suero en el fondo del primer tubo, 40 µl se distribuyen en el segundo tubo, 20 µl en el tercero y 10 µl en el cuarto. ▪ Repetir el procedimiento descripto para depositar las mismas cantidades de suero en los tubos de 2-ME. ▪ Incluir un suero control interno positivo (título conocido) y negativo y, un control de soluciones y antígeno sin suero. Página 21 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �▪ Con un dispensador automático o con micropipeta de 1 ml, agregar 1 ml de solución de 2mercaptoethanol (0,1 M) en cada tubo del grupo de 2-ME y mezclar muy bien agitando la gradilla. ▪ Con un dispensador automático o con micropipeta de 1 ml, agregar 1 ml de solución salina fenolada al 0,5 % a cada uno de los tubos del grupo de SAT. ▪ Dejar las gradillas con las mezclas durante 45 a 60 minutos a temperatura ambiente 22 ± 4 ºC y posteriormente, dispensar a cada tubo 1 ml de antígeno de SAT diluido al 2 % (0,09 %) en solución salina 0,85%. ▪ Mezclar bien agitando la gradilla y llevar a estufa. Incubación La incubación se realiza a 37 ± 2 ºC durante 40-48 hs. y tiene por objeto obtener en el tiempo más corto posible el máximo de aglutinación. Se recomienda tomar y registrar las temperaturas máximas y mínimas de la estufa durante el transcurso de las 40-48 hs. de la incubación, para verificar la estabilidad de la estufa. c) Lectura e interpretación de resultados Una vez finalizada la incubación de las muestras, se realiza la lectura de las pruebas contra el fondo negro opaco de la caja de lectura o aglutinoscopio, iluminada desde atrás con una fuerte luz que atraviese los tubos. La aglutinación del complejo antígeno-anticuerpo bajo la forma de grumos y su depósito en el fondo del tubo por gravedad, determina la clarificación de la columna de líquido en el tubo, manteniéndose los grumos firmes después de una leve agitación del tubo. La aglutinación es el resultado directo de la unión específica de los anticuerpos presentes en el suero, con las Brucellas inactivadas contenidas en el antígeno. Las determinaciones se deben basar tanto en la claridad/turbidez de las mezclas como en el grado de aglutinación y la firmeza de los grumos al agitar suavemente el tubo. El título se determina por la inversa de la dilución más alta donde se observa aglutinación en el tubo, en el que se presenta una disminución evidente de la turbidez, manteniéndose los grumos firmes a pesar de una agitación leve. Si esto ocurre, por ejemplo, en los 3 primeros tubos solamente, el título del suero (recíproco de la dilución) es de 100 UI/ml de aglutinación en SAT o en 2-ME. El grado de aglutinación en cada una de las distintas diluciones puede clasificarse como completo (+), incompleto (I) o negativo (-). Aglutinación completa es aquélla en que el líquido de la mezcla suero- antígeno aparece límpido, translúcido y la agitación suave no rompe los grumos. Aglutinación incompleta es la que muestra la mezcla suero-antígeno parcialmente turbia y una suave agitación no rompe los grumos. Negativa es aquélla en que la mezcla suero-antígeno no evidencia aglutinación, la columna líquida aparece turbia y una suave agitación no revela grumos. Fenómeno de zona En ciertas ocasiones, puede ocurrir que se encuentre aglutinación en las diluciones más altas, pero no en las diluciones más bajas. Esta inhibición de la aglutinación en las diluciones bajas es llamada “fenómeno de zona” y está asociado a un exceso en la concentración de anticuerpos en el suero en las diluciones más bajas, provocando una aglutinación no visible por estar fuera de la zona de equivalencia de la unión antígeno-anticuerpo. Página 22 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Figura 4: Esquema Prueba simultánea de SAT y 2-ME Página 23 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Informe de Resultados Ejemplo Negativo Neg I 25 25 1/25 I: Incompleto Tabla 2: Interpretación de los resultados para Hembras Bovinas mayores de 18 meses de edad vacunadas con vacuna Brucella abortus cepa 19 entre los 3 a 8 meses de edad BPAT SAT 2-ME INTERPRETACION - NH * NH NEGATIVO + ≤ 50 - NEGATIVO + I 100 - SOSPECHOSO + 100 - SOSPECHOSO + I 200 - SOSPECHOSO + 200 - POSITIVO + 25 a 50 I 25 NEGATIVO + ≤ 25 ≤ 25 NEGATIVO + ≥ I 50 ≥ I 50 POSITIVO * NH: No se hace Tabla 3: Interpretación de los resultados para animales no vacunados (Bovinos y otras especies) mayores de 6 meses de edad BPA SAT 2-ME INTERPRETACION - NH NH NEGATIVO + 25 - NEGATIVO + I 50 - SOSPECHOSO + 50 - SOSPECHOSO + I 100 - SOSPECHOSO + 100 - POSITIVO + 200 - POSITIVO + ≥ 25 ≥ 25 POSITIVO Página 24 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Preparación de Soluciones para las pruebas de SAT/2-ME SOLUCIÓN SALINA 0,14 M • • Cloruro de Sodio Agua destilada 8,5 g 1000 ml SOLUCIÓN SALINA FENOLADA Solución salina 0,14 M con la adición de 0,5 % de fenol. Conservar a temperatura ambiente por un plazo de 30 días. Se recomienda preparar el volumen necesario de trabajo diario o semanal. SOLUCIÓN 2-MERCAPTOETHANOL 0,1 M • 2-Mercaptoethanol • Solución salina 0,14M. (No utilizar solución salina fenolada) 7,8ml 992,2ml El 2-Mercaptoethanol es sensible a la luz y al calor y se deteriora rápidamente por exposición al aire. Se debe conservar en frasco color ámbar herméticamente cerrado a temperatura ambiente (22ºC ± 4 ºC). Leer detenidamente la hoja de seguridad. Evitar la inhalación, manipularlo en lo posible con máscara de gases o en cabina de extracción. NUNCA pipetear con la boca. La solución de 2-Mercaptoethanol ya preparada se puede conservar por una semana a temperatura ambiente (22ºC ± 4 ºC). Se recomienda preparar el volumen necesario de trabajo diario o semanal. SOLUCIÓN DE ANTÍGENO SAT (WRIGHT) al 2% • • • Solución salina 0,14M (no utilizar solución salina fenolada) 98ml Antígeno SAT (Wright) (4,5%) 2ml • La solución de antígeno al 2% se puede conservar por una semana en heladera (5ºC ± 3ºC). Descartar toda aquella solución que presenten turbidez o signos de contaminación. Página 25 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE (PAL o MRT) solo para Bovinos La prueba se diseño para detectar la presencia de anticuerpos en leche de bovinos. Estos anticuerpos reaccionan con el antígeno coloreado con hematoxilina formando un complejo antígeno anticuerpo que queda adherido a la superficie de los glóbulos grasos y asciende con ellos a la superficie, formando una capa o anillo de crema de color púrpura azulada, de intensidad variable según el grado de la reacción. Paralelamente, desaparece parcial o totalmente la tinción de la columna de leche. Si la muestra no contiene anticuerpos específicos, el antígeno no se fijará a los glóbulos grasos y permanecerá uniformemente distribuido, coloreando la columna de leche, mientras que la capa de crema forma un anillo de color blanco natural. El porcentaje de grasa de la muestra influye en la prueba, ya que la formación del anillo de crema en la superficie dependerá del tenor graso. La prueba de anillo en leche se usa especialmente como diagnóstico presuntivo para detectar rebaños infectados. También se emplea en la vigilancia epidemiológica en áreas de control de la brucelosis. Los animales de rebaños positivos a la prueba de anillo en leche deben ser examinados por las pruebas serológicas para identificar los infectados. Materiales ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Tubos de serología: tipo Wassermann de 13 mm por 100 mm, o tubos de khan de vidrio claro y completamente limpio. Pipetas 1 ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml. Micropipetas de 10 a 100 µl y 1 ml. Gradillas. Timer. Reactivos 1. Antígeno PAL con volumen celular aprox.4%. Conservar el Antígeno en la heladera a 5 ± 3 °C. No se debe congelar, lo cual lo inutiliza, ya que se modifica la sensibilidad 2. 3. 4. Muestras de leche refrigerada (No congelada) Solución de formalina 1%. Muestras de leche controles positivo y negativo. Equipos: ▪ ▪ ▪ Heladera con temperatura controlada (5ºC ± 3 ºC). Estufa con temperatura controlada (37 ºC ± 2ºC). Termómetro calibrado. Toma de la muestra La prueba se lleva a cabo con la muestra de leche de tanque. Si es necesario, las muestras se pueden pre tratar con un conservante (formalina al 0,1%) durante 2–3 días a 5°C ± 3°C antes de su utilización. En el campo, tan pronto se ha llenado el tarro y antes de que la crema suba, revolver bien el contenido y tomar unos 50 ml de leche. Si es necesario, agregar 1 ml de solución de formalina al 1% por cada 10 ml de leche. Las muestras, bien identificadas, se transportan refrigeradas hasta el laboratorio. Página 26 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Ejecución del ensayo Las muestras de leche se deben mantener en refrigeración a una temperatura de 5ºC ± 3 ºC hasta que hayan transcurrido no menos de 24 horas desde su recolección (preferiblemente, 48 a 72 horas). Las muestras de leche no deben haber sido congeladas, calentadas, sometidas a agitación violenta ni conservadas durante más de 72 horas. Llevar las muestras de leche y antígeno a temperatura ambiente (22 ± 4 ºC) como mínimo unos 45-60 minutos previos a la realización del ensayo. Mezclar cada muestra invirtiendo varias veces el recipiente (tubo o frasco). Garantizar la homogeinización del antígeno, agitando suavemente por inversión durante no menos 10 minutos (No usar vórtex). Colocar 1 ml de la muestra en un tubo de vidrio 13 x 100mm o tubo de khan. La altura de la columna de leche en el tubo debe ser como mínimo de 25 mm. Agregar 30 µl de antígeno a cada tubo. Mezclar bien invirtiendo el tubo varias veces, sin que se llegue a formar espuma. No debe quedar antígeno sobre las paredes. Incubar en estufa a 37ºC ±2 ºC, durante una hora. Lectura - Anillo de crema, blanco; columna de leche, azul. + ++ +++ ++++ Anillo de crema y columna de crema, del mismo color, o casi igual. Anillo de crema de color más pronunciado que la columna de leche. Anillo