143 10 4482 https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/838fbb8810ba5c2f3630a0f3b10cbec3.pdf 61e5ae49cb1f85ec7b3fe8f98e3b2c21 PDF Text Text Resolución 180/95 Unifícanse distintas normas que prevén la comisión de infracciones en la tramitación de los certificados que expide el Instituto Argentino de Sanidad y Calidad Vegetal. BUENOS AIRES, 17 de abril de 1995 VISTO el Expediente Nº 2851/94 del registro del INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL, y CONSIDERANDO: Que resulta necesario unificar en su aplicación las distintas normas que prevén la comisión de infracciones en la tramitación de los certificados que expide el INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL como órgano de aplicación de las normas regales que rigen las material de su competencia. Que el personal dependiente de la Dirección Nacional de Inspección General, en el cumplimiento de las funciones de fiscalización e inspección de productos vegetales, sus subproductos y/o derivados, han detectado la presencia de documentación apócrifa y adulterada. Que en virtud de lo expuesto, se considera conducente determinar en forma fehaciente a través de una norma, el grado de responsabilidad de las personas físicas o jurídicas que actúan en las operaciones de comercio exterior. Que el suscripto es competente para dictar el presente acto en virtud de lo dispuesto por el articulo 6º inciso a) del Decreto Nº 2266 del 29 de octubre de 1991, modificado por su similar Nº 1172 del 10 de julio de 1992. Por ello, El SECRETARIO DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA RESUELVE: ARTICULO 1º- Los exportadores, importadores y/o despachantes de aduana que actúen por cuenta y orden de éstos, cuando efectúen una operación de exportación o importación de productos de origen vegetal o intenten concretarla, utilizando para ello documentos y certificaciones no expedidas oficialmente por el INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL, cuando así correspondiere, serán pasibles de las sanciones prescriptas por el articulo 26 del Decreto Nº 2266 del 29 de octubre de 1991, sin perjuicio de las acciones penales y/o civiles que pudieren corresponder. ARTICULO 2º- Comuníquese, publíquese, dése a la Dirección Nacional del Registro Oficial y archívese. Fdo.: Felipe C. Solá. Resolución 180/95 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Resolución SAGyP N° 0180/1995 Description An account of the resource Comisión de infracciones. Creator An entity primarily responsible for making the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource Lunes 17 de Abril de 1995 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Resolución Abstract A summary of the resource. Unifícanse distintas normas que prevén la comisión de infracciones en la tramitación de los certificados que expide el Instituto Argentino de Sanidad y Calidad Vegetal. Source A related resource from which the described resource is derived <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=17119">Resolución SAGyP N° 0180/1995</a> https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/223b30c3f4c7651a872ab15a8555a567.pdf ec12cc0397572fbabfb7b41b66a7e985 PDF Text Text �������������� Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Resolución SAGyP N° 0261/1995 Description An account of the resource Mercados de cereales. Creator An entity primarily responsible for making the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource Viernes 19 de Mayo de 1995 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Resolución Abstract A summary of the resource. Se sustituye el Anexo XX de la Resolución N° 1075/1994. Source A related resource from which the described resource is derived <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=29560">Resolución SAGyP N° 0261/1995</a> https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/8fc7c1e1fa7f5af2c7b2a36d9ac09a27.pdf ac92d0af83f816e0fc6eb7d29eb0e2e5 PDF Text Text RESOLUCION SAGyP 274/95 RESUMEN: Modifícase la Resolución Nº 1.051/94, mediante la cual se establece un sistema de clasificación de la miel teniendo como base su origen botánico. RES. SAGP Nº 274/95 BUENOS AIRES, 6 de Noviembre de 1995. VISTO el expediente Nº 804.105/95 del registro de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA y la Resolución Nº 1.051/94 del 2 de diciembre de 1994, también del registro de esta Secretaría, que establece un sistema de clasificación de la miel teniendo como base su origen botánico, y CONSIDERANDO: Que la aplicación de la mencionada resolución ha demostrado la necesidad de modificar ciertas normas, así como la metodología usada, para poder responder así a las exigencias que caracterizan la demanda de los principales mercados internacionales. Que la DELEGACION II de la DIRECCION GENERAL DE ASUNTOS JURIDICOS del MINISTERIO DE ECONOMIA Y OBRAS Y SERVICIOS PUBLICOS ha tomado la intervención que le compete. Que el suscripto es competente para dictar el presente acto en virtud de lo dispuesto por el artículo 4º del Decreto 2692 del 23 de octubre de 1979. Por ello, EL SECRETARIO DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA RESUELVE: ARTICULO 1º- Sustitúyense los artículos 3º, 4º, 7º, 8º, 9º, y 11º del la Resolución Nº 1051 de fecha 2 de diciembre de 1994 del registro de esta Secretaría por los siguientes: "Artículo 3º- Se considerarán mieles monoflorales o uniflorales aquellas en cuya composición se encuentre, como mínimo un CUARENTA Y CINCO POR CIENTO (45%) de polen de la misma familia género o especie floral, y posea características organolépticas, físico químicas y microscópicas propias, excepto las mieles que se mencionan a continuación. a) MIEL DE CITRUS (Citrus sp): Es aquella cuya composición se encuentra un mínimo de DIEZ A VEINTE POR CIENTO (10 A 20 %) de granos de polen de citrus, permitiéndose hasta un VEINTE POR CIENTO (20%) de humedad. b) MIEL DE EUCALIPTO (Eucaliptus sp): Es aquella en cuya composición se encuentra un mínimo de SETENTA POR CIENTO (70%) de granos de polen de dicha especie. c) MIEL DE TREBOLES (Trifolium sp): Es aquella en cuya composición se encuentran presentes pólenes de melilotus, alfalfa (Medicago sativa) y lotus, en su conjunto alcanzando un valor mínimo de CUARENTA Y CINCO POR CIENTO (45%). d) MIEL DE ALFALFA (Medicago sativa): es aquella en cuya composición se encuentra un mínimo de VEINTE POR CIENTO (20%) de granos de polen de dicha especie. Artículo 4º- Las mieles que se comercialicen indicando su origen botánico, deberán llevar impresos sobre los envases y/o en los rótulos adheridos, en lugar visible, una leyenda que indique su origen botánico, el número de partida identificatoria del laboratorio certificador y el número que le corresponde a dicho laboratorio en el registro respectivo. Los tambores de los que provenga la miel a analizar deberán estar identificados con un número indeleble, indicando así la partida a la que pertenecen. Artículo 7º- Los productores que requieran la certificación de clasificación de sus mieles por origen botánico conforme a las normas de la presente resolución, deberán suministrar, mediante declaración jurada, la siguiente información al laboratorio respectivo: a) Ubicación de la colmena, apiario o área de acopio. �b) Fecha de recolección c) Período probable de entrada de néctar. d) Proceso de extracción usado (manual, centrífuga manual, a motor, etc.) e) Toda otra información que requiera el laboratorio. Artículo 8º- Los análisis que efectúen los laboratorios se harán de muestras de miel recién cosechadas, obtenida según el siguiente procedimiento: a) Se deben extraer CIEN (100) gramos de cada parte superior, media e inferior del recipiente de envasado (tambor). b) Las muestras así obtenidas deberán ser homogeneizadas. c) Posteriormente, se colocarán TRES (3) frascos de contenido no inferior a CINCUENTA (50) gramos, sellándolos y etiquetándolos en el lugar, así como el tambor muestreado. Uno de los frascos será utilizado para realizar los análisis, otro quedará en poder del productor y el restante lo conservará el laboratorio durante DOCE (12) meses como muestra de referencia. Artículo 9º- Cada laboratorio deberá formar una palinoteca de referencia. Los patrones polínicos de cada especie se realizarán siguiendo las técnicas con o sin acetólisis (1966). Artículo 11º- Los análisis cualitativos para determinación del origen botánico de la miel y el análisis cuantitativo se realizarán siguiendo metodología de Louveaux, Maurizio y Vorwohl (1978)". ARTICULO 2º- Derógase el artículo 10 de la resolución mencionada precedentemente. ARTICULO 3º- Comuníquese, publíquese, dése a la Dirección Nacional del Registro Oficial y archívese. Fdo.: Felipe C. Solá � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Resolución SAGyP N° 0274/1995 Description An account of the resource Sistema de clasificación de miel. Creator An entity primarily responsible for making the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource Lunes 6 de Noviembre de 1995 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Resolución Abstract A summary of the resource. Modifícase la Resolución Nº 1.051/94, mediante la cual se establece un sistema de clasificación de la miel teniendo como base su origen botánico. Source A related resource from which the described resource is derived <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=29695">Resolución SAGyP N° 0274/1995</a> https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/c3c592ddac3d57027b0098571d1016f6.pdf d14e77ea636faa9a3dde44c6f4a49357 PDF Text Text RESOLUCION N° 297/95 SAGyP RESUMEN: Establece las condiciones que debe cumplir el transporte de partidas de fibra de algodón, semillas y/o subproductos de algodón provenientes del Paraguay y Brasil en calidad de importación y/o tránsito, fijando corredores fitosanitarios, condiciones al tránsito por hidrovías y las condiciones para el tránsito de algodón ecológico (orgánico). BUENOS AIRES, 5 de junio de 1995 VISTO el expediente N° 2292/94 del registro del INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL por el que se propicia la modificación de la Resolución N° 733 del 29 de agosto de 1994 de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA, y CONSIDERANDO: Que el INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL se encuentra ejecutando conjuntamente con otras organizaciones nacionales y provinciales y el sector privado, un Programa de Prevención y Erradicación del Picudo Mexicano del Algodonero (Anthonomus grandis). Que es necesario proteger las zonas de producción de algodón existentes fuera de la región núcleo algodonera. Que existen áreas infestadas con Picudo Mexicano del Algodonero en los Departamentos de Pilagás y Pilcomayo, en la provincia de FORMOSA. Que por resolución N° 466 del 24 de mayo de 1994 de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA se fijaron los pasos fronterizos autorizados para el ingreso de algodón provenientes de las REPUBLICAS DEL PARAGUAY y FEDERATIVA DEL BRASIL y las exigencias de fumigación para la importación de algodón provenientes de países con ocurrencia de picudo. Que por Resolución N° 733 del 29 de agosto de 1994 de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA se fijaron las condiciones de importación y tránsito de algodón y los corredores fitosanitarios de tránsito autorizados. Que el Decreto N° 1274 del 29 de julio de 1994 del Poder Ejecutivo Nacional faculta a la AUTORIDAD FITOSANITARIA NACIONAL a establecer las condiciones para autorizar el tránsito internacional de vegetales, sus partes, productos y subproductos que atraviesen el territorio nacional. Que el Subcomité de Sanidad Vegetal del MERCADO COMUN DEL SUR (MERCOSUR) celebrada del 28 al 30 de junio de 1993, se deben aplicar también al tránsito por hidrovías dado que existe un alto riesgo de diseminación de plagas a través de esta vía de transporte. Que las autoridades fitosanitarias de la REPUBLICA DEL PARAGUAY solicitaron una reconsideración de las condiciones de tránsito para el algodón de esa procedencia, ofreciendo la posibilidad de instalar un galpón cerrado de fumigación en la unidad de control integrado de Encarnación, REPUBLICA DEL PARAGUAY, Posadas, REPUBLICA ARGENTINA. Que asimismo las autoridades de la REPUBLICA DEL PARAGUAY requirieron que se establezcan las exigencias para el tránsito de algodón orgánico (ecológico) paraguayo por territorio nacional. Que el suscripto se encuentra facultado para dictar la presente medida en virtud de lo prescripto por el artículo 6° inciso a) del Decreto N° 2266 del 29 de octubre de 1991, modificado por sus similares Nros. 1172 del 10 de julio de 1992 y 2194 del 13 de diciembre de 1994. �Por ello EL SECRETARIO DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA RESUELVE: ARTICULO 1°.- Establecer que el transporte de partidas de fibra de algodón, semillas y/o subproductos de algodón, provenientes de las REPUBLICAS DEL PARAGUAY y FEDERATIVA DEL BRASIL, en calidad de importación y/o tránsito a terceros países se realice con enlonado completo de la carga y perfectamente cerrado, a efectos de evitar pérdidas del material en el camino y deberán cumplir con las reglamentaciones que establezca el INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL ARTICULO 2°.- Establecer que las partidas de fibra de algodón, semillas y/o subproductos de algodón provenientes de las REPUBLICAS DEL PARAGUAY y FEDERATIVA DEL BRASIL en calidad de tránsito a terceros países deberán seguir un itinerario obligatorio por corredores fitosanitarios, fijados a tal efecto por el INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL. ARTICULO 3°.- Ampliar las regulaciones impuestas para el transporte de mercaderías por vía terrestre, al transporte por hidrovías que atraviesan zona de producción algodonera argentina. A tal efecto, el INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL sancionará los requisitos técnicos que deberán ser cumplidos fijando los puertos de fiscalización, los lugares de fumigación de la mercadería y las bodegas y toda otra condición técnica que asegure la minimización del riesgo cuarentenario. ARTICULO 4°.- Autorizar el tránsito internacional de algodón ecológico (orgánico) por el territorio nacional sin fumigar, en contenedores cerrados y precintados. Los contenedores deberán ser previamente aprobados por el INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL, luego de comprobar su hermeticidad. A tal efecto el Instituto mencionado reglamentará la operatoria que deberá seguirse para emitir la autorización de tránsito de este tipo de mercadería. ARTICULO 5°.- Prohibir el ingreso a la Provincia de SALTA de algodón sin desmotar, fibra y subproductos, como así también de bolsas usadas, provenientes de las provincias de FORMOSA y MISIONES, sin tratamiento químico previo establecido por el INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL. El ingreso a la provincia de SALTA o de los productos mencionados provenientes de las provincias de FORMOSA o MISIONES, estará permitido sólo por las Rutas Nacionales Nros 51 y 16. ARTICULO 6°.- Los infractores a las obligaciones impuestas por la presente resolución serán pasibles de las sanciones previstas en el artículo 26 del Decreto N° 2266 del 29 de octubre de 1991. ARTICULO 7°.- Derógase la Resolución N° 733 del 29 de agosto de 1994 de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA. ARTICULO 8°.- Notifíquese a través del INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL a los países miembros del MERCADO COMUN DEL SUR (MERCOSUR). �ARTICULO 9°.