30 10 4450 https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/277a213691160b612b5f47f0b70dd6f5.pdf b74fcda38bc623526879c2544784848a PDF Text Text MANUAL DE APOYO ORIENTATIVO PARA EL DIAGNÓSTICO DE LAS ENFERMEDADES DE AVES Y LAGOMORFOS QUE PUEDEN APARECER EN LAS PLANTAS DE TRANSFORMACIÓN PRIMARIA DIRECCIÓN NACIONAL DE INOCUIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA DIRECCIÓN DE INOCUIDAD DE PRODUCTOS DE ORIGEN ANIMAL COORDINACIÓN DE AVES, OVOPRODUCTOS, PRODUCTOS DE LA CAZA Y ESPECIES MENORES. �CRÉDITOS SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA Presidente: Méd. Vet. Marcelo Miguez Vicepresidente: Méd. Vet. José María Moreno Gerente General: Ing. Agr. Eduardo Dillon DIRECCIÓN NACIONAL DE INOCUIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA Director: Dr. Ernesto Ferrarese DIRECCIÓN DE INOCUIDAD DE PRODUCTOS DE ORIGEN ANIMAL Director: Dr. Juan Carlos De María COORDINACIÓN DE AVES, OVOPRODUCTOS, PRODUCTOS DE LA CAZA Y ESPECIES MENORES Coordinador: Dr. Malvestiti, Leonardo Jorge Redactores: Dr. Malvestiti, Leonardo Jorge. Dr. Vicari, Carlos Alberto. Dr. Ball, Julio Cesar. Dr. Roberto, Marcelo Mario. Dr. Otero, Sebastián Ricardo. Colaboradores: Dr. Ramos, Mariano. Dra. Espinoza, Cora. Dra. Borgna, Patricia. Diseño, ilustración y edición: Coordinación de Relaciones Institucionales, Información y Comunicación �ÍNDICE 01. Glosario 01 02. Listado de enfermedades de las aves de declaración obligatoria OIE 02 03. Técnica de necropsia de la aves 03 04. Descripción de las enfermedades de las aves 04 05. Listado de enfermedades de lagomorfos de declaración obligatoria OIE 05 06. Técnica de necropsia de los lagomorfos 06 07. Descripción de las enfermedades de los lagomorfos 07 08. Bibliografía 08 09. Anexos 09 �4 �01. GLOSARIO Abscesos: acumulación de pus en los tejidos orgánicos internos o externos. Aerosaculitis: inflamación de los sacos aéreos. Agente antimicrobiano: designa una sustancia natural, semisintética o sintética, que da muestras de actividad antimicrobiana (mata o inhibe el desarrollo de microorganismos). Se excluyen de esta definición los antihelmínticos y las sustancias clasificadas en la categoría de los desinfectantes o los antisépticos. Análisis del riesgo: designa el proceso que comprende la identificación del peligro, la evaluación del riesgo, la gestión del riesgo y la información sobre el riesgo. Artritis: inflamación de una articulación, la cual por su curso puede ser aguda, subaguda o crónica. Exudativa; aquella que presenta derramamientos. Ascitis: acumulación de líquido en la cavidad celómica (abdominal). Produce abultamiento fluctuante e indoloro del abdomen con sonido mate a la percusión. Puede ser exudativa o traumática. Aves de un día: designa las aves que tienen, como máximo, 72 horas después de haber salido del huevo. Aves ponedoras: designa a las aves mantenidas para la producción de huevos que no están destinados a ser incubados. Aves reproductoras: designa a las aves conservadas para la producción de huevos para incubar. Bolsa De Fabricio: glándula del sistema inmune, asociada a la cloaca y ligada a ella en su parte superior, a través de una hendidura. Bronquitis: inflamación aguda o crónica de la membrana mucosa de los bronquios. Brote de enfermedad o de infección: designa la aparición de uno o más casos de enfermedad o de infección en una unidad epidemiológica. Bursitis: inflamación de las bolsas sinoviales de las articulaciones. Candidiasis: infección de la piel y las mucosas producida por hongos del género Cándida. Canibalismo: es el acto o la práctica de alimentarse de miembros de la propia especie . El término se aplica a cualquier tipo de animal. Para el caso de aves son diversos grados de pérdida de tejidos, debido al picoteo del ano, dedos, plumas o alrededor de la cabeza.. 5 �Caquexia: Estado de involución general caracterizado por pérdida de peso, astenia e incapacidad para desarrollar actividades mínimas. Suele acompañar a estadios terminales de enfermedades crónicas. También suele aplicarse este término a un órgano determinado, cuando el mismo se encuentra afectado por un trastorno. Caseoso: tejido que, por necrosis, adquiere una consistencia semejante a la del queso. Caso: designa un animal infectado por un agente patógeno, con o sin signos clínicos manifiestos. Cavidad del cuerpo: en las aves, la cavidad torácica, abdominal y pélvica se hallan unidas, conformándola. Cianótica: coloración azul y alguna vez negruzca o lívida de la piel, debida a trastornos circulatorios. Cirrosis: inflamación crónica del tejido de cualquier órgano; cirrosis hepática, inflamación del hígado. Cólera: epizootia que suelen padecer las gallinas, palomas, ánades, faisanes, etc., caracterizada por su breve curso y gran mortalidad. Es 6 producida por un bacilo específico. Colibacilosis: infección producida por Escherichia coli. Congestión: acumulación excesiva o anormal de sangre en los vasos de una parte del cuerpo. Conjuntivitis: inflamación de la conjuntiva ocular. Control veterinario oficial: significa que la Autoridad Veterinaria conoce el lugar de mantenimiento de los animales y la identidad de su propietario o de la persona encargada de cuidarlos y puede, en caso de necesidad, aplicar medidas apropiadas de control zoosanitario. Convulsiones: contracción violenta, involuntaria, de naturaleza morbosa, de los músculos voluntarios, que determina movimientos irregulares, localizados en uno o varios grupos musculares o generalizados en todo el cuerpo. Costra: lesión secundaria a la desecación de un exudado o secreción (serosa, sangre o pus). Crónico: enfermedad o proceso de larga duración. Degenerados: de Degeneración: Alteración de los tejidos y/o estructuras anatómicas, con cambios químicos de las sustancias constituyentes y pérdida de los caracteres esenciales y funciones. Deshidratación: perdida excesiva de agua y sales minerales en un organismo. Diátesis: predisposición orgánica a contraer una determinada enfermedad. Dislocación: sacar algo de su lugar. Referido a huesos y articulaciones. Disnea: dificultad de respirar. DNSA: Dirección Nacional de Sanidad Animal, SENASA. �Edema: hinchazón blanda de una parte del cuerpo, que cede a la presión y es ocasionada por la infiltración serosa de los tejidos. Emaciación: enflaquecimiento extremo por causa morbosa. Empastamiento: estado de una parte infiltrada o edematosa no inflamada agudamente; sensación de la mano que palpa. Encéfalomielitis: inflamación del cerebro y médula espinal combinadas. Enfermedad: designa la manifestación clínica y/o patológica de una infección. Enfermedad de declaración obligatoria: designa una enfermedad inscripta en una lista por la Autoridad Veterinaria y cuya presencia debe ser señalada a esta última en cuanto se detecta o se sospecha, de conformidad con la reglamentación nacional. Enfermedad emergente: designa una infección nueva consecutiva a la evolución o la modificación de un agente patógeno existente; una infección conocida que se extiende a una zona geográfica o a una población de la que antes estaba ausente; un agente patógeno no identificado anteriormente o una enfermedad diagnosticada por primera vez y que tiene repercusiones importantes en la salud de los animales o de las personas. Enfermedades de la Lista de la OIE: designa la lista de enfermedades transmisibles aprobada por el Comité Internacional de la OIE y presentada en el Capítulo 2.1.1. del Código Terrestre. Enteritis: inflamación de la membrana mucosa de los intestinos. Equivalencia de medidas sanitarias: designa la situación en la que la(s) medida(s) sanitaria(s) propuesta(s) por el país exportador para sustituir las del país importador, ofreciendo el mismo nivel de protección. Erradicación: designa la eliminación de un agente patógeno en un país o una zona. Erupción: aparición y desarrollo en la piel o en las mucosas de granos, manchas o vesículas. Grano o mancha de la piel. Estertores: respiración anhelante, generalmente ronca o silbante, propia de la agonía y del coma. Ruido de burbuja que se produce en ciertas enfermedades del aparato respiratorio y se percibe por la auscultación. Etiología: estudio o teoría de las causas de una enfermedad. Exantema: erupción de la piel, de color rojo más o menos subido, que desaparece momentáneamente con la presión del dedo, va acompañada o precedida de calentura y termina por descamación; como el sarampión, la escarlatina y otras enfermedades. Exsicosis: estado morboso producido por la insuficiencia de ingreso de agua en el organismo. 7 �Exudado: salida desde un reservorio de una sustancia, generalmente de origen infeccioso y/o inflamatorio. Exudativa: que produce exudación. Fibrinosos: agregados de coágulos blandos. Flácido: flaco, flojo, sin consistencia. Fluido: derrame o evacuación de un líquido normal o patológico. Además puede emplearse este término para el paso de un fluido por un conducto, como la sangre en una arteria o el aire en los bronquios. Focos: centro principal de un proceso morboso. Folículos: Cripta o pequeño saco en forma de dedo de guante, en una mucosa o en la piel, generalmente con función secretoria. Fotofobia: sensibilidad anormal a la luz; puede ser manifestación de enfermedades oculares como la queratitis, uveítis y úlceras cornéales, de enfermedades neurológicas como la migraña, hemorragia subaracnoidea y la meningitis o de patología mental como la depresión. Gangrena: muerte de los tejidos por falta de riego sanguíneo, generalmente a causa de una herida seguida de infección y putrefacción. Hemorragia: salida o derrame de sangre de los vasos sanguíneos. Hígado Graso: que ha sufrido la infiltración adiposa. Hipertrófico: aumento excesivo del volumen de un órgano. Inflamación: alteración patológica en una parte cualquiera del organismo, caracterizada por trastornos de la circulación de la sangre y, frecuentemente, por aumento de calor, enrojecimiento, hinchazón y dolor. 8 Infiltración: acumulación en un tejido, de una sustancia extraña al mismo. Lesión: toda alteración, discontinuidad patológica o traumática de un órgano o tejido. Letargo: síntoma de varias enfermedades nerviosas, infecciosas o tóxicas, caracterizado por un estado de somnolencia profunda y prolongada. Necropsia: autopsia o examen de los cadáveres. Necrosis: muerte celular, de un tejido u órgano, causada por agentes físicos, químicos y/o biológicos. Neumonía: inflamación del tejido pulmonar. Pulmonía. Nódulo/s: tumefacción circunscripta o conglomerado de estructuras con forma sólida, puede ser poco visible y detectarse por la palpación. OIE: la Organización Mundial de Sanidad Animal. Pápula: pequeña elevación sólida y circunscripta de la piel o mucosas. �Patogenia: ciencia que estudia el desarrollo de las enfermedades. Sinusitis: inflamación de los senos nasales. Puede ser purulenta o no. Parálisis: privación o disminución del movimiento en una o varias partes del cuerpo. Sufusiones: derrame especialmente sanguíneo; hemorragia con infiltración de tejidos. Paresia: parálisis leve que consiste en la debilidad de las contracciones musculares. Patogenicidad: de patogenia: Parte de la patología, que estudia cómo se engendran las enfermedades. Pericarditis: inflamación aguda o crónica del pericardio. Perihepatitis: inflamación de la cápsula de Glisson, o de la capa peritoneal del hígado. Peritonitis: inflamación del peritoneo. Petequias: mancha de color rojo púrpura, debida a efusión interna de sangre, del tamaño de la cabeza de un alfiler, perfectamente delimitada sobre la piel o mucosas y que puede cambiar de color al azul o amarillo. (Hemorragia petequial). Placas: área o zona que difiere del resto del tejido. Postración: abatimiento o agotamiento extremos. Pseudo membranas: falsa membrana o neomembrana, especialmente la producción morbosa que solo tiene de membrana la apariencia, estando constituida por un exudado fibrinoso coagulado que engloba leucocitos y bacterias. Tendosinovitis: inflamación aguda o crónica de la vaina de un tendón o de este y su vaina. Tortícolis: espasmo doloroso, de origen inflamatorio o nervioso, de los músculos del cuello, que obliga a tener la cabeza torcida e inmóvil. Tumefacto De tumefacción: aumento de tamaño de una zona por inflamación, tumor o edema; hinchazón. Tumores: tumefacción, aumento de tamaño o hinchazón de carácter patológico. Es uno de los signos fundamentales de la inflamación. Masa de células transformadas, con crecimiento y multiplicación anormales. Dependiendo de su posible evolución, se diferencia tumor benigno formado por células muy semejantes a las normales, que permanece en su lugar de inicio y no produce metástasis; y tumor maligno o cáncer, de carácter grave, invasivo, que produce metástasis. Variólico: relativo a la viruela. Secreción: sustancia que se vierte interna o externamente desde el organismo. Puede o no ser de origen infeccioso. Síndrome: conjunto de síntomas que ocurren en una enfermedad. Sinovitis: inflamación de la membrana sinovial de las grandes articulaciones. 9 �02. LISTADO DE ENFERMEDADES DE LAS AVES DE DECLARACIÓN OBLIGATORIA INFLUENZA AVIAR ALTAMENTE PATÓGENA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE BRONQUITIS INFECCIOSA AVIAR LARINGOTRAQUEÍTIS INFECCIOSA AVIAR TUBERCULOSIS AVIAR HEPATITIS VIRAL DEL PATO ENTERITIS VIRAL DEL PATO CÓLERA AVIAR VIRUELA AVIAR TIFOSIS AVIAR BURSITIS INFECCIOSA (ENFERMEDAD DE GUMBORO) ENFERMEDAD DE MAREK MICOPLASMOSIS AVIAR (M. GALLISEPTICUM) CLAMIDIOSIS AVIAR PULLOROSIS 10 �03. TÉCNICA DE NECROPSIA DE LAS AVES DATOS ANAMNÉSICOS O ANTECEDENTES CLÍNICOS Estos datos son muy importantes, ya que sumados a la experiencia del necropsista orientan al mismo a llegar al diagnóstico de la enfermedad presente en el animal o lote de animales. Todos los datos anamnésicos se deben volcar a una ficha u hoja de protocolo, la cual deberá estar perfectamente identificada con un número; el mismo, servirá para poder identificar cualquier estudio complementario que se realice. También, se deberá consignar fecha de ingreso de la muestra, nombre y apellido del propietario, nombre del establecimiento, dirección, localidad y número telefónico. Estos datos son imprescindibles en caso de diagnosticarse una enfermedad exótica o de denuncia obligatoria ante las autoridades sanitarias. RAZA Se debe consignar si el lote está compuesto por animales de raza pesadas, semipesadas o livianas. Las razas pesadas y semipesados son más propensas a padecer afecciones del aparato locomotor o afecciones de la quilla debidas a su peso. Las razas livianas son más sanguíneas, por lo tanto más propensas a golpes y picaje. ORIGEN Es conveniente conocer el origen o procedencia de las aves. Existe un grupo importante de enfermedades que son trasmitidas a través del huevo y, por lo tanto, el problema no reside solo en el criador que recibe el producto, sino también en el propietario de los reproductores. Por lo tanto, las medidas adecuadas se deberán tomar en ambas explotaciones. EDAD En las explotaciones avícolas, el conocimiento de la edad de los animales adquiere una gran importancia. Existe un gran número de enfermedades que afectan solamente a animales jóvenes, como las hay, que afectan solamente a animales adultos. TIPO DE EXPLOTACIÓN Los sistemas de explotación más frecuentes son: reproductores, ponedoras de huevos para consumo y parrilleros. Existen enfermedades que afectan con mayor frecuencia a cada una de estas explotaciones, por lo tanto su importancia económica y profilaxis son distintas. TIEMPO QUE SE OBSERVA LA ENFERMEDAD Conocer cuánto tiempo hace que comenzaron los síntomas o la mortandad nos indicará la evolución de la enfermedad, de 11 �esta manera podemos dividirlas en agudas, subagudas y crónicas. Este dato nos permite conocer el período de incubación de la misma, dato éste muy importante en las enfermedades avícolas. MORBILIDAD Indica la cantidad de animales enfermos en el lote, y debe ser expresado en porcentaje. MORTALIDAD Indica la cantidad de animales muertos en el lote, se expresa también en porcentaje. Estos dos índices son muy importantes, pues nos dan pautas que orientan significativamente en el diagnóstico. Algunas enfermedades presentan altos índices de morbilidad con baja mortalidad, mientras que en otras, ambos índices son muy similares. CONSUMO DE ALIMENTO Y AGUA Se debe consignar con el objeto de determinar la disminución o aumento de los mismos. En casi todas las enfermedades, las aves disminuyen el consumo de alimento por falta de apetencia y movilidad, en las etapas febriles del consumo de agua está aumentado. Esto debe también deslindarse de los consumos aumentados normalmente en las épocas estivales. 12 VACUNAS Se deben conocer perfectamente los planes de vacunación establecidos en el criadero. Estos datos permiten interpretar ESTUDIOS SEROLÓGICOS posteriores, establecer posibles errores con respecto a la edad o vía de vacunación, etc. MEDICAMENTOS Se debe conocer si las aves fueron medicadas, qué droga se utilizó, por qué vía se suministró, y cuánto tiempo recibieron la medicación. Estos datos son muy importantes en casos de enfermedades bacterianas, ya que se pueden observar lesiones particulares de una determinada enfermedad, pero no se puede hacer el aislamiento del agente, la causa es que los animales estaban recibiendo un antibiótico, dato que se desconocía. También es importante en los casos de haberse suministrado una medicación, poder determinar si fue efectiva o no, y cambiarla si fuera necesario. SÍNTOMAS En este rubro consignaremos los síntomas observados por el propietario, estos datos debemos evaluarlos con precaución. Algunas veces los datos pueden ser equivocados o estar tergiversados ya sea por el encargado, el propietario o el mismo veterinario que nos trae la muestra, con el fin de disimular posibles errores de manejo. Otras veces el error se produce por desconocimiento o mala interpretación de los mismos, por esta razón los síntomas deben ser corroborados por el necropsista durante el examen externo de los animales. Los síntomas deben dividirse en: Respiratorios: por ejemplo; boqueo, exudado nasal u ocular, hipertrofia de los senos infraorbitarios, etc. Digestivos: por ejemplo; diarrea, aquí se debe consignar color, aspecto, etc. Nerviosos: por ejemplo; parálisis, paresias, torsión de cuello opistótonos, etc. Producción de huevos: se deberá consignar si está afectada la misma, ya sea en calidad o cantidad. INSPECCIÓN EXTERNA DEL AVE Una vez cumplimentados todos los datos anamnésicos, comienza a trabajar el necropsista, realizando la inspección externa de los animales. Corrobora primeramente si la sintomatología observada por el avicultor se corresponde con la que manifiestan las aves en ese momento. Se deberá observar el plumaje, si se encuentra brilloso, erizado, sucio, si las �plumas se encuentran limpias o aglutinadas con materia fecal alrededor de la cloaca. Es importante mirar la pigmentación de patas, pico y piel, coloración de la cresta, carúnculas y barbillones, estado de los párpados, forma y tamaño de las pupilas, coloración del iris, fosas nasales (presencia o ausencia de exudados), senos infraorbitarios (hipertrofia o no de los mismos) En la boca, observar la presencia de exudados, seudomenbranas, placas, etc. Se deberá prestar atención a la presencia de parásitos externos debajo del ala y alrededor de la cloaca. Las articulaciones se deberán observar con detenimiento sobre todo la tarsiana, así como las almohadillas plantares. (Pueden observarse desviaciones, exudados inflamatorios, hipertrofia, etc) En la quilla podemos encontrar exudados inflamatorios, desviaciones de la misma. Por último, debemos observar la presencia o ausencia de fracturas, traumas, heridas o malformaciones, como así también todo dato de interés que considere importante. SACRIFICIO DEL AVE Antes de sacrificar las aves, se extrae sangre; de este modo se obtiene suero para eventuales estudios serológicos. La extracción se puede realizar por punción cardíaca o a través de la vena axilar, en este momento se puede inyectar unos pocos centímetros de aire, los que serán suficientes para producir la muerte del animal. 13 �Otros métodos de sacrificio pueden ser: Punción Occipito - Atlantoide (esto se realiza con punzón, produciendo la destrucción de la masa encefálica) Torsión de cuello, con este método se produce la fractura de las vértebras cervicales. Sangrado a blanco, esto se logra con la sección de las venas yugulares o palatinas, o también por punción cardiaca extrayendo la sangre con una jeringa grande. Se debe tener en cuenta que el método de sacrificio será elegido de acuerdo a la sintomatología observada. Si, por ejemplo, los animales presentan signos nerviosos nunca se debe pensar en pacificar las aves por punción Occipito - Atlantoide; del mismo modo, si los animales presentan signos respiratorios, no se deben seccionar las venas yugulares, ni utilizar la torsión del cuello. El método de la embolia gaseosa tiene como ventaja que conserva la estructura de todos los órganos, pero como las aves no sangran, éstos se hallan pletóricos de sangre, y la sección de los vasos en la necropsia dificulta la observación por la gran acumulación de sangre. Por lo tanto, el necropsista es el que decidirá a su juicio, y de acuerdo a la inspección externa, el método de sacrificio. NECROPSIA Se denomina necropsia a la acción de examinar un cadáver (de nekros: muerto y opsie: ver). Los sinónimos más frecuentes son examen pos mortem o autopsia. La necropsia tiene como objetivo confirmar, rectificar o establecer un diagnóstico sobre un animal muerto. Hace un llamado a la observación, al conocimiento de la salud y la patología, utiliza la técnica de la disección. Es únicamente en el curso de una necropsia donde se tiene la posibilidad de examinar en detalle todos los órganos de un animal y rápidamente, darse una precisa idea de su estado. Por lo tanto, el examen de la necropsia ofrece las mejores facilidades para el establecimiento de un diagnóstico. Ante la falta de lesiones macroscópicas el operador tiene la posibilidad de extraer muestras para realizar exámenes complementarios que ayuden al diagnóstico. 14 Cuando se trate de establecer un diagnóstico en un grupo de animales, el estudio de las lesiones en conjunto permitirá arribar a un diagnóstico preciso. La necropsia se efectúa sobre un animal muerto en forma espontánea o sobre un animal enfermo o supuestamente enfermo que se ha sacrificado para tal fin, por lo tanto existe el riesgo de favorecer la liberación de elementos patógenos al medio ambiente. Es por esto que la necropsia nunca deberá realizarse hasta no estar seguro de la ausencia de riesgos de contaminación del medio ambiente y del operador. Una necropsia detallada requiere de la sección total del animal, por lo tanto se podrá realizar solo una vez. Una buena necropsia debe ser sistemática, precisa y completa. TÉCNICA Primeramente se debe introducir el ave en un recipiente que contenga agua con el agregado de una solución antiséptica. (Amonio cuaternario, espadol, etc) con el objeto de mojar las plumas y evitar que éstas se diseminen por la sala de necropsia. �Se coloca el ave en decúbito dorsal, se realizan dos incisiones en la piel, entre la quilla y las patas, luego se tracciona de las patas abriendo las articulaciones coxofemorales, de esta forma el ave queda en condiciones para comenzar la necropsia. Se realiza un ojal en la piel por debajo de la quilla y con tijera se hace una incisión hasta la comisura del pico, y hacia abajo, hasta la cloaca. Se tracciona la piel hacia los laterales dejando al descubierto los músculos Antes de tocar cualquier órgano, se deben observar los sacos aéreos pectorales del cuello y que de otra forma serían destruidos. de las patas. Se deben mirar con detenimiento los sacos aéreos interesternales, En este momento claviculares, axilares, torácicos anteriores, toracicos posteriores y se debe observar el abdominales. tejido subcutáneo y los En este momento se deben tomar muestras necesarias para los músculos. exámenes bacteriológicos. Se realiza un ojal Hacia el lado derecho del necropsista se debe buscar la unión del en los músculos estómago glandular y el esófago, donde, con tijera se realiza un corte, abdominales por debajo de la quilla, se a continuación se retira todo el aparato digestivo y el bazo (estómagos, intestino e hígado), terminando la extracción con un corte en el recto cortan los músculos pectorales a la altura cerca de la cloaca. Separar todos los órganos y dejarlos sobre la mesa, el intestino se separa de los estómagos con un corte a la altura del de las articulaciones píloro, se debe observar el páncreas (se encuentra incluido en el asa condrocostales, con duodenal). Abrir el estómago glandular y muscular por la línea media, tijera o costótomo se observando el contenido, las mucosas, etc. cortan las costillas hasta la clavícula. Disponer el intestino en forma de U invertida, abriéndolo en su totalidad, verificando el contenido, estado de las mucosas, presencia o Una vez cortada la no de parásitos, etc. clavícula y el hueso coracoides, con la En animales jóvenes observar con detenimiento la bolsa de Fabricio mano se vuelca la (ubicada por debajo de la cloaca con el animal en decúbito dorsal), quilla hacia un lado, tamaño, presencia de exudado, estado de los pliegues, etc. quedando expuesta la cavidad torácica y Retirar el corazón realizando un corte en los grandes vasos, observar el abdominal. pericardio y miocardio. Se observa el corazón, En la cavidad abdominal queda el aparato urogenital, en los machos el hígado, el estómago se deben observar los testículos, forma, tamaño, coloración, en las muscular y una hembras el ovario izquierdo (el derecho esta atrofiado), su grado de porción del intestino. 15 �desarrollo, lo que indica si el ave esta en postura, (si los hubiera) observar los óvulos, su tamaño, forma, color, etc. Retirar el oviducto en su totalidad, observar la presencia de lesiones. Se observan los riñones formados por tres lóbulos (anterior, medio y posterior) y ubicados centro-lateralmente a la columna vertebral, observar los úteros hasta su desembocadura en la cloaca. Luego se comienza la observación de digestivo y respiratorio. Se abre por la comisura del pico, se observa la lengua, pliegue palatino, paladar blando y fosa palatina. Luego se abre el esófago comenzando en la faringe hasta el buche, observando el contenido y estado de las mucosas. La inspección del aparato respiratorio se inicia en la laringe, donde comienza la apertura de la traquea, la que se abre en toda su extensión hasta la bifurcación de los bronquios, los que se cortan introduciéndonos en los pulmones, se observa la presencia de exudados en traquea o bronquios y estado de las mucosas. 