de crema, azul oscuro; la columna de leche tiene aún un poco de color. Anillo de crema, azul oscuro; la columna de leche es blanca. Cualquier grado de + debe interpretarse como Positivo Observaciones El exceso o la escasez de crema dificultan la interpretación de la prueba. La agitación vigorosa dificulta la realización de la prueba. El calentamiento de la leche interfiere con los resultados; por lo tanto, la prueba no se puede efectuar con leches pasteurizadas. Cuando la prueba se efectúa el mismo día en que se ha recolectando la leche, se pueden obtener algunos resultados falsos positivos o dudosos. La leche de calostro puede dar resultados falsos positivos. La leche de vacas con mastitis también puede dar falsos positivos o impedir la interpretación de la prueba debido al descoloramiento del antígeno. La leche de vacas próximas a secarse puede dar resultados dudosos o falsos positivos. Hay vacas infectadas con Brucella que no eliminan anticuerpos por la leche. Estas vacas son positivas en las pruebas de sangre y negativas en la prueba del anillo. Página 27 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Modificación de la prueba para tanques muy grandes Para hacer más sensible la prueba, aumentar la cantidad de leche, manteniendo constante la cantidad del antígeno (30 µl). Cuando se ajusta la PAL para aplicarla a rebaños de gran tamaño (utilizándose 2 o 3 ml de leche), se añaden 0,1 ml de una mezcla de crema negativa no pasteurizada al tubo de ensayo y a continuación, 30 µl del antígeno de la prueba del anillo. Después de mezclar, la prueba se incuba y se lee de la misma forma que para la PAL no ajustada. La mezcla de crema negativa se recoge mediante la separación de la leche compuesta por varias muestras y sin pasteurizar correspondiente a un rebaño de 25 o más vacas que sean negativas a brucelosis. < 150 vacas 150 – 450 vacas 451- 700 vacas 1 ml de leche 2 ml de leche 3 ml de leche Figura 5: Prueba de vigilancia epidemiológica para muestras de pool de leche Página 28 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �ENZIMOINMUNOENSAYO INDIRECTO (I ELISA) (Para suero o leche) Se realiza siguiendo el protocolo de los kits comerciales validados y aprobados para el diagnóstico oficial de la brucelosis en la República Argentina con el valor de corte establecido por SENASA. El enzimoinmunoensayo (ELISA) es un método empleado habitualmente para la detección y/o cuantificación de sustancias, generalmente proteínas, que se encuentran en concentraciones muy bajas. El método combina la especificidad de unión de los anticuerpos con la amplificación de "señal" que brindan las reacciones catalizadas por enzimas. En la práctica clínica es la técnica inmunológica más empleada. Se utiliza para cuantificar, entre otras cosas, hormonas, marcadores tumorales, para determinar la presencia de antígenos microbianos y para la determinación cualitativa o cuantitativa de anticuerpos totales o frente a algún antígeno en particular. ELISA Indirecto. Consta de las siguientes etapas: 1. Fijación insoluble del antígeno al soporte/placa, específico para los anticuerpos objeto de estudio (generalmente en los kits comerciales la placa ya está preparada con el antígeno pegado a la misma). 2. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados, solo si se indica en las instrucciones. 3. Adición de los sueros/leches controles y sueros/leche problemas, en la dilución indicada en el protocolo, de tal forma que si hay presencia de anticuerpos, estos reaccionarán específicamente con los antígenos fijados al soporte. 4. Incubación. 5. Lavado para eliminar los anticuerpos que no se hayan pegado al antígeno o uniones inespecíficas. Es importante que la placa no se seque, lo que podría incrementar la actividad inespecífica del ensayo. 6. Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima (generalmente anti IgG de especie), los cuales reaccionan con los anticuerpos específicos añadidos en el paso anterior y que se encuentran fijados a los antígenos. 7. Incubación. 8. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados (conjugado) que no hayan reaccionado. 9. Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. 10. Frenado. 11. Lectura colorimétrica de la placa. Página 29 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Figura 6: Esquema ELISA Indirecto Materiales y Equipamiento ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Lector de placas automático con filtros (405 nm, 414 nm, 450nm). Computadora. Agitador orbital de placas. Lavador manual o automático de placas. Heladera (5 ± 3 ºC) y freezer (-20 ± 5ºC). Estufa de incubación (37 ± 2 ºC). Vórtex. Sistema purificador de agua (mínima calidad de agua requerida: destilada o desionizada). Micropipetas monocanal de volumen variable (0,5 –10µl, 5 - 50 µl, 50 -200 µl, 200 - 1000 µl). Micropipetas multicanal de volumen variable (5 - 50 µl, 30 -300 µl). Propipetas. Dispensadores automáticos. Timer. Selladores de placas de acetato o parafilm. Cubetas plásticas para pipetas multicanales. Microtubos (para realizar las diluciones previas de los sueros), tubos o placas fondo en U. Crío tubos de polipropileno para el almacenamiento de los sueros. Gradillas. Material de vidrio (probetas, pipetas, erlenmeyers, etc. de distintos volúmenes). Toallas o papel absorbente. Página 30 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Reactivos Están incluidos en los kits comerciales autorizados por el SENASA, incluyen: • • • • • • • Buffer de lavado Buffer de dilución Conjugado Sustrato cromógeno Solución de frenado Sueros controles Placas o tiras de 8 pocillos con el Ag pegado A continuación se citan algunas precauciones a tener en cuenta para ejecutar la técnica de Elisa: � � � � � � � � � � � � Seguir expresamente las instrucciones del kit para la preparación de todos los reactivos Ambientar los reactivos del kit a temperatura ambiente por lo menos una hora antes de su utilización. No mezclar reactivos ni instrucciones de diferentes lotes o kits. Evitar cualquier contaminación de los reactivos. No utilizar los kits una vez superada la fecha de caducidad. Utilizar una punta de pipeta nueva por cada muestra y reactivo. Utilizar agua desionizada o destilada para la preparación/dilución de los reactivos que se empleen en el ensayo. Corroborar que el lector de placas posee el filtro con el cual se debe leer la placa y seguir las instrucciones de uso del equipo. Se recomienda trabajar las muestras por duplicado, para verificar la repetibilidad del operador. Incluir sistemáticamente un control positivo y un control negativo siempre que se utilice el kit. El sustrato es extremadamente sensible a la luz y a las contaminaciones, por lo que, se recomienda retirar del frasco únicamente el volumen que se vaya a utilizar y nunca devolver el sustrato sobrante al frasco original. La solución de frenado es un ácido fuerte. En caso de contacto con la piel lavar inmediatamente con abundante agua. Figura 7: Placa de Elisa Página 31 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �ELISA POR COMPETICIÓN / BLOQUEO La técnica consiste en la adsorción del antígeno lipopolisacárido liso (LPS-l) de Brucella sobre una matriz sólida (Microplaca de 96 pocillos). A continuación se añade la dilución de los sueros y el anticuerpo monoclonal, específico para un epitope de la cadena O del LPS-l. Se mezclan los dos junto con el antígeno adherido y se dejan incubar. Después de la incubación, se lava la microplaca y a continuación se añade el conjugado de anticuerpo anti-monocolonal conjugado con enzima. Es importante mencionar que el anticuerpo del conjugado ha sido previamente adsorbido con suero normal (no infectado) de bovino, equino y humano para reducir las reacciones inespecíficas entre especies. La etapa final de la prueba es la adición de la solución substrato / cromógeno. Después de un periodo de tiempo fijo, se frena la reacción y se mide fotométricamente. Entre cada uno de los pasos del ensayo la placa debe ser lavada debidamente. En la ausencia de anticuerpos anti Brucella en los sueros problemas (sueros negativos), el anticuerpo monoclonal se liga con el epítope de la cadena O del LPS-l, lo cual es indicado en la prueba por el desarrollo de color. En el caso que el suero problema contenga anticuerpos antiBrucella (suero positivo) estos compiten con el anticuerpo monoclonal por sitios del epítope e inhiben el enlace del anticuerpo monoclonal con la porción de cadena O del LPS-l, manifestándose por la ausencia de color en el ensayo. Los sueros con anticuerpos post vacunales por B. abortus cepa 19, compiten en menor grado con el anticuerpo monoclonal porque su afinidad, especificidad y concentración es baja, resultando usualmente en una reacción negativa (excepto los animales vacunados en los tres meses anteriores al sangrado). Diversos CELISA / bloqueo comerciales se encuentran disponibles en el mercado. En el caso del Elisa de bloqueo, sobre las placas con el LPS de Brucella abortus pegado, se depositan las muestras de suero, las cuales en el caso de contener anticuerpos específicos se unirán al antígeno. Tras eliminar el material no unido mediante lavados, se añade el anticuerpo monoclonal específico del LPS (epítope C) conjugado con una enzima. En el caso de que las muestras contengan anticuerpos frente a LPS, estos no permitirán la unión del conjugado, mientras que, si las muestras no contienen este tipo de anticuerpos, el conjugado se unirá libremente al antígeno de la placa. Tras sucesivos lavados para eliminar el material no unido, podremos revelar las reacciones acontecidas en la placa mediante la adición del sustrato adecuado el cual, desarrollará una reacción colorimétrica en presencia de la enzima (es decir en presencia del monoclonal conjugado con enzima). De este modo la aparición de una reacción coloreada, indicará que la muestra evaluada no contiene anticuerpos específicos del LPS