- Comuníquese, publíquese, dése a la Dirección Nacional del Registro Oficial y archívese. RESOLUCION N° 297 Fdo.: Ing. Felipe SOLA - Secretario � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Resolución SAGyP N° 0297/1995 Description An account of the resource Transporte de partidas de fibra de algodón. Creator An entity primarily responsible for making the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource Lunes 5 de Junio de 1995 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Resolución Abstract A summary of the resource. Establece las condiciones que debe cumplir el transporte de partidas de fibra de algodón, semillas y/o subproductos de algodón provenientes del Paraguay y Brasil en calidad de importación y/o tránsito, fijando corredores fitosanitarios, condiciones al tránsito por hidrovías y las condiciones para el tránsito de algodón ecológico (orgánico). Source A related resource from which the described resource is derived <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=21181">Resolución SAGyP N° 0297/1995</a> Is Replaced By A related resource that supplants, displaces, or supersedes the described resource. <strong>Abrogada por el artículo 2° de la <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=199693">Resolución N° 31/2011</a> del SENASA</strong> https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/f19c9d7c70bbf8291dc50b6db18b7f09.pdf 975d6b09b665bf1bd46e347d562c5d67 PDF Text Text RESOLUCION N° 298/95 SAGyP RESUMEN: Extiende a los subproductos del algodón lo dispuesto por el art. 2° de la Resolución N° 466 del 24 de mayo de 1994. BUENOS AIRES, 5 de junio de 1995. VISTO el expediente N° 2292/94 del registro del INSTITUTO ARGENTINO DE SANIDAD Y CALIDAD VEGETAL, la Resolución N° 466 del 24 de mayo de 1994 de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA, y CONSIDERANDO: Que la Resolución N° 466 del 24 de mayo de 1994 de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA establece puntos de ingreso al país para las partidas de fibra y/o semilla de algodón provenientes de las REPUBLICAS DEL PARAGUAY y FEDERATIVA DEL BRASIL. Que es necesario ampliar los términos de la resolución mencionada para las partidas de subproductos del algodón provenientes de los países citados. Que el suscripto es competente para dictar el presente acto, en virtud de lo dispuesto por el artículo 6° inciso a) del Decreto N° 2266 del 29 de octubre de 1991, modificado por sus similares Nros. 1172 del 10 de julio de 1992 y 2194 del 13 de diciembre de 1994. Por ello EL SECRETARIO DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA RESUELVE: ARTICULO 1°.- Extender a los subproductos del algodón lo dispuesto por el artículo 2° de la Resolución N° 466 del 24 de mayo de 1994 de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA, sobre el establecimiento de puntos de ingreso al país para las partidas de fibra y/o semilla de algodón. ARTICULO 2°.- Comuníquese, publíquese, dése a la Dirección Nacional del Registro Oficial y archívese. RESOLUCION N° 298 Fdo.: Ing. Felipe SOLA – Secretario. � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Resolución SAGyP N° 0298/1995 Description An account of the resource Subproductos de algodón. Creator An entity primarily responsible for making the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource Lunes 5 de Junio de 1995 Abstract A summary of the resource. Extiende a los subproductos del algodón lo dispuesto por el art. 2° de la Resolución N° 466 del 24 de mayo de 1994. Source A related resource from which the described resource is derived <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=21182">Resolución SAGyP N° 0298/1995</a> Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Resolución Is Replaced By A related resource that supplants, displaces, or supersedes the described resource. <strong>Abrogada por el artículo 10° de la <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=84755">Resolución N° 208/2003</a> del SENASA</strong> https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/b31452b15007c89f61412678fec6a2d7.pdf ff8474cc9bdb03caccc06dd890f3fe3e PDF Text Text RESOLUCION N° 88/96 BUENOS AIRES, 14 de febrero de 1986 VISTO el expediente n° 42.939/85, en el cual el SERVICIO DE LABOTORIOS (SELAB), dependiente del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL (SENASA), propone establecer normas complementarias a las cuales deberán ajustarse los establecimientos elaboradores de productos destinados a combatir la Fiebre Aftosa, y CONSIDERANDO: Que el método de la DPB50, utilizado en el presente según la Resolución Ministerial n° 609 de fecha 8 de octubre de 1971 pare evaluar la calidad de vacuna antiaftosa ha presentado irregularidades con respecto al modelo teórico, ya que para que éste sea considerado válido requiere de requisitos importantes como son: a) La curva correspondiente a la relación dosis-respuesta debe estar constituida por una recta claramente descendente a medida que la vacuna se diluye. b) El número de animales de prueba debe ser suficientemente grande para todas las diluciones. c) E número de diluciones debe ser lo suficientemente grande para que la prueba abarque) desde el CIEN POR CIENTO (100% al CERO POR CIENTO (0%) de protección. Que de acuerdo a las experiencias del SERVICIO DE LABORATORIOS ( SELAB) existe un gran porcentaje de vacunas aprobadas que no han cumplido los requisitos del método y por lo tanto sus valores no son estadísticamente confiables. Que de acuerdo a lo descripto anteriormente se considera que el método a la generalización podal se asemeja más que la DPB50 a la situación en el campo. Que dicho método elimina los inconvenientes de la falta de linearidad y de la falta de inclinación que con frecuencia ocurre en las pruebas de DPB 50. Que evita la ruptura de formulación de la vacuna a la que se ve sometida en la preparación de las diluciones para DPB50. Que brinda la posibilidad de controlar las vacunas en las otras valencias por métodos indirectos y hasta sería factible establecer una correlación de los mismos con el bovino con el fin de reemplazarlo en el futuro. Que el SERVICIO DE LABORATORIOS (SELAB), dependiente del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL (SENASA) está en condiciones de realizar los diferentes controles propuestos por la presente Resolución. Que el artículo n° 38 del Decreto n° 583 del 31 de enero de 1967, modificado por el Decreto n° 3899 del 22 de junio de 1972, reglamentario de la Ley n° 13.636 otorga facultades a la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA para resolver sobre el particular. Por ello, EL SECRETARIO DE AGRICULTURA, GANADERIA Y PESCA RESUELVE: ARTICULO 1°.- Las vacunas antiaftosas inscriptas de acuerdo a las normas y requisitos establecidos en la Resolución Ministerial n° 609/71 y su Anexo I deberán ajustarse a la misma salvo las normas y requisitos expresamente indicadas en la presente Resolución y su Anexo III. �ARTICULO 2°.- En los controles de autorización y de series los exámenes físico-quimicos, bacteriológicos, de inocuidad y potencia se realizarán sobre la vacuna envasada, rotulada y estampillada, además de las etapas que el SERVICIO DE LABORATORIOS (SELAB), considere necesario ajustándose a las siguientes normas: a) Controles físico-químicos. Las características físico-químicas de las vacunas serán enunciadas por el Laboratorio productor y se efectuarán las determinaciones que establece el Articulo 10, apartado II, inciso b) de la Resolución Ministerial n° 609/71. b) Controles bacteriológicos. Deberá estar libre de gérmenes y hongos viables de acuerdo con las técnicas que establece el SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL (SENASA) Anexo III. c) Controles de inocuidad. La vacuna no tend rá virus vivo, tampoco causará fiebre aftosa ni provocará reacciones inaceptables en los animales vacunados utilizándolos según lo indicado por el Laboratorio producir. 1) Control virus activo: La Dirección del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL (SENASA) efectuará el control de acuerdo a lo descripto en el Anexo III y en caso necesario el Servicio podrá utilizar previa notificación al Laboratorio productor aquéllas que surgieran en el futuro demostrando más sensibilidad que las citadas en el Anexo III. 2) Control de tolerancia: Se hará de acuerdo al Articulo 10, apartado II, inciso c) de la Resolución Ministerial n°609/71. ARTICULO 3°.- Los controles de autorización o serie que no pasaran cualquiera de los exámenes descriptos en el Articulo 2°, inciso a), b) y c), no podrán continuar con la siguiente etapa de control y por consiguiente el SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL (SENASA) procederá de acuerdo al Artículo 21 de la Resolución Ministerial N° 609/71. ARTICULO 4°.- Las pruebas de eficacia se efectuarán en bovinos por los métodos de la protección a la generalización podal y de acuerdo al siguiente protocolo: Por cada cepa patrón oficial se emplearán VEINTE (20) bovinos que reúnan las condiciones establecidas en el inciso c), apartado II, del Articulo 10 de la Resolución Ministerial n° 609/71. En las pruebas de autorización se agregará UN (1) bovino vacunado por cada valencia a controlar, el que será debidamente identificado y sólo se utilizará en la prueba en caso de muerte de UN (1) bovino titular, DIECISEIS (16) bovinos y UNO (1) más como está indicado precedentemente recibirán la vacuna en la dosis establecida de acuerdo al Articulo 24 de la Resolución Ministerial n° 609/71 y vía según indicación del Laboratorio productor y TRES (3) no vacunados actuarán como testigos. Transcurridos los VEINTIOCHO (28) dias post-vacunación cada grupo de DIECINUEVE (19) animales serán inoculados con UN (1) mililitro de una dilución de virus bovino de las Cepas Oficiales de prueba que contengan DIEZ MIL (10.000) D.I. 50 distribuidas en cuatro puntos de la lengua y por vía intradérmica. Los animales se observarán el SEPTIMO (7°) dia post-inoculación del virus y para que la prueba sea válida, los TRES (3) animales testigos deberán desarrollar lesiones podales de Fiebre Aftosa. ARTICULO 5°.- Será aprobada toda serie de vacuna que proteja por cada tipo o subtipo de virus que la integre por lo menos TRECE SOBRE DIECISEIS (13/16) de los vacunados con una dosis de vacuna. �Si la vacuna no alcanzara el nivel exigido en una sola y única valencia, pero protegiera en esa valencia hasta ONCE SOBRE DIECISEIS (11/16) animales, el Laboratorio productor podrá por única vez solicitar la repetición del control por esa valencia, utilizándose la misma cantidad de animales y dándose como aprobada si en el recontrol protegiera TRECE SOBRE DIECISEIS (13/16) animales. ARTICULO 6°.- Controles indirectos: Se realizarán por medio de la prueba de seroprotección, seroprotección, seroneutralización u otra prueba serológica equivalente. La valencia probada por índice de seroprotección ISP) o seroneutralización (SN) deberá alcanzar por lo menos un valor de SETENTA Y CINCO POR CIENTO (75%) de Expectativa Porcentual de Protección (EPP) para ser aprobada. Esto significa que un mínimo del SETENTA Y CINCO POR CIENTO (75%) de protección, es el límite inferior del intervalo de confianza del NOVENTA Y CINCO POR CIENTO (95%) para la media de las Expectativas Porcentuales de Protección (EPP) del grupo vacunado, Anexo III. En caso que se controle por método citado las valencias de una serie que no se hiciera por descarga en bovinos y no aprobara en una de ellas, se podrá repetir la prueba para esa valencia en bovinos por descarga. ARTICULO 7°.- Finalizados y aprobados todos los controles de acuerdo a los requisitos de la presente Resolución se otorgará Certificado Definitivo según la Resolución Ministerial n° 609/71. ARTICULO 8°.- Control de serie: Cada serie deberá pasar los controles bacteriológicos, físico-qulmicos e inocuidad, a que serán sometidas de la misma forma a lo citado en el Artículo 2° de la presente Resolución para el control de autorización. a) Control de eficacia: Se efectuará igual que para el de autorización y de acuerdo a lo descripto en el Artículo 4°; salvo que se vacunaran DIECISEIS (16) bovinos por cada serie, sin agregar UNO (1) más y deberá utilizar como mínimo DOS (2) bovinos como testigos. Será aprobada toda serie de vacuna que proteja por lo menos TRECE SOBRE DIECISEIS (13/16) animales para la valencia estudiada. Si en cambio diera ONCE SOBRE DIECISEIS (11/16) SESENTA Y OCHO POR CIENTO (68%) de los animales el Laboratorio productor podrá solicitar, por única vez, un segundo control debiendo proteger en éste caso TRECE SOBRE DIECISÉIS (13/16) animales. Cualquier otro resultado inferior a lo descripto en la presente Resolución, la serie será rechazada y se procederá de acuerdo al Artículo 21 de la Resolución Ministerial n° 609/71. En caso de muerte de UNO (1) o DOS (2) de los bovinos vacunados antes de la infección, la prueba se considerará válida dándose como aprobada toda serie que proteja por lo menos DOCE SOBRE QUINCE (12/15) u ONCE SOBRE CATORCE (11/14) animales. Si en cambio diera DIEZ SOBRE QUINCE (10/15) o NUEVE SOBRE CATORCE (9/14) animales el Laboratorio productor podrá solicitar, por única vez. un segundo control debiendo proteger en este caso TRECE SOBRE DIECISEIS (13/16) animales. Cualquier otra situación de más de DOS (2) animales muertos, el SERVICIO DE LABORATORIOS (SELAB) repetirá el control por anulación del mismo. b) Métodos indirectos: Se aplicará el procedimiento y criterio expresados en el control de autorización del Artículo 6° de la presente Resolución. �ARTICULO 9°.- La presente Resolución entrará en vigencia a partir de la prueba oficial de control N° 335. ARTICULO 10.- A partir de la fecha en la que la presente Resolución entre en vigencia, déjase sin efecto el Artículo 6° de la Resolución n° 162/84 en cuanto a exigencias de valor mínimo de aprobación de vacunas oleosas, cuyo período de inmunidad sea de CUATRO (4) meses, pasando a exigirse el mínimo de aprobación a TRECE SOBRE DIECISEIS (13/16) en lugar de CATORCE SOBRE DIECISEIS (14/16). ARTICULO 11.- Comuníquese, publíquese, dese a la Dirección Nacional del Registro Oficial y archívese. RESOLUCION N° 88. ANEXO III A) METODOS DE CONTROL DE INOCUIDAD A LA INFECCION DE SERIES DE VACUNA ANTIAFTOSA HIDROXIDO-SAPONINADA UTILIZADOS POR SELAB 1) VACUNA INTEGRAL 1.1 CELULAS UTILIZADAS: BHK21clona 13 ó IBRS2clona 17. Se siembran en fracos Roùx ó Frascos Roller de 1 litro. la cantidad de 80 ml. aproximadamente con 300.000 cel/ml. para los Frascos Roux 120 ml. para los Frascos Roller. Se incuban a 37 C durante 40 horas. 1.2 MEDIO: Para crecimiento Eagle con 10t de suero bovino. Para mantenimiento Eagle sin suero. 1.3 METODO: 1.3.1 Se cambian los 80 ml. ó 120 ml. (Según sea Roux o Frascos Roller) del medio Eagle de crecimiento por igual cantidad 1.3.2 Se siembra 10 ml. de vacuna integral en los Roux ó en Frascos Roller (1° pasaje). 1.3.3 Se incuba 24 horas a 37°C. 1.3.4 Se saca de estufa y se congela a -20°C. 1.3.5 Se descongela y a partir de este 1°Pasaje a un Frasco Roux ó Roller con células en las mismas condiciones que las del 1°Pasaje. 1.3.6 Se incuba a 37°C durante 40 horas. 1.3.7 Se congela, descongela y se efectúa un 3° Pasaje a partir del 2° de igual manera que en 1.3.5. 1.3.8 Se incuba durante 72 horas a 37°C. 1.3.9 Se lee el efecto citopático en m.o. y luego se congela, descongela y se entrega a Fijación de Complemento. 2) ELUCION DEL ANTIGENO �2.1 CELULAS UTILIZADAS: Igual que el método anterior 1.1. 2.2 MEDIO: Para mantenimiento y crecimiento igual que el método anterior 1.2. Buffer de elución 1,2 Molar: ....................................... PO4HK2 158,85 grs. ....................................... PO4KH2 -39,19 grs ....................................... H2O destilada c.s.p............1.000ml ...................................... pH: 7,4 Esterilizar en autoclave. 2.3. METODO 2.3.1. Centrifugar 200 ml. de vacuna a 2000 rpm. durante 20' (Centrífuga refrigerada a 4°C). 2.3.2 Deshechar el sobrenadante y al sedimento de hidróxido agregarle 40 ml. de Buffer de elución según fórmula escrita en 2.2. Agitar la mezcla con agitador magnético durante 45' a 4°C. 2.3.3 Centrifugar 20' a 2000 rpm, a 4°C. 2.3.4 Extraer el sobrenadante y conservar. Al sedimento restante agregarle 40 ml. de Buffer de elución y proceder de la misma forma que 2.3.2 y 2.3.3. 2.3.5 Al sobrenadante de esta 2°elución se le une el de la 1°elución, completando un total de 80 ml. de antígeno eluído. 2.3.6 Llevar los 80 ml. del eluido a 160 ml. con agua destilada estéril y agregarle OCHO POR CIENTO (8%) de PEG 6000. 2.3.7 Agitar 45' a 4°C con agitador magnético. 