16 Los pulmones se separan de la pared costal, a la que están fuertemente adheridos, se observa el color, la consistencia, etc. Por último se retira la traquea y los pulmones del cadáver. Para concluir con la inspección del sistema respiratorio, debemos observar las fosas nasales y los senos infraorbitales. Para la inspección de éstos últimos, se introduce la tijera por el orificio nasal y se corta paralelamente al pico por debajo del ojo, posteriormente, se corta el pico en forma perpendicular al eje y a la altura de los orificios nasales. A continuación, debemos observar el Sistema Nervioso Central, para tal fin se corta la piel por encima de los huesos craneanos, con una tijera se realiza un corte en los huesos frontales por detrás de la órbitas oculares, y dos cortes laterales por los huesos parietales que, partiendo del anterior, se unen en el orificio occipital. Se retira la tapa ósea, quedando a la vista cerebro y lóbulos ópticos (note que el cerebro no tiene circunvoluciones). Con tijera curva se retira el sistema nervioso central. El examen del Sistema Nervioso Periférico comienza con la observación de los neumogástricos, los que se localizan a lo largo del cuello, incluidos en el paquete vascular, del que deben ser disecados y observados. El plexo braquial se localiza a la entrada del pecho, los nervios intercostales se observan después de retirar los pulmones. El plexo lumbar y sacro se localizan por debajo del lóbulo medio del riñón, y por último, los nervios ciáticos entre los músculos aductores de la pata. Se debe verificar la disposición y forma de los folículos de las plumas dejando expuesta la piel, esto se realiza retirando las plumas en las zonas de los muslos, pecho, región dorsal, y especialmente a la altura del cuello. Por último, se deben observar los huesos largos, comprobar su dureza o fragilidad quebrando uno con ambas manos. Realizar un corte longitudinal a fin de comprobar el estado de la médula ósea y de las zonas de osificación, también se deben abrir las articulaciones principalmente la del tarso. �04. DESCRIPCIÓN DE LAS ENFERMEDADES DE LAS AVES INFLUENZA AVIAR (IA) DECLARACIÓN OBLIGATORIA (Ver manual de procedimientos específicos de la Dirección Nacional de Sanidad Animal.) DEFINICIÓN La influenza aviar o gripe aviar comúnmente gripe del pollo y gripe de los pájaros, designa a una enfermedad provocada por un virus que afecta a las aves, aunque algunas variantes pueden afectar al hombre y otros mamíferos. Esta afección es altamente contagiosa. ETIOLOGÍA Virus tipo ARN, de la familia Orthomyxoviridae, género Influenzavirus. Esta familia incluye varios virus clasificados en tres tipos, A, B ó C. El tipo A es el único que provoca infecciones naturales en las aves. Los tipos B y C infectan de modo primario a humanos y, ocasionalmente a cerdos. Todos los virus aislados altamente patógenos son del tipo A subtipos H5 y H7. Un subtipo del virus de influenza aviar H5N1, apareció en 1997 en Hong Kong, identificado como la fuente más probable de una futura pandemia de gripe humana. TRANSMISIÓN • Contacto directo con secreciones de aves infectadas, especialmente heces. • Alimentos, agua, equipos y ropa contaminados. • Huevos rotos contaminados pueden infectar a los pollitos. 17 �RESISTENCIA A LA ACCIÓN FÍSICA Y QUÍMICA Temperatura Se inactiva a: 56°C/3 horas; 60°C/30 min. pH Lo inactiva el pH ácido. Productos químicos Inactivado por agentes oxidantes, detergentes, disolventes de lípidos. Desinfectantes Soluciones de formol y compuestos de yodo. Supervivencia Sigue siendo viable durante mucho tiempo en los tejidos, las heces y el agua. SIGNOS CLÍNICOS Los signos de la enfermedad son en extremo variables y dependen de la especie afectada, edad, sexo, infecciones concomitantes, virus, factores ambientales, etcétera. La patogenicidad del virus de influenza, va a determinar su ubicación en el organismo. Los menos patógenos van a atacar el aparato respiratorio superior y a medida que aumenta la patogenicidad se distribuirá en el tracto digestivo, pudiéndose aislar hasta en el tejido muscular. Las infecciones pueden variar clínicamente en: subclínicas (no patogénicas), respiratoria aguda y/o urogenital (baja patogenicidad) y enfermedad sistémica severa (alta patogenicidad). Por lo tanto la IA puede manifestarse como una enfermedad respiratoria, entérica, reproductiva o neurológica. Los signos clínicos descriptos pueden incluir: descenso en la producción de huevos, huevos en fárfara o deformados, hinchazón de la cabeza, párpados, cresta y barbillones; cianosis de los barbillones, crestas y patas, problemas respiratorios con descargas nasales claras, mucopurulentas o sanguinolentas; tos; trastornos nerviosos, incoordinación; plumaje erizado; inapetencia; depresión y diarrea. Cualquiera de estos signos se puede producir solo o en varias combinaciones. En caso de explotaciones de aves a piso y en jaula, se observan signos nerviosos como tortícolis, opistótonos, imposibilidad de pararse, temblor de cabeza y cuello, cresta y barbillones edematosas a necróticos, edema en cabeza y patas, hemorragias subcutáneas en patas, edema, hemorragias viscerales, congestión y hemorragias en pulmones. En algunos casos, la enfermedad es rápidamente fulminante y se encuentran las aves muertas sin signos previos. Otras veces la enfermedad curso al principio con una enfermedad respiratoria aguda con aumento en mortalidad y declinación en la producción de huevos. 18 �DIAGNÓSTICO El período de incubación es de 3-5 días. • Depresión severa, inapetencia. • Marcada disminución de la producción de huevos. • Edema facial con crestas y barbillas tumefactas y cianóticas. • Hemorragias petequiales en las superficies de las membranas internas • Muertes súbitas (la mortalidad puede alcanzar 100%). • Aislamiento del virus necesario para un diagnóstico definitivo. • Aerosaculitis. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL • Cólera aviar agudo. • Enfermedad de Newcastle. • Enfermedades respiratorias, especialmente laringotraqueítis infecciosa. BRONQUITIS INFECCIOSA AVIAR DECLARACIÓN OBLIGATORIA DEFINICIÓN Enfermedad vírica aguda de la gallina, que produce signos respiratorios, problemas renales (broilers) y alteraciones en la puesta; disminución de la puesta de huevos; disminución de la calidad de los huevos: huevos en fárfara, con la cáscara rugosa y deformada, clara acuosa. Disminución de la incubabilidad (10-20%). Presencia de “falsas ponedoras”. Aumento del índice de transformación en pollos barrilleros. ETIOLOGÍA Coronavirus, Virus RNA pleomórficos, con envoltura y proyecciones glicoproteicas. Sensibles al calor y a la mayoría de desinfectantes. Más de 50 serotipos por SN: Massachusetts M-41 (respiratorio, ovario), Connecticut, Arkansas, Australia T (oviducto, aparato renal), Gray y Holte (renal). Cepas europeas (Dutch) D207; D212 (oviducto). Emergencia de nuevos serotipos. PATOGENIA Sensibilidad: afecta únicamente a las gallinas, la gravedad es inversamente proporcional a la edad y mayor al inicio de la puesta. La forma renal más frecuente en razas pesadas. Transmisión: vía aerógena a partir de exudados nasales y traqueales o de las deyecciones. Contagio directo o indirecto (muy contagioso). Algunas aves quedan portadoras y eliminan virus durante meses. Otros factores predisponentes: infecciones previas por virus con tropismo respiratorio (NC, LT, TRT) o por virus inmunosupresores (Gumboro, anemia infecciosa del pollo). Otras infecciones respiratorias: 19 �E. coli, Haemophilus paragallinarum, Mycoplasma gallisepticum. Malas condiciones higiénicas y de manejo: frío, calendario intensivo de vacunaciones, stress. Periodo de incubación: 18-36 horas. • Vía de entrada: aerógena multiplicación en tráquea, sacos aéreos o pulmón. • Digestiva: multiplicación en mucosa del proventrículo. • Viremia corta y multiplicación en células epiteliales del aparato respiratorio. • Según cepa del virus y edad del ave; oviducto y riñón. • Bolsa de Fabricio, tonsilas cecales y cloaca. SIGNOS CLÍNICOS Evolución en 10-14 días. 1 día - 1 mes: signos respiratorios: tos, estornudos, exudados nasales y oculares, estridor, disnea. Depresión, apilamiento en busca de calor, disminución del consumo de pienso, adelgazamiento. Morbilidad hasta el 100% y mortalidad hasta el 30%. Muerte por asfixia y aplastamiento. 5-20 semanas: signos respiratorios moderados. Atrofia del oviducto: aparición de falsas ponedoras (ponedoras internas). Cepas nefropáticas (en aves 3-6 semanas): depresión, signos respiratorios, plumas erizadas, sed intensa, diarrea blanquinosa, y hasta un 30% mortalidad. Más de 20 semanas: ligeros signos respiratorios. Caída de la puesta hasta el 50%. Recuperación lenta (4-6 semanas) sin volver al ritmo de producción normal. Disminución de la calidad: huevos en fárfara, cáscaras arrugadas, cáscaras frágiles, huevos deformados, claras acuosas. LESIONES MACROSCÓPICAS Inflamación catarral en tráquea, cavidad nasal y senos infraorbitarios. Atrofia de oviducto. Nefritis y palidez en riñones. DIAGNÓSTICO Signos respiratorios en pollitos, alta morbilidad, pero baja mortalidad. Caída de la puesta hasta del 50% y huevos de mala calidad. Presencia de alto porcentaje de falsas ponedoras. Mortalidad en pollos parrilleros con lesiones renales. 20 DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL Signos respiratorios: Influenza aviar, Newcastle, Laringotraqueítis, Micoplasma gallisepticum, Coriza infeccioso (Haemophilus paragallinarum), Aspergilosis (Aspergillus fumigatus), Enfermedad de Gumboro, Deficiencias nutricionales, Intoxicación por sal (falta de agua), Síndrome de caída de la puesta (adenovirus EDS-76), Encefalomielitis aviar, Situaciones de stress. �BURSITIS INFECCIOSA AVIAR (ENFERMEDAD DE GUMBORO) DECLARACIÓN OBLIGATORIA DEFINICIÓN Es una enfermedad viral causada por un virus del género Avibirnavirus, de la familia Birnaviridae. La enfermedad clínica sólo la presentan los pollos, si bien se pueden infectar pavos, patos y avestruces. Únicamente se ven afectadas a nivel clínico las aves jóvenes. ETIOLOGÍA Es un virus Birnaviridae, género Birnavirus, virus RNA sin envoltura. Dos serotipos: serotipo 1: amplia distribución, cepas que causan inmunosupresión (no signos clínicos directos). Cepas altamente virulentas, alta mortalidad serotipo 2 (pavos y pollos), cepas no patógenas ni inmunosupresoras. PATOGENIA El grupo de aves afectado mostrará una morbilidad muy elevada acompañada de una depresión grave en la mayoría de las aves, lo que dura unos 5–7 días. La mortalidad se eleva drásticamente durante 2 días y a continuación desciende de forma rápida durante los siguientes 2–3 días. Normalmente, muere entre el 5% y el 10% de las aves, pero la mortalidad puede alcanzar el 30–40%. Vías de transmisión: oral, conjuntival, respiratoria. Fómites (virus muy resistente al medio ambiente). No demostrada vía vertical. Periodo de incubación muy corto: 2-3 días. SIGNOS CLÍNICOS Los principales signos clínicos son diarrea acuosa, plumaje erizado, apatía, anorexia, temblores y postración. LESIONES MACROSCÓPICAS Entre las lesiones post mortem destacan la deshidratación de los músculos con numerosas AMBIENTE CONTAMINADO (HECES) GUSANOS, ÁCAROS hemorragias equimóticas en oral muslo y pectoral, primera x en linfocitos y macrófagos intestinales 24h el agrandamiento y decoloración 24-48h anaranjada de los Bolsa de Fabricio (órgano diana) Segunda x en linfocitos riñones. Las bolsas de Linfocitos B precursores circulantes Fabricio muestran las lesiones diagnósticas principales. Las aves Necrosis y erosión Bazo, riñón, timo, hígado que mueren presentan una bolsa agrandada e inflamada con una decoloración Atrofia Bolsa inmunosupresión amarilla pálida. Pueden presentar hemorragias intrafoliculares y en 21 �algunos casos, la bolsa puede estar completamente hemorrágica con la apariencia de una cereza oscura. En muchas bolsas estarán presentes edemas de color pajizo peribursales. Incremento moco intestinal, esplenomegalia con focos de necrosis. Forma subclínica: pollos menores de 3 semanas: infecciones oportunistas, bajo rendimiento y productividad. Forma clínica: pollos mayores de 3 semanas: picaje de la cloaca, Anorexia, depresión, diarrea acusada (deshidratación, mal plumaje), Recuperación en 5-7 días. DIAGNÓSTICO Signos Clínicos. Animales mayores de 3 semanas: aparición rápida, alta morbilidad, rápida recuperación. Lesiones bolsa de Fabricio. En animales menores de 3 semanas: aumento infecciones secundarias. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL Anemia Infecciosa aviar, Leucosis linfoide, Enfermedad de Marek, Hepatitis por cuerpos de inclusión (adenovirus), Enfermedad de Newcastle, Bronquitis Infecciosa, Coccidiosis. MICOPLASMOSIS AVIAR DECLARACIÓN OBLIGATORIA (Ver directivas de la Dirección Nacional de Sanidad Animal.) DEFINICIÓN Es una enfermedad que puede producirse por diferentes factores, algunos de estos son determinantes, ocasionados por el Micoplasma Gallisepticum y el Micoplasma Synoviae. Influyen también factores como la mala ventilación, vacunación, despique, sobrepoblación o cualquier otro factor causante de estrés. Otros microorganismos pueden complicar el cuadro, como por ejemplo, bacterias como E. Coli y otros microorganismos del genero Proteus. TRANSMISIÓN Puede ser vertical a través del huevo u horizontal por aerosoles, agua, alimento y portadores sanos. SIGNOS Dificultad respiratoria, estornudos, estertor bronquial, caída en la producción de huevos, disminución del consumo de alimento, baja tasa de crecimiento, disminución del porcentaje de nacimientos. LESIONES MACROSCÓPICAS Pericarditis y perihepatitis con exudado fibrino purulento, opacidad en sacos aéreos, tendinosinovitis purulenta, peritonitis, salpingitis. MORBI- MORTALIDAD Es variable de acuerdo con la presentación del caso. Se agrava si hay deficiencias de manejo y/o si se combina con otros agentes infecciosos. DIAGNÓSTICO El diagnóstico clínico se basa en los signos y las lesiones antes mencionadas. El diagnóstico de laboratorio se realiza por aglutinación (placa, tubo) inmunofluorecencia e inhibición de la hemoaglutinación (Ver manuales de procedimientos operativos DNSA). 22 �CLAMIDIOSIS AVIAR DECLARACIÓN OBLIGATORIA DEFINICIÓN La clamidiosis aviar (CA) está causada por la bacteria Chlamidophila psittaci. Originalmente, la CA que afecta a humanos y a todo tipo de aves se denominó psitacosis, pero con posterioridad se introdujo el término ornitosis para referirse a la enfermedad adquirida de aves salvajes o domésticas o que se presenta en ellas, mientras que el término psitacosis se reserva para la enfermedad adquirida de aves psitácidas o que se presenta en ellas. Se ha descrito en varias partes del mundo la clamidiosis en el avestruz y en el ñandú. ETIOLOGÍA La clamidiosis aviar (CA) está causada por la bacteria Chlamidophila psittaci, perteneciente al género Chlamydia, dividida en dos géneros, Chlamydia y Chlamydophila. Todas las cepas aviares conocidas se encuentran ahora incluidas en la especie Chlamydophila psittaci. Las cepas aviares comprenden al menos seis serotipos que se relacionan con las especies de aves de las que se aíslan normalmente. La clamidiosis que se presenta naturalmente en las especies de mamíferos y que no se contrae de las aves, está causada por cepas del organismo claramente diferentes. PATOGENIA Para las aves en cautiverio, el período de incubación varía de tres días a varias semanas; sin embargo, las infecciones latentes son comunes y la enfermedad activa puede presentarse después de años de exposición. En aves de vida libre, la transmisión natural se produce principalmente por vía aerógena y, en segundo término, por vía digestiva. Las aves que sufren la enfermedad clínicamente, como aquellas que son portadoras, eliminan la bacteria con sus secreciones nasales y sus heces. La infección en las aves, tiene su punto de partida al tomar contacto con materiales contaminados o en la inhalación del polvillo resultante (aerosoles). La difusión del agente se facilita en aquellas aves que cohabitan en estrecho contacto, o que se desplazan en bandadas. La eliminación del agente infeccioso entre las aves con clamidiosis latente puede activarse con diversos factores de estrés, como el hacinamiento, el transporte y el enfriamiento. Las aves pueden parecer sanas, pero son portadoras de C. psittaci y pueden eliminar el agente en forma intermitente, el cual es resistente a la desecación permaneciendo infeccioso por varios meses. 23 �LESIONES MACROSCóPICAS La necropsia de las aves afectadas revela a menudo un aumento del bazo y del hígado, inflamación fibrinosa de los sacos aéreos, pericarditis y peritonitis. Además se puede observar caquexia, anorexia; las lesiones también pueden incluir sinusitis, traqueitis, rinotraqueitis, inflamación de los sacos aéreos, neumonía y enteritis. DIAGNóSTICO La infección puede presentarse en forma asintomática, o bien, producir una enfermedad aguda, subaguda o crónica. En el cuadro agudo los signos clínicos, al igual que los observados en otras enfermedades sistémicas, son somnolencia, anorexia, plumas erizadas, escalofríos y debilidad general. También se pueden agregar síntomas digestivos (diarrea, deposiciones amarillentas), respiratorios (descarga nasal, tos, estornudo y dificultad respiratoria) y oculares (conjuntivitis uni o bilateral con abundante flujo lacrimal y fotofobia) y una reducción en la producción de huevos. Muchas aves, especialmente las aves psitácidas viejas, pueden carecer de síntomas clínicos; sin embargo, liberan el agente durante períodos largos. El cuadro crónico lleva a un progresivo desmejoramiento del estado general y pérdida de peso del ave. El porcentaje de mortalidad puede alcanzar al 2,5%, valor que no llama la atención de los criadores de estas aves, permitiendo entonces una mayor difusión del microorganismo. Los casos de cuadros clínicos evidentes pueden alcanzar una mortalidad del 30–50%. 24 �ARTRITIS VIRAL DEFINICIÓN La artritis viral, denominada también tenosinovitis, es una infección causada por Reovirus, que afecta las aves de carne (parrillero y reproductores pesados) caracterizada por artritis y tenosinovitis (fundamentalmente del tarso y metatarso). ETIOLOGÍA 1. El agente etiológico es un reovirus. Varios serotipos han sido identificados. Desarrolla bien en huevos embrionados susceptibles, en cultivos celulares principalmente en células de riñon de pollos jóvenes. 2. Todos los serotipos de reovirus tienen antígenos precipitantes comunes, esta prueba puede ser usada para identificar las aves que han sido infectadas por el virus. 3. Los reovirus son sumamente resistentes al calor, y presumiblemente a muchos factores tarsianas y las vainas ambientales. tendinosas contienen exudado inflamatorio PATOGENIA y sanguinolento. El reovirus es eliminado por las heces de Los cartílagos los pollos infectados. Se trasmite en forma articulares pueden horizontal a pollos susceptibles y pueden estar ulcerados y las estar contaminados los huevos externamente membranas sinoviales (cáscara). Se ha demostrado la transmisión de la articulación a través del huevo. Puede persistir en aves y tendones pueden infectadas por un período de por lo menos estar hemorrágicas. 289 días. La transmisión por artrópodos de 2. Las aves que no los reovirus de las aves virémicas no ha sido pueden extender la probada pero se supone que es posible. articulación tarsiana a menudo tienen SIGNOS CLÍNICOS roturas del tendón Los primeros síntomas son la dificultad en la de los gastrocnemio, marcha manifestada por cojeras, inflamación justamente por de la articulación tarsiana y del tendón en encima de la su recorrido por la caña. La mayoría de las articulación, los aves se encuentran en buena condición, pero algunas están retrasadas en el crecimiento. La músculos de la pata están hemorrágicos, mortalidad es usualmente baja. estos pueden Si hay ruptura de los tendones de una o ambas fusionarse por patas las aves quedan inmovilizadas o muy adherencias. disminuidas en su movilidad. Se observa la hemorragia a través de la piel en la zona de la DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL ruptura. LESIONES MACROSCóPICAS 1. En la fase aguda de la enfermedad hay hinchazón e inflamación de los tendones y hojas tendinosas justo encima de la articulación del tarso y a lo largo de la caña, en su parte posterior. Las articulaciones 1. Sinovitis. 2. Estafilocococcia de las patas. 3. Perosis. 4. Discondroplasias. 5. Enfermedad de Marek. 25 �LARINGOTRAQUEÍTIS INFECCIOSA AVIAR (DIFTERIA AVIAR) DECLARACIÓN OBLIGATORIA (Ver manual de procedimientos específicos de la Dirección Nacional de Sanidad Animal.) DEFINICIÓN La laringotraqueitis infecciosa es una enfermedad viral de curso agudo, que afecta a las gallinas, faisanes y que se caracteriza por disnea marcada, tos, boqueo y expectoración de un exudado mucohemorrágico. ETIOLOGÍA El agente causal es un virus Herpes, el que produce cuerpos de inclusión intranucleares en las células epiteliales de la tráquea, conjuntiva y membrana corioalantoidea de los huevos embrionados. Existe una sola cepa de virus, pero hay variabilidad en cuanto a su patogenicidad. PATOGENIA Las aves que han pasado la enfermedad son la fuente de infección, los animales vacunados, y en ciertas circunstancias fomites contaminados. La puerta de entrada es aerógena, siendo las aves adultas más susceptibles. El período de incubación es de aproximadamente entre 6 y 12 días. La difusión horizontal dentro del lote es muy lenta, a diferencia de otras enfermedades virales. SIGNOS CLÍNICOS Cepas patógenas: 1. Disnea bien manifiesta, boqueo, rales y posición muy característica durante la inspiración. 2. Expectoración muco-hemorrágica. 3. Portabilidad del 50-70%, mortandad del 10 a 20%. La enfermedad persiste en el lote entre 2 y 6 semanas. Cepas de baja patogenicidad: Conjuntivitis, lagrimeo, inflamación de los senos infraorbitarios, escara nasal y caída de la postura. 26 LESIONES MACROSCóPICAS 1. Severa laringotraqueitis hemorrágica, la cual puede extenderse a nivel de bronquios, también pueden estar afectados los sacos aéreos. En aves muertas se puede encontrar exudado pseudomenbranoso o caseoso en tráquea. 2. Presencia de sangre en la comisura del pico, boca, cabeza y plumas. 3. En brotes producidos por cepas de baja patogenicidad, es posible observar solamente conjuntivitis y sinusitis. DIAGNóSTICO DIFERENCIAL Se debe diferenciar de: 1. Enfermedad de Newcastle 2. Micoplasmosis 3. Difteroviruela aviar 4. Coriza infecciosa. �TIFUS DE LAS AVES (VER MANUAL DE PROCEDIMIENTOS ESPECÍFICOS DE LA DIRECCIÓN NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL.) DEFINICIÓN La tifosis aviaria es una enfermedad bacteriana de curso agudo o subagudo que ataca principalmente a gallinas y pavos. SIGNOS CLíNICOS En los casos agudos pueden morir aves sin sintomatología clínica; en el curso de los ETIOLOGÍA primeros días las aves El agente etiológico es un bacilo, Gram muestran diarrea, negativo, inmóvil, llamado Salmonella pérdida de apetito, gallinarum. Esta bacteria posee algunos palidez de crestas y antígenos comunes a los de la Salmonella barbillones. La diarrea pullorum (productora de la pullorosis), por esta razón ambas Salmonellas dan reacción de es fétida acuosa y de color amarillento. aglutinación cruzada. PATOGENIA La infección se produce por la ingestión de alimentos y agua contaminada con excreciones de aves clínicamente afectadas o portadoras inaparentes. La puerta de entrada es digestiva, siendo las aves adultas y las razas pesadas las más susceptibles. La morbilidad y mortalidad son muy variables, pudiendo llegar esta última hasta más de un 60%. El período e incubación es de 4 a 6 días y la muerte en los casos agudos ocurre 48 horas después de aparecidos los síntomas. Las aves infectadas que sobreviven, se trasforman en portadoras inaparentes de la enfermedad, trasmitiendo la infección a la descendencia, esto ocurre debido a que la Salmonella se acantona en el ovario. Pullorosis LESIONES MACROSCóPICAS 1. Hepatomegalia, coloración bronceada del hígado, con presencia de pequeños focos de coloración blanco amarillenta. 2. Esplenomegalia e hipertrofia renal. 3. Enteritis en la porción anterior del intestino delgado algunas veces con presencia de pequeñas úlceras. 4. Palidez de crestas y barbillones, la sangre puede presentar aspecto aguachento. DIAGNóSTICO DIFERENCIAL Cólera aviar Histomoniasis Hepatitis vibriónica Hepatitis vírica a cuerpos de inclusión 27 �PULLOROSIS ENFERMEDAD DE MAREK DECLARACIÓN OBLIGATORIA DECLARACIÓN OBLIGATORIA (Ver manual de procedimientos específicos de la Dirección Nacional de Sanidad Animal.) DEFINICIÓN Es una enfermedad viral, neoplástica, que se presenta en gallinas; se caracteriza por la infiltración de varios plexos nerviosos y/u órganos internos con presencia de células neoplásticas y pleomórficas. DEFINICIóN La pullorosis es una salmonelosis específica de las aves. Hace 20 años esta enfermedad estaba muy extendida y causaba mucha mortalidad. Afecta fundamentalmente a gallinas, pavos y en un menor grado a los palomos. ETIOLOGÍA y PATOGENIA El agente productor de la pullorosis es la Salmonella pullorum. El contagio se puede producir por infección por el huevo. A diferencia de otras salmonellas que contaminan el huevo al ser puesto, en este caso la infección ya se encuentra en el interior antes de la puesta. Los embriones en estos casos suelen morir durante la incubación, aunque también pueden nacer. Infección por contacto. Infección por intermediarios. El calzado y la ropa pueden ser vehículos de contagio al transmitir la infección de un sitio a otro. SINTOMATOLOGÍA El periodo de incubación es de 2 a 5 días. ETIOLOGÍA La enfermedad es producida por un virus de la familia Alphaherpesvirinae, género Mardivirus DNA, la mayor parte de los virus aislados son serológicamente indistinguibles, el virus desarrolla bien en cultivos celulares de riñon de embrión de pollo y fibroblastos de embrión de pato. Produce inclusiones intranucleares en estos cultivos celulares o en el epitelio del folículo de la pluma de pollos infectados. Es bastante resistente a los factores ambientales. PATOGENIA Los pollos infectados diseminan el virus que está en las células descamadas del folículo de la pluma, el que infecta a muchos otros pollos susceptibles que inhalan estas células descamadas. Los portadores infectados pueden o no estar enfermos clínicamente. La enfermedad es sumamente contagiosa y estas células descamadas pueden diseminarse a grandes distancias, las mismas son posiblemente el mayor medio de difusión y diseminación de la enfermedad. Los pichones enfermos presentan debilidad general, falta de apetito y una mayor apetencia por el calor. La transmisión de la enfermedad a través del huevo no ha sido satisfactoriamente Los excrementos aparecen blancos y muy demostrada. Si ésta se produce la hace en muy fluidos, éstos pueden secarse en los plumones poca cantidad. que rodean la cloaca y obstruiría, produciendo un hinchazón en el vientre. Se sospecha que pueda producirse la difusión a través de un escarabajo (alphiotobuis DIAGNóSTICO diaperinus) que vive en las camas y que a Además de la necropsia, el diagnóstico de la veces se alimenta de cadáveres de pollos pullorosis se basa en las pruebas serológicas infectados. realizadas con la sangre de los animales vivos. El papel de otras aves en la difusión de la enfermedad es desconocido, sin embargo, algunas aves han sido afectadas con el virus. Es razonable, por lo tanto, pensar que otras aves pueden diseminar el virus. 28 �SIGNOS CLíNICOS 1. Forma nerviosa o neural: paresias o parálisis de las patas, cuello, párpados son observados. Las aves con lesiones de nervio ciático a menudo están caídas con una pata hacia delante y otra hacia atrás. 2. Forma ocular. El iris está gris y la pupila tiene forma irregular, puede estar excéntrica. Las aves con lesiones oculares están ciegas o tienen una visión deteriorada. 3. Forma cutánea: las áreas afectadas de la piel presentan folículos tumorales, deformados, más levantados y rugosas. Algunas aves, aparentemente, se recuperan de estas lesiones pero posteriormente mueren de otras manifestaciones de enfermedad Marek. 