de Brucella spp. y, la ausencia de color indicará que la muestra es positiva y contiene dichos anticuerpos. Materiales y equipamiento, reactivos, cuidados y precauciones, manejo y conservación de las muestras: Idem Elisa Indirecto. Figura 8: CELISA Página 32 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Tabla 4: Guía de problemas y soluciones en la técnica de ELISA Señal Posible causa Solución Color irregular 1.Error de pipeteo 2.Falta de mezcla de reactivos 3.Falta de lavados Práctica Mejorar técnica Precaución No hay color 1. Se omitió el substrato 2. Errónea concent. Substrato 3. Substrato con pH erróneo 4. Conjugado muy diluido 5. Se omitió el conjugado Revisar Revisar Controlar pH Revisar Revisar Color parejo en toda la placa 1. Conjugado muy concentrado 2. Falla en el lavado 3 Substrato contaminado Controlar Mejorar técnica Revisar 1. Reacción inespecífica 2. Material de vidrio sucio 3. Agua de mala calidad 4. Poco detergente (Tween 20) 5. Tampones contaminados Cambiar solución de lavado Mejorar lavado Controlar calidad Revisar Preparar soluciones nuevas 1. Substrato muy concentrado 2. Conjugado muy concentrado 3. Solución substrato con pH erróneo 4. Concent. Cromógeno errónea Revisar Controlar dilución Controlar Revisar 1. Substrato muy diluido 2. Conjugado muy diluido 3.Solución substrato con pH erróneo 4.Concentración Cromógeno errónea 5.Concent de Tween errónea Revisar Revisar dilución Revisar Revisar Revisar 1. Incubación despareja 2. Resecación por aire 3. Tampón de lavado residual Utilizar estufa Mantener la placa cubierta Eliminarlo Elevado color de fondo “background” Desarrollo de color muy rápido Desarrollo de color muy lento Efecto borde Página 33 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Figura 9: Modelo de protocolo de Trabajo ELISA Protocolo ELISA Brucelosis DIRECCIÓN DE LABORATORIOS Y CONTROL TÉCNICO Fecha: Temperatura ambiente: Analista: Marca del Kit: Tipo de Elisa: Competencia Matriz: Indirecto Suero Bloqueo Leche Otros Otros Número de Lote: Vencimiento: Fecha apertura kit: Nº Placa: Muestras: Protocolo N°…… 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A B C D E F G H Firma operador Página 34 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �ENSAYO DE POLARIZACION FLUORESCENTE PARA LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA Brucella EN SUERO El ensayo de Polarización Fluorescente (FPA) para la detección de anticuerpos contra Brucella tiene la capacidad de ser una prueba multi-especies, permitiendo el diagnóstico presuntivo en bovinos, porcinos, caprinos, ovinos, ciervos y bisontes. Este ensayo, validado para bovinos, tiene la capacidad de distinguir animales infectados con Brucella de los animales vacunados con B. abortus cepa 19 a partir de los 3 meses post vacunación aproximadamente, y de los animales con reacción cruzada con bacterias gram negativas en más del 90% de los casos. A diferencia de los enzimoinimunoensayos, el FPA es un ensayo homogéneo que no requiere la necesidad de varias etapas de lavado. Los reactivos son agregados secuencialmente en solución y el tiempo total de la prueba no excede los 5 minutos para cada muestra. En resumen, la prueba involucra la adición de una determinada cantidad de suero a una solución tampón de dilución en un tubo de vidrio. A continuación la muestra es equilibrada por aproximadamente cinco minutos, posteriormente se realiza una primera lectura en el analizador fluorescente para obtener una lectura blanco de referencia (auto fluorescente). A continuación el antígeno conjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC) es agregado a la solución y luego, la muestra es equilibrada nuevamente por un mínimo de dos minutos para permitir que el antígeno y el anticuerpo interactúen, a continuación la muestra es leída nuevamente en el polarizador. Si anticuerpos específicos contra Brucella están presente (suero positivo), el resultado será un valor alto de unidades de mili polarización (mP). En ausencia de anticuerpos anti Brucella (suero negativo), el resultado es un valor bajo en mP. El valor de corte para distintas especies animales para la República Argentina se ha determinado en: Bovinos: ▪ Animales negativos < 94 mP. ▪ Animales sospechosos: Los valores entre 94mP y 104 mP. ▪ Animales positivos: valores igual o mayor a 105 mP. Caprinos y Porcinos: ▪ Animales negativos < 85 mP. ▪ Animales positivos: valores igual o mayor a 85 mP. Ovinos (para el diagnóstico de B. melitensis, no para B. ovis): ▪ Animales negativos < 78 mP. ▪ Animales positivos: valores igual o mayor a 78 mP. Materiales y equipamiento: ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ Analizador de Polarización Fluorescente. Vórtex. Micropipetas monocanal de volumen variable (0,1– 10µl, 20 –200µl, 200–1000µl). Heladera (5 ± 3 ºC) y freezer (-20 ± 5 ºC). Tubos de vidrio: Tubos de borisilicato de 10 x 75 mm. Material de vidrio. Termómetro de temperatura ambiental. Computadora e impresora. Reactivos Están incluidos en los kits comerciales AUTORIZADOS por el SENASA, incluyen: • • • Buffer de dilución Sueros controles positivo y negativo Antígeno marcado con isotiocionato de fluoresceina Página 35 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �PREPARACION DE LA PRUEBA DE FPA Preparación de los Reactivos Se deben seguir las instrucciones del prospecto que acompaña al kit comercial. Preparación del equipamiento/instrumentos El usuario debe leer el manual de instrucciones y familiarizarse con los controles de los instrumentos, calibración y la solución de los problemas de todos los equipos previos a la ejecución del ensayo. Ejecución de la prueba En el día de la prueba preparar y analizar los sueros controles, siguiendo con lo especificado en los puntos indicados a continuación. Si el valor de mP de los sueros controles no se ajusta dentro de los límites especificados, el ensayo debe ser rechazado. Dejar a temperatura ambiente los reactivos, sueros controles y problemas por lo menos dos (2) hs. antes de su uso. Se debe controlar y registrar en la planilla de trabajo la temperatura ambiente al momento del ensayo Encender el equipo y seguir las instrucciones de uso. ▪ ▪ ▪ ▪ Para bovinos dispensar 990 µl de la solución tampón de dilución de sueros en los tubos de vidrio de borosilicato (10x 75mm). Dispensar 10 µl de suero bovino (Dilución 1/100) a analizar dentro de los tubos y mezclar bien con vórtex evitando la formación de espuma. Para porcinos y caprinos dispensar 960 µl de la solución tampón de dilución de sueros en los tubos de vidrio de borosilicato (10x 75mm). Dispensar 40 µl de suero porcino o caprino (dilución 1/25) a analizar dentro de los tubos y mezclar bien con vórtex. ▪ ▪ Para ovinos (B. melitensis) dispensar 975 µl de la solución tampón de dilución de sueros. Dispensar 25 µl de suero ovino (dilución 1/40). ▪ ▪ ▪ ▪ Esperar como mínimo cinco minutos a que la solución suero-Buffer se estabilice. Continuado el período de equilibración, realizar la lectura blanco de las muestras. Dispensar 10 µl de antígeno conjugado con FITC determinado en cada tubo y mezclar bien con vórtex. Es importante evitar la formación de espuma en la muestra En caso de que el suero se vea contaminado con partículas en suspensión, dejar el suero equilibrarse por lo menos 10 minutos para asegurarse que estas partículas hayan sedimentado o centrifugar el mismo. Las partículas inespecíficas puedan interferir con la lectura de la muestra dado que, la misma se basa en el Peso Molecular de las partículas en suspensión ▪ ▪ Dejar que la muestra y el antígeno se equilibren por lo menos por dos minutos. Leer las muestras exactamente en el mismo orden que fueron blanqueadas. Página 36 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Figura 10: Esquema Ensayo de Polarización Fluorescente 10 µl de Suero Bovino + 990 µl de Buffer ANTIGENO 10 µl Esperar 5 min. Lectura Blanco en Polarizador Incubación 2-5 min Lectura Final en Polarizador Interpretación de los resultados Control del ensayo Los sueros controles del ensayo deben estar dentro de los límites especificados por el fabricante del kit utilizado según el control de calidad desarrollados durante la estandarización, optimización e implementación del ensayo. Los resultados de los sueros controles y problemas son expresados en unidades de mili polarización (mP) de la actividad del suero contra el antígeno. Se debe controlar y registrar en la planilla de trabajo la temperatura ambiente al momento del ensayo. Aceptación de los controles Si los valores de mP de los sueros controles están fuera de los límites especificados, la prueba será rechazada y los controles y las muestras deben ser repetidas. Página 37 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �FIJACIÓN DE COMPLEMENTO La fijación del complemento (FCT) es la prueba de referencia internacional para el diagnóstico serológico de la brucelosis bovina, ovina y caprina. La prueba permite la detección y cuantificación relativa de los anticuerpos específicos antibrucélicos ¨capaces de fijar¨ el complemento (IgG1 y algunas IgM específica), cuya presencia en determinados niveles posee una gran correlación con el estado de ¨Animal infectado¨. La FCT es una prueba confirmatoria ampliamente usada y aceptada pese a la complejidad de su realización y a la necesidad de buenas instalaciones y personal entrenado para titular y mantener los reactivos adecuadamente. La técnica se desarrolla en dos etapas: en la primera el antígeno y el suero problema (cuyo complemento se destruyó previamente por calentamiento a baño maría) se incuba en presencia de complemento de cobayo. Después de dejar reaccionar la mezcla de reactivos, se mide en la segunda etapa la cantidad de complemento libre (que indica la ausencia o presencia de anticuerpos antibrucelares en suero y su cantidad) mediante la incorporación de un ¨sistema indicador¨ o ¨sistema hemolítico¨ formado por