2.3.8 Dejar reposar por un período mínimo de TRES (3) horas un overnight a 4°C. 2.3.9 Centrifugar a 9000 rpm. 2.3.10 Deshechar sobrenadante y diluir el culotte en 4 m medio Eagle de mantenimiento. 2.3.11 Sembrar 1 ml. por Roux o Frasco Roller con células e incubar a 37°C durante 24 horas. 2.3.12 Sacar, congelar, descongelar y efectuar un 2°pasaje con 10 ml. del 1°pasaje a otro Roux o Frasco Roller e incubar a 37°C durante 48 horas. 2.3.13 Sacar, congelar, descongelar y efectuar un 3°pasaje de la misma forma que el anterior e incubar a 37°C durante 72 horas. �2.3.14 Observar efecto citopático al m.o. y congelar, descongelar y realizer Fijación de Complemen to. INTERPRETACION PARA AMBAS TECNICAS: Toda serie de vacuna está liberada para la siguiente etapa de control cuando no se observe efecto citopático en los cultivos ni sea detectado virus por Fijación de Complemento. B) CONTROL BACTERIOLOGICO 1) HIDROXISAPONINADA ~ a) Medios de cultivo: Agar en Soja Tripteina (Hongos saprofitos y patógenos) Tioglicolato (Aeroblos - anaerobios) Sabouraud (Líquido o sólido - hongos patógenos). b) Volúmen del Medio utilizado = 10 ml. c) Inóculo = 1 ml. en Tioglicolato y 0,5 en los restantes. d) Temperatura de Incubación = 25°- 27°C (termofilos y mesofilos). e) Tiempo de incubación = 14 dias. 2) OLEOSAS SIEMBRA EN: - Tioglicolato USP, lavado en agar con agregado del UNO POR CIENTO (1%) de Tween 80 y de fosfato bisódico como neutralizador de PH. - Sabouraud líquido con UNO POR CIENTO (1%) Tween 80 y fosfato como amortiguador de PH. - Volumen de Siembra 2 cc de vacuna en 20 cc. de medio de cultivo. Incubación a 25°C - 27°C durante 14 días. C) CONTROLES INDIRECTOS Serán utilizadas las técnicas de seroprotección (ISP) en ratón lactante y seroneutralización (SN) según el procedimiento del manual de procedimiento para control de Vacuna Antiaftosa del CPFA. Hasta que el Servicio obtenga la correspondencia entre la descarga de bovinos y EPP (Según procedimiento de Gomes y Astudillo) estas pruebas sólo tendrán valor orientativo. �Una vez establecida dicha correlación el SELAB establecerá el protocolo oficial de control por seroprotección (ISP) o seroneutralización (SN) los que serán incluidos en este Anexo III previa comunicación a los laboratorios productores. � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Resolución SAGyP N° 0088/1996 Description An account of the resource Vacunas antiaftosa. Creator An entity primarily responsible for making the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource Miércoles 14 de Febrero de 1996 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Resolución Abstract A summary of the resource. Las vacunas antiaftosas inscriptas de acuerdo a las normas y requisitos establecidos en la Resolución Ministerial N° 609/71 y su Anexo I deberán ajustarse a la misma salvo las normas y requisitos expresamente indicadas en la presente Resolución y su Anexo III. Source A related resource from which the described resource is derived Resolución SAGyP N° 0088/1996 https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/c85580e13969e2975dcd040b2a999df4.pdf 42756c759d1e9c0be15e6d93167c2181 PDF Text Text MINISTERIO DE ECONOMIA Y OBRAS Y SERVICIOS PUBLICOS SECRETARIA DE AGRICULTURA, PESCA Y ALIMENTACION RESOLUCION N° 456/1996 SAPyA BUENOS AIRES, 2 de agosto de 1996 VISTO el expediente N° 800-001976/96 del registro de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, PESCA Y ALIMENTACION, y CONSIDERANDO: Que la Encefalopatía Bovina (BSE) se ha convertido en un problema sanitario grave no sólo por las trabas a la comercialización de productos pecuarios de origen bovino sino también por sus posibles implicancias en la Salud Pública, tanto de los países afectados como para aquellos que importen productos y subproductos de origen rumiante. Que es necesario mantener una permanente actualización de la información científica sobre el tema en los aspectos veterinarios, epidemiológicos, de diagnóstico, de transmisibilidad y de Salud Pública, con el propósito de fortalecer la situación de Libre de BSE en la REPUBLICA ARGENTINA y garantizar la continuidad de tal situación, de acuerdo a los más recientes avances científicos en la materia. Que una Comisión Científica Consultora, compuesta por especialistas nacionales y extranjeros de reconocida trayectoria en el tema sería el instrumento adecuado para cumplimentar los anteriores requerimientos. Que la DELEGACION II de la DIRECCION GENERAL DE ASUNTOS JURIDICOS del MINISTERIO DE ECONOMIA Y OBRAS Y SERVICIOS PUBLICOS, destacada ante esta Secretaría, ha tomado la intervención que le compete. Que los profesionales que a continuación se designan han demostrado poseer un amplio conocimiento del tema. Que de conformidad con las atribuciones conferidas por el Decreto N° 660 del 24 de junio de 1996, el suscripto es competente para suscribir dicho acto. Por ello, EL SECRETARIO DE AGRICULTURA, PESCA Y ALIMENTACION RESUELVE: ARTICULO 1° — Créase en el ámbito de esta Secretaría la Comisión Científica Consultora sobre Encefalopatía Espongiforme Bovina (BSE). ARTICULO 2° — La citada Comisión estará integrada por: Doctor D. Clarence GIBBS, del NATIONAL INSTITUTE OF HEALTH de los ESTADOS UNIDOS DE AMERICA; Doctor D. William HUESTON, del ANIMAL AND PLANT HEALTH INSPECTION SERVICES de los ESTADOS UNIDOS DE AMERICA; Doctor D. Pedro PICCARDO, de la Universidad de Indiana de los ESTADOS UNIDOS DE AMERICA; Doctor D. Ray BRADLEY, del MINISTERY OF AGRICULTURE FISHIRIES AND FOOD del REINO UNIDO DE GRAN BRETAÑA E IRLANDA DEL NORTE; Doctor D. Richard KIMBERLIN, de SCRAPIE AND RELATORIE ADVISORE SERVICES del REINO UNIDO DE GRAN BRETAÑA E IRLANDA DEL NORTE; Doctor D. Ueli KIHM, del OFFICE VETERINAIRE FEDERAL de la CONFEDERACION SUIZA; Doctora en Medicina D. Ana Lía TARATUTO (C. I. N° 3.150.926) del INSTITUTO DE INVESTIGACIONES NEUROLOGICAS RAUL CARREA (FLENI); Doctor en Medicina D. Ginés Mario GONZALEZ (D.N.I. N° 4.692.308) de la FUNDACION ISALUD; Doctor en Medicina Veterinaria D. Bernardo Jorge CARRILLO (D.N.I N° 7.269.709) del INSTITUTO NACIONAL DE TECNOLOGIA AGROPECUARIA (INTA); Doctor en Medicina Veterinaria D. Alfredo Jorge NADER (L.E N° 4.637.019) del ex-SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL; Doctor en Medicina Veterinaria D. Emilio Juan GIMENO (C. I. N° 2.318.115) de la UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA; Doctor en Medicina D. Alberto Everardo Julio CORMILLOT (C. I. N° 3.869.136); Médico Veterinario Doctor D. Alejandro Aníbal SCHUDEL (C.I. �N° 6.803.793) del INSTITUTO NACIONAL DE TECNOLOGIA AGROPECUARIA (INTA), Médico Veterinario Doctor D. Carlos José VAN GELDEREN (L. E. N° 7.801.797) y el Médico Veterinario D. Bernardo Gabriel CANE (D.N.I N° 12.014.678) del ex–SERVICIO NACIONAL DE SANIDA ANIMAL. ARTICULO 3° — Serán funciones de esta Comisión Científica Consultora: a — Reunirse a convocatoria del Señor Secretario de Agricultura, Pesca y Alimentación. b — Elaborar informes anuales de opinión sobre los últimos avances científicos en la materia y sus implicancias sobre la posición de la REPUBLICA ARGENTINA como país libre de BSE. c — Asesorar y efectuar recomendaciones a la SECRETARIA DE AGRICULTURA, PESCA Y ALIMENTACION en todo lo relativo a esta materia. ARTICULO 4° — Déjase establecido que dichas funciones serán Ad-Honorem. ARTICULO 5° — Comuníquese, publíquese, dése a la Dirección Nacional de Registro Oficial y archívese. — Ing. FELIPE C. SOLA, Secretaría de Agricultura, Pesca y Alimentación. � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Resolución SAGyP N° 0456/1996 Description An account of the resource Consultora sobre Encefalopatía Espongiforme Bovina (BSE). Creator An entity primarily responsible for making the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource Viernes 2 de Agosto de 1996 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Resolución Abstract A summary of the resource. Créase en el ámbito de esta Secretaría la Comisión Científica Consultora sobre Encefalopatía Espongiforme Bovina (BSE). Source A related resource from which the described resource is derived <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=38572">Resolución SAGyP N° 0456/1996</a> Is Replaced By A related resource that supplants, displaces, or supersedes the described resource. <strong>Abrogada por el articulo 1° de la <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=310952">Resolución N° 126/2018</a> del Ministerio de Agroindustria</strong> https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/c8214f339f67c84f4d00ee2426049f2a.pdf 0a13ef0584b18ba67e9838c53eacae92 PDF Text Text MINISTERIODE ECONOMIA Y OBRAS Y SERVICIOS PUBLICOS SECRETARIA DE AGRICULTURA, PESCA Y ALIMENTACION RESOLUCION Nº 457/1996 SAPyA DEROGADA por RM 126/2018 BUENOS AIRES, 2 de agosto de 1996 VISTO el expediente Nº 800-001977/96 del registro de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, PESCA Y ALIMENTACION, y CONSIDERANDO: Que la Encefalopatía Espongiforme Bovina (BSE) se ha convertido en un problema sanitario grave no sólo por las trabas a la comercialización de productos pecuarios de origen bovino sino también por sus posibles implicancias en la Salud Pública, tanto de los países afectados como para aquellos que importen productos y subproductos de origen rumiante. Que es necesario mantener una permanente actualización de la información de que dispone esta Secretaría para todos los aspectos involucrados en este problema, incluidos los médicos, veterinarios y epidemiólogos, que constituyen la base de las decisiones técnicas de la política de importaciones. Que el carácter del producto sanitariamente diferenciado de nuestras carnes, productos y subproductos de origen bovino requiere un permanente control de gestión de las acciones ejecutadas para demostrar la ausencia de la enfermedad en nuestro país y de las programadas y en ejecución para garantizar la continuidad de tal situación, de acuerdo con los más recientes avances en la materia. Que una Comisión Técnica Asesora, compuesta por especialistas en el tema sería el instrumento adecuado para cumplimentar los anteriores requerimientos. Que los profesionales que a continuación de designan han demostrado poseer no sólo un amplio conocimiento del tema, sino también la necesaria idoneidad profesional que requiere el manejo de una situación como la presente. Que la DELEGACION II de la DIRECCION GENERAL DE ASUNTOS JURIDICOS del MINISTERIO DE ECONOMIA Y OBRAS Y SERVICIOS PUBLICOS, ha tomado la intervención que le compete. Que de conformidad con las atribuciones conferidas por el Decreto Nº 866 del 11 de diciembre de 1995, el suscripto es competente para suscribir este acto. Por ello, EL SECRETARIO DE AGRICULTURA, PESCA Y ALIMENTACION RESUELVE: ARTICULO 1º – Créase en el ámbito de esta Secretaría la COMISION TECNICA ASESORA SOBRE ENCEFALOPATIA ESPONGIFORME (BSE), con carácter de permanente. ARTICULO 2º – La citada Comisión Honoraria estará integrada por los siguientes profesionales: Médico Veterinario Doctor D. Alejandro Aníbal SCHUDEL (L.E. 6.179.271) del INSTITUTO NACIONAL DE TECNOLOGIA AGROPECUARIA (INTA), Médico Veterinario Doctor D. Carlos José VAN GELDEREN (L.E. 7.801.797) y Médico Veterinario Doctor D. Bernardo Gabriel CANE (D.N.I. 12.014.678) ambos del ex-SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL. ARTICULO 3º – La coordinación de esta Comisión Técnica Asesora será ejercida por el Doctor D. Carlos José VAN GELDEREN. ARTICULO 4º – Serán funciones de esta Comisión Técnica Asesora: a) Asesorar al Señor Secretario de Agricultura, Pesca y Alimentación en todo lo concerniente al tema BSE. b) Coordinar las acciones que sobre BSE se realicen en las diferentes áreas de esta Secretaría. �c) Asesorar y coordinar con otros organismos públicos y privados, nacionales y extranjeros, sobre el tema BSE. d) Convocar, organizar y ejercer la secretaría de las reuniones de la Comisión Científica Consultiva. ARTICULO 5º – Déjase establecido que dichas funciones serán Ad-Honorem. ARTICULO 6º – Comuníquese, publíquese, dése a la Dirección Nacional del Registro Oficial y archívese.— Ing. FELIPE C. SOLA, Secretaría de Agricultura, Pesca y Alimentación. � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentación Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Resolución SAPyA N° 0457/1996 Description An account of the resource Comisión Técnica Asesora Encefalopatía Espongiforme Bovina (BSE). Creator An entity primarily responsible for making the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentación Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource Viernes 2 de Agosto de 1996 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Resolución Abstract A summary of the resource. Se crea en ámbito de esta Secretaría la COMISIÓN TÉCNICA ASESORA SOBRE ENCEFALOPATIA ESPONGIFORME (BSE), con carácter de permanente. Source A related resource from which the described resource is derived <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=38571">Resolución SAPyA N° 0457/1996</a> Is Replaced By A related resource that supplants, displaces, or supersedes the described resource. <strong>Abrogada por el artículo 1° de la <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=310952">Resolución N° 126/2018</a> del MINISTERIO DE AGROINDUSTRIA</strong> https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/44041a9a623d8e48b1e1862d6c7c42e0.pdf 3f6f5ad25d85df656fe18495949aa5e3 PDF Text Text Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos SANIDAD VEGETAL Resolución 98/2003 Apruébanse las Normas de Funcionamiento de los Laboratorios de Diagnóstico de Enfermedades para Plantas Cítricas de Vivero y/o sus Partes. Instalaciones. Técnicas de laboratorio. Técnicas de invernáculo. Extracción de muestras. Certificado de diagnóstico. Bs. As., 5/2/2003 Visto el expediente N° 800-011266/2001 del Registro de la ex-SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTACION, y CONSIDERANDO: Que a los fines de resguardar la calidad y sanidad de los materiales de propagación de plantas cítricas y/o sus partes que se encuentren en disponibilidad para la entrega al productor, es necesario establecer la normativa referente a la habilitación y funcionamiento de los Laboratorios que certificarán dicha calidad y sanidad. Que las condiciones que debe reunir un laboratorio y las normas para su funcionamiento dependen de los análisis y del material que pretenda analizar. Que a la presente norma complementa la Resolución del Registro de la ex-SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTACION N° 149 de fecha 27 de octubre de 1998 referida a las Normas para la Producción, Comercialización e Introducción de Plantas Cítricas de Vivero y sus Partes. Que en virtud del artículo 13 de la Ley N° 20.247, los laboratorios de análisis deben estar inscriptos en el Registro Nacional de Comercio y Fiscalización de Semillas. Que por los artículos 1°, 2° y 3° de la Resolución 42 de fecha 6 de abril de 2000 se crean categorías que contemplan a los laboratorios. Que la resolución n° 42 de fecha 6 de abril de 2000 en su ANEXO I establece que los laboratorios deberán cumplir previamente a su inscripción, con normas establecidas en la materia. Que a los efectos de dar cumplimiento a la Resolución de la ex-SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTACION N° 149 de fecha 27 de octubre de 1998, es necesario contar con laboratorios y establecer protocolos de habilitación a los cuales se deberán ajustar los laboratorios para inscribirse. Que la COMISION NACIONAL DE SEMILLAS, creada por la Ley de Semillas y Creaciones Fitogénéticas N° 20.247, se ha pronunciado favorablemente según surge del Acta N° 288 de fecha 13 de agosto de 2001. �Que la DIRECCION DE LEGALES del AREA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS de la DIRECCION GENERAL DE ASUNTOS JURIDICOS del MINISTERIO DE ECONOMIA, ha tomado la intervención que le compete, en virtud de lo dispuesto por la Resolución de la PROCURACION DEL TESORO DE LA NACION N° 7 de fecha 4 de febrero de 2002. Que el suscrito es competente