4. Forma aguda (visceral): la enfermedad tiene una presentación aguda y la mortalidad crece rápidamente alcanzando su pico en pocas semanas, para luego disminuir poco a poco. Las lesiones neoplasicas afectan principalmente los órganos internos. LESIONES MACROSCóPICAS Se observa una hipertrofia de los nervios periféricos con decoloración de los mismos que aparecen grisáceos-amarillentos, es necesario observar varios nervios para encontrar las lesiones (neumogástiricos, ciáticos, plexo braquial, plexo lumbosacro, intercostales). Tumores linfoides son observados en las vísceras fundamentalmente en hígado, bazo, riñones, pulmones, gónadas y corazón. Hay lesiones tumorales en piel y músculos esqueléticos. Hay decoloración del iris (color grisáceo) y deformación de la pupila en casos de presentación ocular. No es frecuente la lesión en Bolsa de Fabricio. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL 1. Leucosis lindoidea 2. Enfermedad de Newcastle 3. Tuberculosis 4. Histomoniasis 5. Avitaminosis (riboflavina) 6. Ojo gris por causas genéticas. ENFERMEDAD DE NEWCASTLE DECLARACIÓN OBLIGATORIA (Ver manual de procedimientos específicos de la Dirección Nacional de Sanidad Animal.) DEFINICIóN La enfermedad de Newcastle es de origen viral, contagiosa y letal, afecta a las aves domésticas y silvestres causándoles alta morbilidad y mortalidad, las que dependen de la virulencia de la cepa del virus, del grado de inmunidad a la vacunación, de las condiciones ambientales y del estado de las aves de la explotación. ETIOLOGÍA La ENC es causada por un virus de la familia Paramyxoviridae, del género Rubulavirus. Las cepas se clasifican de acuerdo a su grado de patogenicidad y virulencia en: lentogénicas, mesogénicas y velogénicas, es decir, de baja, moderada y alta patogenicidad, respectivamente. Estas últimas constituyen un serio problema sanitario y comercial para la avicultura. El virus no afecta a humanos, sin embargo, las personas, vehículos, equipos o herramientas, son las fuentes primarias que transportan la infección de una granja a otra. PATOGENIA Las fuentes de transmisión del virus entre las aves son las secreciones respiratorias y heces, así como los cuerpos de las aves muertas. El virus se transmite durante el período de incubación (2 a 15 días) por un período limitado durante la convalecencia. La transmisión es horizontal. Sin embargo, se ha demostrado que algunos psitácidos transmiten durante más de un año el virus de la enfermedad de Newcastle de manera intermitente. SIGNOS CLíNICOS La severidad de estos signos está relacionada con el tipo de cepa actuante, especie afectada, dosis, edad, estado inmune, ruta de exposición y condiciones ambientales. En los casos agudos se presenta la mortalidad sin otras manifestaciones clínicas. Se puede observar disnea, tristeza, debilidad, postración y muerte, la cual puede alcanzar 100%. Aquellas aves que no mueren en la fase aguda pueden presentar diarrea verdosa, torticolis, temblores 29 �musculares, parálisis de alas y de patas. Otra forma de presentación es con trastornos respiratorios severos, seguidos por signos neurológicos, caída de la producción de huevos y generalmente ausencia de cuadros gastrointestinales; la morbilidad puede alcanzar 100%, con una mortalidad en aves jóvenes de hasta 90% y en adultos 50%. En brotes de campo causados por algunas cepas, se pueden producir cuadros respiratorios, caída de la producción de huevos y puede durar varias semanas, con una mortalidad generalmente baja, excepto en aves susceptibles muy jóvenes. Los virus lentogénicos, usualmente, no causan enfermedad en las aves adultas; sin embargo, en pollos jóvenes pueden causar cuadros respiratorios con mortalidad cuando están presentes otros patógenos. LESIONES MACROSCóPICAS No existen lesiones patognomónicas asociadas con ninguna de las formas de la enfermedad. La presencia y severidad de las lesiones están relacionadas con los diferentes factores de patogenicidad ya 30 descritos. Cuando el sistema respiratorio está afectado se observan lesiones hemorrágicas y congestión de la tráquea, en algunos casos acompañados de aerosaculitis con exudado catarral. En aves de postura se observan óvulos flácidos y degenerados, hemorragias y palidez de otros órganos reproductores, así como yemas de huevos en la cavidad abdominal. La presencia de lesiones hemorrágicas en el tracto gastrointestinal, es un criterio que se ha empleado para diferenciar las cepas velogénicas viscerotrópicas de las neurotrópicas y estas lesiones son frecuentes en proventrículo, ciego, cloaca, tonsilas cecales, tracto intestinal y necrosis en la pared intestinal. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL 1. Cólera aviar 2. Influenza aviar 3. Laringotraqueítis 4. Viruela aviar (forma diftérica) 5. Psitacosis 6. Micoplasmosis 7. Bronquitis infecciosa 8. También errores de manejo, tales como falta de agua, aire, alimentación �DIFTERO VIRUELA AVIAR DEFINICIÓN La Difiero-Viruela Aviaria (DVA), es una enfermedad viral que afecta a las gallinas, pavos y otras aves ornamentales y silvestres, que se caracteriza por la presencia de lesiones cutáneas en las partes desprovistas de plumas y/o por lesiones en las mucosas del aparato digestivo y respiratorio superior. ETIOLOGÍA La DVA es causada por un virus POX. Las 4 cepas de virus más importantes están estrechamente relacionadas, y en condiciones naturales son especie-específicas. Estas son: Virus gallina, virus pavo, virus paloma y virus canario. Estos virus poseen grado de inmunidad cruzada, propiedad ésta utilizada para el control de la enfermedad por medio de la vacunación. PATOGENIA 1. La descamación epitelial, a partir de las formaciones costrosas, contiene virus el cual persiste en el ambiente, particularmente en las camas por varios meses. A partir de ese material las aves se infectan penetrando el virus a través de abrasiones cutáneas. 2. Ciertos mosquitos (Culex - Aedes) y también otros artrópodos chupadores pueden trasmitir el virus de animales enfermos a susceptibles. La difusión por esta vía dentro del lote de aves es rápida. 3. La penetración de virus da lugar a una corta viremia y la aparición de las lesiones cutáneas o diftéricas, solas o combinadas. El período de incubación es de cuatro a diez días. LESIONES MACROSCóPICAS 1. Lesiones cutáneas en cabeza, cuello o patas, que siguen una secuencia de pasos, a saber: pápulas, nódulos, hemorragia y costra. En general en las aves predominan las lesiones papulosas-costrosas. 2. Presencia en áreas fibrinonecróticas en las mucosas: boca, senos, cavidad nasal, conjuntiva, faringe, laringe, tráquea y esófago. 3. Forma atípica semejante a coriza infecciosa. 4. En los pavos la lesión más común es la cutánea con una marcada proliferación del tejido, formando nódulos, principalmente en la cabeza. 5. En las palomas la presentación más típica es la diftérica con lesiones en boca, faringe y laringe. 6. En los canarios la presentación es muy grave llegando a morir hasta el 100 % de los animales, muchas veces sin lesiones macroscópicas, cuando los animales permanecen vivos por un tiempo, pueden aparecer lesiones cutáneas alrededor de los ojos, pico y patas. SIGNOS CLíNICOS En las aves la presentación es solapada y la enfermedad se hace evidente con la presentación de las lesiones cutáneas ya descriptas. La difusión dentro del lote en general es lenta. El cuadro epizootiológico en general es: a. baja mortalidad, presentación frecuente en verano, poca ganancia de peso, pérdida de vigor, etc. b. disnea, inapetencia, secreción ocular, y nasal. La mortalidad puede llegar hasta el 50%. DIAGNóSTICO DIFERENCIAL 1. Laringotraqueítis infecciosa. 2. Coriza Infecciosa. 3. Avitaminosis A. 31 �DERMATITIS NECROTICA DEFINICIÓN Es una enfermedad que afecta a los pollos y pavos en crecimiento (4 a 16 semanas de vida), con incidencia baja que en los lotes afectados puede llegar al 60%. Se caracteriza por la presencia de áreas gangrenosas en la piel, acompañadas por una severa inflamación de los tejidos subyacentes (celulitis). ETIOLOGÍA Los distintos géneros de bacterias aisladas son: - Clostridium Perfringens tipo A - Clostridium septicum - Estafilococo spp. - Escherichia Coli PATOGENIA 1. Lesión primaria traumática puede ser producida por: heridas, traumatismos, canibalismo, etc. 2. Invasión secundaria de bacterias como: Estafilicocos spp, Escherichia coli, que producen anaerobiosis y entonces hay desarrollo de clostridium. 3. Existen mecanismos predisponentes, entre los que podemos mencionar: mal manejo, deficiencias inmunitarias, Enfermedad Infecciosa Bursal, Aflatoxicosis y otras afecciones como: adenovirus, deficiencias nutricionales, reovirus, (Síndrome de mala absorción) y Artritis viral. SIGNOS CLÍNICOS Necrosis de la piel y tejidos más profundos, en las zonas de muslos, pechuga, alas, patas y región lumbar. A nivel de la piel se observa dermatitis necrótica gangrenosa con pérdida de epitelio y plumas. A nivel muscular se observa miosis serohemorrágica con fragmentación de las fibras musculares y pérdida de las estriaciones. A nivel de los órganos podemos observar: hepatomegalia con focos de necrosis, allí se puede aislar el agente, riñones y corazón infartados con hemorragias petequiales. DIAGNóSTICO DIFERENCIAL Las lesiones son muy características, aunque se debe diferenciar de la díatesis exudativa por carencia de vitamina E. 32 �LEUCOSIS LINFOIDEA DEFINICIÓN La leucosis linfoidea es causada por un leucovirus. Es una enfermedad neoplástica que afecta a aves semimaduras y maduras, caracterizada por una difusión lenta dentro del lote, la mortalidad es baja pero persistente, con neoplasia de la bolsa de Fabricio, con metástasis a otros órganos internos, especialmente el hígado, bazo y riñones. SIGNOS CLíNICOS - Las aves afectadas no presentan síntomas de la enfermedad. Las aves enfermas en su última etapa presentan emaciación y palidez de crestas y barbillones. ETIOLOGÍA - Puede observarse 1. Leucosis Linfoidea y otras enfermedades una hipertrofia del neoplásticas tumorales correspondientes al abdomen con ascitis grupo Leucosis/sarcoma son causadas por demostrable a la un grupo estrechamente relacionado de RNA leucovirus. El grupo se subdivide en 5 grupos, palpación o examen clínico. denominados A, B, C, D y E. 2. Los virus del grupo L/S estimulan un grupo - La osteopetrosis ocasionalmente específico de anticuerpos en las gallinas acompaña a L.L y infectadas. Estos anticuerpos permiten la identificación serológica de las aves infectadas, se manifiesta por una hipertrofia de pero estas pruebas son engorrosas y de poca los huesos largos, aplicación en gran escala. especialmente de las PATOGENIA cañas. La hipertrofia 1. La más importante vía de difusión de la es bilateral y enfermedad es por transmisión vertical. Las simétrica. ponedoras infectadas transmiten la infección a través del huevo a algunos o toda su progenie. DIAGNóSTICO DIFERENCIAL Estas aves infectadas pueden diseminar el 1. Enfermedad de virus intermitentemente o continuamente Marek durante toda su vida. 2. Tuberculosis 2. El virus está presente en la saliva y las 3. Coligranuloma de heces de las aves infectadas y se difunde Hijarre lateralmente a las aves susceptibles. 3. Algunas aves son virémicas es probable que 4. Reticuloendeteliosis los artrópodos que se alimentan de estas aves virémicas puedan difundir la enfermedad. Hay poca información al respecto para comprobar esta posibilidad. LESIONES MACROSCóPICAS 1. Las lesiones se presentan frecuentemente en aves de 4 meses de edad y mayores, cuando éstas se aproximan a la madurez sexual. 2. Las lesiones que se observan en los órganos internos son focales o difusas, neoplasias de color blanco o grisáceo en la bolsa de Fabricio, hígado, bazo o riñones. Otros órganos pueden ser afectados pero menos frecuentemente. El hígado se encuentra con hipertrófia y nodular. Las lesiones de hígado, bazo y riñones recuerdan mucho a las producidas por Enfermedad de Marek. 33 �COCCIODIOSIS DE LAS AVES DEFINICIÓN Es una enfermedad de las aves y de muchas especies animales producidas por protozoarios que, salvo excepciones, afecta primordialmente al tracto intestinal produciendo enteritis y diarrea. de Eimeria que este actuando. SIGNOS CLíNICOS La sintomatología depende de la especie de coccidio OCURRENCIA que esté actuando. Es una enfermedad común en los pollos, El signo clínico que menos frecuente en los pavos, patos, gansos, casi siempre está faisanes y muchas otras aves. Si bien las presente es la diarrea aves jóvenes son las más atacadas, puede en intensidad y tipo ocurrir en aves adultas susceptibles. El calor, de exudado, las hay la humedad y el hacinamiento favorecen la desde muy leves a aparición de brotes agudos. muy sanguinolentas. Los otros signos ETIOLOGÍA que acompañan son El agente etiológico es un protozoario de género la deshidratación, Eimeria, habiéndose descrito en las gallinas anemia, apatía, 9 especies distintas que se diferencian por la somnolencia y retardo forma, tamaño, tiempo de esporulación, período en el desarrollo, de prepotencia, localización preferencial en los aves de postura hay diversos sectores del intestino, patogénia, etc. disminución en la En la gallina se describen las siguientes: producción de huevos. La mortalidad varían Nombre de la Localización considerablemente de Eimeria una especie a otra. Intestino medio Eimeria mitis LESIONES Duodeno Eimeria hagani MACROSCóPICAS Varían como los Duodeno Eimeria praecox signos y van desde Duodeno Eimeria mivati exudado mucoso, moco sanguinolento a Duodeno Eimeria acervulina verdaderas hemorragia Intestino medio Eimeria maxima intestinales (necatrix y tenella), con la Recto y ciego Eimeria brunetti presencia de gran Intestino medio Eimeria necatrix cantidad de sangre y coágulos. La Ciego Eimeria tenella localización de las lesiones también PATOGENIA depende de la especie Los coccidios tienen ciclo directo, los ooquistes actuante. eliminados con las heces por el ave infectada, esporulan en el medio ambiente en condiciones DIAGNÓSTICO de temperatura y humedad adecuadas. Al DIFERENCIAL ser ingeridos por animales susceptibles se 1. Enteritis ulcerativa liberan los esporozoitos, los que parasitan las 2. Enteritis necrótica células epiteliales del intestino, multiplicándose 3. Histomoniasis primero en forma asexual y luego sexualmente, 4. Enfermedad de provocando la destrucción de las células. La Gumboro gravedad del cuadro depende de la especie 5. Pullorosis 34 �ENCEFALOMIELITIS AVIARIA DEFINICIÓN Encefalomielielitis Aviaria (EMA) o tremor epidémico es una infección de las gallinas, pavos, faisanes y codornices, caracteriza en aves jóvenes por una ataxia progresiva y parálisis, frecuentemente se observa temblores de cabeza y cuello. Los animales adultos infectados no muestran sintomatología. se observa el tremor. Los pollos que caen postrados son pisados por otros y mueren. 1. Durante la fase aguda de la infección en reproductores y durante un período de aproximadamente un mes, algunas ponedoras diseminan el virus a través del huevo. La mayoría de los pollos que nacen de estos huevos infectados muestran síntomas de la enfermedad en el momento de nacer o a los pocos días. Los pollos infectados eliminan virus a través de las heces, las que pueden difundir en forma horizontal el virus a pollos sanos de la misma camada. 2. La transmisión de la enfermedad en adultos susceptibles es desconocida y puede variar. Cuando los lotes derivan de fuentes múltiples casi todas las aves tienen anticuerpos, mientras que los derivados de una misma fuente, frecuentemente están libres de anticuerpos, esto demuestra que la transmisión horizontal es importante en lotes grandes y de fuentes diversas. LESIONES MACROSCóPICAS La mayoría de las aves no se observan lesiones macroscópicas. Algunas áreas focales grises en la musculatura del proventrículo se han descrito, pero normalmente son muy difíciles de ver. La morbilidad es variable, puede llegar al 60%. Los pollos con síntomas raramente se recuperan en forma ETIOLOGÍA completa. Los que La EMA es causada por un picornavirus. No existen diferencias serológicas entre los distintos sobreviven se atrasan en el crecimiento y virus aislados, a pesar de que pueden variar en no hay una normal su tropismo tisular. Todos son enterotrópicos, producción de huevos. pero ciertas cepas son más neurotrópicas que Puede haber secuelas otras y varían en su patogenicidad. de visión disminuida o El virus de EMA desarrolla en saco vitelino cataratas. de huevos embrionados y en una variedad de Las aves adultas cultivos celulares. raramente presentan Está presente en las heces de las aves infectas síntomas, puede y sobrevive en ellas por lo menos durante 4 haber un leve semanas. descenso en el registro de postura. PATOGENIA DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL 1. Enfermedad de Newcastle 2. Encefalomielitis esquina SIGNOS CLíNICOS 3. Disturbios En pollitos, la sintomatología se presenta nutricionales en el nacimiento o puede aparecer hasta la séptima semana de vida. Sin embargo, éstos se (raquitismo, presentan con más frecuencia entre la primera Encefalomalacia, y tercera semana de vida. Hay ataxia progresiva, Deficiencia de Riboflavina) indiferencia, parálisis, postración, tremor de cabeza y cuello. Cuando se excitan los animales 35 �HISTOMONIASIS DEFINICIÓN Histomoniasis es una enfermedad causada por un protozoario que afecta a los pollos, pavos, gallina de Guinea, gansos, codornices y posiblemente otras especies y se caracteriza por la presencia de lesiones en el ciego y el hígado. ETIOLOGÍA El agente etiológico es un protozoario denominado Histomona meleagridis, asistido en su carácter patógenos por bacterias secundarias. En trabajos experimentales con ausencia de bacterias, la histomona aparece como no patógena. La histomona meleagridis es flagelado en el lumen del ciego, pero adquiere forma ameboidea en los tejidos. La Histomona meleagridis se destruye rápidamente por los desinfectantes y por factores ambientales, a menos que se encuentre protegida dentro de lombrices en huevo de Heterakis gallinarum. PATOGENIA La transmisión de la Histomonas meleagridis, aves susceptibles, se realiza por tres vías: 1. Puede ser ingerida de heces frescas. Esta ruta probablemente sea la menos importante. 2. Puede ser ingerida dentro de los huevos de Heterakis gallinarum, que es un parásito común de pavos y gallinas. Entro de los huevos, las Histomonas pueden sobrevivir durante meses o años. La histomona es liberada en el intestino cuando se ingiere el huevo. Luego esta invade las paredes del ciego e inicia la enfermedad. 3. La histomona puede ser ingerida con la larva de heterakis gallinarum, que se encuentra en los tejidos de la lombriz de tierra. De la ingestión de la lombriz resulta entonces una infección. SIGNOS CLíNICOS 1. Los signos clínicos se observan entre los 7 a 11 días postinfección. Inicialmente hay indiferencia, anorexia moderada, alas caídas y diarrea amarrillenta. La cabeza puede estar cianótica (cabeza negra) a pesar de que no es muy frecuente. En las gallinas con cabeza negra puede observarse algo de sangre en las heces. 2. Posteriormente aumenta la depresión y permanecen con las alas caídas, los ojos cerrados y la cabeza caída. Es común la emaciación en casos crónicos y aves adultas. 3. En las aves jóvenes la morbilidad y mortalidad son altas, hasta 100 % (en pavos). Aves adultas tienden a ser mas resistentes. 36 LESIONES MACROSCóPICAS Hipertrofia bilateral del ciego con engrosamiento de las paredes del mismo. La mucosa usualmente está ulcerada. El ciego tiene contenido caseoso o de color amarillento gris o verde y puede estar laminado. En casos crónicos estas masas pueden ser expulsadas. El hígado contiene depresiones redondas irregulares que varían en color. Son de color amarrillo a gris pudiendo adquirir una coloración verde o roja. Varían en tamaño pero generalmente son de 1 a 2 cm. de diámetro y pueden unirse para formar lesiones más grandes. Las lesiones son bien observadas cuando se realiza la necropsia a un número representativo de aves. Pueden no ser enteramente típicas cuando están medicadas. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL 1. Tuberculois 2. Leucosis Linfoidea 3. Reticuloendoteliosis 4. Tifosis 5. Pullorosis �ASPERGILOSIS DEFINICIóN Es une enfermedad producida por un hongo, que afecta particularmente el aparato respiratorio incluyendo los sacos aéreos de los pollitos, pavos, aves silvestres y ornamentales. SIGNOS CLíNICOS Resultan de la localización del proceso inflamatorio. Se puede observar, disnea (polipnea) y ETIOLOGÍA boqueo, en general El agente causal es el Aspergillus fumigatus, no se escuchan aunque otros géneros y especies de hongos rales. Otros signos también pueden causar brotes similares. incluyen anorexia, somnolencia, PATOGENIA emancipación y Al igual que otros hongos, el Aspergillus diarrea. Si hay fumigatus esta regularmente presente en la cama y en el alimento. En condiciones ideales lesiones en SNC, de temperatura y humedad, crece rápidamente se observa: ataxia, opistótonos, parálisis y forma colonias esporuladas las que tienen y posturas anormales. color azul-verdoso. La puerta de entrada es aerógena y la infección resulta de la inhalación de gran número de esporos a partir de utensilios o cámaras contaminadas. La infección conjuntival ocurre por exposición directa a los esporos presentes en el aire. En general pavitos y pollitos menores de 6 semanas de vida son más susceptibles que los animales adultos. La fuente más importante de infección son las mecedoras las cuales por una deficiente desinfección, son el ambiente ideal para la manipulación del hongo (alta humedad y temperatura). DIGNóSTICO DIFERENCIAL Se debe diferenciar de: Pullorosis, Bronquitis infecciosa, Enfermedad respiratoria crónica, Encefalomielitis aviar, Enfermedad de Newcastle. El Aspergillus Fumigatus en ciertas circunstancias puede penetrar a través de la cáscara y afectar el embrión, que, cuando nace, presenta las lesiones típicas. LESIONES MACROSCóPICAS 1. Focos de aspecto nodular de color amarillo a gris-blanquecino, de un tamaño de 1 a 3-4 mm. localizados en la pared costal del pulmón. En la tráquea y en los sacos aéreos, las áreas lesionadas adoptan aspectos de placas. En el sistema nervioso central, también se pueden observar focos necróticos de color amarillo y gris. Con menor frecuencia se pueden encontrar lesiones en hígado y cavidad abdominal. 2. El crecimiento del hongo con esporulación, en los sacos aéreos, toma un aspecto velloso de color verdoso. 37 ��05. LISTADO DE ENFERMEDADES DE LAGOMORFOS DE DECLARACIÓN OBLIGATORIA Mixomatosis ENFERMEDAD HEMORRAGICA VIRAL (VHD) 39 �06. TÉCNICA DE NECROPSIA DE LOS LAGOMORFOS (CONEJOS Y LIEBRES) DATOS ANAMNESICOS O ANTECEDENTES CLíNICOS Estos datos son muy importantes, ya que sumados a la experiencia del necropsista orientan al mismo a llegar al diagnóstico de la enfermedad presente en el animal o lote de animales. Todos los datos anamnésicos se deben volcar a una ficha u hoja de protocolo, la cual deberá estar perfectamente identificada con un número, el mismo, servirá para el futuro poder identificar cualquier estudio complementario que se realice. También se deberá consignar fecha de ingreso de la muestra, nombre y apellido del propietario, nombre del establecimiento, dirección, localidad y número telefónico. Estos datos son imprescindibles en caso de diagnosticarse una enfermedad exótica o de denuncia obligatoria ante las autoridades sanitarias. EXAMEN EXTERNO Antes de comenzar a realizar la necropsia se deberá inspeccionar y palpar a los conejos (estén ellos vivos o muertos) a fin de determinar la presencia de anormalidades y el estado general, principalmente si se trata de animales de pelo. Se deberá comenzar la inspección observando el estado y la coloración de la piel, condición general del pelaje, suciedad, etc. A continuación se examinarán los ojos, nariz, y la boca incluyendo dientes, mucosa bucal y lengua, posteriormente las orejas, para, por último, palpar el cráneo en búsqueda de anormalidades. Los linfonódulos superficiales se palparán a fin de detectar agrandamiento de los mismos, 40 �de la misma manera se inspeccionarán los órganos genitales externos. SACRIFICIO Al elegir el método de eutanasia se deberán considerar varios factores entre los cuales debemos mencionar el de no producir dolor ni miedo al conejo y causar la muerte lo mas rápidamente posible. El método elegido no debe inferir en la recolección de las muestras. La inhalación de dióxido de carbono en una concentración del 40 % produce una rápida anestesia sin dolor. El halotano induce rápidamente la anestesia, causando ambos una aceptable y estética eutanasia. La aplicación de un golpe en los huesos centrales del cráneo también se podrá utiliza para producir una rápida inconsciencia y depresión del sistema nervioso central. La administración de pentobarbital en una concentración letal por vía endovenosa causa una rápida pérdida de la conciencia y muerte por depresión del centro respiratorio del cerebro. El éter puede ser utilizado para sacrificar los animales obligándolos a inhalar sus vapores. Una de las contraindicaciones del mismo, es que produce una irritación de las membranas mucosas causando una considerable excitación antes de la pérdida de la conciencia, asimismo es peligroso pues es altamente inflamable. Muchos otros anestésicos pueden ser utilizados a concentraciones letales, los mismos causan depresión del sistema nervioso central con la consecuente falla respiratoria y paro cardíaco. Las drogas de efecto semejante al curare fueron consideradas para la eutanasia, sin embargo las mismas producen solo parálisis de los músculos esqueléticos lo que conlleva a la anorexia y muerte. Es importante remarcar que el conejo durante la etapa inicial de la anorexia está absolutamente consciente, por tal razón este tipo de drogas nunca se deberá utilizar como eutanasia. NECROPSIA Antes de comenzar la necropsia, el conejo deberá ser introducido en un recipiente que contenga agua con el agregado de una solución antiséptica (ej. Amonio cuaternario) con el objeto de mojar el pelo evitando que éste se disemine por la sala de necropsia. Luego se colocará el cadáver en decúbito dorsal, y se realizará una incisión en la piel, por la línea media, comenzando en la periné, lo más cercano al ano y llegando hasta la mandíbula. Una vez realizado el corte se separará la piel hacia ambos lados, dejando al descubierto el tejido subcutáneo. Se desarticulan los miembros posteriores abriendo la articulación coxal y se seccionarán los músculos pectorales. De esta manera el conejo quedará en posición decúbito dorsal. Este es el momento en el cual se observarán el tejido subcutáneo y los músculos superficiales. Para abrir la cavidad abdominal se deberá hacer una incisión en los músculos abdominales, comenzando en el mismo lugar en donde se incidió la piel, cortando hacia la derecha del operador hasta llegar a la última costilla. Se deberá tener la precaución de no perforar el intestino. A partir de allí se cortará paralelamente al diafragma hasta llegar al lado opuesto, volcando los músculos hacia ese lado. De esta manera, nos quedarán expuestos los órganos abdominales. Antes de proseguir con la necropsia se realizará una inspección de la posición de los órganos, presencia de líquido exudados, etc. Para la extracción de los órganos abdominales se deberá cortar el esófago en su unión con el 41 �estómago y la cava caudal por delante del hígado, de esta forma se pueden extraer el estómago, el intestino, el páncreas, el bazo y el hígado, realizando el último corte en la porción final del recto. Se separarán todos los órganos abdominales. El bazo es relativamente aplanado, alargado con forma de lengüeta, adherido al lado izquierdo del estómago en el saco ciego y por su curvatura mayor. Se separará también el hígado, éste está formado por cuatro lóbulos, dos derechos y dos izquierdos, los que a su vez se dividen en lateral y medial. La vesícula biliar esta ubicada en