eritrocitos de carneros recubiertos de anticuerpos de conejo (hemolisina) como complejo antígeno-anticuerpo alternativo. La presencia de anticuerpos en el suero problema induce la formación de inmuno complejos en la primera etapa de la reacción que determina la activación del sistema complemento y el agotamiento de sus factores. En la segunda etapa de la reacción no existe complemento libre que pueda activarse ante la presencia del ¨sistema hemolítico¨. El resultado es la ausencia de hemólisis (resultado positivo). Alternativamente, la lisis de los eritrocitos (hemólisis) es indicadora de la existencia de complemento libre en la segunda etapa de la reacción, que no se agotó en la primera por no haberse formado inmuno complejos ante la ausencia de anticuerpos antibrucelares (resultado negativo). Se han propuesto varios métodos para FCT que utilizan diferentes concentraciones de eritrocitos de oveja (GR) frescos o conservados (normalmente se recomienda una suspensión al 2%, 2,5% o al 3%). Los GR están sensibilizados con un volumen igual de suero anti-GR de conejo diluido (hemolisina) hasta contener varias veces (en general de dos a cinco veces) la concentración mínima necesaria para producir un 100% de lisis de los GR en presencia de soluciones titulada de complemento de cobayo. Variantes para la prueba de FCT: ▪ ▪ La macrotécnica, se realiza en tubos de Khan a un volumen final de 1 ml. La microtécnica, se realiza en placas de polipropileno de 96 pocillos, con un volumen final de 100 µl. Equipos - Pipetas monocanales con rangos de 2 µl a 20 µl, 20 µl a 200 µl y 500 µl a 5000 µl. - Pipetas multicanales de rango 20 µl a 200 µl. - Centrifuga. - Centrífuga de placas. - Estufa con temperatura controlada (37ºC ± 2ºC). - Heladera con temperatura controlada (5 ± 3°C). - Freezer con temperatura controlada (-20 ± 5°C). - Agitador de microplacas. - Vórtex. -Baño térmico. - Espectrofotómetro. Materiales: -Tubos de ensayo. - Material de vidrio de volúmenes varios. - Gradillas. - Film para cubrir placas. - Puntas de pipetas (Tips). Página 38 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �- Placas de polipropileno de 96 pocillos con fondo en U. - Cubetas o reservorios de plástico para reactivos. Reactivos Solución buffer: Ver Anexo FCT I Solución GR 2%: ver Anexo FCT II Titulación Hemolisina: Ver Anexo FCT III Sistema hemolítico Anexo FCT IV Titulación Complemento: Ver Anexo FCT V Titulación Antígeno: Ver Anexo FCT VI Sueros controles Suero control positivo bovino (SENASA suero patrón Nacional BR 01/05). Suero control negativo bovino (SENASA suero patrón Nacional BR 03/05). Manejo y conservación de las muestras - Conservar los sueros en heladera (5 ± 3ºC) no más de dos días, para períodos mayores, conservarlos a –20 ± 5ºC. - Evitar repetidos ciclos de congelamiento/ descongelamiento. - No usar sueros contaminados, que presenten precipitados o intensa hemólisis. - Homogeneizar con el uso de vórtex los sueros antes de usarlos. Inactivación de los sueros Sueros patrones - Suero BR 01/05: Reconstituir el suero control positivo bovino liofilizado con 1 ml de agua destilada estéril. Realizar una dilución 1/12,5 con SB e inactivar durante 30 minutos en baño termostático a 58 ± 2ºC, luego alicuotar y conservar a -20 ± 5ºC. - Suero BR 03/05: Reconstituir el suero control negativo bovino liofilizado con 1 ml de agua destilada estéril. Inactivar durante 30 minutos en baño termostático a 58 ± 2ºC, luego alicuotar y conservar a –20 ± 5º C. Muestras de suero Las muestras de suero se inactivan 30 minutos en baño termostático a 58 ± 2ºC para eliminar el complemento natural contenido en las mismas. La temperatura del baño termostático se controla mediante la introducción de un termómetro certificado en el agua durante todo el tiempo de exposición de las muestras. - Los sueros ovinos se inactivan por 30 minutos en baño termostático entre 60ºC – 63°C (en caso de que los sueros sean anticomplementarios, se recomienda realizar otro ciclo de inactivación de 30 minutos). - Las muestras podrán ser sumergidas en el baño termostático en tubos de ensayo tapados herméticamente, contenidos en gradillas, debidamente identificados. Volumen de suero sugerido a inactivar: 200 µl. - La inactivación de las muestras podrá realizarse un día antes del análisis. En este caso, una vez retiradas del baño termostático se dejan a temperatura ambiente durante al menos 30 minutos para luego conservar en heladera. Si el análisis se realiza después de las 24 hs, las muestras ya inactivadas se conservan a (-20 ± 5ºC). Página 39 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Condiciones del ensayo El procedimiento se desarrolla en caliente (incubación en estufa a 37 ± 2ºC) y se utilizan los siguientes reactivos en volúmenes de 25 µl: a. b. c. d. Diluciones en base 2, a partir de 1/2 de los sueros problemas en SB. Solución de complemento de cobayo en SB que contenga 2 UC (100%). Solución de antígeno en SB a la dilución de trabajo. Sistema hemolítico obtenido por la mezcla de volúmenes iguales, de una solución de suero hemolítico en SB que contenga 2UH (100%) y de una suspensión de glóbulo rojos de carnero en SB al 2%. Ejecución Dependiendo del número de muestras a realizar, se podrá incluir los controles en la misma placa o utilizar una placa para los sueros y otra para los controles. a) Dilución de las muestras de suero - El procedimiento de dilución se realiza de forma general en placa fondo en U, mediante la - utilización de volúmenes de 25 µl. La secuencia de operaciones se detalla en la tabla 1. La homogeneización de los dos componentes de cada dilución se realiza mediante 5 aspirado/dispensado con la micropipeta. Tabla 1 1/2 Suero 25 µl SB 25 µl 1/4 25 µl de la dilución 1/2 25 µl 1/8 25 µl de la dilución 1/4 25 µl 1/16 25 µl de la dilución 1/8 25 µl 1/32 25 µl de la dilución 1/16 25 µl 1/64 25 µl de la dilución 1/32 25 µl 1/128 25 µl de la dilución 1/64 25 µl 1/256 25 µl de la dilución 1/128 25 µl b) Sueros controles - Control positivo: El procedimiento de dilución se realiza mediante la utilización de volúmenes de 25 µl, siguiendo la secuencia de operaciones que se detalla en la tabla 2. La homogeinización de los dos componentes de cada dilución se realiza mediante 5 aspirado/dispensado con la micropipeta. Tabla 2 Suero positivo 01/05 SB - 1/12,5 1/25 25 µl 25 µl - 25 µl 1/50 25 µl de la dilución 1/25 25 µl 1/100 25 µl de la dilución 1/50 25 µl 1/200 25 µl de la dilución 1/100 25 µl 1/400 25 µl de la dilución 1/200 25 µl 1/800 25 µl de la dilución 1/400 25 µl 1/1600 25 µl de la dilución 1/800 25 µl Control negativo: El suero control negativo se diluye siguiendo el mismo protocolo de los sueros problema (1/2, 1/4, 1/8 etc.). c) Controles del ensayo • • Control de la ausencia de poder anticomplementario del antígeno: Se dispensa por duplicado en la placa 25 µl/pocillo de SB, 25 µl/pocillo de C y 25 µl/pocillo de antígeno Control sistema hemolítico con complemento: Se dispensa por duplicado en la placa 50 µl/pocillo de SB y 25 µl/pocillo de C. Página 40 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �• Control sistema hemolítico sin complemento: Se dispensa por duplicado en la placa 75 µl/pocillo de SB. d ) Disposición de los sueros en la placa Los controles y muestras diluidas deben quedar dispuestas en la placa fondo en U (25 µl/pocillo) según indica la tabla 3. Tabla 3 A B C D E F G H 1 Control positivo 1/12,5 1/25 1/50 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 2 3 Control muestra negativo 1/2 1/2 1/4 1/4 1/8 1/8 1/16 1/16 1/32 1/32 1/64 1/64 1/128 1/128 1/256 1/256 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 c) Preparación y dispensado de las soluciones de antígeno y complemento - Preparar la solución de C según la dilución de trabajo establecida como óptima y dispensar 25 µl/pocillo de dicha solución en todas las muestras. - Preparar la solución de antígeno según la dilución de trabajo establecida como óptima y dispensar 25 µl/pocillo de dicha solución en todos los pocillos salvo en la dilución 1/2 (muestras y control negativo) y 1/12,5 (control positivo) Fila A, las cuales actuarán como controles de poder anticomplementario (PAC) de cada suero. d) Primera incubación en caliente - Tapar y agitar la placa en agitador de placas durante 2-4 minutos. - Incubar a 37 ± 2ºC durante 30 minutos. e) Dispensado del sistema hemolítico - Quince (15) minutos antes de finalizar la primera incubación, preparar e incubar a 37 ± 2ºC durante 15 minutos el sistema hemolítico según el Anexo FCT IV. - Finalizada la primera incubación, dispensar 25 µl/ pocillo del sistema hemolítico en todos los pocillos de las placas incluida la placa de los controles. f) - Segunda incubación en caliente Tapar y agitar las placas en agitador de placas durante 2-4 minutos. Incubar a 37 ± 2ºC durante 30 minutos. g) Centrifugación de la placa - Finalizada la incubación, centrifugar la placa a una fuerza de 1000 RPM durante 3 minutos o bien dejarla en reposo en heladera durante una hora antes de su lectura. Página 41 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Expresión de resultados El grado de fijación del complemento se manifiesta por la presencia (negativos) o ausencia (positivos) de hemólisis del sistema hemolítico. La reacción positiva se cuantificará mediante la determinacion del título y su grado de hemólisis. Reacción positiva - Sedimento en grado variable de los glóbulos rojos en el fondo del pocillo. - El sobrenadante estará afectado por un cierto tinte rojizo en función de la hemólisis que se haya producido. Este grado de hemólisis debe cuantificarse y cosignarse mediante un sistema de cruces. Figura 11: Placa fijación de complemento 0 % de hemólisis Sobrenadante translúcido, en el fondo botón de depósito de GR Sobrenadante rojizo en un 25% de intensidad, en el fondo un deposito claro de 25% de hemólisis +++ GR Sobrenadante rojizo en un 50% de intensidad, en el fondo un deposito tenue de 50% de hemólisis ++ GR Sobrenadante rojizo en un 75% de intensidad, en el fondo un deposito muy 75% de hemólisis + tenue de GR 100% de hemólisis Negativo sobrenadante rojo cristalino, ausencia de depósito de GR ++++ Página 42 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Determinación del título del suero Será la inversa de la dilución mas alta que siga dando algún grado de sedimentación de los GR. Este grado de fijación será informado mediante el sistema de cruces descripto y convertido a UIFCT. - En el caso de los bovinos vacunados con Brucella abortus S19, para el diagnóstico de las Brucellas lisas (B. abortus), se considera un resultado positivo cualquier valor ≥40 UIFCT (1/8 ++). - Para animales no vacunados (bovinos, caprinos, ovinos y porcinos) se considera positivo cualquier valor ≥20 UIFCT (1/4 ++). Expresión de los resultados en unidades internacionales de fijación del complemento - El sistema de expresión de los resultados en UIFCT, ajustados al suero patrón internacional OIEISS (en el caso de las Brucellas lisas), usado a continuación, se basa en el Procedimiento IZS TE B2. 