para dictar el presente acto en virtud de las facultades que le otorga el Decreto N° 475 del 8 de marzo de 2002. Por ello, EL SECRETARIO DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS RESUELVE: ARTÍCULO 1° — Apruébase las NORMAS DE FUNCIONAMIENTO DE LOS LABORATORIOS DE DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES PARA PLANTAS CITRICAS DE VIVERO Y/O SUS PARTES que como Anexos I a VII forman parte integrante de la presente resolución. ARTÍCULO 2° — Los interesados deberán presentar la solicitud mencionada en el ANEXO I ante la Dirección de Calidad, Laboratorio Central de Análisis de Semillas (L.C.A.S.), de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS en la que se consignarán datos del propietario, dirección del laboratorio, profesionales responsables, instalaciones, equipos e instrumental y demás aspectos que se fijan en la presente resolución. ARTÍCULO 3° — La habilitación de laboratorios queda supeditada a la verificación de la capacidad técnica, instrumental y operativa del solicitante para la realización de los análisis para los cuales se requiere habilitación, la que estará a cargo de la Dirección de Calidad Laboratorio Central de Análisis de Semillas (L.C.A.S.), quien deberá solicitar la intervención del LABORATORIO DE SANIDAD VEGETAL (L.S.V.) dependiente del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA de esta Secretaría, para evaluar los aspectos de su competencia. ARTÍCULO 4° — Los diagnósticos de enfermedades que podrán realizar los laboratorios estarán condicionados por la idoneidad técnica del responsable y la disponibilidad de instrumental y equipo mencionado en el ANEXO II y III de la presente resolución. ARTÍCULO 5° — Una vez obtenida la habilitación el interesado deberá proceder a su inscripción ante el Registro Nacional del Comercio y Fiscalización de Semillas cumplimentando la reglamentación pertinente. ARTÍCULO 6° — Queda prohibida en el ámbito nacional la actuación de cualquier laboratorio que no cumplimente los requisitos establecidos en la presente resolución. La falta de inscripción en el Registro Nacional de Comercio y Fiscalización de Semillas, hará pasible a los mismos de las sanciones previstas en el artículo 41 de la Ley N° 20.247. La falta de cumplimiento de cualquiera de las exigencias establecidas en la presente resolución facultará a la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS a cancelar la habilitación del �laboratorio, lo que dará lugar a la caducidad de la inscripción en el Registro Nacional de Comercio y Fiscalización de Semillas. ARTÍCULO 7° — Los certificados emitidos por los laboratorios habilitados tendrán validez en el orden nacional y deberán ser confeccionados en los formularios autorizados que se detallan en el ANEXO VII de la presente resolución. A petición de un laboratorio habilitado el Laboratorio Central de Análisis de Semillas (L.C.A.S) ensayará por sí mismo o por terceros las muestras cuestionadas emitiendo su veredicto al respecto. ARTÍCULO 8° — La Dirección de Calidad, Laboratorio Central de Análisis de Semillas (L.C.A.S.) de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS, actuando en forma conjunta con el SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, Laboratorio de Sanidad Vegetal, en los temas de su competencia, llevará a cabo la auditoría y la supervisión de los laboratorios inscriptos, debiendo éstos cumplimentar las directivas que se emitan sobre criterios de interpretación de resultados, procedimientos analíticos y ejecución de los ensayos de verificación. ARTÍCULO 9° — Los profesionales responsables quedarán sujetos a lo dispuesto en el punto 2 del Anexo III de la Resolución ex-INSTITUTO NACIONAL DE SEMILLAS N° 42 de fecha 6 de abril de 2000. ARTÍCULO 10. — Toda modificación en la situación del laboratorio en cuanto a propietario, domicilio, instalaciones o profesionales responsables, deberá comunicarse en forma fehaciente a la Dirección de Calidad, Laboratorio Central de Análisis de Semillas (L.C.A.S.) dentro de los TREINTA (30) días de producida. ARTÍCULO 11. — Comuníquese, publíquese, dése a la Dirección Nacional del Registro Oficial y archívese.— Haroldo A. Lebed. ANEXO I SOLICITUD DE HABILITACION DE LABORATORIOS DE DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES DE PLANTAS CITRICAS DE VIVERO Y SUS PARTES. PROPIETARIO Nombre y Apellido o razón social ..............................….......................…………………… Domicilio ..................... CP ........... Localidad .....……Provincia.......................…………… Teléfono/Fax/Correo electrónico .....................................…………………………………. LABORATORIO Nombre del Laboratorio .................................................................................................… �Domicilio ................................... CP.... Localidad .................... Provincia.......................…. Teléfono/Fax/Correo electrónico ....................................………………………………….. PROFESIONALES RESPONSABLES Jefe o Director Técnico Nombre y Apellido ..................................... LE/LC/DNI N° .....................……..................... Domicilio ................................... CP ........... Localidad ................. Provincia.......................… Título expedido por ............................................ Matr. Prof. N° ....................…………........ Teléfono/Fax/Correo electrónico ....................................…………………………………… Reemplazante autorizado Nombre y Apellido ..................................... LE/LC/DNI N° .......................…..................... Domicilio ............................. CP ........... Localidad ...................... Provincia......................... Título expedido por ....................……........................ Matr. Prof. N° .............…….............. INSTALACIONES Agregar plano o croquis. INSTRUMENTAL Y EQUIPOS Agregar el detalle correspondiente de acuerdo a las normas de la presente resolución. .................................................... Firma del propietario o representante .................................................... Firma del profesional responsable .................................................... Firma del reemplazante autorizado ANEXO II NORMAS DE FUNCIONAMIENTO DE LOS LABORATORIOS DE DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES DE PLANTAS CITRICAS DE VIVERO Y SUS PARTES. 1- DISPOSICIONES GENERALES: �El alcance de esta Normativa es referente a los diagnósticos obligatorios de enfermedades transmitidas por injerto a: 1. Plantas Madre Original y Planta Madre de Reserva. 2. Material de Fundación. 3. Plantas yemeras. 4. Plantas Madres Semilleras. 5. Plantas certificadas. La duración de los diagnósticos (meses-horas) y su repetición se harán según el Anexo I de la Resolución N° 149/98. Los laboratorios de diagnóstico de enfermedades para plantas cítricas de vivero y sus partes, deberán comprometerse a cumplir las siguientes normas y proporcionar al responsable técnico y/o analista las condiciones necesarias para el desarrollo y desempeño de su/s función/es. El responsable técnico y/o analista deberá tener conocimiento del compromiso y los objetivos de estas normas. Los conceptos omitidos y/o no previstos en estas normas serán resueltos por el INASE y/o la Dirección de Calidad de acuerdo a la competencia de los mismos. Tanto el Director Técnico como el reemplazante autorizado deberán estar capacitados en técnicas de detección mediante métodos biológicos, bioquímicos y moleculares de enfermedades de plantas cítricas de viveros y sus partes, según normas técnicas de la dirección de calidad del INASE, u otras que demuestren ser adecuadas para tal fin. Los mismos avalarán con su firma los certificados que expidan haciéndose responsable de su contenido. Los analistas (o técnicos) deberán poseer entrenamiento e idoneidad en el diagnóstico de enfermedades transmisibles por injerto de plantas cítricas de viveros y sus partes, participar en cursos y reuniones técnicas. Se deberá proveer entrenamiento para el personal auxiliar. 2- INSTALACIONES: Debido a la naturaleza de los diagnósticos necesarios para la certificación sanitaria de plantas cítricas y sus partes, toda entidad dedicada a esta actividad, deberá contar con una sección de laboratorio y una de invernáculo, adecuadamente equipados. El ingreso de personas ajenas a estas instalaciones debe limitarse al mínimo necesario para disminuir los riesgos de contaminación. El personal (tanto técnicos como auxiliares) deberán restringir su movimiento dentro de las instalaciones a las tareas que tienen asignadas. �A - LABORATORIO: El área del laboratorio y cada una de sus dependencias deberán ser compatible con el volumen de muestras que se procesen y con el personal disponible. Se deberá establecer una separación eficaz entre zonas vecinas cuando se desarrollen en ellas actividades incompatibles. El acceso y el uso de todos los sectores que influyan sobre la calidad de estas actividades, deberán ser definidos y controlados. Estos sectores estarán detallados en un croquis que deberá presentarse al momento de la solicitud de habilitación. Incumbe al laboratorio cumplir con las exigencias vigentes en materia de salud y seguridad. El laboratorio deberá disponer de los siguientes sectores: • Recepción y registro de muestras: Con acceso externo, que asegure independencia de las demás dependencias. • Sector de acondicionamiento y lavado de muestras. • Sector de flujo laminar. • Sector de cultivo de tejidos "in vitro" o micropropagación. • Sector para el desarrollo de técnicas bioquímicas y/o moleculares (DAS-ELISA, Inmunoimpresión, Hibridación, sPAGE). • Sector de revelado de film (cuarto oscuro). • Sector del lavado del material, preparación de medios y esterilización. Sector para almacenamiento de drogas. • Sector para el almacenamiento de materiales de vidrio y plástico. Sector de oficinas. B- INVERNACULOS: • La zona de invernáculo/s debe estar cercada con alambrado olímpico perimetral y contar con piletas de desinfección para la entrada peatonal y vehicular. • Las entradas peatonales deberán constar de piletas de desinfección cubiertas con cobre en forma de polvo (oxicloruro, sulfato u otro tipo de formulación), que puede ser mezclado con grava o canto rodado pequeño (1 ó 1,5 cm de diámetro), para una mejor distribución del desinfectante, el cual deberá mantener la concentración necesaria que asegure su efectividad. El tamaño de las piletas dependerá del tránsito peatonal por entrada, pero deberán ser lo suficientemente amplias como para permitir el ingreso sin dificultad y diseñadas de tal manera que el peatón se vea obligado a pisarlas. • Las piletas de desinfección vehicular contendrán una solución líquida de cobre (oxicloruro de cobre al 3 por mil), que se renovará periódicamente y con mayor frecuencia en períodos de lluvia, o cuando el tránsito es intensivo. Su tamaño debe ser acorde al tipo de vehículo que ingresa al �establecimiento, deberá dar 2 vueltas completas la rueda del vehículo más grande que ingrese al sector y cubriendo completamente la cubierta. • Deberá considerarse además la estructura de la pileta, dimensionada de tal manera que soporte el peso del vehículo con carga (el vehículo más pesado que ingrese a ese sector). • Toda el área comprendida en el alambrado perimetral, circundante a los invernáculos, debe estar limpia, libre de malezas que puedan albergar insectos vectores de plagas. • El diagnóstico de enfermedades se realizará en un invernáculo de vidrio, policarbonato o similar en condiciones de aislamiento exterior y con controles de temperatura. • El tamaño del invernáculo dependerá de la cantidad de pruebas de diagnóstico e investigación que se van a llevar a cabo. • Este invernáculo estará dividido en 3 sectores. En ellos se desarrollarán las siguientes actividades: Sector 1: siembra y cría de plantines indicadores y mantenimiento de las "plantas candidatas", con una temperatura de 18-24°C. Sector 2: denominado frío, utilizado para pruebas de diagnóstico (18-24°C) para detectar psorosis y tristeza. Sector 3: denominado caliente, utilizado para pruebas de diagnóstico (28-32°C) para detectar exocortis y cachexia-xiloporosis. • En todos los sectores se llevarán registros de humedad y temperatura por medio de termohidrógrafos. Los datos obtenidos de las fajas de los termohidrógrafos se llevarán en planillas para poder (de ser necesario) correlacionar síntomas con temperatura del sector. Las fajas se archivarán en carpetas para su control. • Semanalmente se realizará el monitoreo de todo del invernáculo para el control de insectos mediante trampas amarillas y recolección de muestras de hojas (de cada mesada debidamente identificada) que se observan bajo lupa. Los datos se registran en planillas. • Todo invernáculo dedicado al diagnóstico deberá ser aislado (toda abertura al exterior deberá contar con malla antiáfido, 30/32 hilos por pulgadas, contar con doble puerta de entrada con antecámara entre ambas puertas evitando el ingreso de insectos. En la antecámara se encontrarán los guardapolvos de uso obligatorio y los desinfectantes para manos (desinfección inmediata) empleándose previo ingreso al invernáculo. • Al ingresar al invernáculo, en la antecámara y en cada sector dei invernáculo se deberá desinfectar el calzado pisando una bandeja que contiene una esponja empapada en una solución desinfectante basado en iodo (l2). Dicho desinfectante debe ser renovado periódicamente, dependiendo su frecuencia del movimiento de personas que ingrese al mismo. �• El piso del invernáculo deberá ser de cemento con desagüe o canto rodado y contará con mesadas que pueden ser de cemento, madera, plástico o material apropiado para tal fin. El piso y las mesadas se desinfectarán con soluciones de hipoclorito de sodio (100% cloro activo) al 10% y de cobre al 3‰. Se mantendrá la limpieza de los sectores y cada uno contará con tachos de residuos con tapa. • Los invernáculos deberán contar con algún sistema de riego interno por goteo o de riego manual. 3- EQUIPAMIENTO: El laboratorio y el/los invernáculos deberán estar provistos de todos los equipos y de los materiales de referencia necesarios para la ejecución correcta de los ensayos. Todos los equipos deberán ser mantenidos en adecuado estado de funcionamiento. 