una profunda depresión en la superficie visceral del lóbulo medial derecho en un área denominada lóbulo cuadrado. Antes de separar las distintas porciones del intestino se deberá observar el páncreas. Este se encuentra ubicado en el meso duodeno, unido a la porción craneal, descendente y ascendente del duodeno, acompañado de abundante tejido graso. Una vez realizado esto, se procederá a separar las distintas porciones del intestino comenzando por el duodeno, yeyuno e íleo, los que debridarán 42 de los mesos correspondientes. Se continuará con el ciego que tiene forma de espiral y en su porción saculada contiene constricciones internas formadas por repliegue de la mucosa, formando la válvula espiral y terminando en el apéndice vermiforme, por último se debrindará el colon hasta el recto. El intestino deberá ser abierto en su totalidad a fin de observar su contenido, estado de las mucosas, la presencia o no de lesiones y/o parásitos. También se abrirá el estómago, vaciando su contenido y observando el estado de la mucosa. A continuación se deberá observar el aparato urogenital, recordando que los riñones tienen superficie lisa y que el derecho está situado más hacia craneal que el izquierdo. Los uréteres se pueden seguir fácilmente desde el riñón hasta la vejiga, la uretra en los machos se extiende desde la vejiga hasta el vértice del pene, mientras que en las hembras es más corta y se abre dentro del vestíbulo. Una vez realizada la inspección se extraerán los riñones, cortándolos por su borde lateral, se observarán su aspecto, color, forma, etc. Se deberá retirar �la cápsula para su correcta observación de la superficie. Las adrenales situadas craneomedialmente de los riñones son aplanadas y de coloración amarillo-parduzco. Deberán ser inspeccionadas “In Situ” antes de retirar los riñones. En los machos se observarán los testículos y glándulas accesorias (vesículas seminales y próstata) en busca de anormalidades. En las hembras los ovarios tienen forma de elipse alargada, los cuernos uterinos (derecho e izquierdo) están separados en toda su longitud, desembocando cada uno de ellos por un cerviz en la vagina. Al igual que los otros órganos, una vez observados deberán ser abiertos en búsqueda de lesiones. Para observar los órganos torácicos, se deberá proceder a la apertura de la cavidad. Ello se realizará cortando las uniones condrocostales de ambos lados, de esta manera se retirará el esternón, se extraerá el corazón, se cortará el pericardio, y se observará la presencia de adherencias, hemorragias, etc. Para extraer la tráquea y los pulmones se deberán realizar dos incisiones paralelas a las ramas de las mandíbulas, se desprenderá la lengua y se extraerá junto con la tráquea y el esófago; una vez en la cavidad toracica se cortará el pliegue pulmonar para permitir la extracción del mismo. Se abrirá la tráquea en toda su longitud, penetrando por los bronquios y llegando hasta el parénquima pulmonar. También se deberá abrir el esófago en búsqueda de alguna lesión. Se observarán la mucosa bucal, paladar y dientes. Para observar las conchas nasales se realizará un corte horizontal. Para extraer el cerebro se deberá retirar la piel de la cabeza, se realizará un corte transversal por detrás de las órbitas y dos cortes laterales que se unen en el agujero occidental. Luego se extraerá la tapa craneana y se separarán el cerebro y el cerebelo. Se deberán observar las articulaciones mediante su apertura. También se cortará longitudinalmente un hueso largo (fémur o tibia) a fin de observar el estado de la médula ósea. 43 �07. ENFERMEDADES DE LOS LAGOMORFOS (CONEJOS Y LIEBRES) MIXOMATOSIS cabeza, también se encuentran en la región ano genital, dorsal. DECLARACIÓN OBLIGATORIA (Ver manual de procedimientos específicos de la Los ganglios linfáticos correspondientes a Dirección Nacional de Sanidad Animal.) las zonas afectadas, DEFINICIÓN ganglios cefálicos y Es la enfermedad vírica de mayor importancia axilares se encuentran económica de todas las que afectan a los conejos aumentados de domésticos y silvestres, comprometiendo tamaño, lo mismo que fundamentalmente piel y subcutáneo. el bazo. ETIOLOGÍA DIAGNÓSTICO El agente causante epizoótica es un pox virus, de El diagnóstico se aproximadamente 250 m, especie específico. efectúa por los signos y síntomas antes PATOGENIA descriptos de los La difusión dentro de la población de conejos se realiza tanto contacto directo entre animales cuales se destacan: como por la acción vehiculizadora de insectos • edemas y nódulos picadores y chupadores (mosquitos, pulgas, etc) o mixomas en cara y genitales, SIGNOS CLíNICOS posteriormente en el La primera manifestación clínica de un resto del cuerpo. período de incubación de 3 a 5 días es una • tumefacción de blefaroconjuntitivitis uni y luego bilateral. El exudado se hace purulento y el animal permanece labios, el hocico y la base de las orejas, las con los ojos cerrados. Aparecen inflamaciones edematosas y tumoraciones en los labios, hocico, cuales se caen por el peso del edema, por base de las orejas, deformando la cabeza, en esta etapa, por su aspecto se lo denomina cabeza lo que la cara toma un aspecto macizo y de león. Simultáneamente se inflama la vagina, deforme “cabeza de escroto, ano y se inicia una rinitis superada que león”. produce trastornos respiratorios. Las lesiones tienden a generalizarse en la superficie corporal y el animal muere con signos de debilidad y enflaquecimiento a los 8 a 10 días de contagio. LESIONES MACROSCóPICAS Las lesiones macroscópicas que se suscriben a piel y subcutáneo, son de tipo mixomatosas, de aspecto gelatinoso, difuso o nodular. La primera lesión es un blefaroconjuntivitis que pronto se transforma en un área mixomatosa en toda la 44 DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL En los casos típicos no se puede confundir con otra enfermedad, sin embargo, en casos no muy típicos se debe diferenciar de Pasteurelosis y Estafilocococcia. �TULAREMIA DEFINICIÓN La tularemia es una zoonosis propia de lagomorfos y pequeños roedores. La enfermedad puede afectar además a las personas, animales domésticos (herbívoros y pequeños carnívoros) y otros mamíferos, aves, reptiles y anfibios. Llamada la enfermedad de los cazadores, se distribuye principalmente en el hemisferio norte. ETIOLOGÍA El agente etiológico es la Francisella tularensis, cocobacilo, gram-negativo, resistente al frío y soluciones alcalinas. La Francisella es capaz de resistir en agua más de tres meses a temperaturas de 13-15 ºC y de persistir en cadáveres de animales hasta cuatro meses, dependiendo de la temperatura ambiente. Sin embargo, muestra una baja resistencia a los desinfectantes comunes. PATOGENIA Los principales animales afectados son liebres y pequeños roedores. La transmisión en animales se realiza mediante contacto directo, contacto con orina, heces, secreciones y a través de vectores artrópodos (pulgas y garrapatas). En liebres y roedores la letalidad es alta, dejando inmunidad por varios años. En animales domésticos, a menudo la infección tiene un carácter subclínico. La enfermedad se transmite al hombre por contacto directo con el animal enfermo o muerto, ingestión de agua contaminada, inhalación, ingestión de carne cruda o poco cocida de animal enfermo o por picadura de artrópodos. SIGNOS CLÍNICOS Los signos clínicos son depresión grave, le sigue una septicemia mortal. El curso de la enfermedad es aproximadamente de 2–10 días y es habitual que estos animales mueran. Normalmente, la mayoría de las especies domésticas no manifiestan signos. Entre los animales domésticos, parece que los gatos pueden actuar como transmisores de la bacteria. LESIONES MACROSCÓPICAS Los animales que mueren por la tularemia aguda habitualmente se encuentran en buena condición física. Se presentan signos de septicemia caracterizada por focos blanquecinos de necrosis distribuidos al azar en el hígado, médula ósea y bazo. Además, el bazo suele estar agrandado. Los focos necróticos varían en tamaño y en algunos casos, puede que apenas se vean a simple vista. Normalmente los pulmones están congestivos y edematosos y pueden aparecer áreas de consolidación y neumonía fibrinosa y pleuritis. La fibrina puede estar presente en la cavidad abdominal. Con frecuencia existen focos de necrosis caseosa en uno o en más de un ganglio linfático. Los ganglios linfáticos, que a menudo están afectados, son los de las cavidades abdominal y pleural y los que drenan las extremidades. Observación de adelgazamiento extremo y presencia de nódulos grisáceo amarillentos, en las piezas de caza. DIAGNÓSTICO Los signos clínicos anteriores, unidos a infestación por garrapatas, afectando a diversos animales, supondrán el primer indicio de tularemia. Asilamiento del microorganismo a partir de lesiones hepáticas, ganglionares o pulmonares. Para el diagnóstico por laboratorio, debe enviar sangre y/o material patológico, solicitando investigación de Tularemia, bien por aislamiento de la F. tularensis a partir de muestras patológicas, bien por serología a partir de la sangre. Se debe manipular con extrema precaución, pues es altamente contagiosa para el hombre. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL Debe efectuarse con la parálisis flácida por garrapatas. 45 �ENFERMEDAD HEMORRÁGICA VIRAL (VHD) DECLARACIÓN OBLIGATORIA • Traquea: signos (Ver manual de procedimientos específicos de la de inflamación y Dirección Nacional de Sanidad Animal.) hemorrágica con petequias hemorragias DEFINICIÓN focales y congestión La enfermedad Vírica Hemorrágica (EVH), vascular edema y Enfermedad hemorrágica viral (EHV) septicemia trasudado espumoso vírica hemorrágica (SVH) hepatitis necrótica del hemorrágico. conejo, es una afección de origen vírico-infeccioso • Pulmón: Hemorragia que afecta a los conejos silvestres y domésticos. total o parcial Neumonía, edema ETIOLOGÍA generalizado. La mayoría de los autores lo han clasificado • Hígado: aumento del como un virus del grupo de los Calicivirus tamaño, congestivo, dentro de la familia Caliciviridae. hepatomegalia, PATOGENIA friabilidad, color La principal vía de contaminación es la oral, gris amarillento, conjuntiva ocular y respiratoria y también hemorragias a través de heridas en la piel. Se distribuye superficiales y rápidamente afectando a muchos individuos en degeneración grasa y poco tiempo, normalmente en conejos de 45 focos necróticos. días en adelante. • Riñón: Hiperplasia hemorrágica con Se produce una disminución de las plaquetas, hemorragias. aumentando el tiempo de pro trombina, • Bazo: congestivo y alterando la cascada de la coagulación, aumentado de tamaño. lo que produce hemorragias multifocales, • Intestino: con coagulación intravascular diseminada inflamación de las y muerte. La muerte súbita se produce por placas linfoides y fallo múltiple orgánico, congestión y edema hemorragias en pulmonar, necrosis adrenocortical, alteraciones mucosa. circulatorias, renales y necrosis hepática. • Corazón: a veces hemorrágico. SIGNOS CLÍNICOS Cuando la enfermedad aparece en un DIAGNÓSTICO criadero, su evolución es muy grave. La Es por los signos muerte sobreviene en uno a tres días después clínicos anteriores y del contagio. La signología es: decaimiento, lesiones. fiebre, angustia respiratoria, opistótonos, chillidos, exudado sanguinolento en nariz DIAGNÓSTICO (patognomónico), espuma en boca y nariz, DIFERENCIAL posiciones posturales características (patas • Septicemia delanteras estiradas). hemorrágica por Pasteurella multocida. Pueden existir convulsiones con fuertes • Altas temperaturas chillidos y después de muertos, las ambientales. extremidades y la cabeza se encuentran • Infecciones totalmente estiradas. mixtas con virus de Mixomatosis. LESIONES MACROSCÓPICAS Las lesiones pueden aparecer en varios órganos • Toxemia de la preñez. • Intoxicaciones pudiendo ser: warfarina. • Cerebro: congestivo. 46 �08. BIBLIOGRAFÍA The biology of the laboratory rabbit. Editors. S.H Weisbroth, R.E Flatt, A.L Kraus. Academic Press, Inc. san Diego California. 1974 Report of the AVMA Panel on Euthanasia. Javma, Vol. 202, January 15 Mikel Ruiz Veramendi GEFOR Tularemia. Francisella tularensis. Zoonosis y enfermedades transmisibles comunes al hombre y a los animales. Acha PN OPS. 1986. Arenas R. Tularemia. Estudio de un caso ulceroganglionar. Rev Semin Cátedra Patol Med A Barc. 1981. 14, 397-400. Chin J (ed.). Control of communicable diseases. Manual. 17ª Edición. American Public Health Association 2001. Center for Disease Control and Prevention (CDC). Case definitions for infectious conditions under public health surveillance. MMWR, 1997; 46 Daita Juan Carlos Presidente de la Cámara Argentina de Cunicultura. Enfermedad Hemorrágica Viral (VHD) Dr. Miguel Angel Pertuccelli, Med. Vet. Miguel V. Piscopo, Med. Vet. Miguel A. Herrero Loyola, Cátedra de Patología de Aves y Pilíferos. UNLP. Castellanos Echeverría, A. F., 1998, Manuales para la educación agropecuaria. Producción animal, editorial trillas. FAO: 2000, Manual on meta inspection for developing countries. FAO Animal Production and Health Paper 119. Chapman, J. A.: 1990. Rabbits, Hares and Pikas. Status Survey and Conservation Plan. IUCN. 47 �Barragán J. I. Med. Vet. La enfermedad del músculo verde en pollos: un proceso cada vez más frecuente. Parrado E. Programa de Conejos, MIXOMATOSIS: Enfermedad de Declaración Obligatoria. SENASA Fernández Alfonso, La Tularemia el mal de la liebres, ¡Afecta en Navarra? Malalties Infeccioses II (curso 2005/06) Enfermedad Hemorrágica Del Conejo SAMUS S. A. Médico Veterinário Bacteriólogo Clínico e Industrial Mixomatosis Bilgili S.F. y Joseph Hess ROSS TECH 08/48 Enfermedad del Músculo Verde Pautas para disminuir su incidencia en los lotes de broilers Marzo 2008 Organización Mundial de Sanidad Animal OIE, Sitio oficial de la página www.oie.int/ Manuales de procedimientos especificos desarrollados por la DNSA de SENASA. 48 �09. ANEXOS PROCEDIMIENTOS A SEGUIR EN PLANTAS DE FAENA DE AVES Y LAGOMORFOS ANTE LA SOSPECHA O CONFIRMACIÓN DE LA PRESENCIA DE UNA ENFERMEDAD EXÓTICA DE DECLARACIÓN OBLIGATORIA El caso de que el veterinario oficial asignado a un establecimiento de faena reciba por parte de su par de campo la confirmación de que un determinado lote o lotes ha sido enviado a faena a esa planta con su autorización, y proviene de una zona donde ha sido detectado un foco de una enfermedad exótica de denuncia obligatoria (Influenza, Newcastle, Laringotraqueitis, EVH lagomorfos, Mixomatosis) o dicha zona se encuentra bajo vigilancia por sospecha de ocurrencia de la misma, se deberá proceder de la siguiente manera: 1- Identificación del o los lotes indicados. 2- Autorizar la faena del o los lotes al final del día. 3- Garantizar que se realice una intensa limpieza y desinfección de la línea de faena al concluir la misma. 4- Garantizar que se realice una intensa limpieza y desinfección de los camiones que fueron utilizados para el transporte de esos lotes antes de que los mismos se retiren de la planta. 5- Identificar la partida faenada a fin de que la misma se destine a subproductos cocidos, harinas u otros, cuyo proceso de elaboración incluya la aplicación de temperatura suficiente de manera que garantice la destrucción de los agentes causales de la enfermedad. 49 �En el caso de que el veterinario no hubiera recibido comunicación pero observase en la inspección pre - mortem sintomatología compatible con una enfermedad exótica, se tendrá que proceder de la siguiente manera: 1- Extraer muestras de los animales sospechosos como lo indica el manual de procedimiento de campo, (según la enfermedad de la cual se sospecha) enviar las mismas al laboratorio de SENASA con carácter de urgente, a fin de que se confirme o no la sospecha. 2- Avisar al veterinario de SENASA de la oficina local que le corresponda a la zona de origen de los animales sospechados. 3- En lo referente a la faena del lote en cuestión, proceder como se indica en los puntos 1 al 4 del párrafo anterior. 4- Identificar las carcazas una vez faenadas, apartadas del resto en la cámara, a la espera de los resultados de laboratorio. 5- De confirmarse el diagnóstico con las pruebas de laboratorio, deberá cumplirse con el punto 5 del párrafo anterior. 6- Si los resultados de los análisis de laboratorio dieran negativos, se deberá liberar la mercadería para su posterior comercialización. 50 �51 �GUÍA DE ENFERMEDADES PARA EL LLENADO DE PLANILLAS Ante y Post Mortem AVES NOMBRE DE LA ENFERMEDAD ANTE MORTEM POST MORTEM VIRUELA AVIAR (DIFTEROVIRUELA AVIAR) Se produce una erupción variólica en regiones corporales desprovistas de plumas. Los nódulos aparecen en cresta y párpados, región nasal y ángulos del pico, barbillas y orejillas, en membranas interdigitales y a veces en cara interna de alas, cuello abdomen, dorso e intermediaciones de la cloaca. Se forman pseudomembranas o depósitos difteroides en la mucosa de la cavidad bucal, faringe, lengua y laringe. Las máculas de la mucosa aumentan de tamaño y de espesor en pocos días y se forman depósitos caseosos. Cuando se desprenden de la mucosa se forman hemorragias. Con esto, se ocasionan graves dificultades respiratorias y pueden provocar la muerte por sofocación. Al principio de tipo exantemático, a los pocos días se transforman en nódulos nacarados y brillantes, del tamaño de granos de arroz, color pardo oscuro. Éstos se desprenden solos al cabo de algunas semanas. Cuando se combinan la forma mucosa y la mixta, baja el consumo del pienso, descenso acusado del rendimiento, baja fecundidad, postración, adelgazamiento y alta mortalidad. LARINGO TRAQUEÍTIS Se muestran disturbios respiratorios graves y crecientes, con abundante secreción INFECCIOSA ocular y de flujo nasal. Las aves enfermas expulsan una secreción mucosa y hemorrágica procedente de la tráquea. El consumo del pienso disminuye. En la mucosa aparecen depósitos amarillogrises que pueden llegar al segundo o tercer anillo cartilaginoso de la tráquea. Estos depósitos llenan ampliamente la luz laríngea y traqueal originando disnea en primer lugar, y muerte por asfixia. Coloración cianótica de la cresta de las aves BRONQUITIS INFECCIOSA Dificultad respiratoria. Se presentan una disnea acrecentada. Aspiran aire por el pico abierto y el cuello extendido. Plumas erizadas, abatimiento, ruidos respiratorios sibilantes, estertores y flujo nasal claro, ojos llorosos, baja de consumo del pienso, caída abrupta de postura. Hemorragias puntiformes en mucosa traqueal, mucosidad en conductos nasales y senos; tapones caseosos en tráquea y bronquios, sacos aéreos opacos y con material caseoso. Desórdenes respiratorios, estornudos, INFLUENZA AVIAR ALTA PATOGENICIDAD ronquidos, descarga óculo-nasal, caída de Hemorragias en tarsos, patas y cabeza, hemorragias múltiples puntiformes en órganos viscerales ENFERMEDAD DE MAREK Hinchazón de nervios periféricos en patas y alas. Aparecen tumores en ovarios, proventrículo, hígado y focos blancogrisáseos en corazón y bazo (también hipertrófico), hígado agrandado, buche dilatado y colgante. Rara vez se presentan tumores en la bolsa de Fabricio. la producción, ocasionalmente tortícolis, paresia y parálisis. Hinchazón exudativa en la cabeza, letargo. Necrosis de la cresta y barbas. 52 Plumaje erizado, cabeza encogida y letargo. Parálisis, cojeras, marcha insegura, dedos retraídos, falta de apetito; el iris se tiñe de un color gris sucio y manchado, la pupila pierde su redondez neta normal y aparece rígida. �NOMBRE DE LA ENFERMEDAD ANTE MORTEM POST MORTEM LEUCOSIS Síntomas exteriores pueden ser indefinidos, a pesar de que la cresta y los barbillones están normalmente arrugados y ocasionalmente pálidos y escamosos, falta de apetito, aves pierden peso y es posible que tengan diarrea. Hígado y riñones son los más afectados; el hígado aparece tachonado de tumores suaves y duros, los riñones están agrandados y con una coloración marrón oscura; la bolsa de Fabricio siempre presenta tumores. ENFERMEDAD DE NEWCASTLE (PESTE AVIAR, PESTE AVIAR ATÍPICA) Postración, fotofobia, somnolencia, falta de apetito y agua, respiración con el pico abierto, estertores roncos, flujo nasal; crestas rojas azuladas flácidas y retraídas. Síntomas nerviosos como parálisis parcial o total de patas y alas, tienen una actitud característica de colocar la cabeza entre las patas o derecha y hacia atrás entre los hombros, caminan en círculos y hacia atrás, torsión de cuello, baja de postura a cero, ponen huevos en el piso siendo la cáscara de los mismos blandas y mal formados. Mucosidad y hemorragias puntiformes en tráquea, bronconeumonía, sacos aéreos de aspecto amarillentos, hemorragias en molleja, corazón, proventrículo e intestinos; folículos ováricos flácidos, degenerados y llenos parcialmente de sangre; a menudo se presenta peritonitis ENFERMEDAD DE GUMBORO (BURSITIS INFECCIOSA) Decaimiento, depresión, diarrea blanquecina y acuosa, enrojecimiento e inflamación del ano, falta de apetito, postración, plumaje erizado, extenuación, paso tembloroso y vacilante. Musculatura deshidratada (exsicosis), hemorragias superficiales en cara interna del muslo; bolsa de Fabricio puede adquirir el tamaño de nuez, puede aparecer amarillenta, hemorrágica y contener material caseoso; los riñones pueden estar tumefactos y teñidos de color gris rojizo claro. ENCEFALOMIELITIS AVIAR Somnolencia, falta de equilibrio, las aves se sientan sobre sus tarsos, temblores nerviosos en la cabeza, atontamiento e inestabilidad, caída de postura, parálisis. ARTRITIS VIRAL (TENDOSINOVITIS) Se sientan sobre los tarsos, cojeras, falta de crecimiento. La hinchazón de los tendones y vainas por arriba del tarso, metatarso y tibiometatarso. MICOPLASMOSIS (ENFERMEDAD RESPIRATORIA CRÓNICA) Respiración dificultosa, descarga nasalocular, estertores en traquea. Falta de apetito, debilidad, pechuga afinada, disminuye la producción. Hinchazón de la cara, principalmente alrededor de los ojos. Hígado recubierto con falsa membrana viscosa y amarillenta. Saco cardíaco engrosado y blanco. Exceso de mucosidad en traquea, material caseoso en bronquios, coloración amarillenta en sacos aéreos. SINOVITIS INFECCIOSA Plumaje erizado, falta de brillo y diarrea color amarillento. Cojeras, falta de apetito. Debilidad. Hinchazón de articulaciones del tarso, alas, muslos y almohadillas plantares. Ampollas en pecho y en algunos casos son víctimas del canibalismo por otras aves. Fluido en articulaciones del tarso o almohadillas plantares. SALMONELLOSIS TIFOSIS Agrandamiento, inflamación y coloración verdosa del hígado. Deshidratación, hígado impregnado con bilis color bronce y enteritis. 53 �NOMBRE DE LA ENFERMEDAD ANTE MORTEM PARATIFOSIS POST MORTEM Exudados en hígado y pulmones, bazo puede estar agrandado, ciego con tapones duros, pálidos y amarillentos, enteritis y nódulos en intestino delgado, fluido amarillo en el saco del corazón pudiendo contener exudado fibroso. PULLOROSIS Aves friolentas, falta de apetito y empastamiento blanquecino alrededor del ano. Hígado, bazo, corazón, pulmones y mollejas contienen nódulos grises ESCHERICHIA COLI COLIBACILOSIS Fiebre, falta de apetito, disminuye la producción, caída de la postura. Enteritis, los riñones se agrandan y congestionan con sangre. El hígado, su vesícula y el bazo también se agranda. El corazón aparece congestionado y flácido, con fluido color pajizo. Lesiones tumorales en hígado o intestino. Aerosaculitis, perihepatitis, peritonitis, pericarditis, coligranulomas, coliseptisemia, salpingitis. Falta de apetito, diarrea, caída de la proCÓLERA AVIAR (Pasteurela multocida) ducción, oscurecimiento e inflamación de Hemorragias puntiformes en corazón, hígado, proventrículo, molleja e intestino; puntos necróticos grisáceos en el hígado. STAPHILOCOCCOSIS Diarrea, depresión, hinchazón de las articulaciones, cojeras, emaciación debido a la falta de apetito. Hígado, bazo, riñones congestionados y agrandados; articulación del muslo hinchado con material inflamado que luego se torna caseoso, puede haber destrucción de tendones COCCIDIOSIS Eimeria Acervulina: pérdida de peso, palidez y decaimiento general. Eimeria Acervulina: Placas blanquecinas en la mitad superior del intestino delgado; enteritis. las cabezas, articulaciones de las patas, puede haber parálisis de las patas y dificultades respiratorias. Eimeria Necatrix: pérdida de peso, heces sanguinolentas, Eimeria Tenella: disminuye el consumo de alimento, diarrea con heces acuosas, las aves se acurrucan y encogen la cabeza, plumaje erizado Eimeria Necatrix: gran inflamación del intestino delgado, zonas hemorrágicas en el lado externo del intestino, mucosidad sanguinolenta y ciegos llenos de sangre. Eimeria Tenella: los ciegos aparecen hinchados y llenos de una maza sanguinolenta proveniente de la hemorragia de los vasos sanguíneos de la pared interior de las mismas; se presentan núcleos blancos o rosados en los ciegos. CANIBALISMO Amontonamiento Lomo rallado. Decoloración de la piel. PECHUGA VERDE MÚSCULO VERDE Los procesos actuales de producción de los pollos de carne están haciendo que la principal incidencia de problemas pase de los típicamente patológicos a los problemas considerados como metabólicos o de manejo. En los casos agudos, todo el supracoracoideo se presenta pálido y tumefacto y cubierto por una membrana fibrinosa y a veces, hemorrágica. El tejido necrótico es de color blanquecino o asalmonado, y solamente los extremos del mismo son de color verdoso. La lesión suele estar limitada a las zonas intermedias del músculo, otorgando un aspecto desagradable a la pechuga. No es de tipo infeccioso. 54 �NOMBRE DE LA ENFERMEDAD ANTE MORTEM POST MORTEM SÍNDROME DE HIGADO GRASO Falta de apetito, decaimiento, falta de producción. Zonas excesivamente grasas debajo de la piel y en la cavidad del cuerpo, entre los intestinos, cubriendo la molleja, riñones, y base del corazón. Hígado con extrema infiltración grasa, blando y pulposo, puede haber hemorragias debajo de la cápsula hepática. GUÍA DE ENFERMEDADES PARA EL LLENADO DE PLANILLAS Ante y Post Mortem LAGOMORFOS (CONEJOS LIEBRES) NOMBRE DE LA ENFERMEDAD ANTE MORTEM POST MORTEM MIXOMATOSIS Blefaroconjuntitivitis uni y luego bilateral. El exudado se hace purulento y el animal permanece con los ojos cerrados. Aparecen inflaciones edematosas y tumoraciones en los labios, hocico, base de las orejas, deformando la cabeza, en esta etapa, por su aspecto se lo denomina cabeza de león. Las lesiones son de aspecto gelatinoso, difuso o nodular. Los ganglios linfáticos correspondientes a las zonas afectadas, ganglios cefálicos y axilares se encuentran aumentados de tamaño, lo mismo que el bazo. TULAREMIA Decaimiento, depresión, fiebre. Focos blanquecinos de necrosis distribuidos al azar en el hígado, médula ósea, ganglios linfáticos y bazo. Además, el bazo suele estar agrandado. Los pulmones están congestivos y edematosos y aparece una pleuritis. La fibrina puede estar presente en la cavidad abdominal. Observación de adelgazamiento extremo y presencia de nódulos grisáceo amarillentos, en las piezas de caza. ENFERMEDAD HEMORRÁGICA VIRAL (VHD) Decaimiento, fiebre, angustia respiratoria, opistotonos, chillidos, exudado sanguinolento en nariz, espuma en boca y nariz. Convulsiones. Congestión, hemorragias, edema e inflamación en diferentes órganos: cerebro, aparato respiratorio, hígado, riñones, bazo, intestino, corazón, etc. 55 �� Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Manual de apoyo orientativo para el diagnostico de las enfermedades de aves y lagomorfos que pueden aparecer en las plantas de transformación primaria. Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2012 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Dirección Nacional de Inocuidad y Calidad Agroalimentaria Dirección de Inocuidad de Productos de Origen Animal Coordinación de aves, ovoproductos, productos de la caza y especies menores Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0068 Abstract A summary of the resource. Listado de enfermedades de las aves y de lagomorfos de declaracion obligatoria. Table Of Contents A list of subunits of the resource. 01. Glosario 02. Listado de enfermedades de las aves de declaración obligatoria OIE 03. Técnica de necropsia de la aves 04. Descripción de las enfermedades de las aves 05. Listado de enfermedades de lagomorfos de declaración obligatoria OIE 06. Técnica de necropsia de los lagomorfos 07. Descripción de las enfermedades de los lagomorfos 08. Bibliografía 09. Anexos Enfermedades de las Aves https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/161b3a4268f7d2f872e7472b940d5ba4.pdf ef1c09d72847e2c05066eca0dc58a803 PDF Text Text �2 �autoridades Presidente Med. Vet. Marcelo S. Miguez Vicepresidente Med. Vet. José M. Romero Gerente General Ing. Agr. Eduardo Dillon Dirección Nacional de Inocuidad y Calidad Agroalimentaria Dr. Ernesto Ferrarese Dirección de Inocuidad de Productos de Origen Animal Dr. Leonardo J. Malvestiti Redactores Dr. Leonardo J. Malvestiti Dr. Carlos A. Vicari Dr. Julio C. Ball Dr. Gustavo Soto Kruse �4 �Índice INTRODUCCIÓN 7 OBJETIVOS 7 DESTINATARIOS 7 BIENESTAR ANIMAL 8 CONCEPTO Y DEFINICIONES 8 CONDICIONES GENERALES EN LA MANIPULACIÓN 9 Tratamiento de los animales 9 Capacitación del personal 9 TECNOLOGÍA OPERATIVA EN EL PROCESO DE FAENA 9 Recepción, pesaje y espera 9 Zona de descarga y colgado 10 Zona de insensibilización y degüello 11 INSPECCIÓN VETERINARIA 12 BIBLIOGRAFÍA 13 �6 �INTRODUCCIÓN OBJETIVOS El presente documento ha sido elaborado como una guía orientativa para establecer ciertos parámetros del tratamiento humanitario a los animales destinados a ser faenados. Durante el proceso de faena, los operadores de las industrias alimentarias son los principales responsables de garantizar el bienestar animal dado que disponen de todos los mecanismos, equipamientos y prácticas de tratamiento de las especies a faenar. El principal objetivo de este manual es transmitir al público los derechos básicos en materia de bienestar animal en plantas de faena. De esta forma, se aspira a que las prácticas humanitarias sean parte de esta tarea garantizando el cumplimiento de derechos relacionados con este concepto. Así, se pretende que los animales atraviesen el proceso de faena con el menor malestar posible, de forma tal que implique, fundamentalmente, una práctica beneficiosa para productores y consumidores. Si bien el concepto de bienestar animal es aplicado en distintas actividades y procesos, este manual tomará como eje el tratamiento humanitario de animales en relación con la faena. Conciliar estos dos aspectos, es decir, establecer y llevar adelante los procesos de faena como prácticas de tipo humanitarias, implica desarrollar determinadas condiciones para generar un ambiente que no le produzca un malestar al animal. En función de esto, el Servicio establece y promueve ciertas pautas para que los actores intervinientes en las industrias alimentarias puedan desarrollar y reconocer prácticas específicamente relacionadas con el bienestar de aves y lagomorfos en este contexto. DESTINATARIOS Esta guía orientativa está destinada a la población en general y a los actores intervinientes en las plantas de faena en particular (veterinarios, transportistas, comerciantes, entre otros). El propósito es que puedan reconocer, aplicar y promover prácticas de bienestar animal y manejo humanitario en el desarrollo de estas funciones. 7 �Durante las distintas etapas, es importante que los animales estén en armonía para que el estrés no atente contra sus derechos básicos de bienestar. BIENESTAR ANIMAL y para evitar que los cambios fisiológicos producidos puedan influir negativamente en la calidad de la carne. CONCEPTO Y DEFINICIONES Por este motivo, se han establecido a nivel internacional ciertos principios de bienestar animal definidos por cinco derechos básicos2: El concepto de bienestar animal ha sido definido como un estado de salud mental y física completas donde el animal se encuentra en armonía con su ambiente1. En el caso de las planta de faena, los derechos que implican este estado son implementados por manipuladores de animales y transportistas calificados, a través de diseños ambientales, manejos, movimientos adecuados y el sacrificio humanitario. En estas ocasiones, los animales pueden presentar signos de ansiedad o miedo que se manifiestan en la inquietud, la vocalización, la cabeza puesta en estado de vigilancia o las orejas tipo radar (en el caso de los lagomorfos). El estrés o la angustia que deviene de estas circunstancias se definen como un estado anormal en el que los animales tienen que hacer adaptaciones fisiológicas extremas con el fin de competir con su ambiente (por ejemplo, cambios en el ritmo cardíaco, en el de respiración, en la temperatura corporal y en la presión sanguínea). Por lo tanto, este estado se debe mantener al nivel mínimo posible para cuidar el bienestar del animal Hugues, B. D. 1 8 1. Exención de hambre y sed mediante acceso fácil al agua dulce y una dieta para mantener la salud. 2. Exención de dolor, lesión o enfermedad mediante prevención o diagnóstico rápido y tratamiento. 3. Exención de miedo y angustia, garantizando las condiciones que eviten el sufrimiento mental. 4. Libertad para expresar el comportamiento normal, proporcionando espacio suficiente. 5. Exención de malestar proporcionando un ambiente apropiado. 2 Surgen de las primeras directrices recomendadas por la Comisión Consultiva sobre el Bienestar de los Animales de Granja creada por el gobierno del Reino Unido en 1979. Han sido tomadas como referencia en bienestar animal a nivel mundial. �CONDICIONES GENERALES EN LA MANIPULACIÓN Tratamiento de los animales En lo que respecta al trato con los animales, los principios del bienestar establecen que está prohibido: • Golpear, dar puntapiés o maltratar a los animales. • Aplicar presión en los puntos especialmente sensibles del cuerpo que pueda causarles sufrimiento innecesario. • Levantar o arrastrar a los animales por la cabeza, orejas, alas o plumas causándoles dolor. En cuanto a los espacios, se deberán realizar ciertas consideraciones sobre las áreas comunes: • Se evitarán los ruidos molestos como los gritos del personal o los golpes bruscos. • Los sectores de espera o pesado garantizarán una ventilación adecuada que evite las altas concentraciones de amoníaco (NH3) y dióxido de carbono (CO2). Capacitación del personal Se deberá garantizar la capacitación de los agentes responsables y la planificación de este tipo de actividades en las plantas de faena. Para eso, se deberán tomar en cuenta las siguientes consideraciones: • Las plantas que operen en la industria alimentaria deberán asegurar que todo el personal que realice tareas con los animales vivos (cargadores, transportistas, colgadores, etc.) reciban la capacitación correspondiente a los preceptos de bienestar animal, sacrificio humanitario, etc. • La capacitación deberá formar parte del programa anual –acorde a las tareas que desempeña el personal– y quedar documentada. TECNOLOGÍA OPERATIVA EN EL PROCESO DE FAENA Recepción, pesaje y espera A continuación, se enumeran algunas cuestiones determinantes en cuanto a esta etapa en el proceso de faena. a) Los animales serán sometidos a un período de ayuno antes de su envío a la planta –mediante supresión del alimento sólido–, a los efectos de disminuir los riesgos de contaminación por medio del derrame del tracto digestivo durante el proceso de eviscerado; dicho periodo no deberá prolongarse de forma innecesaria. b) Se deberá asegurar en todo momento el buen estado de hidratación de los animales destinados a ser faenados. c) Los animales serán descargados lo antes posible luego de su llegada. En caso de retrasarse dicha ope- El trato con los animales se debe desarrollar, desde el comienzo, en función de los principios básicos del bienestar animal. 9 �ración, se los protegerá de las inclemencias del clima (a través de un techo que evite el ingreso directo de la luz del sol y la lluvia, ventiladores que garanticen una corriente de aire, aspersores de agua tipo spray ––foggers– para poder realizar un descenso de la temperatura corporal o cortina de árboles según el caso). d) Las plantas deberán poseer las instalaciones correspondientes para realizar la espera de los animales, antes de ser faenados. Deberán poseer los medios necesarios para el resguardo de los mismos. e) El lapso de tiempo de espera de los animales previo al sacrificio deberá ser lo más breve posible. f) Las jaulas utilizadas para el transporte de los animales hacia el frigorífico deberán: • estar en buen estado general, • garantizar su fácil lavado y desinfección, • ser confeccionadas con algún material que no produzca lastimaduras y/o laceraciones a los animales. No se permite la utilización de jaulas de hierro, acero, alambre u otro material que pueda lesionar a los animales. g) El número de animales que se colocará por jaulas guardará relación con el tipo y la forma de la jaula empleada, la categoría de los animales, el temperamento, el peso vivo, la época del año, la temperatura y humedad ambiente, el horario de transporte, etc. Es decir, se deberá garantizar la circulación de aire para evitar sufrimientos por calor, asfixias, lesiones, aplastamientos y/o compresiones entre ellos. h) Durante el pesado de los animales se deberán evitar los movimientos excesivos y las esperas innecesarias. De efectuarse una espera, deberán resguardarse de las inclemencias climáticas tal como se indica en el ítem c. i) Los animales que sean expedidos en contenedores de fondo flexible o perforado se descargarán con especial cuidado para no causarles heridas. descarga y colgado se ilumine exclusivamente con luz azul durante las tareas (dado que en esa longitud de onda los operadores pueden desarrollar sus actividades y el ave se encuentra con un temperamento aplacado). d) Se garantizará la circulación de aire en estas zonas. e) La descarga se efectuará de la forma menos traumática posible, evitando caídas de jaulas y de animales, movimientos bruscos, golpes, etc. f) El colgado de los animales deberá garantizar que los mismos no se desenganchen, así se evitarán posibles traumatismos durante las operaciones posteriores. g) El colgado incorrecto de las aves no garantiza una adecuada insensibilización y posterior degüello. h) El trayecto que va desde el colgado al aturdidor, en el caso de las aves, deberá estar provisto de un ambiente en penumbras y contar con una superficie de apoyo que las tranquilice, dicho dispositivo se prolongará hasta el momento del aturdido. Nota: En caso de las aves, primero se realiza el colgado y luego la insensibilización. Para el caso de los conejos, en primer lugar se los insensibiliza y luego se los cuelga. Zona de descarga y colgado En estas zonas, el correcto manejo de los animales es crucial para su bienestar. Por lo tanto, se deberán tener en cuenta los siguientes puntos: a) Las jaulas con animales se manipularán con cuidado evitando caídas, no está permitido arrojarlas o lanzarlas. Cuando sea posible, se cargarán y descargarán horizontalmente por medios mecánicos. b) Se evitarán los ruidos molestos e innecesarios. c) Para el caso de las aves, se deberá tener en cuenta que la luz influye en el comportamiento de las mismas y que longitudes de onda corta (espectro de banda de longitud de onda 340 – 380 nm hasta 700 – 730 nm) las tranquilizan, por eso es aconsejable que la zona de 10 Mientras estén en la zona de espera, se deberá revisar regularmente a las aves para chequear que se encuentren en buenas condiciones. �Zona de insensibilización y degüello La insensibilización de las aves se efectuará mediante una descarga eléctrica o cualquier otro método que permita el desangrado total aprobado por el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. La única excepción a dicha exigencia la constituyen las faenas rituales o religiosas autorizadas por el Servicio. Para ello se deberán considerar las siguientes cuestiones: a) El trayecto que va desde el insensibilizado hasta el degüello deberá garantizar que los animales no recuperen sus signos normales. b) Para comprobar la efectividad de los equipos de insensibilización se deberá sacar de la noria o no colgar al animal luego del proceso para comprobar su recuperación (aves o lagomorfos respectivamente), debiendo reaccionar sin demostración de secuelas. c) En el caso de las aves, cuando se empleen tanques de agua para el aturdido deberá ser posible regular el nivel del agua, de modo tal que permita la inmersión hasta la base de las alas. d) Los tanques de agua para aves de corral tendrán un tamaño y una profundidad adecuados al tipo de ave que vaya a sacrificarse. e) Se evitará que los tanques desborden a efectos de evitar un preaturdimiento. f) Los equipos de insensibilización estarán regulados de forma tal que no afecten el sistema cardiovascular del ave y permitan un desangrado completo. g) Para todas las aves y los lagomorfos, la intensidad de la corriente utilizada y la duración de su aplicación serán determinadas teniendo en cuenta: • peso de los animales • velocidad de la noria • raza, temperamento, sexo h) Se tomarán las medidas oportunas para garantizar un buen paso de la corriente. i) Cuando los animales sean aturdidos individualmente, el aparato irá provisto de un dispositivo que mida la impedancia de la carga y evite su funcionamiento si no circula la intensidad mínima requerida. Además, estará provisto de un dispositivo acústico o visual que indique el tiempo de su aplicación al animal y que esté conectado a otro que indique la tensión y la intensidad de la corriente para que pueda ser visto con claridad por los operadores. j) Al realizar el aturdimiento por electrocución de cabeza y tronco, en donde se expone al cerebro a una corriente que genera una forma de epilepsia generalizada en el electroencefalograma, se deberán tener en cuenta los siguientes parámetros: • Corriente mínima (A o mA) • Tensión mínima (V) La incidencia de la luz es esencial en el comportamiento de las aves y constituye uno de los factores de principal influencia en el estado de estrés. • Frecuencia máxima (Hz) • Tiempo mínimo de exposición • Intervalo máximo entre el aturdimiento y el sangrado / muerte (en segundos) • Frecuencia de la calibración del equipamiento • Optimización del flujo de corriente • Prevención de descargas eléctricas antes del aturdimiento • Posición y área de contacto de los electrodos • Reducción al mínimo de dolor causado por la suspensión en los ganchos • Tiempo máximo de suspensión en los ganchos antes del baño de agua • Tiempo mínimo de exposición para cada animal k) Para el caso de los lagomorfos, al utilizar el aturdimiento eléctrico limitado a la cabeza, los electrodos deberán abarcar el cerebro del animal y adaptarse al tamaño de este. l) En caso de ser necesario, deberá disponerse de un sistema alternativo de aturdido. m) Las aves y lagomorfos serán sacrificados mediante la sección de los grandes vasos del cuello, ya sea 11 �en forma manual o automática. Para el sangrado se deberá contar con un espacio físico que permita que los animales permanezcan el tiempo suficiente para completar el proceso. n) El faenado o el escaldado solo se efectuarán cuando se haya comprobado la falta de signos de vida del animal. INSPECCIÓN VETERINARIA Inspección ante-mortem y post-mortem En estos contextos se efectuarán los controles orientados a determinar la presencia de posibles indicadores de aquellas condiciones que no aseguren el bienestar animal y brindar el cumplimiento del presente documento. Comunicación A continuación, se presentan algunos parámetros recomendados al realizar el proceso de aturdimiento (deberán ser modificados según las especificaciones del equipo utilizado). 12 De encontrarse elementos en las carcasas que sugieran malas condiciones para el bienestar del animal, deberá comunicarse de inmediato al personal autorizado del Senasa. Asimismo, los responsables de la empresa deberán tomar las medidas necesarias en las etapas correspondientes del proceso para evitar futuros inconvenientes. �BIBLIOGRAFÍA Reglamento de Productos Subproductos y Derivados de Origen Animal, Decreto 4238/68. Reglamento (CONSEJO DE LA UNIÓN EUROPEA) Nº 1099/2009 relativo a la protección de los animales en el momento de la matanza, 24 de septiembre de 2009. Reglamento (CONSEJO DE LA UNIÓN EUROPEA) N° 1/2005 relativo a la protección de los animales durante el transporte y las operaciones conexas, 22 de diciembre de 2004. Directiva 2007/43/CE por la que se establecen las disposiciones mínimas para la protección de los pollos destinados a la producción de carne, 28 de junio de 2007. Directiva 93/119/CE relativa a la protección de los animales en el momento de su sacrificio o matanza, 22 de diciembre de 1993. Lewis P.D y Morris T.R. (2000). “Las aves y la luz de color”. World’s Poultry Sci Journal, 56, 189-207. Fowier, M. E. (1978). 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For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Manual de Bienestar Animal en plantas de faena de aves y lagomorfos Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource [2012] Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Dirección Nacional de Inocuidad y Calidad Agroalimentaria / Dirección de Inocuidad de Productos de Origen Animal Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0033 Abstract A summary of the resource. El principal objetivo de este manual es transmitir al público los derechos básicos en materia de bienestar animal en plantas de faena. De esta forma, se aspira a que las prácticas humanitarias sean parte de esta tarea garantizando el cumplimiento de derechos relacionados con este concepto. Así, se pretende que los animales atraviesen el proceso de faena con el menor malestar posible, de forma tal que implique, fundamentalmente, una práctica beneficiosa para productores y consumidores. Table Of Contents A list of subunits of the resource. Introducción Objetivos Destinatarios Bienestar Animal Concepto y definiciones Condiciones generales en la manipulación Tratamiento de los animales Capacitación del personal Tecnología operativa en el proceso de faena Recepción, pesaje y espera Zona de descarga y colgado Zona de insensibilización y degüello Inspección veterinaria Bibliografía https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/26773030d8cb0ebb444d2836c5ce1002.pdf 8af210612683d51825600b284ea4b8d5 PDF Text Text MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL UN ENFOQUE PRÁCTICO PARA EL BUEN MANEJO DE ESPECIES DOMÉSTICAS DURANTE SU TENENCIA, PRODUCCIÓN, CONCENTRACIÓN, TRANSPORTE Y FAENA VERSIÓN 1 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Autoridades Diana María GUILLÉN Presidenta Luis Ángel CARNÉ Vicepresidente José Luis FERRO Dirección Nacional de Sanidad Animal Gustavo Pérez HARGUINDEGUY Dirección Nacional de Inocuidad y Calidad Agroalimentaria II • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria DESARROLLO DE CONTENIDOS Mónica Ponce del Valle Carlos Vicari María Florencia Faravelli Claudio Glauber Nicolás Winter COORDINACIÓN Y EDICIÓN DE CONTENIDOS Nicolás Winter COLABORADORES Lucila Segato Débora Racciatti Miguel Trezeguet Mariela Monterubianessi Pedro Torres Javier Aguer Marcelo Bordas Marcelo Ghezzi Alberto Dick Alejandro Muruzeta Eial Izak. DISEÑO Coordinación de Relaciones Institucionales, Información y Comunicación del Senasa. Senasa • III �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL IV • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Contenidos BÚSQUEDA RÁPIDA 1: POR ESPECIE IX BÚSQUEDA RÁPIDA POR ACTOR 2A X BÚSQUEDA RÁPIDA POR ACTOR 2B XI PRÓLOGO XV 1. ANTECEDENTES 1 2. CONSIDERACIONES GENERALES DE BIENESTAR ANIMAL 3 2.1 DEFINICIÓN, PRINCIPIOS BÁSICOS y CRITERIOS DE BIENESTAR ANIMAL 3 2.2 BA y ESTRÉS 5 2.3 ALIMENTACIÓN 6 2.4 INSTALACIONES PARA LA TENENCIA O PRODUCCIÓN DE ANIMALES 7 2.5 SANIDAD, ATENCION MEDICA VETERINARIA Y PRACTICAS ZOOTECNICAS 9 2.6 BIOSEGURIDAD 12 2.7 INDICADORES DE BIENESTAR ANIMAL 13 2.8 CAPACITACIÓN DE LOS ACTORES 15 3. CARACTERÍSTICAS DEL COMPORTAMIENTO Y DEL MANEJO DE LOS ANIMALES 17 3.1 ASPECTOS GENERALES DEL COMPORTAMIENTO DE LAS ESPECIES DOMÉSTICAS 17 3.2 COMPORTAMIENTO NATURAL Y ASPECTOS ESPECÍFICOS DEL MANEJO POR ESPECIE 20 3.2.1 BOVINOS Y BUBALINOS 3.2.2 ÉQUIDOS 3.2.3 PORCINOS 3.2.4 OVINOS Y CAPRINOS 3.2.6 LAGOMORFOS 3.3 ARREO Y MANEJO EN GRUPO EN ESPECIES MAYORES Y MENORES 3.3.1 USO DE INSTRUMENTOS INDUCTORES DE MOVIMIENTO 20 22 24 25 28 29 31 4. TENENCIA Y PRODUCCIÓN PRIMARIA DE ANIMALES DOMÉSTICOS 33 4.1 RESPONSABILIDADES DE LOS ACTORES 33 4.1.1 PRODUCTOR o TENEDOR DE ANIMALES / COOPERATIVA DE PRODUCTORES / CENTROS DE GENÉTICA / CABAÑAS / HARAS / ESTABLECIMIENTOS DE CRÍA DE REPRODUCTORES (PADRES Y ABUELOS) 4.1.2 PERSONAL DE CAMPO/PEONES Y CUIDADORES DE ANIMALES 33 33 Senasa • V �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4.1.3 MÉDICO VETERINARIO 33 4.1.4 ASOCIACIONES DE PRODUCTORES y ENTIDADES AGROPECUARIAS 34 4.1.5 USINAS LÁCTEAS 34 4.1.6 SENASA 34 4.2 ASPECTOS GENERALES EN LA TENENCIA Y PRODUCCIÓN DE ANIMALES PARA CONSUMO HUMANO 35 4.2.1 TENENCIA DE ANIMALES CON FINES DEPORTIVOS, EDUCACIONALES O RECREATIVOS 4.2.2 ORGANIZACIÓN DE UN SISTEMA DE PRODUCCIÓN 4.2.3 INSTALACIONES, MANEJO, ALIMENTACIÓN, SANIDAD, BIOSEGURIDAD Y ATENCIÓN MÉDICA VETERINARIA 35 35 36 4.3 ASPECTOS PARTICULARES POR ESPECIE Y TIPO DE PRODUCCIÓN 37 4.3.1 BOVINOS DE CARNE 4.3.2 BOVINOS DE LECHE (TAMBO) 4.3.3 ÉQUIDOS 4.3.4 CERDOS 4.3.5 OVINOS Y CAPRINOS 4.3.6 AVES 4.3.7 LAGOMORFOS CUADRO RESUMEN 1 - BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN DE ANIMALES PRODUCTORES DE ALIMENTOS PARA CONSUMO HUMANO 37 41 48 50 55 60 67 70-71 5. TRANSPORTE DE ANIMALES 73 5.1 RESPONSABILIDADES DE LOS ACTORES 73 5.1.1 PRODUCTOR o TENEDOR DE ANIMALES, EMPRESA PECUARIA, CABAÑA, CENTROS DE GENETICA, IMPORTADORES Y EXPORTADORES DE ANIMALES 5.1.2 PERSONAL PERTENECIENTE A LOS ESTABLECIMIENTOS PECUARIOS, EMPRESAS PECUARIAS, CABAÑAS, CENTROS DE GENETICA, REMATES FERIA, ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES, EXPOSICIONES, EXPORTADORES E IMPORTADORES DE ANIMALES 5.1.3 EMPRESA DE TRANSPORTE TERRESTRE Y CHOFERES DE SUS PROPIOS CAMIONES 5.1.4 CHOFER / CONDUCTOR 5.1.5 EMPRESAS DE TRANSPORTE MARITIMO Y AEREO QUE TRANSPORTEN ANIMALES 5.1.6 PERSONAL DE BARCOS O AVIONES QUE TRANSPORTEN ANIMALES 5.1.7 REMATE FERIA – ESTABLECIMIENTO CONCENTRADOR 5.1.8 EMPRESA CONSIGNATARIA o INTERMEDIARIO COMERCIAL y MATARIFES 5.1.9 MATADERO 5.1.10 PERSONAL DE MATADERO 5.1.11 MEDICOS VETERINARIOS 5.1.12 AUTORIDADES NACIONALES O PROVINCIALES DE CONTROL VEHICULAR, TRANSITO Y ADUANAS 5.1.13 SENASA 5.2 TRANSPORTE DE ANIMALES POR VIA TERRESTRE VI • Senasa 73 74 74 75 75 75 76 76 76 77 77 77 78 79 �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 5.2.1 CONDICIONES GENERALES 79 5.2.2 ESTRUCTURA DE LOS MEDIOS DE TRANSPORTE TERRESTRE 79 5.2.3 APARTE DE ANIMALES, CONFORMACION DE LOTES Y ACONDICIONAMIENTO PREVIO AL TRASLADO 80 5.2.4 ASPECTOS PARTICULARES DURANTE LA CARGA Y DESCARGA DE ANIMALES COMO ACTIVIDADES CONEXAS 82 5.2.5 ASPECTOS PARTICULARES DEL TRASLADO O VIAJE 85 5.3 PARTICULARIDADES DEL TRANSPORTE DE ANIMALES POR VIA MARITIMA Y AEREA 5.4 INDICADORES DE BIENESTAR EN EL TRANSPORTE 5.5 CAPACITACION CUADRO RESUMEN 2 - BIENESTAR ANIMAL EN EL TRANSPORTE 87 89 89 90 6. MANEJO DE ANIMALES EN REMATES FERIA, ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES DE HACIENDA, EXPOSICIONES U EVENTO CON AGRUPAMIENTO DE ANIMALES 93 6.1 RESPONSABILIDADES DE LOS ACTORES 93 6.1.1 RESPONSABLE DE REMATE FERIA, ESTABLECIMIENTO CONCENTRADOR, EXPOSICION O EVENTO CON AGRUPAMIENTO DE ANIMALES 6.1.2 PERSONAL DE REMATES FERIA, ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES, EXPOSICIONES O EVENTOS CON AGRUPAMIENTO DE ANIMALES 6.2 PRINCIPIOS GENERALES SOBRE LAS INSTALACIONES 6.2.1 MANTENIMIENTO DE LAS INSTALACIONES 6.3 DEL INGRESO Y EGRESO DE ANIMALES 6.4 ASPECTOS PARTICULARES DEL MANEJO DE ANIMALES DURANTE LA JORNADA DE TRABAJO O EVENTO 6.5 INDICADORES ESPECIFICOS DE BIENESTAR ANIMAL EN REMATES FERIA, ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES DE HACIENDA, EXPOSICIONES Y AFINES 6.6 CAPACITACION DE LOS OPERARIOS Y PERSONAL DE LOS ESTABLECIMIENTOS CUADRO RESUMEN 3 BIENESTAR ANIMAL EN REMATES FERIA Y ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES 93 94 95 98 98 99 102 103 104 7. MANEJO DE ANIMALES EN MATADEROS 107 7.1 RESPONSABILIDADES DE LOS ACTORES 107 7.1.1 RESPONSABLE o DIRECCION DE LA PLANTA (MATADERO) 7.1.2 RESPONSABLE DE BIENESTAR ANIMAL DEL ESTABLECIMIENTO 7.1.3 OPERARIOS 7.1.4 JEFE DE SERVICIO DEL SENASA 7.2 DISEÑO DE LAS INSTALACIONES Y EQUIPOS 7.2.1 ASPECTOS PARA ESPECIES MAYORES Y MENORES 7.2.2 ASPECTOS PARA AVES Y LAGOMORFOS 7.3 DESCARGA Y PRE-FAENA 7.3.1 ASPECTOS PARA ESPECIES MAYORES Y MENORES 107 107 107 108 109 109 113 114 114 Senasa • VII �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 7.3.2 ASPECTOS PARA LAS AVES Y LAGOMORFOS 7.4 FAENA PROPIAMENTE DICHA 7.4.1 CONSIDERACIONES GENERALES ACERCA DE LA INSENSIBILIZACIÓN EN LAS DIFERENTES ESPECIES 7.4.2 INSENSIBILIZACION POR ESPECIE 7.4.3 IZADO (COLGADO) Y SANGRADO (DEGÜELLO) DE LOS ANIMALES 7.5 RITOS RELIGIOSOS (HALAL, KOSHER) 7.6 INDICADORES ESPECIFICOS DE BIENESTAR EN EL MATADERO O FRIGORIFICO 7.7 CAPACITACIÓN DEL PERSONAL CUADRO RESUMEN 4 - BIENESTAR ANIMAL EN FAENA 116 117 117 119 124 126 127 129 130 8. CONCLUSIONES Y PROSPECTIVA 133 ANEXO I – DEFINICIONES 135 ANEXO II –TÉCNICAS DE SACRIFICIO HUMANITARIO POR ESPECIE 141 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 143 VIII • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.1, 4.2, 4.3, 4.3.3, 4.4 EQUIDOS 3.1, 3.2.3, 3.3, 3.3.1 CERDOS 4.1, 4.2, 4.3, 4.3.4, 4.4 T OVINOS Y CAPRINOS 3.1, 3.2.4, 3.3, 3.3.1 4.1, 4.2, 4.3, 4.3.5, 4.4 POLLO PARRILLERO 3.1, 3.2.5 4.3.6.1, 4.4 3.1, 3.2.5 4.1, 4.2, 4.3, 4.3.6.2, 4.4 3.1, 3.2.6 4.1, 4.2, 4.3, 4.3.7, 4.4 GALLINA PONEDORA LAGOMORFOS (conejos, chinchillas) T 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5 NA ANEXOS I y II 3.1, 3.2.2, 3.3, 3.3.1 T 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5 7.1, 7.2, 7.2.1, 7.3, 7.3.1, 7.4, 7.4.1, 7.4.2.1, 7.4.3, 7.5, 7.6, 7.7 7.1, 7.2, 7.2.1, 7.3, 7.3.1, 7.4, 7.4.1, 7.4.2.1, 7.4.3, 7.5, 7.6, 7.7 7.1, 7.2, 7.2.1, 7.3, 7.3.1, 7.3.1.1, 7.4, 7.4.1, 7.4.2.2, 7.4.3, 7.5, 7.6, 7.7 7.1, 7.2, 7.2.1, 7.2.1.2, 7.3, 7.3.1, 7.3.1.2, 7.4, 7.4.1, 7.4.2.3, 7.4.3, 7.4.3.1, 7.5, 7.6, 7.7 CAPÍTULO 8 – Conclusiones 4.1, 4.2, 4.3.2, 4.4 CAPÍTULO 7 – Faena BOVINOS Y BUBALINOS DE LECHE 3.1, 3.2.1, 3.3, 3.3.1 CAPÍTULO 6 – Remate feria y Establecimientos Concentradores 4.1, 4.2, 4.3.1, 4.4 ESPECIE CAPÍTULO 5 Transporte CAPÍTULO 4 Producción– primaria BOVINOS Y BUBALINOS DE CARNE 3.1, 3.2.1, 3.3, 3.3.1 CAPITULO CAPÍTULO 2Consideraciones generales CAPÍTULO 3 – Comportamiento y Manejo CUADROBÚSQUEDA DE REFERENCIA RAPIDA 1: POR ESPECIE RÁPIDA 1: POR ESPECIE T T T T T T 7.1, 7.2, 7.2.1, 7.2.1.3, 7.3, 7.3.1, 7.4, 7.4.1, 7.4.2.4, 7.4.3, 7.4.3.2, 7.5, 7.6, 7.7 7.1, 7.2, 7.2.2, 7.3, 7.3.2, 7.4, 7.4.2.5, 7.4.3, 7.4.3.3, 7.5, 7.6, 7.7 Referencias (T) Todo el Capítulo / (NA) No alcanzado Senasa • IX �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL CAPÍTULO 6 – Remate feria y Establecimientos Concentradores CAPÍTULO 7 – Faena CAPÍTULO 8 – Conclusiones ANEXOS NA NA T T NA NA T T NA NA T T 6.1, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6 