1.6 SOP 004 del Centro Internacional de Referencia OIE para Brucelosis Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell”Abruzzo e del Molise G. Caporale. Teramo. Italia y el Manual de Procedimiento del Laboratorio Agroalimentario. Gobierno de Aragón. España. Tabla 4. Tabla 4. Interpretación en UIFCT Dilución 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 % de Fijación del Complemento + ++ +++ ++++ + ++ +++ ++++ + ++ +++ ++++ + ++ +++ ++++ + ++ +++ ++++ + ++ +++ ++++ + ++ +++ ++++ 1000 UIFCT (1/200) 16,6 20 23,2 26,6 33,2 40 46,4 53,2 66,4 80 92,8 106,4 132, 8 160 185,6 212,8 265,6 320 371,2 425,6 531,2 640 742,4 851,2 1062,4 1280 1484,8 1702,4 Página 43 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Controles del ensayo La aprobación del ensayo debe realizarse si los controles han dado los resultados esperados: Controles Suero control positivo Suero control negativo Control de poder anticomplementario de los sueros Control de ausencia de poder anticomplementario del antígeno Resultado Esperado 50 % de fijación (++) - en la dilución 1:200 que corresponde a 1000 UIFCT (Brucellas lisas) 100% de hemólisis en todos las diluciones, ausencia de fijación de complemento 100% de hemólisis ausencia de fijación del complemento en la dilución 1:2 (sin antígeno) 100 % hemólisis Control del sistema hemolítico sin C 0% de hemólisis Control del sistema hemolítico con C 100% de hemólisis Criterio de aceptación del análisis: El ensayo se debe considerar APROBADO / NO APROBADO a) APROBADO: • Los controles de antígeno, sistema hemolítico con y sin complemento dan los resultados pre-establecidos. • El control de suero positivo da el resultado pre-establecidos (1:200) con una variación máxima de (± 2 ++). • El control negativo da un resultado Negativo. b) NO APROBADO: si uno de los controles no da el resultado esperado, se repite el ensayo. La presencia de, al menos, un 25% de sedimento de eritrocitos (+) de la fila A (dilución ½) indica poder anticomplementario en la muestra. En este caso, se informa el resultado de PAC, lo que implica la solicitud de una nueva extracción de la toma de muestra. Página 44 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Para facilitar la lectura e interpretación de los resultados se puede preparar una escala visual del siguiente modo: En un tubo se coloca 100 µl de la suspensión de glóbulos rojos al 2% + 900 µl de SB 1X. En otro tubo colocar 100 µl de la suspensión de glóbulos rojos al 2% + 700 µl de agua destilada, agitar para provocar la completa hemólisis de los GR (solución de hemoglobina), y agregarle 200 µl de SB 5X para mantener la presión osmótica. Estos dos tubos mantienen la misma relación de GR. intactos en el primer caso y de glóbulos lisados en el segundo, que el que el 0% de hemólisis y el 100% de hemólisis en la prueba. De esta manera mezclándolas en distintas proporciones podremos obtener la imagen que corresponde a los distintos grados de hemólisis, luego de centrifugar durante 5 minutos a 1000 rpm. PORCENTAJE DE HEMÓLISIS REACTIVOS 0% EN µl Solución 0 hemolisada Suspensión de 100 glóbulos rojos 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Página 45 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Anexo FCT I: Solución Buffer (SB) - Realizar una solución de stock de calcio/magnesio como indica la tabla 1, luego conservar en refrigeración durante 6 meses o eliminar si hay turbidez producto de contaminación. Solución de stock calcio 0,3M y magnesio 1 M Ca Cl2. 3,7g Mg Cl2. 9,5 g Agua destilada - 100 ml Añadir 1ml de solución stock a 1 litro de solución salina 0,85% (NaCl2 8,5 g/ agua destilada 1 litro). La solución de trabajo debe tener un pH de 7,3 – 7,4. Luego de su uso conservar en refrigeración por 7 días. Página 46 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Anexo FCT II: Preparación de la suspensión de GR 2 % a) Lavado de los GR Homogeinizar cuidadosamente el frasco que contiene los eritrocitos. En un tubo cónico re-suspender los eritrocitos en una proporción de 1 volumen de GR + 5 volúmenes de SB, luego homogeinizar cuidadosamente. Centrifugar aproximadamente a 1500 rpm durante 5 minutos y luego eliminar el sobrenadante con una pipeta. Repetir la re-suspensión de los GR en SB, centrifugar de la misma manera anteriormente descripta y luego eliminar el sobrenadante con una pipeta. Realizar la última re-suspensión de los GR en SB y centrifugar aproximadamente a 1500 rpm durante 10 minutos. Luego de la última centrifugación descartar el sobrenadante el cual debe estar libre de hemólisis. b) El método para la estandarización de la suspensión de glóbulos rojos 2% se podrá realizar por medio de dos técnicas. • • Método espectrofotométrico. Método en cámara de Neubauer. Método espectrofotométrico: Tomar del tubo cónico 0,2 ml de GR ya lavados y diluirlo en 9,8 ml de SB (2%). Realizar un blanco de lectura en el espectrofotómetro dispensando 2,5 ml agua destilada en la celda o tubo del espectrofotómetro. Determinar la lisis 100% de los GR realizando una dilución 1/15 con agua destilada, agregando en un tubo que contiene 2,8 ml de agua destilada 0,2 ml de glóbulos rojos al 2%. Una vez lisados los eritrocitos, leer la densidad óptica (DO) a 545 nm. La DO esperada debe ser de 0.330 ± 0.05. El laboratorio debe determinar según el modelo de espectrofotómetro cual es la DO optima que indique la concentración de GR al 2 %. Método en cámara de Neubauer: - Tomar del tubo cónico 0,2 ml de GR ya lavados y diluirlo en 9,8 ml de SB (2%). Realizar una dilución 1/200 y hacer el recuento de glóbulos rojos en la cámara. La suspensión deberá tener 5,4(± 0,2) X 108 GR/ml. Página 47 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Anexo FCT III: Titulación Hemolisina Preparación de las soluciones “madres” de hemolisina Se prepararán 15 diluciones de hemolisina (tabla 1). En cada tubo se dispensa los siguientes volúmenes de SB y de hemolisina. La solución se homogeniza mediante agitación en vórtex. Tabla 1: Preparación de las soluciones “madres” de hemolisina N° de tubo Dilución SB (ml) 1 1/50 4,9 2 1/100 2 3 1/150 7,45 4 1/200 1 5 1/250 12,5 Hemolisina 100 µl 2 ml T1 50 µl 1 ml T2 50 µl 6 1/500 1 1 ml T5 7 1/1000 6 2 ml T5 8 1/2000 1 1 ml T7 9 1/3000 2 1 ml T7 10 1/4000 3 1 ml T7 11 1/5000 4 1 ml T7 12 1/6000 5 1 ml T7 13 1/7000 3 0,5 ml T7 14 1/8000 3,5 0,5 ml T7 15 1/9000 4 0.5 ml T7 Preparación de las soluciones “hijas” de hemolisina - En la filas B, C, D, G y H de una placa fondo en U dispensar 25 µl/pocillo de SB excepto de las columnas 10, 11 y 12 de las filas A, B, C y D (tabla 2). - En la filas A (excepto las columnas 10, 11 y 12) y F de la placa dispensar 50 µl/pocillo de las diluciones “madres’’ de hemolisina preparadas en la batería de tubos de ensayo, según protocolo de la tabla 1. - Con una pipeta multicanal recoger 25 µl por pocillo de la fila A y pasar a la fila B. La homogenización de los dos componentes de cada dilución se realiza mezclando mediante 5 golpes de aspirado y dispensado de la pipeta. Recoger 25 µl/pocillo de la fila B y pasar a la fila C. Volver a homogenizar. Recoger 25 µl/pocillo de la fila C y pasar a la D. Homogeinizar y recoger 25 µl/pocillo y descartar. - De la misma forma, haga diluciones de la fila F sobre las filas G y H. - Las diluciones finales obtenidas se detallan en la tabla 3. Tabla 2. Planilla de localización de las diluciones ‘’madres’’ de hemolisina y SB 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl A de T1 de T1 de T1 de T2 de T2 de T3 de T3 de T4 de T4 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl B de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB C 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl D de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB E 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl de T5 de T5 de T6 de T7 de T8 de T9 de T10 de T11 de T12 de T13 de T14 de T15 F 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl G de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl H de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB Página 48 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Tabla 3. Diluciones finales de hemolisina 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 1/50 1/50 1/50 1/100 1/100 1/150 1/150 1/200 1/200 B 1/100 1/100 1/100 1/200 1/200 1/300 1/300 1/400 1/400 C 1/200 1/200 1/200 1/400 1/400 1/600 1/600 1/800 1/800 D 1/400 1/400 1/400 1/800 1/800 1/1200 1/1200 1/1600 1/1600 F 1/250 1/250 1/500 1/1000 1/2000 1/3000 1/4000 1/5000 1/6000 1/7000 1/8000 1/9000 G 1/500 1/500 1/1000 1/2000 1/4000 1/6000 1/8000 1/10000 1/12000 1/14000 1/16000 1/18000 H 1/1000 1/1000 1/2000 1/4000 1/8000 1/12000 1/16000 1/20000 1/24000 1/28000 1/32000 1/36000 E Preparación y dispensado de la suspensión