4- INSTRUCCIONES PARA EL FUNCIONAMIENTO: PROCEDIMIENTOS: Cada laboratorio y el/los invernáculos deberán contar con una carpeta donde consten todos los procedimientos operativos e instrucciones de trabajo actualizados conjuntamente con los otros registros que más adelante se detallan para permitir la/s auditoría/s por parte del INASE. DOCUMENTACION: • Boletín interno de análisis. • Libro de registro de muestras. • Certificados de análisis • Archivo de documentos. • Bibliografía técnica. • Registro de reactivos. • Registro de equipos. Referente al Libro de registro de muestras: Este libro deberá contar con hojas numeradas con un sistema que asegure la inalterabilidad de los registros, preferentemente en posición horizontal, que pueda ser completadas en forma manual o una mecánica tipo PC. con sistema de seguridad. Allí se registrarán todas las muestras que ingresen al Laboratorio y al invernáculo a las que se hallan emitido o no certificado (muestras de control interno de calidad, particulares, de entrenamiento, ensayo de referencia, muestras de fiscalización y otras), con número correlativo que corresponderá al número de diagnóstico de la misma. Se deberán detallar los datos mínimos �obligatorios que hacen a la identificación de las muestras como: número de diagnóstico o test, fecha de recepción, remitente, procedencia u origen, especie, cultivar, categoría, número de lote, fecha y número de certificado de análisis y todos aquellos datos que se consideran necesarios para la identificación de la muestra. Las muestras deberán registrarse en secuencia numérica en orden cronológico de recepción. Muestras: Las muestras ingresadas deberán ser identificadas con su respectivo número de recepción. BOLETIN INTERNO DE DIAGNOSTICO. Se emitirá un boletín interno por cada muestra. Este boletín deberá estar identificado con el mismo número de recepción que posee la muestra en el Libro de Registro de Muestras. El Boletín Interno contará con la información indispensable para la ejecución del diagnóstico o test tales como: número de diagnóstico o test, determinaciones solicitadas, fecha de inicio y finalización del análisis, y otras informaciones complementarias. Aquí se registrarán los resultados obtenidos de los diagnósticos o tests, datos e identificación del técnico (si las etapas están desarrolladas por distintos técnicos, cada uno deberá indicar la etapa que le corresponda mediante firma y aclaración). ARCHIVO DE DOCUMENTOS. Los Libros de Registro de Muestras, Boletines Internos, y Certificados emitidos se archivarán durante un período de cinco (5) años y estarán a disposición de los inspectores de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS o de sus organismos descentralizados en sus áreas de competencia, cuando ellos lo soliciten. MUESTRAS. Las Muestras deberán ser empaquetadas en bolsas plásticas de polietileno junto con una etiqueta resistente. La bolsa deberá ser envuelta firmemente alrededor del material para evitar espacios de aire excesivos y deberá ser colocada en una segunda bolsa. Esta bolsa deberá ser sellada o cerrada fuertemente con un cordel o una banda elástica y ser rotulada nuevamente con la firma del responsable de la extracción y del Director Técnico o Representante de la empresa. La temperatura de conservación de muestras vegetales (varetas, hojas, brotes, semillas de cítricos) es de 5-8°C-heladera, sector de verduras. Las muestras ingresadas deberán ser identificadas con su respectivo número de recepción. El, protocolo de extracción de las muestras se describe en el ANEXO V. ANEXO III �TECNICAS DE LABORATORIO 1. DETECCION DEL VIRUS DE LA TRISTEZA DE LOS CITRICOS A- INMUNOIMPRESION DIRECTA - ELISA Muestra: Brotes tiernos: pedicelos de hojas o pedúnculos de frutos. Almacenamiento de la muestra: La muestra se puede guardar en una bolsa plástica en heladera como máximo 2 semanas. Drogas y Equipo mínimo requerido: Kit (membrana de nitrocelulosa con controles positivos, anticuerpo monoclonal específico del virus de la Tristeza de los Cítricos (CTV) marcados con fosfatasa alcalina) Sustrato para revelado: pastillas de BCIP-NBT, Sigma Fast. Drogas para preparar los Buffer (solución tampón), en las diferentes etapas. Destilador, en su defecto agua destilada. Heladera Agitador orbital Agitador magnético Papel absorbente Lupa binocular de 10X - 20X de aumento. Material para cortar. Balanza analítica, capacidad 120gr con resolución 0,001gr. Micropipetas de volúmenes variables o varias de volúmenes fijos. Tips estériles adaptables a las micropipetas. Peachímetro rango de pH de 0 a 14, resolución 0,01, error +/- 0,1 rango de temperatura de 0,5 a 100°C, 1°C de resolución, +/- 1°C de error. Autoclave Material de vidrio o plástico necesario. Preparar el buffer sustrato disolviendo una pastilla de BCIP-NBT (5-bromo-4-cloro-3-indolyl phosphate/ nitroblue tetrazolium tablets), en 10ml de agua destilada. Añadir sobre las membranas �y dejar incubar hasta la aparición de color violeta-púrpura en el testigo positivo (3 a 7 minutos). Paralizar la reacción lavando la membrana con agua corriente. Dejar extendida sobre papel absorbente. Lectura de la membrana: Observar las impresiones con ayuda de una lupa (X 10 - X 20 aumentos). La presencia de precipitados violáceos en la zona vascular de las secciones de material vegetal, indica la presencia del virus de la Tristeza de los Cítricos (CTV) (reacción positiva). TABLA DE DROGAS Y SOLUCIONES: Droga o Solución Composición pH u Observaciones Albúmina de suero bovino . . Agua fisiológica tamponada (AFT)10 X: 20ml agua destilada 1,6gr NaCl pH 7,4 0,08gr NaH2PO4 2H2O 0,268gr Na2HPO4 2H2O Diluir 1 ml en 9ml de agua destilada. Tampón de lavado: 1 ml AFT 10 X 4mg NaN3 pH 7,2-7,4 10ul Tween 20 Llevar a 20ml con agua destilada B- DAS-ELISA Muestras: corteza verde. Almacenamiento de la muestra: La muestra se puede guardar en una bolsa plástica en freezer (20°C) durante varios meses. Drogas y Equipo mínimo requerido: �Kits completos (inmunoglobulinas, inmunoglobulina marcada con fosfatasa alcalina) para la determinación del virus de la Tristeza de los Cítricos (CTV). Sustrato para revelado: p-nitrofenil fosfato de sodio. Drogas para preparar las soluciones tampón, en las diferentes etapas. Agitador magnético. Destilador, en su defecto agua destilada. Placas de microtitulación de 96 pocillos de poliestireno con fondo plano y de una capacidad de 350 µl de capacidad por pocillo de excelente calidad. Pizetas de plástico de volúmenes variables. Micropipetas de volúmenes variables o varias de volúmenes fijos. Tips estériles adaptables a las micropipetas. Pipetas multicanal 8 ó 12 (capacidad: 50 a 200µl). Peachímetro rango de pH de 0 a 14, resolución 0,01, error +/- 0,1 rango de temperatura de 0,5 a 100°C, 1°C de resolución, +/- 1°C de error. Estufa de cultivo de temperatura regulable (rango temperatura ambiente a 50°C). Material de vidrio o plástico necesarios. Balanza analítica, capacidad 120gr, resolución 0,001gr. Heladera y freezer (-20°C). Lector de microplaca (espectofotómetro 405nm) optativo. Testigos positivos. Testigos sanos. Tapizado: Añadir 200ul por pocillo de inmunoglobulinas (IgG) específicas en la concentración indicada en el envase, en tampón carbonato (pH 9,6). Incubar en cámara húmeda a temperatura ambiente durante 4 horas o toda la noche a 4°C. Vaciar los pocillos y lavar la placa con tampón de lavado (PBST). Repetir 4 a 8 veces. Adición de la muestra: TECNICA DE PROTOCOLO �Preparación de la muestra vegetal: realizar cortes transversales limpios en brotes tiernos, pedicelo de hojas o pedúnculos de frutos. Presionar cuidadosamente las secciones recién cortadas contra la membrana de nitrocelulosa. Dejar secar la huella o impronta unos minutos. Las membranas impresas pueden conservarse durante varios meses en lugar seco. Para analizar plantas adultas se deben tomar 5 brotes tiernos (de la última brotación) o 10 hojas alrededor de la copa y preferentemente de la parte superior. La máxima fiabilidad del método se obtiene realizando 2 improntas por cada brote u hoja. Bloqueo de la membrana: Diluir en 10 ml de agua destilada 0,1g de albúmina de suero bovino para cada membrana. Colocar la membrana en un recipiente apropiado (bandeja, bolsa de plástico hermética). Verter sobre ella, cubriéndola, la solución de albúmina e incubar durante 1 hora a temperatura ambiente o durante toda la noche a 4°C. Transcurrido el tiempo de incubación, desechar la solución de albúmina manteniendo las membranas en el mismo recipiente. Adición de anticuerpos monoclonales específicos de CTV conjugados con fosfatasa alcalina: Diluir 10 µl de anticuerpo monoclonal en 10ml de agua fisiológica tamponada (AFT). Añadir la solución sobre la membrana cubriéndola. Incubar durante 2-3 horas a temperatura ambiente y desechar la solución del conjugado. Lavado de la membrana: Preparar la solución del buffer de lavado. Lavar agitando (manual o mecánicamente) con 10 ml de solución durante 5 minutos. Eliminar la solución y repetir la operación con la solución restante. Revelado de la membrana: Añadir 200ul por pocillo de un homogenizado 1:10 (peso de corteza verde: volumen tampón extracción) del material en que se desee detectar la presencia del virus. Incubar toda la noche a 4°C. Colocar 2 controles negativos, 2 controles positivos y 1 blanco (PBST). El lavado se realiza como se describió anteriormente. Adición del conjugado: Añadir 200ul por pocillo de una dilución en tampón conjugado de IgG conjugada en la concentración indicada en el envase. Incubar en cámara húmeda a temperatura ambiente durante 2 horas. �El lavado se realiza como se describió anteriormente. Revelado de la reacción y lectura: Añadir 200ul por pocillo del substrato (1mg de p-nitrofenil fosfato de sodio por cada mililitro de tampón sustrato pH 9,8). Incubar de 15 a 60 minutos a temperatura ambiente. Paralizar la reacción añadiendo 50ul por pocillo de NaOH 3M. Realizar lectura visual o colorimétrica a 405nm. La intensidad del color será proporcional al contenido en antígenos de la muestra. Comparar los resultados con el de los controles negativos. TABLA DE DROGAS Y SOLUCIONES Drogas o Soluciones Composición Tampón Carbonato 1,59gr Na2CO3 pH u Observaciones 2,93gr NaHCO3 0,20gr NaN3 pH 9,6 Llevar con agua destilada a 1 litro de solución. Tampón de lavado (PBST) 8gr NaCI 0,2gr KH2PO4 1,45gr Na2HPO4 2H2O 0,2gr KCI 0,2gr NaN3 pH 7,4 0,5ml Tween 20 Llevar con agua destilada a 1 litro de solución Tampón conjugado 2gr BSA (albúmina de suero bovino) 20gr PVP. MW 40.000 0,2gr NaN3 pH 7,4 �Llevar con PBST a 1 litro de solución. Tampón de extracción 1,3gr Na2SO3 (anhidro) 2,0gr Albúmina de huevo 20,0gr PVP.MW. 40.000 pH 7,4 20ml Tween 20 Llevar con PBST a 1 litro de solución. Tampón sustrato 0,1 gr MgCl2 97ml Dietanolamina pH 9,8 0,2gr NaN3 Llevar con agua destilada a 1 litro de solución. 2. DETECCION DE LA CLOROSIS VARIEGADA DE LOS CITRICOS (CVC) Muestras: nervadura central de la hoja. Almacenamiento de la muestra: La muestra se puede guardar en una bolsa plástica en freezer durante varios meses. Drogas y Equipo mínimo requerido: Kits completos (inmunoglobulinas, inmunoglobulina marcada con fosfatasa alcalina) para la determinación de la Clorosis variegada de los cítricos (CVC). Sustrato para revelado: p-nitrofenil fosfato de sodio. Drogas para preparar las soluciones tampón, en las diferentes etapas. Agitador magnético. Destilador, en su defecto agua destilada. Placas de microtitulación de 96 pocillos de poliestireno con fondo plano y de una capacidad de 350 µl de capacidad por pocillo de excelente calidad. Pizetas de plástico de volúmenes variables. Micropipetas de volúmenes variables o varias de volúmenes fijos. Tips estériles adaptables a las micropipetas. �Pipetas multicanal 8 ó 12 (capacidad: 50 a 200m1). Peachímetro rango de pH de 0 a 14, resolución 0,01, error +/- 0,1 rango de temperatura de 0,5 a 100°C, 1°C de resolución, +/- 1°C de error. Estufa de cultivo de temperatura regulable (rango temperatura ambiente a 50°C). Material de vidrio o plástico necesarios. Balanza analítica, capacidad 120gr, resolución 0,001gr. Heladera y freezer (-20°C). Lector de microplaca (es pectofotómetro 405nm). Testigos positivos. Testigos sanos. TECNICA DE PROTOCOLO DAS-ELISA: Tapizado: Añadir 200ul por pocillo de inmunoglobulinas (IgG) específicas en la concentración indicada en el envase, en tampón carbonato pH: 9,6. Incubar en cámara húmeda a 37°C durante 2 horas. Vaciar los pocillos y lavar la placa con tampón fosfato (PBST) vaciando los pocillos rápidamente. Repetir 3 veces. Adición de la muestra: Añadir 200ul por pocillo de un homogeneizado 1:5 (peso de nervadura central de la hoja: volumen de tampón extracción) del material en que se desee detectar la presencia de la bacteria. Incubar toda la noche a 4°C. Controles: 2 controles positivos, 2 controles negativos y 1 blanco (PBST). El lavado se realiza como se describió anteriormente. Adición del conjugado: Añadir 200ul por pocillo de una dilución en tampón conjugado de IgG conjugada en la concentración indicada en el envase. Incubar en cámara húmeda a 37°C durante 2 horas. �El lavado se realiza como se describió anteriormente. Revelado de la reacción y lectura: Añadir 200ul por pocillo del substrato (1mg de p-nitrofenil fosfato de sodio por cada ml de tampón substrato pH: 9,8). Incubar de 30 minutos a 2 horas a temperatura ambiente. Paralizar la reacción añadiendo 50ul por pocillo de NaOH 3M. Realizar lectura con espectofotómetro con filtro de 405nm. Interpretación de los resultados: Se considerará positiva la muestra que arroje un resultado del doble de la Densidad óptica (O.D.) de los controles sanos o promedio del valor de la lectura de los controles sanos más un valor de 0,1 de densidad óptica. TABLA DE DROGAS Y SOLUCIONES Soluciones Composición pH u Observaciones Tampón carbonato Bis Virus dé la Tristeza de los cítricos. . Tampón de lavado Bis Virus de la tristeza de los cítricos. . Tampón conjugado 2gr albúmina de suero bovino Llevar con PBST a 1 litro de solución. pH 7,4 Tampón de extracción Idem PBST . Tampón sustrato 97ml Dietanolamina Llevar con agua destilada a 1 litro de solución . pH 9,8 3. DETECCION DE LA CANCROSIS DE LOS CITRICOS Muestras: 25 hojas asintomáticas tomadas al azar. Almacenamiento de la muestra: La muestra se puede guardar en una bolsa plástica en heladera como máximo 2 semanas. El lavado de las hojas se puede guardar durante varios meses a -20°C. Drogas y Equipo mínimo requerido: �Kits completos (inmunoglobulinas, inmunoglobulina marcada con fosfatasa alcalina) para la determinación de la Cancrosis de los cítricos. Sustrato para revelado: p-nitrafenil fosfato de sodio. Drogas para preparar las soluciones tampón, en las diferentes etapas. Agitador magnético. Destilador, en su defecto agua destilada. Placas de microtitulación de 96 pocillos de poliestireno con fondo plano y de una capacidad de 350 µl de capacidad por pocillo de excelente calidad. Pizetas de plástico de volúmenes variables. Micropipetas de volúmenes variables o varias de volúmenes fijos. Tips estériles adaptables a las micropipetas. Pipetas multicanal 8 ó 12 (capacidad: 50 a 200µl). Peachímetro rango de pH de 0 a 14, resolución 0,01, error +/- 0,1 rango de temperatura de 0,5 a 100°C, 1°C de resolución, +/- 1°C de error. Estufa de cultivo de temperatura regulable (rango temperatura ambiente a 50°C). Material de vidrio o plástico necesarios. Balanza analítica, capacidad 120gr, resolución 0,001gr. Heladera y freezer (-20°C). Lector de microplaca (espectofotómetro 405nm) optativo. Testigos positivos. Testigos sanos. TECNICA DE PROTOCOLO DAS-ELISA: Tapizado: Añadir 200 ul por pocillo de inmunoglobulina (IgG) específica en la concentración indicada en el envase, en tampón carbonato (pH 9,6). Incubar toda la noche a 4°C. Vaciar los pocillos y lavar la placa con tampón de lavado (PBST) 1 minuto tres veces. �Adición de la muestra: Añadir 200ul por pocillo del sobrenadante del lavado de las hojas (agitar por 20 minutos en tampón peptonado con Tween la muestra de hojas a procesar, con una relación de 25 hojas por 50 ml de tampón; centrifugar dicho lavado a 10.000 rpm por 20 minutos; extraer el sobrenadante con bomba de vacío preferentemente; resuspender el precipitado en 1 ml de PBS). Incubar 2 horas a 37°C. Colocar controles negativos, controles positivos y 1 blanco (PBST). El lavado se realiza como se describió anteriormente. Adición del conjugado: Añadir 200ul por pocillo de una dilución en PBST de IgG conjugada en la concentración indicada en el envase. Incubar 2 horas a 37°C. El lavado se realiza como se describió anteriormente. Revelado de la reacción y lectura: Añadir 200ul por pocillo del substrato (1mg de p-nitrofenil fosfato de sodio por cada ml de tampón sustrato pH 9,8. Incubar de 15 a 60 minutos a temperatura ambiente. Paralizar la reacción añadiendo 50ul por pocillo de NaOH 3M. Realizar lectura visual o colorimétrica a 405nm. La intensidad del color será proporcional al contenido en antígenos de la muestra. Comparar los resultados con el de los controles negativos. TABLA DE DROGAS Y SOLUCIONES Soluciones Composición pH u Observaciones Tampón Carbonato Bis Virus de la Tristeza de los cítricos. . Tampón de lavado Bis Virus de la Tristeza de los cítricos . Tampón peptonado con Tween 8,5gr NaCI pH 7,2-7,4 1gr Peptona �250ul Tween 20 1l agua destilada Tampón Conjugado Bis tampón de lavado para Cancrosis. . Tampón Sustrato Bis virus de la Tristeza de los cítricos. . 