NA T T 5.1, 5.3, 5.4, 5.5 NA NA T T CAPÍTULO 5 – Transporte CAPÍTULO 4 Tenencia y Producción primaria ACTOR CAPÍTULO 3 Comportamiento y Manejo CAPITULO CAPÍTULO 2Consideraciones generales BÚSQUEDA PORRAPIDA ACTOR22A CUADRO DERÁPIDA REFERENCIA (a): POR ACTOR TENEDOR, PRODUCTOR PRIMARIO Y COOPERATIVAS DE PRODUCTORES 4.1, 4.2, 4.2.1, 4.2.2, 4.2.3, 4.3.1, 4.4 4.1, 4.2, 4.2.1, 4.2.2, 4.2.3, 4.3.2, 4.4 ÉQUIDOS 3.1, 3.2.1, 3.3, 3.3.1 3.1, 3.2.1, 3.3, 3.3.1 3.1, 3.2.2, 3.3, 3.3.1 CERDOS 3.1, 3.2.3, 3.3, 3.3.1 4.1, 4.2, 4.2.1, 4.2.2, 4.2.3, 4.3.4, 4.4 3.1, 3.2.4, 3.3, 3.3.1 4.1, 4.2, 4.2.1, 4.2.2, 4.2.3, 4.3.5, 4.4 4.1, 4.2, 4.2.1, 4.2.2, 4.2.3, 4.3.6, 4.3.6.1, 4.3.6.4, 4.4 4.1, 4.2, 4.2.1, 4.2.2, 4.2.3, 4.3.6, 4.3.6.2, 4.3.6.4, 4.4 BOVINOS Y BUBALINOS DE CARNE BOVINOS Y BUBALINOS DE LECHE T OVINOS Y CAPRINOS POLLO PARRILLERO 3.1, 3.2.5 GALLINA PONEDORA 3.1, 3.2.5 LAGOMORFOS (conejos, chinchillas) 3.1, 3.2.6 CENTROS DE GENÉTICAS, CABAÑAS, HARAS, PRODUCTORES DE ABUELOS Y PADRES Referencia PERSONAL DE CAMPO/ EMPLEADOS RURALES T T a CUADRO 1 según especie 4.1, 4.2, 4.2.1, 4.2.2, 4.2.3, 4.3.3, 4.4 4.1, 4.2, 4.2.1, 4.2.2, 4.2.3, 4.3.7, 4.4 Referencia a CUADRO 1 según especie T T 5.1, 5.2.1, 5.2.3, 5.2.4, 5.3, 5.4, 5.5 5.1, 5.2.1, 5.2.3, 5.2.4, 5.3, 5.4, 5.5 5.1, 5.2.1, 5.2.3, 5.2.4, 5.3, 5.4, 5.5 5.1, 5.2.1, 5.2.3, 5.2.4, 5.3, 5.4, 5.5 MÉDICOS VETERINARIOS T T T ASOCIACIONES DE PRODUCTORES / ENTIDADES AGROPECUARIAS T T T T 3.1, 3.2.1, 3.3, 3.3.1 4.1, 4.2, 4.3.2, 4.4 5.1, 5.3, 5.4, 5.5 NA NA T T T T NA 5.1, 5.3, 5.4, 5.5 NA NA T T USINAS LÁCTEAS IMPORTADORES Y EXPORTADORES DE ANIMALES Referencias: (T) Todo el capítulo. (NA): No alcanzado. X • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria ANEXOS T T NA 5.1, 5.2, 5.4, 5.5 6.1, 6.3, 6.6 7.1, 7.3 T T T T NA 5.1, 5.2, 5.4, 5.5 6.1, 6.3, 6.6 7.1, 7.3 T T T T NA 5.1, 5.3, 5.4, 5.5 NA NA T T T 3.1, 3.2.1 a 3.2.4, 3.3, 3.3.1 NA 5.1, 5.2.1, 5.2.3, 5.2.4, 5.4, 5.5 T NA T T T 3.1, 3.2.1 a 3.2.4, 3.3, 3.3.1 NA 5.1, 5.2.1, 5.2.3, 5.2.4, 5.4, 5.5 6.1, 6.2.1, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6 NA T T NA 5.1, 5.2.1, 5.2.3, 5.2.4, 5.4, 5.5 6.1, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6 7.1, 7.3 T T CAPÍTULO 5 – Transporte CAPÍTULO 8 – Conclusiones EMPRESAS DE TRANSPORTE MARITIMO Y AEREO REMATES FERIA / ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES / EXPOSICIONES PERSONAL DE REMATES FERIA / ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES / EXPOSICIONES CAPÍTULO 7 – Faena CHOFER / CONDUCTOR CAPÍTULO 6 – Remate feria y Establecimientos Concentradores TRANSPORTE TERRESTRE Y CHOFERES DE CAMION PROPIO CAPÍTULO 4 – Tenencia y Producción primaria ACTOR CAPÍTULO 3 – Comportamiento y Manejo CAPITULO CAPÍTULO 2Consideraciones generales BÚSQUEDARAPIDA RÁPIDA2 POR ACTOR 2B CUADRO DE REFERENCIA (b): POR ACTOR EMPRESA CONSIGNATARIA INTERMEDIARIO COMERCIAL/ MATARIFES T 3.1, 3.2.1a 3.2.4, 3.3, 3.3.1 AUTORIDADES NAC. Y PROV. DE CONTROL VEHICULAR, TRÁNSITO O ADUANAS T T NA 5.1, 5.2.1, 5.2.2, 5.2.4, 5.2.5, 5.4, 5.5 NA NA T T FRIGORÍFICO / MATADERO T T NA 5.1, 5.2.1, 5.2.4, 5.2.5, 5.4, 5.5 NA T T T RESPONSABLE DE BIENESTAR ANIMAL EN FRIGORÍFICO / MATADERO T T NA 5.1, 5.2.4, 5.4, 5.5 NA T T T NA 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7 T T PERSONAL DE FRIGORÍFICO / MATADERO T T NA 5.1, 5.2.4, 5.4, 5.5 Referencias: (T) Todo el capítulo. (NA): No alcanzado. Senasa • XI �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL “Este manual ha sido elaborado en consonancia con los últimos saberes técnicos y científicos del Bienestar Animal a nivel mundial. Todos los actores de las cadenas pecuarias -específicamente bovinos y bubalinos, équidos, cerdos, ovinos, caprinos, aves y lagomorfos- han sido abarcados en cuanto a sus responsabilidades y competencias, incluyendo desde la tenencia y crianza primaria en el campo hasta el transporte, la comercialización y la faena. Esta temática demanda la atención conjunta e integrada de cada una de las personas que tienen responsabilidad directa o indirecta sobre los animales, tanto por el aspecto ético intrínseco como por el impacto negativo que genera cuando no es atendida correctamente. El bienestar de los animales resulta una inversión que minimiza los problemas y las pérdidas en cada una de las etapas y consecuentemente favorece la rentabilidad y productividad en cada eslabón de la cadena.” XII • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Un enfoque práctico para el buen manejo de especies domésticas durante su tenencia, producción, concentración, transporte y faena VERSIÓN 1, OCTUBRE DE 2015 Senasa • XIII �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL XIV • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria PRÓLOGO El Bienestar Animal (BA) representa el modo en que un animal afronta las condiciones de su entorno, considerando que se encuentra en condiciones de bienestar si puede experimentar las 5 libertades: ausencia de hambre, de sed y de malnutrición; ausencia de miedo y estrés sostenido; ausencia de incomodidades (físicas y térmicas, entre otras); ausencia de dolor, lesión y/o enfermedad; y libertad para manifestar un comportamiento natural. Indistintamente de la especie, tipo de crianza y uso, un animal debe criarse en situaciones de mínimo estrés, dolor y/o temor permitiendo que satisfaga sus necesidades nutricionales, sanitarias, ambientales y sociales (comportamiento natural), y logre el estado de bienestar en cada momento o etapa de su vida. El Bienestar Animal no sólo resulta un aspecto ético que se proyecta en el trato compasivo, la tenencia y la producción de animales domésticos por los incontables beneficios que el hombre obtiene de su uso con fines de trabajo, producción, deporte, investigación y/o educación, sino que además posee bases científicas respecto de su impacto negativo cuando no es atendido. Consecuentemente, el Bienestar Animal se erige como un valor esencial que debe cuidarse de manera integral a lo largo de cada cadena pecuaria de bovinos, bubalinos, équidos, cerdos, ovinos, caprinos, pollos parrilleros, gallinas ponedoras, conejos y chinchillas, de manera tal de minimizar los problemas, salvaguardar la inversión y propiciar el desarrollo sostenible de cada actividad, atendiendo además la demanda del público en general y consumidor de productos de origen animal en particular. Este Manual contiene los principios y recomendaciones para el Bienestar Animal en cada una de las especies domésticas atendiendo las particularidades del comportamiento natural, la etapa de la cadena involucrada y las responsabilidades de cada actor implicado, propiciando la mejora integral en el manejo de los animales a lo largo de toda su vida y la productividad y calidad de los productos alimenticios de ellos derivados. A partir de saberes prácticos y conocimientos científicos actuales, se han consolidado los contenidos de cada capítulo del documento de manera tal que cada uno de los actores pueda entenderlos, internalizarlos y cumplirlos a diario. De esta manera, se espera que cada actor, propietario, tenedor o responsable de los animales en carácter permanente o temporal, no sólo se beneficie en las rutinas de trabajo diarias y las mejoras en los indicadores y rentabilidad de la actividad, sino que además actúe en consistencia con un nivel de responsabilidad social acorde a nuestros tiempos. Senasa • XV �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL XVI • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 1. ANTECEDENTES La preocupación por el Bienestar Animal es, de alguna manera, tan antigua como la ganadería, observando que desde un principio el hombre primitivo siempre evitó alimentarse de animales enfermos o que murieran antes de matarlos para su consumo. En el mundo, la primera ley para la protección de los animales se sancionó en Inglaterra en 1822, dando lugar a la posterior fundación de la aún activa Royal Society for the Prevention of Cruelty to Animals (RSPCA). Por su parte, en Argentina Juan Manuel de Rosas redactaba en el año 1819las Instrucciones a los mayordomos de estancia, en las cuales ya se hacía referencia a las condiciones de manejo y pastoreo de los animales. De similar manera, en 1882 José Hernández, autor del Martín Fierro, escribía Las Instrucciones del Estanciero y esbozaba aspectos del arreo, trato y manejo de la hacienda. Posteriormente, en el año 1954 se promulgó la Ley N° 14.346 que contempla la protección de los animales con relación a aquellas conductas humanas caracterizadas como malos tratos y/o actos crueles. Once años más tarde, el Comité Brambell en el Reino Unido fue el primero en avanzar científicamente sobre los alcances del bienestar animal, proponiendo cinco privilegios que todo animal debía tener, independientemente de su alojamiento, los cuales en 1993 fueron mejorados por el Consejo de Bienestar de los Animales de Granja (FAWC1 en su sigla en inglés) y más tarde se convertirían en lo que hoy conocemos como las 5 libertades. Desde comienzos del nuevo milenio, la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE), como organismo internacional de referencia en BA, fue estableciendo principios recomendatorios dentro del Código de Animales Terrestres para que los países miembros de la Organización Mundial de Comercio (OMC), entre ellos Argentina, armonicen su legislación nacional en esta materia. En este sentido, desde hace más de 10 años el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria ha venido desarrollando diferentes normas, manuales y materiales de comunicación, además de actividades específicas de capacitación, que han permitido concientizar a los actores y avanzar en línea con el cumplimiento de los principios de BA internacionalmente reconocidos. El BA en sí mismo no solo resulta un ASPECTO ÉTICO desde la producción antropológica de animales –que ha cobrado alta relevancia durante las últimas décadas, de la mano principalmente de las asociaciones proteccionistas y de los consumidores de Europa– sino que además posee BASES CIENTÍFICAS fundadas sobre la relación de la expresión del comportamiento natural, el nivel de estrés y dolor, y los indicadores específicos de producción, tanto en CANTIDAD como en CALIDAD. Consecuentemente, el bienestar de los animales es un aspecto fundamental de cualquier cadena pecuaria que resulta una inversión para que el productor primario maximice la productividad y el rendimiento de su actividad, y los eslabones pos1  Farm Animal Welfare Council. Senasa • 1 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL teriores de comercialización, transporte y faena no generen pérdidas que atenten contra su propia rentabilidad o la calidad del producto final que llega al consumidor. En resumen, el cumplimiento de los principios de BA acordes a la especie animal y etapa resulta importante porque: Desde el punto de vista REGLAMENTARIO, es el escalón base del sistema multilateral de comercio (OMC) en el cual la legislación nacional debe estar armonizada con las normas internacionales de referencia de la OIE, y de esta manera encontrarse legitimadas las exportaciones de productos de origen animal. n Desde el punto de vista COMERCIAL, resulta una condición básica demandada por los consumidores, principalmente en países desarrollados, para los cuales el Servicio Sanitario Nacional resulta el garante de su cumplimiento en representación del país como un todo indistintamente del destino para el mercado interno o la exportación de la producción. n Desde el punto de vista PRODUCTIVO, posee impacto directo en el rendimiento del establecimiento pecuario, sea de carne, huevo, leche o lana, y en la calidad de sus productos, y consecuentemente en la rentabilidad final de la inversión. n Desde el punto de vista ÉTICO, el trato apropiado de los animales como seres vivos resulta un valor intrínseco de la raza humana que debe ser respetado individual y colectivamente. n Por todo lo expuesto, el presente MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL integra las buenas prácticas y principios técnicos sobre bienestar animal que resultan recomendaciones básicas que debe cumplir cada uno de los actores involucrados en las etapas de las cadenas de producción. 2 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 2. CONSIDERACIONES GENERALES DE BIENESTAR ANIMAL 2.1 DEFINICIÓN, PRINCIPIOS BÁSICOS y CRITERIOS DE BIENESTAR ANIMAL El término BIENESTAR ANIMAL designa “el modo en que un animal afronta las condiciones de su entorno, el cual está en buenas condiciones de bienestar si (según indican pruebas científicas) está sano, cómodo, bien alimentado, en seguridad, puede expresar sus formas innatas de comportamiento y si no padece sensaciones desagradables de dolor, miedo o desasosiego” 2. Dentro del BA se consideran los aspectos de sanidad para prevenir enfermedades y el uso de los productos veterinarios en los tratamientos veterinarios, además del sacrificio humanitario compasivo cuando corresponda. El BA es un estado en que se encuentra el animal en un momento o etapa específica, logrado por la sumatoria de condiciones que se le proveen durante su crianza. La forma en que un animal es tratado por el hombre se engloba bajo términos como trato compasivo o cuidado de los animales, y resulta un aspecto más a considerar a la hora de proveer condiciones para el bienestar. Las PREMISAS BÁSICAS en que se fundamenta el bienestar de los animales son: Que se deben respetar las “CINCO LIBERTADES”, es decir garantizar una vida: 1) libre de hambre, de sed y de malnutrición, 2) libre de miedo y estrés sostenidos, 3) libre de incomodidad, 4) libre de dolor, lesión y/o enfermedad y 5) libre para manifestar un comportamiento natural, contribuyendo al bienestar del animal y así la maximización de su productividad. n Que existe una relación crítica entre la salud de los animales y su bienestar, siendo por esto importante la adopción de planes sanitarios preventivos y la oportuna atención veterinaria cuando corresponda. n Que el empleo de animales para trabajo, producción, deporte, investigación y educación, entre otros, contribuye de manera decisiva en el bienestar de las personas y, por lo tanto, su crianza y manejo conlleva la RESPONSABILIDAD ÉTICA en cuanto a cuidar su bienestar n Que se debe minimizar el sufrimiento y agonía de un animal convaleciente, realizando un sacrificio humanitario de manera inmediata cada vez que sea necesario. n Indistintamente de la especie animal, su tipo de crianza y uso, un animal debe criarse en situaciones de mínimo estrés, dolor y/o temor a partir de tener satisfechas sus necesidades agrupadas en CUATRO PRINCIPIOS, a saber: 1. BUENA ALIMENTACIÓN, a partir de la provisión de agua y alimento en cantidad suficiente y calidad nutricional apropiada capaz de satisfacer sus requerimientos biológicos y fisiológicos correspondientes a su edad, estado nutricional, etapa productiva y condición fisiológica de salud. 2  Fuente OIE. Senasa • 3 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 2. AMBIENTE ADECUADO, que propicie condiciones de confort físico y social sin exposición a diversos estímulos o factores de estrés como son el malestar térmico y/o físico, con el respeto del espacio mínimo por animal de acuerdo a la especie y tipo de producción. 3. BUENA SALUD, sobre la base de la apropiada sanidad preventiva y, de ser necesario, tratamientos veterinarios acordes a la patología que pueda presentarse para eliminar el dolor, las lesiones y/o enfermedades. 4. ENTORNO SOCIAL, capaz de favorecer el COMPORTAMIENTO NATURAL sin el desarrollo de alteraciones de la conducta por falta de bienestar en alguno de los tres puntos anteriores. A partir de estos CUATRO PRINCIPIOS pueden definirse DOCE CRITERIOS, tal y como se presentan en el siguiente cuadro: Cuadro 1. DOCE CRITERIOS DE BIENESTAR ANIMAL 3 a. Los animales deben tener una alimentación suficiente y adecuada para no sufrir hambre de manera prolongada. b. Los animales deben tener acceso a un suministro de agua potable suficiente y adecuado para no sufrir sed por un tiempo prolongado. c. Los animales deben estar cómodos durante el descanso. d. Los animales deben tener una temperatura adecuada, no deberán padecer calor o frío. e. Los animales deben tener suficiente espacio para moverse con libertad. f. Los animales no deben presentar lesiones físicas. g. Los productores deben mantener las condiciones ambientales y la higiene de manera tal de minimizar la ocurrencia de enfermedades. h. Los animales no deben sufrir dolor durante el manejo, las maniobras zootécnicas, las intervenciones quirúrgicas o el sacrificio humanitario. i. Los animales deben poder manifestar comportamientos sociales normales y no dañinos. j. Los animales deben poder manifestar otros comportamientos normales y naturales específicos de su especie. k. Los animales deben ser manejados correctamente en todas circunstancias, rutinas diarias o de trabajo, arreos y transporte, entre otras, indistintamente de su categoría o tipo. l. Se deberán evitar las emociones negativas como miedo, angustia, frustración o apatía, y promover las emociones positivas como seguridad y satisfacción. 3  Sobre la base de los Principios y criterios para el Bienestar Animal de los animales de Producción, Evans y Veisser, Welfare Quality (UE) 4 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 2.2 BA y ESTRÉS El bienestar animal resulta clave en TODAS LAS CADENAS PECUARIAS y a lo largo de ellas, pasando desde su punto de origen en la tenencia y producción primaria de los reproductores y la producción comercial propiamente dicha, el transporte de animales y la comercialización en establecimientos intermedios hasta llegar a su ordeñe, esquila o faena en un frigorífico o matadero. Existen bases científicas que respaldan el impacto de las situaciones de estrés e incomodidad sobre el comportamiento y el estado individual de cada animal. Un animal manifiesta ESTRÉS cuando presenta restricciones en sus movimientos, es manejado inadecuadamente y se generan eventualmente fatiga, dolor y/o lesiones, aparecen objetos o personas ajenas al ambiente habitual, o padece hambre, sed o falta de confort térmico, entre otras. Si el estrés se mantiene en el tiempo se conoce como DISTRÉS. Los animales –incluyendo los destinados a la producción de alimentos– tienen una estructura cerebral que les permite sentir el temor y el dolor de manera similar a los humanos. Esta es una de las causas más importantes de estrés, que genera menores niveles de producción y calidad de los productos. Por eso, malas prácticas de manejo, instalaciones inadecuadas o lesiones accidentales pueden generar estrés y derivar en agresividad y problemas de manejo, caída de la fertilidad, susceptibilidad a las enfermedades y, productivamente, una menor cantidad y/o calidad de leche, carne, huevos o lana. En particular, el descenso de calidad en las carnes puede llevar a presentaciones tipo oscura, dura y seca (DFD por su sigla en inglés) o tipo blanca, pálida y exudativa (PSE por su sigla en inglés) y una mayor presencia bacteriana que acorta su vida útil del alimento para el consumidor. Por otro lado, los hematomas y lesiones pueden producirse por diferentes errores de manejo, pudiendo ser de leves y superficiales a grandes y severos. A su vez, pueden suponer una pérdida de producto no apto para el consumo que debe ser decomisado debido a su aspecto y textura, nivel de contaminación e imposibilidad de procesamiento. Minimizar la generación de estrés es la clave del manejo de los animales en un marco de bienestar y de producción sustentable y rentable, cobrando especial importancia su atención en PRODUCCIONES INTENSIVAS como engordes a corral, tambos bovinos, bubalinos y caprinos, o de aves, cerdos o lagomorfos en confinamiento. Senasa • 5 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 2.3 ALIMENTACIÓN El principal aspecto asociado a la vida de cualquier ser vivo es la nutrición, entendiendo por esto la posibilidad de alimentarse o recibir una dieta en cantidad y calidad de alimentos acordes a la especie y tipo de animal, entre ellos agua de bebida apta para el consumo4. Salvo situaciones particulares en donde se encuentra indicado el ayuno, todo animal debe tener acceso libre al agua y ser alimentado todos los días de manera tal de cubrir sus necesidades metabólicas conforme a su estado de desarrollo. El tipo de sistema y actividad productiva definirán las particularidades nutricionales de las dietas, debiendo considerar la proporción de energía (carbohidratos y lípidos), proteína y fibra acorde a la especie y etapa de producción y los aportes de vitaminas y minerales necesarios para el correcto desarrollo del animal. Es importante que el productor conozca las Buenas Prácticas de Producción de su especie y especificidades de la producción de acuerdo al tipo de crianza bregando por la máxima rentabilidad de su emprendimiento a la par de la adopción de un uso racional de los alimentos como principal insumo y gasto de la actividad. En este sentido, debe resaltarse la importancia de atender los principios de bienestar animal de cada especie producida, en donde la correcta alimentación resulta el pilar central de cualquier producción. 4  Si bien la interpretación del apto para consumo en humanos y animales es diferente en cuanto a los niveles máximos de sustancias en el agua, es importante que cumpla como mínimo los requisitos para estos últimos. 6 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 2.4 INSTALACIONES PARA LA TENENCIA O PRODUCCIÓN DE ANIMALES Cuando se tienen animales o se organiza un sistema de producción deben tenerse en cuenta la selección genética de los animales y su adaptación al ambiente local donde estarán alojados o serán producidos, tanto en relación a los factores climáticos, de enfermedades y parásitos como a la geografía y los suelos, entre otros. El tipo de agrupamiento y/o confinamiento debe garantizar no solo un normal comportamiento del animal, evitando la generación de estereotipias por falta de espacio, ambiente o alimentación adecuada. En ambientes de estabulación, el cuidado de las condiciones internas de temperatura, humedad y luz es clave para la apropiada termorregulación del animal. En este sentido, es fundamental el DISEÑO Y CONSTRUCCIÓN ADECUADA DE LAS INSTALACIONES conforme la actividad que se desarrolla y el número de animales. Los corrales, tranqueras, mangas y cepos –cuyo uso es habitual en la actividad pecuaria– deben ser construidos y mantenidos de tal forma que no presenten ningún elemento punzante o roto que pueda provocar lesiones o alteraciones de confort, en un tamaño adecuado según la cantidad de animales y con la apropiada iluminación tanto para los animales como para el trabajo de los operarios y médicos veterinarios. Los cepos deben contar con mecanismos de uso que permitan el cierre progresivo y la aplicación de una presión que no genere lesiones sobre los animales. Su uso, junto con las tranqueras y peines, no debe provocar ruidos en un nivel que perturbe a los animales. Los alambrados no deben construirse con alambres de púa, horquetas, clavos, saliencias u otros elementos. Es importante inspeccionarlos periódicamente y mantenerlos adecuadamente. Para el caso de alambrados eléctricos, deberán diseñarse, instalarse, utilizarse y mantenerse de manera tal que los animales reciban la descarga eléctrica apropiada y suficiente para lograr el aprendizaje por este reflejo condicionado sin generar quemaduras o lesiones en ellos. Las áreas de acceso –tales como caminos, tranqueras y/o portones– deberán poseer un diseño, dimensiones y una construcción que permitan que los animales transiten cómodamente, con pisos consolidados y antideslizantes pero atendiendo la prevención de los potenciales problemas de manos y patas si son demasiado duros. Los mecanismos de apertura y cierre de tranqueras y portones, deberán ser seguros para el personal y los animales, y fáciles de accionar. Las mangas y/o embarcaderos deberán diseñarse de forma tal que favorezcan el desplazamiento fluido de los animales a través del sistema, en una única línea, con paredes ciegas que eviten los claroscuros y la vista de los operarios. Su emplazamiento deberá realizarse en zonas no inundables y con piso firme, al igual que los caminos de acceso. La iluminación y visibilidad hacia delante, sin generar contraluces, es clave para el correcto avance de ellos en el uso. La posibilidad de construir o rediseñar las mangas, pasarelas y rampas con FORMA CURVA es apropiada para propiciar el avance del animal al impedir la Senasa • 7 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL visión del otro extremo, al igual que los corrales de encierre redondos resultan más eficientes para el giro de los animales con la creencia de que están volviendo al lugar de origen. Es importante que los animales tengan visión de 2 a 3 veces su tamaño por delante para que resulten funcionales durante el uso. A su vez, la iluminación será correcta si se dirige en el sentido de movimiento de los animales para que el mismo no se vea inhibido. Es importante proveer a los animales de una adecuada PROTECCIÓN FRENTE A LAS CONDICIONES CLIMÁTICAS, ya sea mediante un monte o arboleda, reparos o techos construidos con media sombra u otro material duradero, con especial atención en producciones lecheras bovinas o caprinas, porcinas al aire libre u ovinas tras la esquila. En el caso de los TAMBOS, debe darse especial atención a la estructura y equipamiento de la sala de ordeñe debido a su uso varias veces al día durante todo el año, lo cual incide en el bienestar de la vaca o cabra lechera. (Ver apartados específicos sobre ambas especies). Para el caso de INSTALACIONES PRODUCTIVAS EN CONFINAMIENTO, –especialmente en cerdos, aves y lagomorfos– se deben tener en cuenta las condiciones climáticas de la región de emplazamiento en cuanto a la temperatura y humedad, además de los vientos–intensidad y dirección– con el fin de diseñar las mismas y construirlas con la adecuada orientación y estructura. Es importante que las superficies internas (paredes y pisos) estén en buenas condiciones, sean fáciles de limpiar y desinfectar, y que no hayan estructuras o equipos donde los animales se puedan enredar o lastimar. Comúnmente, es de elección el posicionamiento longitudinal noreste-suroeste de las instalaciones, utilizando una cobertura interior del techo que proporcione la mayor eficiencia térmica y cortinas que permitan controlar la ventilación. El uso de sistemas de control ambiental (ventilación forzada y enfriamiento) es recomendable cuando la temperatura y la humedad del ambiente sobrepasen el rango recomendado para la especie. Adicionalmente, es apropiado contar con árboles y arbustos en el exterior de las instalaciones, considerando control ambiental de roedores, insectos y otros animales que puedan afectar la producción (como pueden ser las aves silvestres en caso de la producción avícola). En caso de uso de JAULAS, las mismas deben colocarse de tal forma que no aíslen a las gallinas de la vista, el sonido o el olor de otros individuos. Debe garantizarse la disponibilidad de comederos y bebederos para todos los animales. Finalmente, es recomendable contar con silos o reservas de alimento y tanques de agua suficientes para garantizar la provisión de agua y comida por un mínimo de CUATRO (4) días consecutivos para el correcto desarrollo de la actividad productiva. 