de glóbulos rojos - Se prepara una suspensión de GR al 2% según lo indicado anteriormente. En este ensayo se prepara una suspension de 5 ml. - Dispensar la suspensión (25 µl/pocillo) en los pocillos de la microplaca. - Cubrir y agitar la microplaca en un agitador de placas durante 30 minutos a bajas revoluciones. Esto proporciona la sensibilización de los GR (unión con los anticuerpos presentes en las diluciones de hemolisina). - Dispense 25 µl/pocillo de SB en las filas A, B, C, D, F, G y H. En los pocillos de la columna 1 se dispensar adicionalmente otros 25 µl (esta columna actúa como control del poder hemolítico de la hemolisina). Preparación y dispensado de una solución de complemento - El objeto es preparar una solución de complemento a una concentración tal que siempre haya reactivo disponible para detectar una posible unión de Ag (GR) – Ac (hemolisina diluida). - Para complementos (comerciales) que den un titulo (unidad de complemento) superior a 1/90, debe prepararse una solución de 1/30. Para complementos que den títulos inferiores, la solución a preparar será de 1/10 – 1/20 (tabla 4). Tabla 4: Dilución del complemento Solución de complemento 1/20 Solución de complemento 1/30 TV 5,7 ml 5,8 ml Complemento 0,3 ml 0,2 ml - Dispensar 25 µl/pocillo de la solución de complemento en las filas A, B, C, D, F, G y H, excepto en los pocillos de la columna 1. - Cubrir y agitar la placa durante 2-4 minutos en agitador de placas. Incubación - Incubar a 37 ± 2° C, durante 30 minutos. Página 49 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Cálculos y expresión de resultados El resultado de la relación de cada pocillo se evalúa por el grado de hemólisis presente en el mismo y se consigna mediante un sistema de cruces. Tabla 5. Tabla 5: Expresión de resultados ++++ + Sobrenadante translúcido, en el fondo botón de depósito de GR Sobrenadante rojizo en un 25% de intensidad, en el fondo un deposito claro de GR Sobrenadante rojizo en un 50% de intensidad, en el fondo un deposito tenue de GR Sobrenadante rojizo en un 75% de intensidad, en el fondo un deposito muy tenue de GR Negativo sobrenadante rojo cristalino, ausencia de depósito de GR +++ ++ 0 % de hemólisis 25% de hemólisis 50% de hemólisis 75% de hemólisis 100% de hemólisis Los resultados de la lectura se emiten en la hoja de laboratorio correspondiente. Cálculos de los resultados - Se define la unidad de hemolisis (UH) como la dilución más alta que permita la lisis del 100% de los eritrocitos en el pocillo. - Sobre la hoja del laboratorio se comprueba la repetibilidad del análisis, constatando que los pocillos que contengan la misma dilución de hemolisis presentan un grado de hemolisis similar. - Se elige la UH de la dilución en la que se obtenga 100% de hemolisis. Si existen dudas entre dos diluciones se elegirá la dilución más baja (mayor concentración de hemolisina). - La dilución de trabajo (DT) se establece multiplicando por 2 la UH, es decir 2 UH 100%. - Ejemplo: Si la UH se ha establecido en 1/1000 - DT= 2 x 1/1000= 1/500 Los cálculos y las proporciones finales de reactivos se registran en hojas de trabajo. - Se podrá realizar una dilución 1/50 o 1/100 de la hemolisina en SB conservando a -20 ± 5ºC para luego diluirla al título de trabajo. Se registra el lote, fecha y cantidad de hemolisina diluida. Página 50 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Anexo FCT IV: Sistema hemolítico - - Para la preparación del sistema hemolítico, el volumen total del sistema depende del número de placas a utilizar (1 placa= 96 pocillos fondo en U). Ejemplo para dos placas: 2 placas x 2,4 ml = 4.8 ml = 5 ml (se prepara un volumen adicional en previsión de perdidas) Dispensar en un frasco 2,5 ml de GR 2% y luego 2,5 ml de hemolisina al título de uso agitando suavemente para homogenizar las dos suspensiones e incubar a 37° C ± 2° C, durante 15 minutos. Página 51 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Anexo FCT V: Titulación Complemento Se llama complemento al suero de cobayo completo, que contiene el sistema enzimático denominado ‘’sistema complemento’’, cuya función en la técnica de fijación del complemento es la de detectar uniones especificas antígeno-anticuerpo. En el caso que en dichas uniones una de las partes sean glóbulos rojos, es capaz de lisarla, como en el caso del sistema hemolítico que se utiliza en la reacción de fijación del complemento, donde los hematíes de carnero hacen el papel de antígeno y el suero de conejo (hemolisina) de anticuerpos. El complemento que sea objeto de titulación debe descongelarse dejándolo llevar a temperatura de laboratorio. Una vez reconstituido o descongelado se mantendrá en refrigeración y solo se sacara de la heladera en el momento de su utilización. Si se provee que se va a utilizar más de un vial se juntaran todos en uno y se titulará el conjunto. Preparación de las soluciones “madres” del complemento - Realizar 6 diluciones ‘’madres’’ del complemento, empleando para ello tubos de ensayo. Tabla 1 de este anexo. - En cada tubo se dispensan los siguientes volúmenes de SB y de complemento. La solución se homogeiniza perfectamente mediante un agitador. Tabla 1. Diluciones “madre” del complemento Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 SB µl 725 850 975 1100 1225 1350 C µl 25 25 25 25 25 25 Preparación de las soluciones “hijas” en placas de ensayo y dispensado del SB - En la filas B, C y D de una placa fondo en U dispense 25 µl/pocillo de SB (tabla 2). - En la filas A de la placa dispense 50 µl/pocillo de las diluciones “madres’’ de complemento por duplicado según protocolo descripto en tabla 1. - Con una pipeta multicanal recoja 25 µl/pocillo de la fila A y trasváselos a la fila B. La homogenización de los dos componentes de cada dilución se propiciara mezclando mediante 5 golpes de aspirado y dispensación de la pipeta. Recoja 25 µl/pocillo de la fila B y páselo a la fila C. Vuela a homogenizar. Recoja 25 µl/pocillo de la fila C y páselo al D. Homogeinice y recoja 25 µl/pocillo y descártelos. - Las diluciones que han quedado preparadas en la placa se detallan en la tabla 3. - Dispense a continuación 50 µl/pocillo de SB en todas las filas de la placa. - Agite la placa durante 2-4 minutos en agitador de placas. Tabla 2. Planilla de localización de las diluciones “madres’’ de complemento y SB A B C D 1 50 µl de T1 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 2 50 µl de T2 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 3 50 µl de T4 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 4 50 µl de T2 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 5 50 µl de T5 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 6 50 µl de T6 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 7 50 µl de T1 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 8 50 µl de T2 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 9 50 µl de T4 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 10 50 µl de T2 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 11 50 µl de T5 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB 12 50 µl de T6 25 µl de SB 25 µl de SB 25 µl de SB E F G H Página 52 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Tabla 3. Diluciones finales del complemento 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 1/30 1/35 1/40 1/45 1/50 1/55 1/30 1/35 1/40 1/45 1/50 1/55 B 1/60 1/70 1/80 1/90 1/100 1/110 1/60 1/70 1/80 1/90 1/100 1/110 C 1/120 1/140 1/160 1/180 1/200 1/220 1/120 1/140 1/160 1/180 1/200 1/220 D 1/240 1/280 1/320 1/360 1/400 1/440 1/240 1/280 1/320 1/360 1/400 1/440 E F G H - Cubra la placa para evitar evaporación excesiva e incube en estufa a 37 ±2 °C durante 15 minutos Dispensado del sistema hemolítico - El sistema hemolítico habrá sido preparado según procedimiento descripto anteriormente. - Finalizada la incubación de la placa, dispense 25 µl/pocillo del SH en todos los pocillos de la placa. - Cubra y agite la placa durante 2-4 minutos en agitador de placas. - Incube en estufa a 37 ±2 °C durante 30 minutos Centrifugación de la placa - Finalizada la incubación, centrifugue la placa a una fuerza de 1000 RPM durante 3 minutos. Expresión de resultados El resultado de la reacción de cada pocillo se evaluará por el grado de hemolisis presente en el mismo y se consignará mediante un sistema de cruces: Tabla 4 ++++ + Sobrenadante translúcido, en el fondo botón de depósito de GR Sobrenadante rojizo en un 25% de intensidad, en el fondo un deposito claro de GR Sobrenadante rojizo en un 50% de intensidad, en el fondo un deposito tenue de GR Sobrenadante rojizo en un 75% de intensidad, en el fondo un deposito muy tenue de GR Negativo sobrenadante rojo cristalino, ausencia de depósito de GR +++ ++ 0 % de hemolisis 25% de hemolisis 50% de hemolisis 75% de hemolisis 100% de hemolisis Cálculos de los resultados - Se define la unidad de complemento (UC) o Unidad Hemolítica como la dilución más alta que permita la lisis del 100% de los eritrocitos en el pocillo. - Sobre la hoja del laboratorio se comprobará la respetabilidad del análisis, constatando que los pocillos que contengan la misma dilución de complemento presentan un grado de hemolisis similar. - Se elige la UC la dilución más alta que de 100% de hemolisis. - La dilución de trabajo (DT) se establece multiplicando por 2 la UC. Ejemplo: supongamos que se necesite preparar una solución de complemento para utilizar en el análisis de 2 placas según el procedimiento descripto Ello supone un volumen total de solución de complemento de 2 placas x 2,4ml/placa = 4,8 ml = 5 ml (se prepara un volumen adicional en Página 53 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �previsión de perdidas) a. Supongamos que UC = 1/100 DT= 2 x UC= 2 x 1/100 = 1/50 Si en 50 ml de SB se dispensa 1 ml de C puro: En 5 ml de SB se dispensan x. x= 5/50= 0,1 ml b. Por tanto las proporciones será: 0,1 ml de complemento y 4,9 ml de SB. Control de 2 Unidades de complemento (2 UC) - Una vez obtenida la dilución de trabajo, se realizará diluciones del complemento que contengan 2 unidades, 1,5 unidades, 1 unidad. 