4. DETECCION DE VIROIDES: EXOCORTIS Y CACHEXIA Esquema de Técnicas para la detección de viroides: A - EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS: Muestras: Se toma aproximadamente 10 cm de la parte apical de la planta inoculada (Tejido de Cidra Etrog). Almacenamiento de la muestra: la muestra procesada (ácido nucleico) se guarda en freezer -20°C durante varios meses. Equipo mínimo requerido: Tijeras de podar Molinillo de café o Mortero Termo para N2 líquido �Homogeneizador Drogas para preparar las soluciones Balanza analítica, capacidad 120gr con resolución 0,001gr Pipetas de vidrio o plástico calibradas Micropipetas de volúmenes adecuados para desarrollar el protocolo Tips adaptables a las micropipetas Material volumétrico de vidrio o plástico Agitador orbital Tubos de diálisis Tubos (30-50 ml) para centrífuga Centrífuga Tubos (15-20 ml) para centrífuga Campana desecadora preferentemente acoplada a una bomba de vacío. Freezer-Heladera Peachímetro rango pH de 0 a 14, resolución 0,01, error +/- 0,1 rango de temperatura de 0,5 a 100°C de resolución, +/- 1°C de error. FUNDAMENTO DE LA TECNICA: El protocolo de extracción de ácidos nucleicos consiste en una homogeneización del tejido de las plantas a analizar seguida de un proceso que permite obtener preparaciones enriquecidas en viroides, y susceptibles de ser analizadas mediantes sPAGE o hibridación molecular. Con los métodos de análisis disponibles, la detección de viroides sólo es sensible y fiable cuando se emplea como material vegetal de partida plantas de cidro previamente inoculadas por injerto y mantenidas durante 3-6 meses preferentemente a 28-32°C. TECNICA DE PROTOCOLO 1. Homogeneizar el tejido (5 gr de tejido, 15 ml de fenol y 5 ml de EM) en un homogeneinizador Virtis. Se puede intentar pulverizar el tejido con nitrógeno líquido en un molinillo de café, transferirlo a un tubo donde se agregará fenol y EM para homogeneizarlo con el Politrón. 2. Transferir a tubos de centrífuga (30-50 ml) y centrifugar a 10.000rpm durante 20 minutos. �3. Recoger la fase acuosa y transferirlo a otro tubo (30-50 ml) y desechar la fase orgánica. Estimar el volumen recuperado (6-7 ml). 4. Agregar 1/10 volúmenes de Acetato de Sodio y 3 volúmenes de Etanol. Mezclar invirtiendo el tubo. Mantener a -20°C al menos 1 hora. 5. Centrifugar a 10.000rpm durante 20 minutos. 6. Desechar el sobrenadante. Secar el precipitado que se encuentra adherido a las paredes del tubo. 7. Resuspender el precipitado con 1-1,5 ml de TKM (medio de resuspensión). 8. Hidratar los tubos de diálisis con agua y transferir la preparación anterior a los mismos. Dializar en TKM en agitación durante toda la noche a 4°C. 9. Recuperar la preparación del tubo de diálisis y transferir a tubo de 15-20 ml estimando el volumen. 10. Agregar el mismo volumen de una solución 4 M de LiCI y mezclar invirtiendo el tubo. Mantener a 4°C durante al menos 4 horas (se puede dejar durante toda la noche). 11. Centrifugar a 10.000rpm durante 10 minutos. Recuperar el sobrenadante y desechar el precipitado. 12. Estimar el volumen del sobrenadante recuperado y agregar 3 volúmenes de Etanol frío. Mantener a -20°C durante al menos 1 hora. 13. Centrifugar a 10.000rpm durante 20 minutos. 14. Desechar el sobrenadante. Secar al vacío el precipitado que se encuentra adherido a las paredes del tubo. 15. Resuspender el precipitado con el menor volumen posible (300 ul). Separar en alícuotas de 20 ul para análisis por sPAGE, o 10 ul para Hibridación Molecular. La preparación puede guardarse a 20°C durante varios meses. TABLA DE DROGAS Y SOLUCIONES EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS: Soluciones Composición Filtrar o Autoclavar Observaciones Medio de extracción 0,4M Tris HCI pH8,9 . . �1% SDS 5mM EDTA pH7,0 2% Mercaptoetanol Fenol saturado en agua Al fenol cristalizado agregarle agua hasta que . se observen 2 fases. Ajustar el pH con NaOH 1 a ph neutro M . Etanol . . Guardar a 4°C Solución 3M de Acetato de sodio Disolver 24,6gr de acetato de sodio en 100ml de agua. Ajustar el pH a 5,5 con ácido acético . Guardar a 4°C Medio de 50ml 2M Tris pH7,4. Resuspensión (TKM) 10 100ml 1 M KCI X . 10ml 0,1 M MgCl2 Guardar a 4°C. Aforar a 1 litro. Solución 4M de LiCI Disolver 42,4gr de LiCI en 250ml de agua destilada . B - HIBRIDACION MOLECULAR Muestras: Se usan secciones transversales del tallo. Conservación de las muestras: Las muestras una vez fijadas se pueden conservar envueltas primero en papel de filtro y luego en papel de aluminio en lugar seco. Drogas y Equipo mínimo requerido: Membrana de Nylon (carga positiva) Baño térmico Horno de vacío o cámara de U.V. o estufa a 80°C. Micropipetas de rango apropiado para desarrollar el protocolo Material fungible (Eppendortf, Falcón, u otros similares) Guardar a 4°C �Aparato para sembrar muestras: Hydri-dot system o equivalente. Tijeras de podar. Drogas para preparar soluciones. Filtro Milipore de 0,22 micras y filtro de 0,45 micras Agitador magnético Agitador orbital Horno de hibridación Botellas de hibridación o bolsas de plástico con cierre hermético. Sonda Kit Boehringer Mannheim N° 1363514/ Dig luminicsent detection Kit for nucleic acid: control de ADN, 1 ml de esperma de salmón, antidigoxigenina AP (anti-DIG-AP), agente de bloqueo y CSPD (Disodium3- (4-methoxyspirol (1,2-dioxetane-3,2'- (5'-chloro) tricyclo (3.3.1.1) decan) -4-yl) phenyl phosphate. Cassette para film Film X-Omat (Kodak) Film adherente Papel de aluminio Bandejas para revelado Balanza analítica, capacidad 120gr con resolución 0,001gr Peachímetro rango de pH de 0 a 14, resolución 0,01, error +/- 0,1 rango de temperatura de 0,5 a 100°C de resolución, +/- 1°C de error. Autoclave FUNDAMENTO DE LA TECNICA: La hibridación es una técnica que permite detectar ácidos nucleicos (en nuestro caso viroides) mediante el uso de sondas de DNA marcadas con digoxigenina. Ello se realiza según el siguiente protocolo: • Preparación de membranas con las muestras que se quiere analizar. �• Prehibridación • Hibridación • Lavados • Tratamiento con anticuerpo y revelado TECNICA DE PROTOCOLO. Preparación de las membranas: 1- Calcular el tamaño de la membrana necesario en función del número de muestras que se desea analizar. 2- Colocación de las muestras: Impresiones: Se realizará un corte lo más nítido posible del tejido que se desea analizar (en general se emplea secciones transversales del tallo) que se aplican sobre la membrana haciendo una ligera presión. Se recomienda hacer como mínimo dos impresiones por muestra. Todas las membranas deberán llevar los correspondientes controles positivos y negativos. Acidos nucleicos: Tomar 10 ul de la muestra y agregar 6ul de SSPE 20X y 4ul de formaldehído en un tubo eppendorf. Calentar a 60°C durante 15 minutos en baño térmico y colocar en hielo. Aplicar las muestras al Hydridot system o equivalente. 3- Fijar las muestras a las membranas en un horno U.V. con el programa correspondiente. Como alternativa puede utilizarse un horno de vacío o incluso una estufa a 80°C durante 2 horas. 4- Sólo en el caso de impresiones, antes de iniciar la hibridación pretratar la membrana con una solución de mercaptoetanol 2M durante 10 minutos seguido de 2 lavados con agua destilada. PREHIBRIDACION 1- Encender el horno y ajustarlo a 42°C. 2- Colocar la solución tampón de prehibridación en la botella que ya contiene la membrana. 3- Agregar el esperma de salmón ya desnaturalizado a la botella. 4- Colocar la botella en el horno durante mínimo 2 horas. HIBRIDACION: �1- Desnaturalizar el esperma de salmón y la sonda en agua hirviendo durante 10 minutos y colocar en hielo. 2- Sacar la botella del horno y cambiar la temperatura del mismo a 50°C. Desechar la solución tampón de prehibridación. Añadir la solución tampón de hibridación y colocar en el horno a 50°C. 3- Colocar el esperma de salmón y la sonda ya desnaturalizados en la botella con el tampón de hibridación y la membrana. 4- Colocar nuevamente la botella en el horno de hibridación a 50°C e incubar durante toda la noche. LAVADOS: 1- Sacar la botella que estuvo hibridando del horno, apagar el horno y dejar la puerta abierta. 2- Decantar la solución de hibridación y añadir el volumen de la solución de lavado I necesario para cubrir la membrana. 3- Poner la botella en el horno con la puerta abierta durante 15 minutos. 4- Repetir nuevamente el paso anterior. 5- Ajustar la temperatura del horno a 60°C. Desechar la solución de lavado y añadir el volumen necesario de la solución de lavado II para cubrir la membrana. Colocar la botella en el horno a 60°C durante 1 hora. TRATAMIENTO CON ANTICUERPO Y REVELADO: 1. Sacar la botella del horno y desechar la solución de lavado II. Agregar en cada botella el volumen necesario para cubrir la membrana de la solución tampón 1 y 30 ul de Tween en agitación durante unos 3 a 5 minutos a temperatura ambiente. 2. Desechar la solución tampón 1. Agregar el volumen necesario para cubrir la membrana de la solución tampón 2 y dejarla a temperatura ambiente durante 30 minutos en agitación. 3. Colocar 1 ul de anticuerpo en 5 ml de la solución tampón 2. Desechar la solución de tampón 2. Añadir la solución tampón 2 más el anticuerpo y dejarla a temperatura ambiente durante 30 minutos en agitación. 4. Desechar la solución tampón 2 más anticuerpo. 5. Añadir el volumen necesario para cubrir la membrana de la solución tampón 1 y dejarla a temperatura ambiente durante 15 minutos en agitación. 6. Repetir el paso anterior. �7. Desechar la solución tampón 1. Añadir el volumen necesario para cubrir la membrana de la solución tampón 3 y dejarla a temperatura ambiente durante 30 minutos en agitación. 8. Desechar la solución tampón 3. Añadir 5 ml solución tampón 3 y 13 ul de CSPD. Agitar a temperatura ambiente durante 5 minutos. 9. Desechar la solución con el CSPD. Sacar la membrana. 10. Colocar la membrana sobre el cartón forrado con la cara de las impresiones para fuera. Envolver todo en plástico. 11. Ir al cuarto oscuro. Colocar el cartón en el cassette y encima una hoja de film. Cerrar el cassette y envolverlo con el papel de aluminio. 12. Incubar a 37°C durante 20 minutos aproximadamente. 13. Revelado del film: • Sacar el film del cassette y ponerlo en la solución de revelado durante unos minutos. • Cuando se vean las señales de hibridación, transferirlo a agua para parar el revelado. Enjuagar. • Transferirlo a la solución fijadora y dejarlo durante 30 segundos. • Transferirlo a agua para eliminar los restos del fijador. • Secar el film al aire. TABLA DE DROGAS Y SOLUCIONES Preparación de membranas: Solución o Droga Composición pH u Observaciones Conservación Mercaptoetanol 2M 4ml Mercaptoetanol . . Tampón SSPE 20 X 175,3gr NaCI Ajustar el pH a 7,4 con NaOH 10N Autoclave. Temperatura ambiente. 26ml de agua 27,6gr NaH2PO4 7,4gr EDTA Llevar a 1 litro de solución �SDS 5% 12,5gr SDS . Temperatura ambiente 250ml agua Solución de Denhardt 0,5gr Ficoll 0,5gr Polivinilpirrolidona Filtrar la solución con filtro Milipore Freezer -20°C (0,22 micras). Colocar la solución estéril en tubos estériles. MW24.000 0,5gr Albúmina bovina 50ml agua Formaldehído . . . Solución o Droga Composición pH u Observaciones Conservación Tampón de prehibridación 1/2formamida Esterilizar la solución pasándola por un filtro de 0,45 micras Prehibridación: 1/10 SDS 5% 3/10 tampón SSPE 20X 1/10 solución de Denhardt Esperma de salmón . . Freezer -20°C Solución o Droga Composición pH u Observaciones Conservación Tampón de Hibridación 1/2 Formamida desionizada 1/10 SDS 5% 3/10 tampón SSPE 20 X . . Hibridación: 1/10 agua estéril Lavados: �Solución o Drogas Composición pH u Observaciones Conservación Solución de lavado 1 20 X SSC 50ml . . 175gr NaCl Ajustar a pH7,0 Temperatura ambiente 88,2gr Na Citrato Esterilizar SDS 5% 10ml Llevar la solución a un volumen final de 500ml con agua destilada. Tampón SSC 20X Llevar a 1 litro de solución Tratamiento con anticuerpo y revelado Solución o Droga Composición pH u Observaciones Conservación Tween . . Temperatura ambiente Solución Stock de Compuesto del bloqueo del Kit 20g Tampón 1 150ml. Bloqueo 10X Llevar a un volumen final con 200ml de agua. Esterilizar Almacenar a 4°C o a20°C 0,5 M MgCl2 Disolver 51gr MgCl2 en 500ml de agua Esterilizar Almacenar a 4°C. 1 M NaCl Disolver 29,2gr de NaCI en 500ml de agua Esterilizar Almacenar a 4°C 1 M Tris ph 9,5 Disolver 60,55gr de Tris en 500ml de agua Ajustar el pH a 9,5 con HCI. Esterilizar Almacenar a 4°C. Tampón 1 Acido maleico 11,61gr NaCl8,766gr Agua 800ml Ajustar el pH a7,5. con NaOH 10N y llevar a un volumen de solución final de 1 litro. . �Tampón 2 Solución de stock de bloqueo 2,5ml Tampón 1 17,5ml Tampón 3 Tris-HCI 10mM . . Almacenar a 4°C pH 9,5 NaCl 0,1 M MgCl2 50mM Agua estéril 350ml C - ELECTROFORESIS (sPAGE) Muestras: Agregar 10 ul de glicerol 60% a la muestra (20ul de ácido nucleico) a analizar. Drogas y Equipo mínimo requerido: Material volumétrico de vidrio o plástico Micropipetas de rango apropiado para desarrollar el protocolo Tips adaptables a las micropipetas Drogas para preparar las soluciones Pipetas de vidrio o plástico Balanza analítica, capacidad 120gr con resolución 0,001gr Bandejas Agitador orbital Peachímetro rango de pH de 0 a 14, resolución 0,01, error +/- 0,1 rango de temperatura de 0,5 a 100°C, 1°C de resolución, +/- 1°C de error. Cuba de electroforesis refrigerada y sus respectivos peines. Fuente de electroforesis (100mA, 1000 V de capacidad o superior). Transiluminador U.V. Transiluminador luz blanca. Cámara fotográfica Polaroid o similar. Microcentrífuga. �FUNDAMENTO DE LA TECNICA: El sistema de electroforesis secuencial en geles del 5% de poliacrilamida permite el análisis de viroides con una gran resolución. El proceso se basa en la migración de las moléculas de ácidos nucleicos en una electroforesis estándar (5% PAGE) y la excisión del segmento del gel que contiene los viroides que se somete a una segunda electroforesis en un gel polimerizado con 8M de urea (5% dPAGE). El procedimiento que se detalla a continuación, aprovecha la mejor separación de las formas circulares de los RNAs viroidales cuando el segundo gel se prepara a pH 6,5(tampón TAE) y se somete a electroforesis en tampón a pH 8,3(tampón TBE) TECNICA DE PROTOCOLO: Preparación del primer gel (5% PAGE): 1. Acoplar los cristales y separadores en el formador de geles. 2. Colocar en un vaso de precipitado 24 ml de H2O, 20 ml de Solución C y 4,8 ml de Solución B. En otro vaso de precipitado colocar 10 ml de la solución A y 1 ml de la solución E. Mezclar el contenido de ambos vasos. 3. Depositar en el espacio que existe entre los cristales la mezcla preparada en el paso anterior y colocar el peine. 4. Comprobar que ha tenido lugar una correcta polimerización (20 minutos) y sacar el peine. 5. Ensamblar el gel en el equipo de electroforesis. 6. Dispensar el tampón TAE en los 2 depósitos del equipo. 7. Agregar 10ul de glicerol 60% a las muestras a analizar. Mezclar bien dando un pulso en la microcentrífuga. 8. Cargar las muestras en los pocillos y los controles correspondientes. 9. Cargar en los pocillos de ambos extremos una mezcla de los dos colorantes (azul de bromofenol y xileno cianol) que permitirá valorar si la migración en el gel es la esperada. 10. Correr a una corriente constante de 60mA a 4°C durante 3-3,5 horas o cuando se observe que el azul de bromofenol haya migrado 7cm y el xilen cianol 4cm. 11. Terminada la corrida, sacar el gel y teñirlo en una bandeja con 200ml de agua y 30ul de bromuro de etidio. Mantener con agitación suave durante 15 minutos. 12. Observar el gel en el transiluminador y fotografiar. Cortar el segmento horizontal del gel comprendido entre el RNA-7s y 1 cm por encima del mismo. �Preparación del segundo gel: 1. Acoplar los cristales y separadores en el formador de geles. 2. Colocar en un vaso de precipitado 28,8gr de urea, 14ml de H2O, 6ml de la solución G y 10ml de la solución A. Calentar el vaso de precipitado y cuando se observe que la urea está completamente disuelta, agregar 5ml de la solución B y 1 ml de la solución E. 3. Depositar con rapidez la mezcla en el espacio que existe entre los cristales. No hay que colocar el peine. 4. Comprobar que ha tenido lugar una correcta polimerización (20 minutos). 5. Ensamblar el gel en el equipo de electroforesis. 6. Dispensar la solución tampón TBE en los 2 depósitos del equipo. 7. Colocar el segmento del primer gel en el espacio disponible. Agregar el resto del tampón. 