8 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 2.5 SANIDAD, ATENCION MEDICA VETERINARIA Y PRACTICAS ZOOTECNICAS Todo establecimiento productor o tenedor de animales de manera temporal o permanente debe contar con un plan sanitario preventivo contra enfermedades infecciosas y parasitarias a partir de productos veterinarios registrados y tratamientos aplicados conforme las indicaciones de uso definidas en los rótulos e impresos de los mismos (dosificación, vía de administración, preparación, entre otros). Un animal convaleciente debe ser atendido por un veterinario a la brevedad posible y, además de atender cada patología específica, se debe evaluar la existencia de dolor y, eventualmente, paliar el mismo mediante la administración de productos veterinarios y otras técnicas existentes. En caso de un animal con una patología terminal, se debe minimizar el sufrimiento mediante un SACRIFICIO HUMANITARIO (eutanasia) inmediato, desplazando al animal lo menos posible y, de ser necesario, con asistencia mecánica. Las especificaciones y técnicas según la especie se presentan en el ANEXO II. Tanto para la sanidad preventiva como para la atención clínica veterinaria específica debe recurrirse a la práctica y/o supervisión de un profesional veterinario matriculado que garantizará el ejercicio médico apropiado en consistencia con el bienestar animal. Debe velarse por el uso racional de productos veterinarios conforme las indicaciones especificadas en los impresos de los mismos, que se encuentren registrados en el Senasa y autorizados para su uso en la especie en cuestión, con especial atención en la vía de aplicación y la dosificación acorde al peso del animal. El uso de agentes biológicos (vacunas) como manejo metafiláctico debe respetar los lineamientos de los planes sanitarios nacionales establecidos por el Senasa, mientras que para el caso de productos antiparasitarios o antibióticos debe supervisarse su eficacia y generar protocolos con rotación de principios activos con el fin de minimizar la generación de resistencia parasitaria o microbiana. En este mismo sentido, deben atenderse las prohibiciones o restricciones de uso de productos veterinarios hormonales o promotores de crecimiento conforme las regulaciones sanitarias vigentes. En todos los casos, la correcta aplicación de los productos es un factor clave tanto para garantizar su eficacia como para evitar problemas posteriores en tejidos, órganos o el animal en su conjunto. En particular, la aplicación de productos inyectables debe respetar las zonas apropiadas según la especie (ver Figura 1 y Cuadro 2). Para el caso de uso de baños antiparasitarios, sean por inmersión o aspersión, debe atenderse no solo la correcta cubicación de los mismos conforme las indicaciones de uso y las concentraciones necesarias para su eficacia, sino también a la rutina de baño que involucrará el arreo y baño propiamente dicho, ambas situaciones de alto estrés para los animales, por lo que nunca deberá hacerse en días de calor extremo o con animales sedientos. Por otro lado, es importante remarcar que debe prevenirse el contacto de los Senasa • 9 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Figura 1. Ejemplo de puntos apropiados de inyección en bovinos Fuente: R. Acerbi (2014) animales con sustancias tóxicas o contaminantes químicos no aptos para uso animal, como productos fitosanitarios o de origen ambiental o industrial, y sus envases vacíos luego del uso. Para las PRÁCTICAS ZOOTÉCNICAS deben cuidarse las particularidades de cada especie y tipo de producción que se describen en el Capítulo 4. Sin embargo, debe considerarse aquí el tema de la MARCACIÓN Y SEÑALAMIENTO ya que la MARCA es obligatoria en la identificación de propiedad de las especies mayores y menores y, en algunos casos, asociada a planes sanitarios vigentes, mientras que el uso de la SEÑAL obedece a cuestiones de manejo sanitario y productivo específicas, en muchos casos reguladas por medio de normativas vigentes. CUADRO 2. Aplicación de inyectables en las diferentes especies Especie BOVINOS Aplicación intradérmica (*) Pliegue anocaudal / tabla del cuello (cervical) ÉQUIDOS Tabla del cuello (cervical) CERDOS Cara interna pabellón auricular Aplicación Subcutánea Aplicación Intramuscular Aplicación Endovenosa Tabla del cuello delante o detrás de la escapula Tabla del cuello circunscrita Yugular, mamaria o safena. Tabla del cuello Tabla del cuello Yugular, cefálica y safena Auricular, Cava craneal Cara interna del muslo o base de la oreja Atrás del hombro o en cara interna de la pierna Pata delantera o trasera. Tabla del cuello. Yugular Cara posterior del muslo OVINOS Axilar CAPRINOS Pliegue Anocaudal o talla del cuello (cervical) Atrás del hombro o en cara interna de la pierna Pata delantera o trasera. Tabla del cuello Yugular AVES Barbillón Nuca, bajo el ala o pecho Pechuga Axilar (*) Esta vía re�iere a la aplicación de productos veterinarios diferentes a la PPD para la prueba de tuberculina. Para realizar esta prueba deben atenderse las particularidades para las especies en las que se encuentra aceptada. 10 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria La MARCACIÓN debe realizarse a fuego teniendo en cuenta la buena práctica tanto para realizarla en una única maniobra de forma correcta, como para atender al lugar de localización según cada especie. Por el contrario, la SEÑAL se localiza en una o ambas orejas del animal según su tipo y finalidad. Es importante utilizar señales (caravanas) de calidad y garantizar su correcta aplicación con el instrumento adecuado para minimizar las pérdidas. La sensibilidad de cada especie a la aplicación de la señal debe ser considerada a la hora de planificar la rutina de trabajo y organizar la sujeción y/o inmovilización del animal que permita, por un lado, minimizar el tiempo de la práctica y el dolor generado, y por el otro, garantizar la seguridad del operario. Senasa • 11 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 2.6 BIOSEGURIDAD Todo establecimiento que produce o aloja animales, permanente o temporalmente, se encuentra expuesto a diferentes riesgos biológicos y químicos que pueden resultar una amenaza para los animales si ingresan y toman contacto con ellos. La adopción de procedimientos que salvaguarden la bioseguridad del establecimiento resulta un componente clave que debería ser adoptado por todo productor o responsable del mismo, con especial atención en las PRODUCCIONES INTENSIVAS, con o sin confinamiento, debido a la mayor vulnerabilidad de los animales derivada de los niveles de estrés aumentados, la alta densidad animal y el contacto estrecho entre los individuos. Cuidar el ingreso de personas y animales extraños al establecimiento, minimizar el riesgo inherente a la vestimenta e instrumentos zootécnicos mediante protocolos de desinfección, adoptar un plan de control de plagas (insectos y roedores) y atender el manejo de los animales bajo los criterios de bienestar animal son aspectos básicos a seguir. Si la sanidad se encuentra protegida mediante un plan sanitario profiláctico, la suma del cuidado de los puntos críticos en materia de bioseguridad minimizará los riesgos de enfermedades y consecuentemente propiciará el mantenimiento del bienestar animal en el establecimiento durante todo el ciclo productivo. 12 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 2.7 INDICADORES DE BIENESTAR ANIMAL El bienestar animal como resultado de instalaciones adecuadas, un medio ambiente productivo apropiado, una buena alimentación y sanidad, y un correcto manejo se reflejará a partir de INDICADORES INDIVIDUALES, GRUPALES Y DE MANEJO que deben ser supervisados por el productor, conocidos por los empleados del campo y profesionales veterinarios, de modo tal de atenderlos y responder a los desvíos de manera proactiva. A estos deben sumarse los INDICADORES PRODUCTIVOS Y REPRODUCTIVOS como reflejo global de la actividad productiva y la relación inversión–rendimiento. Por último, la presencia de desvíos en materia de bienestar no solo demanda la identificación de los aspectos individuales, grupales y de respuesta al manejo, sino que además debe contrastarse con los INDICADORES de INFRAESTRUCTURA, EQUIPAMIENTO Y AMBIENTE asociados a la producción. La TABLA 3 presenta el detalle de varios indicadores por tipo, los cuales pueden tener valoración cuantitativa o cualitativa específica según la especie y tipo de producción. Tabla 3 – Indicadores de bienestar animal en la producción primaria ASPECTOS INDIVIDUALES - Condición corporal y peso, aspecto general y suciedad (barro); - Conducta de alimentación, hambre y sed (emaciación, deshidratación); - Dolor o evidencia del mismo por intervenciones zootécnicas realizadas (castración, descorne, descole, otras); - Presencia de enfermedades metabólicas, infecciosas (mastitis) o parasitarias; - Alteraciones clínicas en la respiración y el nivel de agitación, estrés térmico; - Condiciones de la piel con atención a los genitales (testículos, ubres) y plumaje; presencia de lesiones; - Problemas en el periparto como retención de placenta, metritis, desgarros de vagina, prolapso de oviducto, entre otros; - Movilidad y presencia de lesiones clínicas o subclínicas en patas (cojeras); - Tratamientos veterinarios y nivel de uso de analgésicos y antibióticos; - Presencia de miedo y conducta de fuga; - Nivel de descanso y presencia de rumia según corresponda. ASPECTOS GRUPALES (comportamiento social) - Dinámica y distribución de los animales; - Densidad animal; - Cabeceos, lamidos, acicalado social, picaje de plumas, vocalizaciones; - Peleas y disputas de dominancia, agresividad; - Presencia de estereotipias; - Nivel de rumia, descanso y comportamiento de alimentación según corresponda. Senasa • 13 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL RESPUESTA AL MANEJO - Velocidad de salida de la manga del corral o del brete de contención; - Comportamiento durante el arreo o manejo; - Resbalones y caídas; - Vocalizaciones; - Gritos y golpes por parte del personal; - Presencia de perros agresivos o no entrenados; - Uso de instrumentos autorizados para inducir el movimiento; - Uso de instrumentos prohibidos para inducir el movimiento (picana, cadenas y otros) según corresponda. INDICADORES PRODUCTIVOS Y REPRODUCTIVOS - Tasas de morbilidad por lesiones, cojeras, mastitis, problemas metabólicos (acidosis, cetosis, hipocalcemias), diarrea, tos, resfrío y otros; - Tasas de mortalidad como valores discretos y en series temporales (mensual o anual) por categoría animal; - Muertes perinatales; - Intervalo entre partos, tasa de concepción, tasa de abortos, tasa de distocias; - Tamaño de la camada, cantidad de huevos; - Producción de carne (ganancia diaria de peso), leche y lana. ASPECTOS DE INFRAESTRUCTURA, EQUIPAMIENTO Y AMBIENTE ASOCIADOS AL CONFORT ANIMAL - Estado de las instalaciones básicas, como caminos, corrales, alambrados, reparos, mangas, cepos, corrales de encierre, rampas, parideras, jaulas de gestación, perchas, nidos, y otros; - Cantidad y calidad de comederos y bebederos; - Estado de instalaciones específicas como salas de ordeñe, y otros; - Tipo y mantenimiento de equipos vinculados al tipo de producción; - Presencia de insectos, plagas y animales silvestres incompatibles con la especie (predadores entre otros). Es importante que cada establecimiento y actividad seleccione y defina sus propios indicadores, sean alguno de estos o cualquier otro que pueda definirse, para su monitoreo y evaluación periódica como base del seguimiento del bienestar de los animales a lo largo del tiempo. 14 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 2.8 CAPACITACIÓN DE LOS ACTORES La CAPACITACIÓN de los diferentes actores es un pilar fundamental para la concientización y adopción de buenas prácticas en relación con el bienestar animal. Para esto es clave el rol de las universidades y los centros de enseñanza, tanto públicos como privados, e indistintamente de su nivel de enseñanza, de manera tal de avanzar en la difusión de los conocimientos en esta materia y el cumplimiento de los principios de bienestar por parte de cada uno de los actores. Es primordial que los productores, el personal de campo, los empleados rurales, los médicos veterinarios y las asociaciones de productores se encuentren capacitados en materia de bienestar animal en cada una de las etapas específicas. Las particularidades de cada especie y tipo de producción son importantes a la hora de atender el bienestar con el fin de minimizar las pérdidas. Es clave que el operario y productor que diariamente trabajan con los animales conozcan los principios de manejo y los indicadores de bienestar, para poder observarlos e informar los desvíos y, de ser necesario, atender las medidas correctivas que puedan requerirse. Sumado a esto, tener procedimientos estandarizados en las rutinas de trabajo no solo sistematiza la labor y disminuye los tiempos sino que además facilita el seguimiento de las buenas prácticas que se reflejarán en el rendimiento general de la producción. En este sentido, contar con capacitación específica para las rutinas de ordeñe, esquila y las prácticas zootécnicas características de cada especie y tipo de producción es fundamental en el marco del bienestar animal. Finalmente, la designación de un RESPONSABLE DE BIENESTAR ANIMAL DEL ESTABLECIMIENTO –ya sea en un establecimiento primario, intermedio o final, o en un transporte– es un aspecto importante para garantizar la observación sistemática de los indicadores de bienestar, propiciar su atención por parte de cada uno de los operarios y la corrección de los desvíos cada vez que ocurran. Es así que una capacitación adecuada resulta esencial y complementaria respecto de la inversión del productor en cuanto a la infraestructura y los animales en sí mismo, dado que un manejo animal en conformidad con los principios de bienestar permitirá maximizar el rendimiento productivo de su actividad. Senasa • 15 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 16 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 3. CARACTERÍSTICAS DEL COMPORTAMIENTO Y DEL MANEJO DE LOS ANIMALES 3.1 ASPECTOS GENERALES DEL COMPORTAMIENTO DE LAS ESPECIES DOMÉSTICAS El COMPORTAMIENTO ANIMAL es el resultado de la interacción de influencias genéticas y ambientales. Algunos comportamientos tienen determinantes más genéticos (innatos) que aprendidos, mientras que en otros casos sucede lo contrario. Los llamados comportamientos instintivos están programados genéticamente y suelen ser muy escasamente influenciados por la experiencia o el aprendizaje, como por ejemplo ciertas habilidades esenciales para la supervivencia y la reproducción como por la succión del pezón en los bebés. En cambio, los comportamientos aprendidos dependen de las experiencias vividas por cada animal, que en muchos casos pueden tener mecanismos innatos de arraigo pero deben “aprenderse” durante su desarrollo –ejemplo de esto es el aprendizaje a cazar de los felinos viendo cazar a su madre de pequeños–. Los ANIMALES DOMÉSTICOS presentan comportamientos aprendidos desde el nacimiento hasta varios días posteriores por un proceso que se conoce como impronta o troquelado. Este proceso se basa en el establecimiento de lazos sociales definidos, en parte por factores genéticos (herencia) y en parte por la dominancia entre individuos por razones de apareamiento y/o territoriales, comportamiento a partir del cual aprenden diversos aspectos sobre su ambiente, principalmente cómo identificar, acercarse y seguir a algo, usualmente, sus padres. Este tipo de aprendizaje se limita a periodos discretos o sensibles de la vida del animal, en general ocurre a muy temprana edad para ayudarlos a encontrar comida, refugio o protección, aunque con efectos importantes que se extienden durante toda su vida.Por este motivo, un adecuado manejo desde los primeros contactos es clave para el aprendizaje y posterior comportamiento de adultos. Los bovinos, bubalinos, équidos, ovinos, caprinos, cerdos, aves y lagomorfos son ESPECIES “PRESA”, por lo que su instinto es de alta vigilancia y comportamiento de fuga. En este sentido, debe considerarse como criterio general que los animales tienden a distraerse, inhibir su movimiento, asustarse o darse a la fuga por: la presencia de personas o animales desconocidos, los objetos sueltos o colgantes (por ejemplo, cadenas); n elementos brillantes en paredes y suelos, desniveles o declives bruscos en el piso; n los ruidos de diversa índole ocasionados dentro o fuera del ámbito de los animales; n los golpes directos o indirectos; n Senasa • 17 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL las corrientes de aire directas generadas por ventiladores o cortinas de aire en la cara de los animales; n la falta de iluminación en las zonas hacia donde se deben desplazar, sean mangas, rampas o corredores, y los espacios o callejones sin salida. n En el mismo orden, los SENTIDOS DE LA VISTA, AUDICIÓN Y OLFATO en los animales domésticos cobran gran importancia para la supervivencia y, en el contacto con los humanos, definen gran parte de las pautas de manejo de cada especie. Al respecto de la VISIÓN, es necesario saber que se configura en tres zonas o áreas diferentes: la ZONA o PUNTO CIEGO, donde el animal no puede ver, definido como el campo opuesto a la zona de visión binocular; n Figura 2. Zonas de la visión VISION DEL EQUINO la ZONA DE VISIÓN MONOCULAR, cuando deriva de la captación de un ojo en forma independiente, con importantes limitaciones en la profundidad captada; n área ciega la ZONA DE VISIÓN BINOCULAR, hacia el frente de la cabeza, captada en simultáneo por ambos ojos y generando una sola imagen a nivel cerebral que suele ser estrecha pero con más profundidad. n visión monocular visión monocular visión binocular El animal define con su visión la ZONA DE FUGA O ESCAPE como el espacio o distancia mínima a su alrededor a la cual permite que se les aproximen sin sentirse incómodo. Esta zona está directamente relacionada con el nivel de domesticación del animal y su impronta. En el manejo, la invasión de esta zona determinará que el animal se mueva (o fugue) en una dirección particular de acuerdo a la posición desde donde se ingrese a la misma. (Ver apartado 3.3). Por otro lado, la AUDICIÓN, en muchos casos incrementada por un movimiento direccional selectivo de las orejas, se suma a la visión en entornos o situaciones de baja luminosidad, mientras que el OLFATO cumple muchas funciones además de la detección de los predadores en su cercanía. Todas las especies animales tienen REGULARIDAD EN SU COMPORTAMIENTO DIARIO, el cual está definido por la cantidad de horas luz por día que influencian directamente su ritmo circadiano. Consecuentemente, salvo condiciones de crianza artificial confinada (estabulación completa), es normal que su comportamiento tenga variaciones con el paso de las estaciones del año. Asimismo, en todas las especies es normal que existan diferencias en el comportamiento entre machos y hembras, animales jóvenes y viejos, reproductores y animales castrados y hembras con cría y sin ella, más allá de la impronta que hayan tenido durante su aprendizaje. 18 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Los animales domésticos son GREGARIOS, es decir eligen vivir en grupos (rodeos, rebaños, parvadas), y se organizan socialmente por dominancia. Son mayoritariamente de apareamiento promiscuo –no se mantiene una pareja machohembra única durante su vida– con precocidad en los jóvenes y una esencia dócil en su temperamento. Con lo expuesto, debe atenderse que la organización y manejo de un establecimiento productor de animales domésticos debe contemplar la particularidad del comportamiento de cada especie, propiciando el desarrollo natural a diario. En todos los casos, la clave es MINIMIZAR LA GENERACIÓN DE ESTRÉS y consecuentemente preservar el bienestar, por lo que es fundamental planificar las actividades de manejo de los animales, sea la alimentación, abastecimiento de agua, revisión física, higiene de corrales o jaulas o maniobras zootécnicas para llevarlas a cabo en el menor tiempo y con el menor contacto posible. En este sentido, dado que se ha comprobado científicamente que la predictibilidad de los eventos aversivos permite disminuir la respuesta de estrés, es recomendable mantener rutinas sistemáticamente organizadas de manejo, especialmente cuando la crianza es artificial o confinada, permitiendo el acompañamiento de los animales con las respuestas aprendidas. Por último, la importancia de la alimentación como punto esencial en las rutinas diarias de los animales demanda que los animales siempre tengan adecuada disponibilidad de agua de bebida y alimentos de acuerdo a las necesidades metabólicas de la especie, categoría y tipo de producción, a lo cual debe sumarse una cantidad mínima de espacio físico por animal para minimizar los conflictos y alteraciones de comportamiento. Senasa • 19 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 3.2 COMPORTAMIENTO NATURAL Y ASPECTOS ESPECÍFICOS DEL MANEJO POR ESPECIE 3.2.1 BOVINOS Y BUBALINOS Estos son animales herbívoros y rumiantes que diariamente pastan cerca de 9 a 11 horas y beben de 25 a 80 litros de agua, dependiendo de la época del año, la altura de las pasturas, la categoría animal y la raza, en los cuales la rumia ocupa aproximadamente el 75% del tiempo de pastoreo. Existen razas índicas o europeas, siendo la primera de un temperamento más nervioso en la crianza pura o híbrida. En ambos casos eligen vivir en grupos (rodeos), lo cual debe ser considerado durante el manejo productivo. Se organizan socialmente por niveles de dominancia y jerarquías, por lo que la mezcla de grupos diferentes altera dicho orden y puede generar comportamientos de aceptación, rechazo con agresión o separación dentro de los grupos. Su comportamiento social depende de circunstancias como la edad, la etapa sexual o presencia de crías, a lo que se puede agregar el condicionamiento derivado de circunstancias agradables o desagradables previas. El hacinamiento les produce un malestar e incomodidad que se refleja en cambios de hábitos y conducta, que a su vez se manifiesta desde la indiferencia hasta la hostilidad entre los miembros del grupo. Es necesario que los animales cuenten con suficiente espacio propio para su categoría, tamaño y desarrollo corporal. En relación a sus sentidos, poseen: una audición muy aguda y sensible a sonidos de alta frecuencia, por lo que debe evitarse la exposición a estímulos acústicos disonantes o ajenos a su entorno; n una visión panorámica de aproximadamente 360º, con una zona binocular frontal y zonas monoculares a los lados; n un olfato refinado que permite el establecimiento de jerarquías y la distinción de estados fisiológicos entre individuos (sexualidad). n Los bovinos y bubalinos son animales con comportamiento rutinario. Se alimentan varias veces por día –más veces a menor edad–y beben agua entre 2 y 3 veces por día,; a su vez, sociabilizan hasta 3 horas diarias y ocupan varias horas descansando y rumiando. Como ya se explicó anteriormente, el conocimiento de la zona de fuga y punto de equilibrio definen la dirección del movimiento a la hora del manejo (Ver Figuras 3 y 4). 20 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Figura 3 cono gris, zona ciega límite de la zona de fuga 60º 45º 90º A Posición del operario para detener el movimiento del animal B Posición del operario para iniciar el movimiento del animal Punto de balance Cuando el arreador se para frente a este punto, el animal permanece inmóvil en la manga, si el arreador avanza hacia adelante del punto de balance, el animal retrocede; en cambio si el arreador se corre hacia atrás del punto de equilibrio, el animal avanza. punto de balance Figura 4 corral de encierro el ganado avanza cuando el trabajador cruza el punto de balance de cada animal CEPO Senasa • 21 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 3.2.2 ÉQUIDOS Los ÉQUIDOS (solípedos, asnos, mulos, burdéganos y cebras) se caracterizan por una vista aguda y un ángulo de visión muy amplio (ver Figura 5). Poseen capacidad de aprendizaje más allá de la época juvenil, aunque sus experiencias condicionan marcadamente su comportamiento a futuro. VISION DEL EQUINO área ciega visión monocular Figura 5 visión monocular visión binocular Es un animal de manada cuyo temperamento está configurado por su esencia de “animal presa”, por lo cual mantiene altos niveles de vigilancia y capacidad de anticipación emocional. En la manada define dos tipos de grupos: el reproductivo –conformado por el macho alfa, hembras y potrillos menores a 3 años y eventualmente padrillos subordinados– y el no reproductivo, conformado por machos jóvenes en grupos de 4 a 8 individuos. Dentro de los grupos elige la convivencia de a pares, definiendo un compañero prioritario con el que realiza sus actividades diarias. En relación a sus ritmos, es un animal de alimentación variada y selectiva por 12 horas diarias (alimentación extensiva), con 2 horas de desplazamientos y de 5 a 6 horas de reposo. Duerme parado alrededor de 3 horas diarias, etapa fundamental en los equinos para mantener su actividad fisiológica normal. La deprivación o alteración del sueño por un transporte prolongado, actividades deportivas continuadas o confinamiento en boxes pequeños (menores a 9 m2 por animal) le genera estrés y cambios de comportamiento. En la estabulación o confinamiento es una especie que se adapta mejor a corrales redondos, de preferencia cerrados o semicerrados, a uno abierto, con bebederos con libre disponibilidad de agua y cantidad de comederos de tamaño adecuado. En sus cuidados, requiere buena ventilación y contacto con el exterior, además de cama e higiene resguardada. Si el animal no tiene salidas al aire libre, la prevención de las estereotipias se puede realizar, entre otras medidas, mediante una mayor proporción de fibra en su dieta. Si el animal es vulnerado en su zona de fuga o se siente amenazado emprenderá la huida y eventualmente la pelea. El comportamiento de desmayo o inmovilismo es un indicador de un alto nivel de estrés no manifestado que debe ser observado y atendido al intentar maniobras de manejo. En el manejo de los equinos no se deben usar perros ni instrumentos inductores de movimiento eléctricos (picanas). El trabajo a pie mejora las respuestas. No hay que apurar, azuzar ni apremiar al caballo, tampoco generar movimientos repentinos que puedan asustarlos. 