0,75 unidades y 0,5 unidades. - Para ello trabajaremos según la siguiente secuencia. Tabla 5. Tabla 5: Diluciones del complemento Tubo 1 Tubo 2 (2 unidades) (1,5 unidades) C: 2 unidades (µl) 400 300 SB (µl) 0 100 - Tubo 3 (1 unidades) 200 200 Tubo 4 (0,75unidades) 150 250 Tubo 5 (0,5unidades) 100 300 Se dispensaran por duplicado 25 µl/pocillo de cada una de las diluciones en los correspondientes pocillos de una placa y luego se completan con 50 µl de SB. Tabla 6 Tabla 6. Unidades del complemento en la placa A B C D E F G H 1 2U 2U 2 1, 5U 1, 5U 3 1U 1U 4 0,75 U 0,75 U 5 0,5 U 0,5 U 6 7 8 9 10 11 - Cubra la placa para evitar evaporación excesiva, agite 2 – 4 minutos e incube en estufa a 37°C ± 2° C durante 15 minutos - Luego repita lo descripto agregando el SH Lectura del análisis: - Pocillo con 2 Unidades: 100% de hemolisis - Pocillo con 1,5 Unidades: 100% de hemolisis - Pocillo con 1 Unidades: 100% de hemolisis o traza de GR en suspensión - Pocillo con 0,75 Unidades: 0% a 75% de hemolisis - Pocillo con 0,5 Unidades: 0% a 50% de hemolisis CONTROL DE CALIDAD - El ensayo debe ser repetible: pocillos con diluciones iguales deben tener un grado de reacción similar. En caso contrario se repetira el análisis. - Debe observarse cada gama de reacciones posibles desde diluciones con el 100% (N) de hemólisis (las mas bajas), hasta diluciones con el 0 % (++++) de hemólisis (las mas alta). En caso contrario se repetira el análisis. - En el control de 2 Unidades de complemento deben dar los resultados preeestablecidos. El análisis debe informarse como APROBADO/NO APROBADO en el apartado de observaciones de la planilla de titulación del complemento. En caso de no aprobado, se repite el proceso. Página 54 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) 12 �Anexo FCT VI: Titulación Antígeno Se utiliza el antígeno de seroaglutinación en tubo (SAT) volumen celular aproximado de 4,5 % Se trata de determinar lo que se denomina UA (Unidad Antigénica) que corresponde para cada lote de antígeno y será la dilución óptima de uso para garantizar la unión con los anticuerpos presentes en los sueros problema, en la cantidad suficiente para fijar el complemento. El antígeno formará el complejo antígeno-anticuerpo con los anticuerpos presentes de los sueros problema y que serán capaces de fijar el complemento. Esta reacción requiere un título mínimo para que se lleve a cabo, es decir, se debe garantizar una concentración mínima de antígeno que reaccione con los anticuerpos y sea capaz de fijar el complemento. Preparación de diluciones “madre” de antígeno Se preparan tres diluciones previas en tubos, donde se dispensaran en un tubo 500 µl de SB y 10 µl de antígeno, en el segundo tubo 750 µl de SB y 10 µl de antígeno y en tercero 1250 µl de SB y 10 µl de antígeno lo que da una dilución de 1/50, 1/75 y 1/125 respectivamente. Preparación de las diluciones “hijas” de antígeno En una placa de fondo en U se dispensa 25 µl de SB en todos los pocillos salvo en la columna 1 y los pocillos A10, A11, A12. La fila C y F no se utilizaran hasta la columna 9 (Tabla 1). En la columna 1 se pondrá 50 µl de las soluciones madres del antígeno por duplicado y en los pocillos A10, A11, A12 de forma simple (tabla 1). Se diluye pasando 25 µl sucesivamente de estos pocillos a los siguientes consiguiendo diluciones al duplo del antígeno. Las diluciones se realizan de la columna 1 a la columna 9 y de los pocillos A10, A11, A12 hasta los pocillos H10, H11 y H12. Es decir se pasan 25 µl de la columna 1 a la 2, se homogeiniza y se pasa otros 25 µl a la columna 3 y así sucesivamente y se elimina los 25 µl que sobran en la columna 9 y lo mismo en vertical en las columna 10, 11 y 12. Tabla 1 Diluciones ‘’hijas’’ del antígeno 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 1/50 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 1/6400 1/12800 1/50 1/75 1/125 B 1/50 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 1/6400 1/12800 1/100 1/150 1/250 1/200 1/300 1/500 C D 1/75 1/150 1/300 1/600 1/1200 1/2400 1/4800 1/9600 1/19200 1/400 1/600 1/1000 E 1/75 1/150 1/300 1/600 1/1200 1/2400 1/4800 1/9600 1/19200 1/800 1/1200 1/2000 1/1600 1/2400 1/4000 F G 1/125 1/250 1/500 1/1000 1/2000 1/4000 1/8000 1/16000 1/32000 1/3200 1/4800 1/8000 H 1/125 1/250 1/500 1/1000 1/2000 1/4000 1/8000 1/16000 1/32000 1/6400 1/9600 1/16000 Dispensado de sueros controles positivo y negativo Seguidamente se dispensa 25 µl de suero control positivo en los pocillos de la fila A, B D E, G y H salvo en las columnas 10, 11, 12 donde se dispensan 25 µl de suero control negativo y servirá como control de hemolisis. El suero control positivo debe ir a una dilución igual al título conocido (1/200) en la reacción de fijación del complemento. Dispensado de una solución de complemento Posteriormente se dispensa 25 µl de complemento a todos los pocillos según el título obtenido previamente, Se agita la placa 2 - 4 minutos y se incuba durante 30 minutos a 37° C ± 2° C. Página 55 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Dispensado del sistema hemolítico Tras la incubación de la placa se procede a dispensar 25 µl de sistema hemolítico a todos los pocillos. Luego se agita la placa 2 - 4 minutos e incubará durante otros 30 minutos a 37 ° C ± 2° C. Centrifugación de la placa Finalizada la incubación, centrifugue la placa a una fuerza de 1000 RPM durante 3 minutos. Expresión de resultados El resultado de la reacción de cada pocillo se evaluará por el grado de hemolisis presente en el mismo y se consignara mediante un sistema de cruces. Tabla 2 ++++ + Sobrenadante translúcido, en el fondo botón de depósito de GR Sobrenadante rojizo en un 25% de intensidad, en el fondo un deposito claro de GR Sobrenadante rojizo en un 50% de intensidad, en el fondo un deposito tenue de GR Sobrenadante rojizo en un 75% de intensidad, en el fondo un deposito muy tenue de GR Negativo sobrenadante rojo cristalino, ausencia de depósito de GR +++ ++ 0 % de hemolisis 25% de hemolisis 50% de hemolisis 75% de hemolisis 100% de hemolisis Los resultados de la lectura se registran en la hoja de laboratorio correspondiente Cálculos de los resultados - Se define la unidad de antígeno (UA) como la dilución más alta que permita una fijación completa (0% de hemolisis) - Sobre la hoja del laboratorio se comprueba la repetibilidad del análisis, constatando que los pocillos que contengan la misma dilución de antígeno presentan un grado de hemolisis similar. - Se elige la UA a dilución en la que se obtenga el 0 % de hemolisis. Si existen dudas entre dos diluciones se elegirá la dilución más baja (de mayor concentración de antígeno). - La dilución de trabajo (DT) se establece multiplicando por 2 la UA. Ejemplo: supongamos que la UA se ha establecido 1/800: DT= 2 x UA= 2 x 1/800 = 1/400 Página 56 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �NORMATIVA VIGENTE Consultar en • • • http://www.senasa.gob.ar/normativas https://www.boletinoficial.gob.ar/ http://www.infoleg.gob.ar/ LEY 24.696: Declárase de interés nacional el control y erradicación de la enfermedad reconocida como Brucelosis (Brucella abortus) en las especies bovina, suina, caprina y otras en todo el Territorio Nacional. RESOLUCIÓN SENASA 67/2019: Plan Nacional de Control y Erradicación de Brucelosis Bovina en la REPÚBLICA ARGENTINA. Se aprueba el Plan Nacional de Control y Erradicación de Brucelosis Bovina en la REPÚBLICA ARGENTINA, de aplicación obligatoria en todo el Territorio Nacional, excepto en la Provincia de TIERRA DEL FUEGO, ANTÁRTIDA E ISLAS DEL ATLÁNTICO SUR. RESOLUCIÓN SENASA 857-E/2017: Zona Libre de Brucelosis Ovina y Caprina a Brucella melitensis. RESOLUCIÓN SENASA 372-E/2017: Aprobación del Plan Nacional de Control de Brucelosis Caprina. RESOLUCIÓN SENASA 98/2016: Comercialización de antígenos/kits para diagnóstico de brucelosis. Los laboratorios elaboradores y/o importadores y/o sus distribuidores autorizados por el servicio nacional de sanidad y calidad agroalimentaria (Senasa), solo pueden efectuar ventas de antígenos/kits para diagnóstico de brucelosis a los laboratorios inscriptos en la red nacional de laboratorios del Senasa, que se encuentren debidamente habilitados para el rubro diagnóstico de brucelosis. RESOLUCIÓN SENASA 63/2013: Se aprueban los requisitos y procedimientos que deben cumplir los productores agropecuarios para que sus establecimientos obtengan la certificación oficial como libre de brucelosis porcina y para incorporar sus rodeos al Registro Nacional de Establecimientos Oficialmente Libres de Brucelosis Porcina. RESOLUCIÓN SENASA 246/2007: Requisitos de bioseguridad para los laboratorios que se dediquen a la elaboración de productos destinados al diagnóstico y a la prevención de la Brucelosis Animal y la Tuberculosis Animal. RESOLUCIÓN SENASA 438/2006: Adóptese el Sistema de Diagnóstico Serológico para el Programa de Control y Erradicación de la Brucelosis. Técnicas que lo conforman. RESOLUCIÓN 736/2006: Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos SANIDAD ANIMAL Y VEGETAL. Créase la Red Nacional de Laboratorios de Ensayo y Diagnóstico. Marco normativo para la inscripción en el Registro de la mencionada Red. Excepciones. RESOLUCIÓN SENASA 79/2003: Adoptar la Técnica de I-ELISA en Leche para el diagnóstico de Brucelosis Bovina en establecimientos lecheros RESOLUCIÓN SENASA 1484/1993: Normas para la Elaboración, fraccionamiento, distribución, expendedor para los reactivos destinados en el diagnóstico y prevención de la Brucelosis Animal. Página 57 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �INFORME DE LA SUBCOMISIÓN TÉCNICA DE LA COMISIÓN NACIONAL DE BRUCELOSIS para el cambio del título de corte de la