8. Aplicar una corriente constante de 18mA a temperatura ambiente durante 4-5 horas. 9. Desensamblar la cubeta y sacar el gel. Colocarlo en una bandeja e iniciar la tinción con nitrato de plata: • Agregar 200ml de la solución 1 y mantener en agitación suave durante 1 hora o toda la noche. • Desechar la solución 1 y agregar 200ml de la solución 2. Mantener en agitación suave durante 1 hora. • Desechar la solución 2 y agregar 200ml de agua y 2ml de la solución de nitrato de plata. Mantener en agitación suave durante 1 hora. • Desechar la solución de nitrato de plata y enjuagar 2 veces con agua y una vez con revelador. • Agregar 200ml de revelador. Al cabo de 20-30 minutos deben observarse las bandas correspondientes a los viroides en la mitad superior del gel. 10. Observar el gel en el transiluminador de luz blanca y fotografiar. TABLA DE DROGAS Y SOLUCIONES Solución Composición Filtrar o Autoclavar Observaciones A 30g acrilamida Filtrar Guardar a 4°C. 0,75gr bisacrilamida Aforar con 100ml de agua �B 2ml Temed en 50ml de agua . Guardar a 4°C. C (TAE) 120mM Tris . Guardar a 4°C . Guardar a 4°C . Guardar a 4°C 60mM Acetato de sodio. Tri hidratado. 3mM EDTA-Na Ajustar a pH7,2 con ácido acético D 10 X (TAE) 400mM Tris 200mM Acetato de sodio tri hidratado. 10mM EDTA-Na Llevar a pH 7,2 con ácido acético y aforar a un litro. D’ 10 X (TBE) 225mM Tris 225mM ácido bórico. 5mM EDTA-Na Aforar a un litro. E Disolver 1 gr. de persulfato amónico en 10ml de agua. . Guardar a 4°C G Tomar 30ml TAE 10X y llevar a 100ml Ajustar a pH 6,5 con ácido acético . . Guardar a 4°C Glicerol 60% . . Temperatura ambiente Bromuro de etidio 5 mg por ml . . Azul de bromofenol 0,3% en glicerol 60% . . Xilen cianol 0,3% en glicerol 60% . . �Soluciones de tinción de plata: 1 . . Etanol 50% más ácido acético 10% Etanol 10% más ácido acético 1% 2 Nitrato de Plata 12mM (NO3Ag) . . Revelador KOH 0,75M . . Formaldehído 0,28% TECNICAS DE INVERNACULO DESINFECCION: A- Desinfección inmediata: Concentración del producto desinfectante a utilizar expresado en porcentaje del producto formulado. Productos desinfectantes Superficie a desinfectar Manos Máquinas, herramientas, elementos plásticos, etc. Cajones de madera, escaleras, etc. Antigermen potente 2% 0,5% 4% Lorasol 4% 1% 5% Lapsasqua 0,5% 1% 1% Cloruro de Benzalconio al 33% de pr. activo 1% NO NO B- Desinfección lenta (previo lavado y dejando actuar por lo menos 1 hora) Concentración del producto desinfectante a utilizar expresado en por mil del producto formulado. Productos desinfectantes Superficie a desinfectar Máquinas, herramientas, elementos plásticos, cajones de madera, escaleras, �pisos*, mesadas, *etc. Antigermen potente 1 por mil Lorasol 1 por mil Lap sasquad 1 por mil Cloruro de benzalconio al 33% de pr. activo. 2 por mil Hipoclorito de sodio* 100 gr. de cloro activo Para cajones de madera, canastos, escaleras, cajones, elementos plásticos, etc. Al 1 por mil dejar actuar por lo menos una hora. . Para pisos y mesadas al 10 por mil. Cobre (oxicloruro o sulfato)* Para pisos y mesadas al 10 por mil. ANEXO IV SIEMBRA y CRIA DE PLANTINES INDICADORES PARA PRUEBAS DE DIAGNOSTICO BIOLOGICAS: • Los plantines indicadores se obtendrán de semillas de Plantas Madres Semilleras con pruebas de diagnóstico para Psorosis (resultado negativo). Se cosecharán de estos árboles según procedimientos rutinarios, se secarán y desinfectarán. Se conservarán hasta su siembra a una temperatura de 5-8°C. No se utilizarán semillas que tengan más de un año de cosechadas. Las semillas se siembran en cajones germinadores a 30°C en un sustrato de arena dentro del invernáculo dedicado al diagnóstico. Una vez alcanzados entre 10-15cm de altura se transplantarán a macetas bajo estricta selección que permita la mayor uniformidad de los plantines seleccionados evitando recesivos y de origen sexual. • La maceta será de polietileno negro de 60-80 micrones de espesor, perforada en la base, de 25 x 35 cm. El sustrato empleado puede ser una mezcla de turba (60%) (puede ser la del sur u otro lugar o cualquier otro sustrato que permita desarrollar plantines vigorosos, libres de deficiencias) y arena (40%) con una fertilización de base compuesta por dolomita (MgCO3), fosfato diamónico y solución de micronutrientes. El sustrato será esterilizado con vapor de agua (90°C durante una hora), con bromuro de metilo o con otro producto y/o metodología de eficiencia comprobada. El producto o metodología empleada deberá garantizar la ausencia de patógenos en el sustrato. • Los plantines se fertilizarán semanalmente con una solución de fertilizantes que asegure plantines indicadores vigorosos y libres de deficiencias minerales (estas deficiencias enmascaran los síntomas foliares a observar). �PRUEBAS DE DIAGNOSTICO BIOLOGICAS: La prueba de diagnóstico clásica se desarrolla de la siguiente manera: • El inóculo de la "planta candidata" (obtenido de una vareta yemera) se injertará en forma de escudete o "T" invertida en número de 3 inóculos por cada plantín indicador, empleándose 4 plantines de cada indicador por planta candidata a controlar. Se utilizarán 2 plantines como controles positivos (con una raza débil de la enfermedad que se está diagnosticando) y 2 plantines como controles negativos (sin inocular). El objetivo de estos controles (negativos y positivos) es disponer de plantines con síntomas (enfermos) y sin síntomas (sanos) para comparar con los observados en los plantines inoculados con la Planta "candidata". Esto evita la subjetividad de las observaciones y permite comprobar qué le invernáculo está funcionando en óptimas condiciones que aseguran que los plantines manifiesten los síntomas claramente y que los plantines se hallan bien nutridos (no tener deficiencias nutricionales). • Estas pruebas pueden realizarse en forma grupal (5 plantas "candidatas" por grupo) utilizando para ello testigos positivos (+) y negativos (-) por grupo. Se emplean en lugar de 2 testigos positivos y 2 testigos negativos por planta "candidata", 4 testigos positivos y 4 testigos negativos por grupo. • Los 4 testigos positivos se inoculan: 2 testigos con un aislamiento débil de la enfermedad a diagnosticar y 2 testigos con otro aislamiento débil de la misma enfermedad a diagnosticar (en lo posible debería ser un testigo positivo de reconocido origen). • Toda prueba lleva una planilla de invernáculo donde se registra toda la información que identifica la planta "candidata", fecha de inoculación y de revisación de prendimiento del inóculo y cantidad de inóculos; identificación del testigo positivo (enfermo) utilizado; para qué la enfermedad se diagnostica; qué especie se utiliza como indicador; qué cantidad de plantines se utiliza (si es prueba clásica o grupal); las observaciones que se realizan y el análisis de los resultados cuando finaliza la prueba. Esquema de una Prueba de Diagnóstico Biológica Clásica: �TRISTEZA: Método: siguiendo el esquema de Prueba de Diagnóstico Clásico o Grupal se inoculará por injerto a plantines de lima Mejicana o lima Key (Citrus aurantifolia) de 15 meses de edad crecidos en condiciones aisladas, en invernáculo. Indicador: lima Mejicana o lima Key (Citrus aurantifolia) Número de plantines indicadores por prueba individual (test): 8 (ocho). 4 plantines inoculados con planta "candidata" a planta madre. 2 plantines inoculados con aislamiento débil de tristeza (testigo positivo o enfermo) 2 plantines sanos, sin inocular (testigo negativo o sano) Inóculo: 3 yemas o piezas de corteza de vareta /vareta yemera/yemeras de la planta "candidata" por plantín indicador. Observaciones al plantín inoculado: deberán realizarse sobre hojas de brotes jóvenes y adultos después de 3 meses de inoculado y durante por lo menos 3 brotaciones. Para la observación de síntomas en ramitas (stempitting) se debe esperar 8 meses de inoculado. Temperatura: toda la prueba (test) deberá desarrollarse en invernáculo, en condiciones aisladas, con temperatura a observar entre 18 y 24°C. Síntomas a observar: Un plantín indicador de tristeza mostrará (de resultar positivo o enfermo): aclareamiento de nervadura (vein clearing), acorchamiento de nervadura (vein corking), abarquillados de hojas (cupping), acanaladuras en ramitas (stem pitting) con o sin presencia de goma. GRUPO PSOROSIS (psorosis, concave gum, impietratura y otras del grupo psorosis) Esta prueba se divide en 2 etapas: Primera etapa: prueba para grupo psorosis. Segunda etapa: prueba de protección cruzada. PRIMERA PARTE: �Método: transmisión por injerto a plantines de Naranjo dulce Pineapple y/o Tangor Dweet, de 15 meses de edad crecidos en condiciones aisladas, en invernáculo. Indicador: Naranjo dulce Pineapple (Citrus sinensis) y/o Tangor Dweet (hibrido). Número de plantas indicadoras prueba individual (test): 8 (ocho) 4 plantines inoculados con planta "candidata" a planta madre. 2 plantines inoculados con aislamiento débil de psorosis (testigo positivo o enfermo) 2 plantines sin inocular (testigo negativo o sano) Inóculo: 3 yemas o piezas de corteza de vareta/s yemera/s de la planta "candidata" por plantín indicador. Observaciones al plantín inoculado: deberá realizarse sobre hojas de brotes jóvenes y adultos después de 1 mes de inoculado y durante, por lo menos, 5 brotaciones. Temperatura: toda la prueba (test) deberá desarrollarse en invernáculo, en condiciones aisladas, con temperatura entre 18 y 24°C. Síntomas a observar: Un plantín indicador del grupo psorosis mostrará (de resultado positivo o enfermo): necrosis de brotes (shock), en brotes jóvenes: flecking, manchas, moteado, mosaico, variegado, punteado, anillo. En brotes buenos: variegado, anillo, goma. SEGUNDA PARTE: Duración de la segunda etapa: 6 meses Método: por Protección cruzada (cross protection) realizado en los plantines utilizados en la primera etapa del protocolo. Indicador: Naranjo dulce Pineapple (Citrus sinensis) y/o Tangor Dweet (híbrido). Número de plantas indicadoras prueba individual (test): 8 (ocho) 2 plantines de los 4 plantines inoculados con planta "candidata" (en la primera etapa) se inocularán con un aislamiento fuerte de psorosis. 1 plantín de los 2 plantines inoculados con aislamiento débil de psorosis (en la primera etapa) (testigo positivo o enfermo) se inocula con un aislamiento fuerte de psorosis. 1 plantín de los 2 plantines sin inocular (en la primera etapa) (testigo negativo o sano), se inocula con un aislamiento fuerte de psorosis. Inóculo: 2 piezas de corteza de vareta yemera del aislamiento fuerte de psorosis en los plantines indicadores especificados en el párrafo anterior. �Observaciones al plantín inoculado: sobre hojas de brotes adultos después de 3 meses de inoculados y hasta aparición de síntomas. Temperatura: toda la prueba debe desarrollarse en invernáculo, en condiciones aisladas, con temperatura entre 18 y 24°C. Síntomas a observar: Un plantín indicador del grupo psorosis NO mostrará (de resultar positivo o enfermo): presencia de goma en hojas, brotes adultos (brotes buenos) y en ramitas. Estos síntomas sólo deben observarse en los plantines indicadores que en la primera Etapa dieron negativos para el grupo Psorosis, de esa manera se confirma la ausencia de esta enfermedad. EXOCORTIS Método: transmisión por injerto a plantas de Cidra Etrog Arizona 861 S 1 de 15 meses de edad crecidos en condiciones aisladas, en invernáculo. Indicador: Cidra Etrog Arizona 861 S1 (Citrus medica) injertado sobre un portainjerto vigoroso. Número de plantas indicadoras prueba individual (test): 8 (ocho). 4 plantas inoculados con planta "candidata" a planta madre. 2 plantas inoculadas con aislamiento débil de exocortis (testigo positivo o enfermo) 2 plantas sanas sin inocular (testigo negativo o sano) Inóculo: 3 yemas o piezas de corteza de vareta/s yemera/s de la planta candidata por plantín indicador. Observaciones a la planta inoculada: sobre pecíolos y hojas de brotes adultos después de 3 meses de inoculados como mínimo y durante por lo menos un año. Temperatura: toda prueba (test) deberá desarrollarse en invernáculo, en condiciones aisladas, con temperatura entre 28 y 32°C. Síntomas a observar: Un plantín indicador de exocortis mostrará (de resultar positivo o enfermo): epinastia de hojas, amarronamiento del pecíolo, de nervaduras central, de nervaduras secundarias y de la punta de la hoja. Nota: Cidra Etrog Arizona 861 S1 es un clon. Se multiplica por injerto de yema sobre un pie rugoso (limón rugoso). CACHEXIA (XILOPOROSIS) Método: trasmisión por injerto a plantas mandarina Parson special injertadas sobre limón rugoso (u otro portainjerto) crecidas en condiciones aisladas, en invernáculo. Indicador: Mandarina Parson Special injertadas sobre Limón Rugoso (u otro portainjerto vigoroso). �Número de plantas indicadoras prueba individual: 8 (ocho). 4 plantas inoculadas con planta "candidata" a planta madre. 2 plantas inoculadas con aislamiento débil de cachexia (xiloporosis) (testigo positivo o enfermo). 2 plantas sanas sin inocular (testigo negativo o sano). Inóculo: 3 yemas o piezas de corteza de vareta/s yemera/s de la planta candidata por planta indicadora. Observaciones a la planta inoculada: después de 9-10 meses de inoculada (como mínimo) y hasta 24 meses se realiza una ventana (levantar la corteza) en la zona de unión del injerto para observar la presencia de goma y poros en corteza y tronco. Temperatura: toda prueba (test) deberá desarrollarse en invernáculo, en condiciones aisladas, con temperatura entre 28 y 32°C. Síntomas a observar: Un plantín indicador de xiloporosis mostrará (de resultar positivo o enfermo): al levantar la corteza en la zona de unión del injerto se observará la presencia de goma y poros en corteza y tronco. ANEXO V PROTOCOLO DE EXTRACCION DE MUESTRAS A PLANTAS "CANDIDATAS" A PLANTAS MADRES SEMILLERAS DE CAMPO 1- La planta "candidata" a Planta Madre Semillera debe estar en un Lote de Plantas Madres Semilleras. Debe haber plano del lote y tener un registro de origen, procedencia del material y fecha de plantación para verificar la calidad genética de la futura Planta Madre Semillera. 2- Se debe ubicar el número de lote, el número de fila y el número de planta de la "candidata" a PMS (Planta Madre Semillera) y se identificará dicha planta mediante tarjeta metálica (no oxidable) con los datos: especie cítrica, lote, fila y planta. 3- Extracción de la muestra: a) se realizará durante mayo-junio de cada año b) se revisará el árbol para observar posibles problemas sanitarios, de producción o de fidlelidad varietal. c) se dividirá el árbol en 4 sectores y a una altura de 1,50 desde el suelo se extraerán 3 varetas yemeras por sector (total: 12 varetas). Cada vareta deberá ser de 10-15 cm de largo y con un grosor no mayor de 1,5 cm. �d) a las 12 varetas se las tratará con parafina en los extremos (para evitar su deshidratación) y se colocarán en bolsas de polietileno transparentes de 60-80 micrones de espesor debidamente identificadas (adentro y afuera de la bolsa). Los datos a colocar en las 2 tarjetas de la bolsa serán los que figuran en el árbol de donde se sacó la muestra (punto 2) y la fecha de extracción de la muestra y el responsable de la extracción. 4- Se enviará de inmediato la muestra al Laboratorio de Diagnóstico autorizado por el INASE y se enviará un fax al mismo laboratorio indicando transporte, fecha de envío e identificación del material enviado (número de muestras y datos de cada muestra). ANEXO VI Para lograr trazabilidad del ensayo se deberá llevar registro de Reactivos utilizados Fecha de compra Marca N° de artículo Fecha de vencimiento N° de muestras Fecha de inicio del ensayo Fecha de finalización Registro de resultados verificables por copia o en forma informática. ANEXO VII CERTIFICADO DE DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES DE PLANTAS DE VIVERO CITRICAS Y/O SUS PARTES NUMERO DE MUESTRA: CODIGO DE LA MUESTRA: CATEGORIA DE PLANTA: FECHA DE INGRESO. Declaración del Responsable del Laboratorio Certifico que el diagnóstico de enfermedades de plantas de vivero cítricas se ha realizado aplicando la metodología de análisis aprobada y se ha efectuado en el Laboratorio habilitado por la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS o sus organismos descentralizados en el área de sus competencias, bajo el número de RNCFS: ............ �ANALISIS SOLICITADOS: TRISTEZA DE LOS CITRICOS: ..................... CLOROSIS VARIEGADA DE LOS CITRICOS ...................... CANCROSIS DE LOS CITRICOS ...................... EXOCORTIS.................................... CACHEXIA.................................... PSOROSIS.................................. OBSERVACIONES: Firma del responsable Fecha de análisis NOTA: El certificado debe estar escrito a máquina. Si el resultado de un análisis es negativo debe colocarse —0— y si no ha sido realizado se debe colocar —N— El certificado carece de validez , si no tiene membrete oficial del laboratorio y la firma del responsable autorizado, como así también el número y fecha de análisis. No deben aceptarse certificados con alteraciones, enmiendas o raspaduras, no debidamente salvadas. En Observaciones se colocará la metodología de análisis efectuada. � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Resolución SAGPyA N° 0098/2003 Description An account of the resource Plantas Citricas de Vivero y/o sus partes. Creator An entity primarily responsible for making the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource Miércoles 5 de Febrero de 2003 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Resolución Abstract A summary of the resource. Apruébanse las Normas de Funcionamiento de los Laboratorios de Diagnóstico de Enfermedades para Plantas Cítricas de Vivero y/o sus Partes. Instalaciones. Técnicas de laboratorio. Técnicas de invernáculo. Extracción de muestras. Certificado de diagnóstico. Source A related resource from which the described resource is derived <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=83350">Resolución SAGPyA N° 0098/2003</a> https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/8a9940938a321fa378eba4ba8c65c1c0.pdf d61c11541983428123da7affb7843ec1 PDF Text Text Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos Página 1 de 3 Esta norma fue consultada a través de InfoLEG, base de datos del Centro de Documentación e Información, Ministerio de Economía y Finanzas Públicas. Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos SANIDAD VEGETAL Resolución 1230/2004 Apruébase el Sistema de Trazabilidad de Productos Fitosanitarios como componente del Sistema Federal de Fiscalización de Agroquímicos y Biológicos creado por la Resolución Nº 500/2003-SENASA. Objetivo. Estrategia. Acciones. Agentes elaboradores o comercializadores con responsabilidades que integran el Sistema. Requisitos y procedimientos a cumplir por los agentes responsables. Registro de elaboración. Bs. As., 29/11/2004 VISTO el Expediente Nº 18.277/2003, la Resolución Nº 500 de fecha 22 de agosto de 2003, ambos del Registro del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, organismo descentralizado de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS del MINISTERIO DE ECONOMIA Y PRODUCCION, y CONSIDERANDO: Que mediante la Resolución Nº 500 de fecha 22 de agosto de 2003 del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, organismo descentralizado de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS del MINISTERIO DE ECONOMIA Y PRODUCCION, se creó el Sistema Federal de Fiscalización de Agroquímicos y Biológicos (SIFFAB). Que el mencionado Sistema Federal contempla entre sus objetivos generales, controlar, fiscalizar y auditar los productos fitosanitarios en el ámbito nacional y determina entre sus objetivos específicos, asegurar la trazabilidad de los mismos. Que corresponde, por lo tanto, establecer un Sistema de Trazabilidad para los productos citados, que coadyuve al cumplimiento de los objetivos en sus sucesivas etapas. Que a fin de optimizar el Sistema de Trazabilidad se debe contemplar la información requerida por el mismo, la documentación que la sustente y las responsabilidades que respecto a dicha información le caben a cada agente elaborador o comercializador que integra el Sistema. Que es exigido por las normas vigentes la obligatoriedad de la emisión de un remito numerado para acompañar toda mercadería en tránsito y que el mismo sea archivado por un período determinado. Que, si bien los remitos que son emitidos por los agentes que integran el Sistema de Elaboración y Comercialización de Productos Fitosanitarios contienen información necesaria para asegurar la trazabilidad, la misma no es suficiente. Que la Dirección de Fiscalización Vegetal dependiente de la Dirección Nacional de Fiscalización Agroalimentaria del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, organismo descentralizado de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS del MINISTERIO DE ECONOMIA Y PRODUCCION, elaboró una propuesta que establece los requisitos mínimos a ser agregados a la documentación de tránsito o remito para asegurar la trazabilidad. Que el Consejo de Administración del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, ha tomado conocimiento de la presente normativa, no encontrando reparos que formular. Que la Dirección de Legales del Area de AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS dependiente de la Dirección General de Asuntos Jurídicos del MINISTERIO DE ECONOMIA Y PRODUCCION, ha tomado la intervención que le compete. Que la presente resolución se dicta en ejercicio de las atribuciones conferidas en función de lo dispuesto por el Artículo 8º, inciso e) del Decreto Nº 1585 del 19 de diciembre de 1996, sustituido por su similar Nº 680 de fecha 1 de septiembre de 2003 y en el Decreto Nº 25 de fecha 27 de marzo de 2003 modificado por su similar Nº 1359 de fecha 5 de octubre de 2004. Por ello, EL SECRETARIO DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS RESUELVE: Artículo 1º — Apruébase el Sistema de Trazabilidad de Productos Fitosanitarios como componente del Sistema Federal de Fiscalización de Agroquímicos y Biológicos (SIFFAB), creado por la Resolución Nº 500 del 22 de agosto de 2003 del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, organismo descentralizado de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS del MINISTERIO DE ECONOMIA Y PRODUCCION, que como Anexo I forma parte integrante de la presente resolución. Art. 2º — Fíjanse como datos mínimos que deben constar en los remitos que se emitan para acompañar todo producto fitosanitario, los siguientes: número de lote del producto, marca comercial o número de registro del producto, volumen correspondiente al número de lote asentado, capacidad de los envases del número de lote asentado y cantidad de embalajes correspondiente al número de lote asentado. En caso que alguno de los datos indicados varíe (número de lote, marca o número de registro, volumen o capacidad de envases), se deberá asentar un nuevo registro de datos en el remito. Art. 3º — Establécese en TRES (3) años el período mínimo obligatorio durante el cual cada agente del Sistema de Elaboración y Comercialización de Productos Fitosanitarios deberá mantener archivados los remitos emitidos y recibidos. Dicha documentación deberá conservarse ordenada cronológicamente y quedará a disposición del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA o quien éste faculte, a los fines de la fiscalización y auditoría oficial del citado Sistema. Art. 4º — Toda persona física o jurídica titular del Certificado de Uso y Comercialización de Productos Fitosanitarios alcanzados por el Sistema Federal de Fiscalización de Agroquímicos y Biológicos (SIFFAB) deberá llevar un libro, que se mantendrá en el respectivo domicilio legal, donde se documente la información correspondiente a la elaboración de los productos mencionados. El libro de registro será foliado y rubricado por la Unidad de Coordinación del Sistema Federal de Fiscalización de Agroquímicos y Biológicos (SIFFAB) y el formato de cada registro se compondrá según se detalla en el Anexo II que forma parte integrante de la presente resolución. Los registros asentados deberán conservarse por un período de TRES (3) años. Art. 5º — El incumplimiento de lo establecido en la presente resolución, dará lugar a la aplicación de las sanciones previstas en el Decreto Nº 1585 del 19 de diciembre de 1996. Art. 6º — La presente resolución entrará en vigencia el día siguiente al de su publicación en el Boletín Oficial. Art. 7º — Comuníquese, publíquese, dése a la Dirección Nacional del Registro Oficial y archívese. — Miguel S. Campos. ANEXO I SISTEMA DE TRAZABILIDAD DE PRODUCTOS FITOSANITARIOS COMO COMPONENTE DEL SISTEMA FEDERAL DE FISCALIZACION DE AGROQUIMICOS Y BIOLOGICOS (SIFFAB) OBJETIVO mhtml:file://J:\DINICA\CGROT\ALESA\Carpetas normativa página web\Agroquimi... 18/12/2013 �Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos Página 2 de 3 Implementar un sistema de rastreo, seguimiento, fiscalización y auditoría de productos fitosanitarios que coadyuve a la óptima ejecución del Sistema Federal de Fiscalización de Agroquímicos y Biológicos (SIFFAB). ESTRATEGIA Fijar y adecuar la documentación e información necesaria, como también los procedimientos para asegurar un rastreo eficaz de los productos a través de toda la cadena de elaboración, comercialización y venta hasta el usuario final mediante el asiento y registro de datos suficientes y el archivo de la documentación requerida por un período dado. ACCIONES - Rastrear los antecedentes, la historia o la ubicación de un producto fitosanitario por medio de datos suficientes debidamente registrados y archivados. - Verificar, fiscalizar, efectuar la vigilancia, monitorear y auditar las actividades de elaboración y comercialización de productos fitosanitarios. AGENTES ELABORADORES O COMERCIALIZADORES CON RESPONSABILIDADES QUE INTEGRAN EL SISTEMA - Persona física o jurídica propietaria del registro. - Elaborador (Fabricante/Formulador). - Distribuidor o mayorista. - Comercio o minorista. REQUISITOS Y PROCEDIMIENTOS A SER CUMPLIDOS POR LOS AGENTES RESPONSABLES - Cada agente definido como responsable deberá llevar un archivo en el que consten en forma completa los remitos de los productos alcanzados por el Sistema de Trazabilidad. - La documentación, tanto de despacho como de recepción, deberá ser conservada hasta TRES (3) años después de realizada cada operación. - A los fines de la fiscalización y de la auditoría oficial, deberá obrar copia de cada documento tanto en el archivo del emisor del mismo, (documento de salida o venta) como del receptor (documento de entrada o compra). - El documento a archivar será el remito que documenta el movimiento de producto entre partes. Dicho remito será archivado en el domicilio legal de cada operador responsable. - La información que deberán conservar los agentes responsables conformará un archivo, el que contendrá por un lado los remitos emitidos y, por otro, los remitos recibidos. - Todos los remitos deben conservarse ordenados cronológicamente y estarán a disposición del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, organismo descentralizado de la SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, PESCA Y ALIMENTOS del MINISTERIO DE ECONOMIA Y PRODUCCION, a los fines de fiscalización y la auditoría oficial del sistema. RESPONSABILIDADES 1.- ELABORADOR (Fabricante/Formulador): Mantener el archivo de remitos emitidos y recibidos. Mantener los archivos exigidos por las normas vigentes de competencia del citado Servicio Nacional. Permitir la fiscalización y la auditoría. 2.- DISTRIBUIDOR O MAYORISTA: Mantener el archivo de remitos emitidos y recibidos. Permitir la fiscalización y la auditoría. 3.- COMERCIO O MINORISTA: Mantener el archivo de remitos emitidos y recibidos. Permitir la fiscalización y la auditoría. 4.- PERSONA FISICA O JURIDICA PROPIETARIA DEL REGISTRO: Mantener el archivo del registro de producción por lote y por elaborador. Permitir la fiscalización y la auditoría. 5. –SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA-Sistema Federal de Fiscalización de Agroquímicos y Biológicos (SIFFAB): Fiscalizar y auditar. ANEXO II LIBRO DE REGISTRO DE ELABORACION OBJETIVO Implementar el registro de lotes de elaboración como parte del sistema de rastreo, seguimiento, fiscalización y auditoría de productos fitosanitarios en el marco del Sistema Federal de Fiscalización de Agroquímicos y Biológicos (SIFFAB). ACCIONES Documentar y asentar en un libro de registro la información correspondiente a la elaboración de los productos fitosanitarios alcanzados por el Sistema Federal de Fiscalización de Agroquímicos y Biológicos (SIFFAB). Verificar, fiscalizar, efectuar la vigilancia, monitorear y auditar las actividades de elaboración y comercialización de los productos fitosanitarios. CAMPOS QUE COMPONEN EL REGISTRO mhtml:file://J:\DINICA\CGROT\ALESA\Carpetas normativa página web\Agroquimi... 18/12/2013 �Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos Fecha Número de Registro Número o Nombre del Establecimiento Número de Lote Página 3 de 3 Volúmen del Lote Número de Protocolo del Activo Número de Protocolo del Formulado DESCRIPCION DE CAMPOS FECHA: corresponde a la fecha de elaboración del lote asentado en el registro. NUMERO DE REGISTRO: se asentará el número de registro del producto fitosanitario (principio activo o producto formulado según corresponda) en el Registro Nacional de Terapéutica Vegetal. NUMERO O NOMBRE DEL ESTABLECIMIENTO: se asentará el número o el nombre del establecimiento correspondiente al establecimiento elaborador del lote documentado en ese registro del libro. NUMERO DE LOTE: se asentará el número de lote asignado al producto elaborado. VOLUMEN DEL LOTE: se asentará el volumen o peso correspondiente al lote elaborado y documentado en el campo previo denominado "Número de Lote". NUMERO DE PROTOCOLO: se asentará el número de protocolo analítico asignado al análisis de control de calidad efectuado por el establecimiento correspondiente al lote elaborado y al documentado en el campo previo al "Número de Lote". NUMERO DE PROTOCOLO DEL ACTIVO: se asentará el número de protocolo del análisis de control del principio activo grado técnico previo a su formulación, si el asiento del registro se tratara de un producto formulado, o el número de protocolo del análisis de control de calidad, si se tratara de la fabricación de un grado técnico (Manual sobre Desarrollo y Uso de Especificaciones FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION (FAO) para Productos Fitosanitarios, Quinta Edición, Apéndice B, ítem 4. Principios Generales de Muestreo). NUMERO DE PROTOCOLO DEL FORMULADO: se asentará el número de protocolo del análisis de control de calidad de manufactura del producto formulado si el asiento del registro se tratara de un producto formulado (Manual sobre Desarrollo y Uso de Especificaciones FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION (FAO) para Productos Fitosanitarios, Quinta Edición, Apéndice B, ítem 4. Principios Generales de Muestreo). mhtml:file://J:\DINICA\CGROT\ALESA\Carpetas normativa página web\Agroquimi... 18/12/2013 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Resolución SAGPyA N° 1230/2004 Description An account of the resource Trazabilidad de Productos Fitosanitarios Creator An entity primarily responsible for making the resource Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource Lunes 29 de Noviembre de 2004 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Resolución Abstract A summary of the resource. "Apruébase el Sistema de Trazabilidad de Productos Fitosanitarios como componente del Sistema Federal de Fiscalización de Agroquímicos y Biológicos creado por la Resolución Nº 500/2003-SENASA. Objetivo. Estrategia. Acciones. Agentes elaboradores o comercializadores con responsabilidades que integran el Sistema. Requisitos y procedimientos a cumplir por los agentes responsables. Registro de elaboración". Source A related resource from which the described resource is derived <a href="https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/verNorma.do?id=101547">Resolución SAGPyA N° 1230/2004</a>