prueba de 2-ME (2006) Integrantes: Dr. Eduardo Bagnat, SENASA; Dr. Eduardo Moras, Fac. Vet UBA; Dra. Marcela Martínez Vibot, Fac. Vet UBA; Dr. Luis Samartino, INTA; Dra. Susana T. de Echaide, INTA; Dra. Irene Walsh, AAVLD; Dr. Guillermo López, DIPRODESA; Dra. Cecilia Di Lorenzo, Coleg. Med. Vet, Bs. As; Dra. Ana M. Nicola, SENASA. CAMBIO DEL PUNTO DE CORTE DE LA PRUEBA 2- MERCAPTOETANOL Se decidió cambiar la interpretación oficial del resultado de la Prueba de aglutinación, del 2Mercaptoetanol para los bovinos. Será considerado Reactor Serológico Positivo a todo animal que en la Prueba de aglutinación del 2Mercaptoetanol, presente reacción de aglutinación en la dilución 1/50 (sea esta reacción completa o incompleta) o mayor siendo esta realizada conforme al Manual de Brucelosis de la DILACOTSENASA. Todo animal cuya reacción de aglutinación en la Prueba del 2-Mercaptoetanol se presente únicamente en la dilución 1/25, sea esta completa o incompleta, será considerado seroreactor Negativo. Datos analizados INTA Castelar Proporcionó a la subcomisión Técnica de Brucelosis el resultado del diagnóstico serológico sobre un total de 1672 sueros de diversos establecimientos que fueran remitidos a esa unidad de diagnóstico y a los cuales se le realizara las Pruebas de Fijación de Complemento, SAT y 2-ME. Siendo que se observaba, por parte de especialistas y profesionales de campo, reacciones que no superaban la dilución 1/25 en la Prueba del 2-Mercaptoetanol y muchas de las cuales no reaccionaban en la dilución 1/50 en la Prueba del SAT y que además ocurrían en animales de establecimientos cuya epidemiología no manifestaba indicios de presencia de la enfermedad, se consideró la necesidad de analizar el error de diagnóstico que se producía en este estrato reactor serológico tomando como referencia la Prueba de Fijación de Complemento (estándar deoro). Del total de 1672 sueros, 170 sueros (10%) reaccionaron sólo en la dilución 1/25 al 2-ME y fueron a su vez Negativos a la FC` y no superaron la dilución 1/50 al SAT. Por otra parte hubo 6 sueros (0,3%) con ese nivel de reacción al 2-ME y al SAT, que resultaron Positivos a la Fijación deComplemento. 170 sueros resultaron falsos positivos (FP), esto es reactores 1/25 al 2-ME y Negativos a la FC` y, 6 sueros resultaron Verdaderos Positivos (VP) (+ 1/25 al 2-ME y Positivos a la FC`). La relación FP/ VP fue de 35/1 EE INTA RAFAELA Sobre un total de 801 sueros 51 (6,3%) se encontraban en ese estrato reactor (FC` Negativo, SAT 1/50 o menos y 2-ME 1/25). Hubo 2 sueros (0,2%) FC` Positivo, SAT 1/50 o menos y 2- ME 1/25 51 sueros resultaron FP y 2 sueros resultaron VP La relación FP/VP fue 51/2= 25/1 Página 58 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Conclusión: La cantidad de Falsos Positivos que cuesta detectar (1) uno verdadero positivo, en el estrato de reactor estudiado, fue de 35 y 25 en cada estudio. Ello significa un costo muy elevado. Al cambiar el nivel de corte del 2-ME de la dilución 1/25 al de la dilución 1/50 (sea esta reacción completa o incompleta), el Verdadero Positivo pasará a ser un Falso Negativo. Por otro lado se observa que en el nuevo punto de corte, reactor en la dilución 1/50 (sea esta reacción completa o incompleta), hay predominio de los verdaderos positivos (FC` Positivos) respecto de los Falsos Positivos (FC` Negativos). Esta relación costo /beneficio justifica la modificación. Debe considerarse que esta modificación se refiere a la interpretación estándar oficial de la serología que se incorpora al Manual de Procedimientos de la Brucelosis de la DILACOT-SENASA. Ello debe distinguirse de la práctica particular de saneamiento donde el profesional sanitarista puede y debe interpretar los resultados serológicos con un CRITERIO EPIDEMIOLÓGICO adecuado al caso particular de aplicación. Asimismo debe tenerse presente para los procedimientos de certificación, que en aquellos casos en que el profesional encuentre discordancia de los resultados con la condición epidemiológica, podrá solicitar que sean consideradas sus discrepancias con la interpretación oficial para su caso, Res. SENASA 438/06. Ver tabla a continuación A partir de Diciembre 2006 TABLA DE DECISIÓN (Hembras vacunadas mayores de 18 meses) BPA WRIGHT 2-ME INTERPRETACIÓN - NSH NSH NEGATIVO + 50 UI - NEGATIVO + I 100UI - SOSPECHOSO + 100 UI - SOSPECHOSO + I 200 UI - SOSPECHOSO + 200UI - POSITIVO + I 50UI I 50 UI POSITIVO Referencias I=Incompleto NSH = No sehace UI = Unidades Internacionales =Positivo + =Negativo Página 59 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �ANEXO I Lavado y desinfección de manos Una vez terminada la tarea, retirarse los guantes y siempre lavarse las manos después de cada actividad en el Laboratorio Página 60 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Página 61 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �ANEXO II Modelo de Planilla de emisión de resultados Página 62 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �Página 63 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �BIBLIOGRAFIA CONSULTADA 1) ALTON G.G., JONES L.M., ANGUS R.D. & VERGER J.M. 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Caporale” Teramo, Italia. 10) Manual de Procedimientos Técnicas para el Diagnóstico de Brucelosis Humana 2008. Servicio de Brucelosis Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas A.N.L.I.S. “Dr. Carlos G. Malbrán”, Centro Regional de Referencia del WHO Global Salm Surv para América del Sur. 11) NIELSENK. (2002). Diagnosis of brucellosis by serology. Vet. Microbiol., 90,447–459. 12) NIELSEN K., GALL D., JOLLEY M., LEISHMAN G., BALSEVICIUS S., SMITH P., NICOLETTI P. & THOMAS F. (1996). A homogenous fluorescence polarization assay for detection of antibody to Brucella abortus. J. Immunol. Methods, 195,161–168. 13) NIELSEN K., KELLY L., GALL D., BALSEVICIUS S., BOSSE J., NICOLETTI P. & KELLY W. (1996). Comparison of enzymeimmunoassays for the diagnosis of bovine brucellosis. Prev. Vet. Med., 26, 17–32. 14) NIELSEN K., KELLY L., GALL D., NICOLETTI P. & KELLY W. (1995). Improved competitive enzyme immunoassay for the diagnosis of bovine brucellosis.Vet.Immunol.Immunopathol., 46,285–291. 15) Norma ISO/IEC 17025/2017. 16) Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE). “Manual of standards for diagnostic test & vaccines”, Capítulo 3.1.4 : Infección por Brucella abortus, B. melitensis y B. suis.) Edición 2016. Página 64 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �17) Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE). Código Terrestre. Capítulo 8.4: Infección por Brucella abortus, B. melitensis y B. suis. 18) SENASA. Manual de diagnóstico serológico de la Brucelosis Bovina. 2009. 19) SENASA. Manual de procedimientos de técnicas diagnósticas en Brucelosis.1998. 20) Silva Paulo, P.; Vigliocco, A.M., Ramondino, R., Marticorena, D., Bici, E., Briones, G., Gorchs, C., Gall, D., Nielsen, K. 2000. Evaluation of primary binding assays for presumptive serodiagnosis of swine brucellosis in Argentina. Clin. Diag. 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Página 65 de 65 SENASA 2019- Brucelosis: Manual de diagnóstico serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) �BRUCELOSIS Manual de Diagnóstico Serológico (B. abortus, B. melitensis, B. suis) 2019 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Brucelosis (B. abortus, B. melitensis, B. suis): Manual de diagnóstico serológico Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2019 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Dirección de Laboratorio Animal Dirección General de Laboratorios y Control Técnico Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0016 Abstract A summary of the resource. El presente Manual tiene como objetivos: ▪ Colaborar con el mejor desempeño y competencia de los Laboratorios que realizan el diagnóstico serológico de la Brucelosis en diferentes especies animales inscriptos en la Red de Laboratorios de SENASA. ▪ Proporcionar a la Red de Laboratorios de SENASA un instrumento que facilite el desarrollo adecuado, sistematizado y estandarizado de los procedimientos técnicos que se realizan en los laboratorios. ▪ Contribuir a la aplicación de las medidas de bioseguridad y controles de calidad que deben cumplirse, cuando se desarrolle un procedimiento técnico. ▪ Contar con un instrumento que sirva de guía para la evaluación y monitoreo de las actividades del laboratorio. Las técnicas diagnósticas descriptas en el presente Manual son las internacionalmente reconocidas y recomendadas por la ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE SANIDAD ANIMAL (OIE) y EL SENASA. Table Of Contents A list of subunits of the resource. <div style="text-align: left;">Definiciones y Abreviaturas</div> <div style="text-align: left;">Medidas Generales de Bioseguridad y Seguridad en el Laboratorio</div> <div style="text-align: left;">Introducción Brucelosis</div> <div style="text-align: left;">Procedimientos de Trabajo (ingreso/rechazo de muestras)</div> <div style="text-align: left;">Prueba de screening con antígenos tamponados en placa (BPAT y RBT)</div> <div style="text-align: left;">Prueba de seroaglutinación lenta en tubo (SAT y 2-ME)</div> <div style="text-align: left;">Prueba de anillo en leche</div> <div style="text-align: left;">ELISA Indirecto</div> <div style="text-align: left;">ELISA por competición / bloqueo</div> <div style="text-align: left;">Ensayo de Polarización Fluorescente <br />Fijación de complemento</div> <div style="text-align: left;">Normativa vigente</div> <div style="text-align: left;">Informe de la Subcomisión Técnica de la Comisión Nacional de Brucelosis</div> <div style="text-align: left;">Anexo I Lavado y desinfección de manos</div> <div style="text-align: left;">Anexo II Modelo de Planilla de emisión de resultados</div> <div style="text-align: left;">Bibliografía</div> Brucelosis Laboratorios