22 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Al igual que en otras especies, para hacer mover al animal, el operador debe penetrar en la zona de fuga y para detenerlo debe salir de esta zona. El punto de balance se encuentra en la cruz del animal. El equino se moverá hacia adelante si el operador está ubicado detrás del punto de balance y retrocederá si está ubicado delante de dicho punto. Según sus experiencias pasadas, la carga de los equinos resultará relativamente fácil o, por el contrario, ardua dependiendo de si los animales poseen experiencia o si asocian la operación de carga a condiciones de transporte difíciles. En el caso de que la carga se dificulte, dos operarios cuidadores de animales con experiencia podrán cargar el animal asiéndose del brazo o colocando una correa de cuero bajo la grupa. También podrá ser útil vendar los ojos del animal. Las rampas deberán tener poca pendiente. Los escalones no suelen plantear problemas al subir pero, al bajar, los caballos tienden a saltar, por lo que convendrá que los escalones sean lo más bajos posible. Aunque es preferible transportar los caballos en boxes individuales, podrán ser transportados en grupo, siempre y cuando sean compatibles. En ese caso, los equinos deben ser desherrados para el transporte. Figura 6 Finalmente, en el caso de caballos remitidos a faena, debe destacarse que el estrés genera cambios fisiológicos que afectan la canal y su carne, llevando a problemas en la calidad como hematomas y carnes PSE (pálidas, blandas y exudativas) y DFD (oscuras, firmes y secas). Senasa • 23 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 3.2.3 PORCINOS Los cerdos se caracterizan por su vista deficiente y una alta sensibilidad a los ruidos y a sufrir estrés por temperaturas extremas, principalmente calor o errores de manejo, como por ejemplo el uso de la picana eléctrica. Por el contrario, poseen un olfato desarrollado para el reconocimiento individual y el establecimiento de jerarquías. Son animales que muestran cierta resistencia a desplazarse si el entorno no les resulta familiar y que presentan comportamiento agresivo cuando se mezclan individuos de diferentes lotes o se encuentran confinados con poco espacio por animal (alta densidad), lo cual puede llevar a mordeduras de orejas y colas (canibalismo). Estos animales presentan un alto nivel de vocalización, chillando y gritando cuando se sienten amenazados, molestados o tienen dolor. Los cerdos tienen limitaciones para subir pendientes pronunciadas, por lo que en las maniobras de carga y descarga las rampas deben tener la menor pendiente posible. Por su visibilidad limitada debe propiciarse buena iluminación para el movimiento. En los corrales de encierre, el uso de formatos redondos con puertas tijera es apropiado. Debe atenderse que los embudos de ingreso a las mangas no funcionan en los cerdos y genera atoramientos, por lo que los ingresos deben ser abruptos. Figura 7 Al igual que en otras especies, debe atenderse la zona de fuga y el punto de balance. Vulnerando la zona de fuga en la parte posterior del punto de balance el animal avanzará, deteniéndose cuando sale de esta zona. En la práctica, el movimiento en la manga se realiza de adelante hacia atrás siendo que, cuando el operario pasa por el punto de equilibrio dentro de la zona de fuga el animal se desplazará hasta adelante. 24 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 3.2.4 OVINOS Y CAPRINOS Los OVINOS Y CAPRINOS son especies de naturaleza sociable, vista aguda, excelente audición y fuerte tendencia gregaria. Esta última condición debe ser aprovechada para manipularlos y transportarlos. Al separarles del grupo para inspecciones individuales, los animales se agitan y forcejean para volver al rebaño. Conviene, por tanto, evitar toda actividad que pueda asustar, herir o agitar a los animales. En particular, las cabras son animales hostiles a la introducción de nuevos individuos en el grupo, pudiendo provocar víctimas, sea por agresiones físicas o porque las cabras más débiles son impedidas en el acceso al agua y a los alimentos. Las ovejas y cabras son conscientes de sus alrededores (potreros, vegetación, aguadas, instalaciones, perros, personas y actitudes) y pueden reconocer los rostros de diversos individuos y si, por ejemplo, estos son amigables o no o, por el contrario, están tensionados y los recuerdan negativamente por varios años o durante toda la vida. A su vez reconocen voces y olores que, junto con la cara del hombre, forman un complejo sistema que debe funcionar lo más adecuadamente para no provocar estrés y resistencia y de esta manera realizar un trabajo más eficiente y en menos tiempo. Así mismo, reconocen a sus congéneres y se establecen relaciones grupales, familiares entre hembras, hijas, camada y entre otras camadas, que el hombre debe respetar y no tratar de romper. cono gris, zona ciega Figura 8 límite de la zona de fuga 60º 45º 90º A Posición del operario para detener el movimiento del animal B Posición del operario para iniciar el movimiento del animal Punto de balance Al igual que en las otras especies, su movimiento se puede generar invadiendo su zona de huida (Figura 8). Si deseamos que avancen debemos situarnos atrás de él y si queremos que retroceda nos debemos situar frente de él. Los grupos de ovinos se movilizan haciendo curvas, comportamiento que se debe considerar al momento de arrear a una majada. Senasa • 25 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL En la figura 9 se ejemplifica a través de flechas, la dirección en que debe desplazarse el operador para que los animales avancen en la manga. Cuando el operador se desplaza en el sentido de las flechas, los animales avanzan. Cuando llega al último animal, se aparta de la manga y retorna, separándose de la línea de fuga siguiendo el sentido de las flechas, luego se acerca nuevamente a la manga y reinicia el circuito. Figura 9 Por último, cabe resaltar la importancia del manejo, arreo y transporte de ovinos en grupos, sumando además los momentos donde se realizan prácticas zootécnicas, revisaciones o tratamientos veterinarios en donde el movimiento grupal minimiza la generación de estrés. 26 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 3.2.5 AVES Las AVES DE PRODUCCIÓN DOMÉSTICA (Gallus gallus) son naturalmente gregarias y han perdido gran parte de la facultad del vuelo debido a la selección artificial del ser humano. Si bien los ejemplares domésticos casi nunca hacen uso de su facultad de vuelo, las gallinas domésticas criadas en semilibertad vuelan a sitios elevados para pasar la noche. Los gallos domésticos pueden llegar a ser territoriales y violentos en algunas razas, aunque usualmente son buenos animales de compañía y fáciles de amansar mediante alimentación a mano. El Gallus gallus posee un sistema social característico con un orden jerárquico que comienza a desarrollarse a la semana de vida, y que a las siete semanas ya está completamente establecido. Hay un macho dominante, que domina sobre todos los demás, y un macho sometido a todos. Las gallinas tienen un orden jerárquico independiente y no entran en la dominancia de los machos. En la cría extensiva estos animales tienen hábitos caníbales, si ven el color rojo debido a una lastimadura en otra gallina las demás no dejan de picotearla, causándole graves daños. Estas aves presentan capacidad cognitiva espacial, percepción del tiempo y del contexto y de aprendizaje social. Si hay un solo gallo en el grupo, este ocupará de forma natural el primer puesto y las hembras tendrán un escalafón por debajo de él. Si no hay un gallo, las gallinas determinarán su orden jerárquico con picotazos y peleas que pueden ser violentas. Cuanto mayor sea el grupo, más complicado y largo será este proceso. Poseen una zona de fuga y punto de equilibrio que guardan relación con el campo visual, por eso, deben ser tenidos en cuenta a la hora de manejar a los animales. En un manejo grupal, la oscilación del operario marcará la línea de movimiento del conjunto de aves. En las granjas, las aves se alimentan varias veces al día dado que son monogástricos, con un tracto gastrointestinal relativamente corto y un tiempo de tránsito del alimento reducido (de 3 a 4 horas). Estos animales carecen de buen olfato y gusto, por lo que la selección del alimento está influenciado por el tamaño de la partícula. Las gallinas son estrictamente diurnas debido a la influencia de la luz en su rutina diaria y en su ciclo biológico de reproducción. Estos dos factores son directamente proporcionales entre sí, por ejemplo, cuando la luz desciende –fotoperíodo negativo o decreciente-, induce el descanso del aparato reproductor y la muda de plumas como condición ancestral de mejora del plumaje; ocurre lo contrario cuando la luz asciende –fotoperíodo positivo o creciente–. La sensibilidad a la luz debe ser tenida en cuenta a la hora de la manipulación de las aves. Por lo tanto, se sugiere realizar el trabajo en penumbra cumpliendo con los criterios de manejo silencioso, calmo y con una correcta manipulación de cada animal. Senasa • 27 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 3.2.6 LAGOMORFOS Los CONEJOS Y CHINCHILLAS son animales con comportamiento diurno, lo que significa que se alimentan y realizan toda su actividad durante el día. Utilizan madrigueras para su protección y reparo y tienen el hábito de roer, ambas condiciones que deben ser atendidas en su crianza artificial. Son animales que tienen camadas numerosas varias veces al año, poseen hábitos sociales y establecen jerarquías ya que la conformación de grupos mejora la producción y su bienestar. Dentro de su comportamiento normal pueden mencionarse: 4 los saltos, correteos y brincos (cabriolas); 4 los chillidos agudos, como expresión de nerviosismo extremo ante una situación de peligro; 4 el pataleo en una situación de nervios para advertir un peligro y marcar el territorio; 4 marcaje del territorio, frotando su barbilla en la zona de dominancia, lo que en la jaula se observa en el comedero, el bebedero y las barras de la jaula (también lo realizan con la orina, especialmente los machos, en los momentos previos a la cópula o también en conejos agresivos). Las alteraciones de comportamiento por el confinamiento en jaulas suelen manifestarse a través de excavaciones en el rincón de la jaula, mordisqueos y/o acicalamiento excesivo, pudiendo evitarse o reducirse al enriquecer el ambiente con maderas para roer, juguetes de plástico, cajas de cartón vacías, bloques de heno, latas, tubos de PVC, pelotas y objetos colgantes o, mejor aún, alojando a los conejos en grupo. Su manipulación no representa problemas si la técnica de agarre es correcta. Para su traslado en jaulas es necesario cuidar la densidad animal y las relaciones sociales para evitar peleas. 28 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 3.3 ARREO Y MANEJO EN GRUPO EN ESPECIES MAYORES Y MENORES Como ya se presentó anteriormente, el conocimiento de la ZONA DE FUGA es clave para propiciar el movimiento de los animales, dependiendo el movimiento en relación con el PUNTO DE EQUILIBRIO o BALANCE y el PUNTO CIEGO. El PUNTO DE EQUILIBRIO, como línea imaginaria a la altura de la cruz del animal, permite darle dirección a la marcha de acuerdo de la posición desde la cual se invada la ZONA DE FUGA: si el cuidador lo hace por detrás de su punto de equilibrio el animal avanzará, mientras que si lo hace desde delante, el animal retrocederá. El posicionamiento del operador en el PUNTO CIEGO puede no desencadenar una respuesta si no observa el movimiento de acceso en esta zona, o si realiza el movimiento de giro –el animal da vuelta en busca de visibilidad– en caso de observar el inicio de movimiento y perder a la persona del campo visual. Para el DESPLAZAMIENTO DEL GANADO, la orientación, salida o el paso del animal que lleva la delantera deben estar despejados. Al ser animales de manada se pondrán nerviosos si el grupo se separa, por lo que es recomendable intentar mantenerlos unidos. El manejo del ganado debe ser calmo, evitando los gritos o ruidos agudos. En caso de utilizar sonidos, se recomienda que sean silbidos, sonidos guturales o voces suaves y monótonas. Se deberá aguardar que los animales se orienten y avancen o sigan a otros y se evitará emplear la fuerza con animales que carecen de espacio suficiente para moverse o se toman su tiempo antes de hacerlo. Por lo general las tropas se organizan espacialmente en tres grupos: la cabeza formada por pocos animales que abren el paso, el cuerpo por animales dominantes y gran cantidad del grupo dominado, y la cola con animales viejos, muy jóvenes y enfermos. En este sentido, es importante entender que no debe presionarse a los animales de la cola porque no irán sobre los dominantes y determinará su fuga lateral de la manada o eventualmente su retroceso. En base a lo expuesto, pueden rescatarse las siguientes recomendaciones: 4 Trabajar sin apuro, en silencio, sin ruidos, gritos o sonidos agudos. 4 Prescindir del personal agresivo o miedoso. 4 No tirar de la lana, cola, extremidades o cabeza de los animales. 4 No usar perros agresivos o sin entrenamiento. 4 No agredir a los animales, azotarlos o usar la picana. 4 No azuzarlos o presionarlos de manera individual o grupal. 4 Trabajar de pie o desde afuera en los corrales. Senasa • 29 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Recuerde que se requiere un mínimo esfuerzo para mantener el movimiento espontáneo del grupo y evitar distracciones o retrocesos que requieran volver a encauzarlos. Toda vez que sea posible, y sin que represente un riesgo para el trabajador, los animales serán conducidos por un OPERARIO A PIE, sin perros ni caballos y respetando la velocidad de la marcha al paso de los animales. En estos casos, se recomienda la estimulación del desplazamiento mediante el USO DE INSTRUMENTOS INDUCTORES AUTORIZADOS (ver apartado 3.3.1). El USO DE PERROS únicamente debe realizarse en establecimientos productores con canes entrenados que realicen su trabajo sin morder y con un mínimo de ladridos –recurso común en producciones ovinas y caprinas–. En lugares de concentración de ganado o remates feria está prohibido utilizar perros. Por otro lado, el trabajo de los OPERARIOS A CABALLO debe ser cuidadoso, acompañando el movimiento natural de los animales. El jinete no debe utilizar la fuerza o cuerpo del equino para empujar, forzar el avance o apretar a los animales contra las instalaciones. Al momento del ENCIERRE, los corrales deben llenarse a medias, trabajando en pequeños grupos que permiten el movimiento de operarios dentro sin generar agitaciones o estrés exagerado en los animales. Para el INGRESO A LA MANGA es recomendable que la misma esté vacía. Las puertas deben estar abiertas para incentivar el avance de los animales que están en la parte de adelante y evitar presionar a los animales del fondo. El uso de PAREDES CIEGAS mejora el avance al minimizar las distracciones. Por último, el VOLTEO o inmovilización con lazo, sea con hombres a pie o a caballo, debe ser practicado con los cuidados particulares de esta maniobra, especialmente al momento de la caída, contando con los elementos necesarios para la revisión o intervención veterinaria en el animal con el fin de minimizar el tiempo en el suelo. A este respecto, el correcto enlazado de las patas y posterior inmovilización debe cuidar la presión aplicada sobre los miembros del animal. Cuando la técnica utiliza un poste frontal, se debe sumar además la tensión ejercida sobre el cuello y cabeza del animal al estar en el suelo. Finalmente, y en caso de revisiones de parasitosis que comúnmente dejan la mano superior libre, debe atenderse su adecuada contención en cuanto al riesgo para las personas cercanas al animal. Es importante considerar cubrir los ojos del animal durante la revisión o intervención para minimizar su estrés. 30 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 3.3.1 USO DE INSTRUMENTOS INDUCTORES DE MOVIMIENTO La asistencia en el arreo de los animales mediante el uso de instrumentos inductores de movimiento debe realizarse cumpliendo las premisas básicas de arreo de los animales y las particularidades de cada especie, cuidando además que el instrumento o elemento no genere molestia innecesaria o lesión en los animales. En este sentido, es CORRECTO utilizar: a) banderas; b) rebenques de lonja ancha; c) varas plásticas o flexibles en cuyo extremo se atan bolsas, cintas o tiras de plástico que con el roce producen un ruido que moviliza a los animales; d) sonajeros o cencerros de material apropiado que estimulan el movimiento en respuesta al sonido; o e) porras de lona. En todos los casos, su uso NO implica el contacto con el animal sino que facilita el manejo sobre el PUNTO DE BALANCE y la ZONA DE FUGA. Por el contrario, NO DEBEN USARSE elementos contundentes rígidos, grandes o con extremos puntiagudos tales como bastones con extremos puntiagudos, cintas o tubos metálicos, látigos, cadenas, arreadores, alambres o correas para golpear a los animales, así como tampoco emplear perros no entrenados para ayudar al movimiento del ganado. El USO DE LA PICANA ELÉCTRICA SE ENCUENTRA RESTRINGIDO A BOVINOS y CERDOS ADULTOS 1, y debe ser una excepción para situaciones en donde el animal disponga de espacio suficiente para moverse y otros estímulos no hayan cumplido esta finalidad o cuando el operador está en riesgo de ser atacado. En el caso de la VACA LECHERA no se recomienda usar la picana eléctrica debido a su susceptibilidad al estrés e impacto sobre la producción de leche. Solo deben utilizarse picanas accionadas por pilas, que se encuentren registradas y aprobadas por el Senasa, cuya potencia nunca exceda los 12 voltios 2. Se encuentra prohibido conectar la picana o elemento similar a la red troncal de electricidad, o utilizar electrodos puntiagudos o afilados. Recuerde que NO ES APROPIADO EL USO DE LA PICANA EN EQUINOS, OVINOS, CAPRINOS Y ANIMALES JÓVENES DE TODAS LAS ESPECIES. El buen uso de la picana se realiza aplicando la misma en los cuartos traseros, presionando los electrodos redondeados o romos sobre el cuero del animal, en un impulso que no debe superar un (1) segundo de duración. No es correcto su uso en la cabeza, orejas, ojos, boca, región anogenital, prepucio, escroto o vientre. 1  El uso de la picana en remates feria y concentraciones de hacienda se encuentra regulado por la Resolución Senasa No. 25/2013. 2  La Resolución Senasa No. 25/2014 establece este límite en virtud de los instrumentos disponibles en el mercado que utilizan 4 baterías de 3 voltios cada una. No obstante, debe resaltarse que el uso de un instrumento diferente nunca debe superar los 50 voltios de potencia máxima. Senasa • 31 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 32 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4. TENENCIA Y PRODUCCIÓN PRIMARIA DE ANIMALES DOMÉSTICOS 4.1 RESPONSABILIDADES DE LOS ACTORES 4.1.1 PRODUCTOR o TENEDOR DE ANIMALES / COOPERATIVA DE PRODUCTORES / CENTROS DE GENÉTICA / CABAÑAS / HARAS / ESTABLECIMIENTOS DE CRÍA DE REPRODUCTORES (PADRES Y ABUELOS) 4 Garantizar el cumplimiento de los principios de bienestar animal de los animales de su propiedad y/o tenencia indistintamente del tiempo que transcurra y en consistencia con la especie y tipo de producción. 4 Propiciar que el personal de su establecimiento conozca y cumpla estos principios de bienestar animal. 4 Diseñar, construir y mantener adecuadamente las instalaciones apropiadas para la crianza de animales de producción de su elección. 4 Velar por la atención médica veterinaria de los animales por parte de un profesional veterinario matriculado. 4.1.2 PERSONAL DE CAMPO/PEONES Y CUIDADORES DE ANIMALES 4 Cumplir con el manejo de los animales conforme los principios de bienestar animal establecidos para la especie y tipo de producción llevada a cabo en el establecimiento. 4 Hacer uso apropiado de las instalaciones, propiciando su adecuado mantenimiento para garantizar el bienestar de los animales. 4.1.3 MÉDICO VETERINARIO 4 Cumplir los principios de bienestar animal en los animales que asista en tratamientos profilácticos o médicos, incluyendo la vacunación y el sacrificio humanitario. 4 Propiciar el conocimiento y cumplimiento de los principios de bienestar animal por parte de los propietarios, tenedores y personal vinculado al manejo de animales de producción. Senasa • 33 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4 Notificar al Senasa la constatación de situaciones inconsistentes con el bienestar animal. 4.1.4 ASOCIACIONES DE PRODUCTORES y ENTIDADES AGROPECUARIAS 4 Propiciar la difusión y conocimiento de los principios de bienestar animal asociados a la producción de animales para consumo humano. 4 Realizar la capacitación de sus asociados en esta materia conforme sea definido. 4.1.5 USINAS LÁCTEAS 4 Propiciar la difusión, capacitación y cumplimiento de los principios de bienestar animal asociados a la producción de animales productores de leche en los tambos proveedores, generando incentivos para la atención de los principios de bienestar animal. 4 Impulsar el abastecimiento de tambos que cumplan con los principios de bienestar recomendados en este manual. 4.1.6 SENASA 4 Gestionar el registro de establecimientos y actividades productivas de los mismos en todo el país. 4 Validar y controlar el cumplimiento de los requisitos de infraestructura y manejo productivo de los establecimientos productores de animales para consumo conforme los criterios específicos de bienestar animal establecidos para cada especie y tipo de producción. 4 Establecer programas sanitarios por especie animal y garantizar su cumplimiento en consistencia con los lineamientos establecidos y el tipo de producción. 34 • Senasa 4 Velar por el cumplimiento de los tratamientos veterinarios y su registro por parte de profesionales veterinarios matriculados. 4 Llevar a cabo acciones de capacitación y concientización de los productores, empleados rurales y médicos veterinarios respecto del bienestar animal en especies productoras de alimentos. �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.2 ASPECTOS GENERALES EN LA TENENCIA Y PRODUCCIÓN DE ANIMALES PARA CONSUMO HUMANO 4.2.1 TENENCIA DE ANIMALES CON FINES DEPORTIVOS, EDUCACIONALES O RECREATIVOS La tenencia de animales aún fuera de una finalidad productiva de alimentos para consumo humano debe respetar los principios y recomendaciones generales presentados en los capítulos 2 y 3. El mayor contacto con los animales favorece su domesticación y mansedumbre a la hora del manejo, sin embargo, no por esto existen cambios en sus necesidades de bienestar animal, por lo que es recomendable atender las características de cada especie, tipo y finalidad del animal a fin de cumplir con las recomendaciones en esta materia. Es muy importante considerar que todo tratamiento veterinario realizado en un animal debe estar supervisado por un profesional veterinario y correctamente documentado, dado que la posibilidad de remitir el mismo a faena al finalizar su vida útil puede implicar restricciones vinculadas con el uso de ciertos productos veterinarios por su impacto potencial en la salud de los consumidores. 4.2.2 ORGANIZACIÓN DE UN SISTEMA DE PRODUCCIÓN Cuando se organiza un SISTEMA DE PRODUCCIÓN deben tenerse en cuenta algunos principios generales que hacen al bienestar de los animales: 1. Realizar una selección genética que tenga en cuenta el tipo de producción y las condiciones de crianza y sanidad demandada. 2. Priorizar la adaptación de los animales al clima local y a las condiciones ambientales como enfermedades, parásitos y disponibilidad de alimento, según sea el caso. 3. Considerar aspectos de la geografía y los suelos para proyectar el bienestar en caminatas, descansos y alimentación. 4. Consentir el agrupamiento social de los animales, favoreciendo comportamientos positivos de la especie producida. 5. Cuidar las condiciones de estabulación –como la calidad del aire, la temperatura y la humedad–para contribuir a una buena sanidad animal y no generar un factor negativo de bienestar. Cuando se presentan condiciones extremas, no se debe impedir que los animales utilicen sus métodos naturales de termorregulación, reforzando para esto la alimentación. 6. Disponer de comederos y bebederos según las necesidades del tipo y categoría animal para minimizar los conflictos de acceso a los mismos. 7. Adoptar un plan sanitario integral y anual contra enfermedades y parásitos, propiciando la atención profesional veterinaria o el sacrificio humaSenasa • 35 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL nitario cuando corresponda. De existir dolor, el mismo debe ser tratado mediante las técnicas veterinarias paliativas existentes. 8. Realizar un manejo de los animales de manera positiva siguiendo las consideraciones particulares sobre el comportamiento y los principios de manejo de cada especie. 9. Contar con un RESPONSABLE DEL BIENESTAR DE LOS ANIMALES en el trabajo diario, por sobre la responsabilidad primaria del dueño o tenedor de los mismos, para atender estratégicamente el cumplimiento de las buenas prácticas. Capacitarlo apropiadamente y en forma periódica es esencial para el desempeño de su función. 4.2.3 INSTALACIONES, MANEJO, ALIMENTACIÓN, SANIDAD, BIOSEGURIDAD Y ATENCIÓN MÉDICA VETERINARIA Conforme se presenta en el capítulo 2, las instalaciones deben estar diseñadas acorde a la especie animal y tipo de producción. Alambrados, corrales, mangas, tranqueras o cepos inapropiados, rotos o con mecanismos fallados no solo dificultan el trabajo diario con los animales, sino que además comprometen la seguridad de los operarios. Asimismo, debe destacarse que respetar las buenas prácticas de uso de las instalaciones con partes móviles es clave tanto para su durabilidad como para evitar la generación de lesiones o estrés en los animales. Para evitar lesiones, no se deben utilizar las tranqueras para presionar a los animales o el cierre del cepo o los peines de las mangas de manera progresiva. El manejo de los animales y su alimentación debe respetar los principios generales de bienestar animal, atendiendo las particularidades de comportamiento de cada especie conforme al Capítulo 3 y las especificidades de cada especie y tipo de producción que se presentan en el apartado 4.3 del presente capítulo. En el mismo sentido, la atención sobre la sanidad mediante un plan sanitario preventivo y la adopción de procedimientos de bioseguridad resultan clave para prevenir el ingreso de enfermedades y consecuentemente la alteración del bienestar de los animales. Es importante propiciar la atención médica veterinaria en animales convalecientes por lesiones o enfermedades específicas, esto resulta fundamental en materia de bienestar y trato humanitario con el fin de minimizar el sufrimiento y dolor. Finalmente, en todas las especies es importante controlar la presencia de animales predadores tanto domésticos como salvajes (por ejemplo, el caso de los PERROS CIMARRONES en la producción ovina y caprina, especialmente en épocas de partos y cría al pie). Recuerde que existen regulaciones de protección de la fauna silvestre, en muchos casos especies predadoras en extinción, que deben ser atendidas aun cuando exista un daño sobre la producción y/o la propiedad privada. 36 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.3 ASPECTOS PARTICULARES POR ESPECIE Y TIPO DE PRODUCCIÓN Los centros de genética, cabañas, haras y establecimientos de cría de reproductores (padres y abuelos) deben ser abordados cumpliendo los mismos principios que se exponen a continuación para cada especie y tipo de producción. Es importante remarcar que su finalidad demanda un completo cuidado del bienestar animal tanto para maximizar la expresión del potencial genético como para propiciar un adecuado desempeño posterior de los reproductores durante su producción. 4.3.1 BOVINOS DE CARNE Los bovinos son la especie de referencia en la producción de animales para consumo en la Argentina. Indistintamente del sistema de producción, los aspectos zootécnicos de destete, castración, descorne y marcación son prácticas comunes que deben ser atendidas por la necesidad de manejo del dolor y estrés de los animales. El DESTETE, como etapa donde el ternero pasa de una dieta a base de leche a una dieta a base de fibras y/o concentrados, representa un momento de estrés más allá del tiempo que haya pasado al lado de la madre; en este sentido, seguir ciertas técnicas de manejo, como el uso de vacas adultas secas de acompañantes, puede ayudar a minimizar el estrés. El cumplimiento de los criterios de bienestar se ve reflejado en indicadores generales como son la tasa de morbilidad, la tasa de mortalidad, el comportamiento de los terneros durante el proceso, el aspecto físico general y su condición corporal, además de los cambios de peso que puedan darse. La CASTRACIÓN –como técnica realizada para reducir la agresión entre animales, mejorar su manejo, maximizar el engorde y lograr la eficiencia de la producción– debe realizarse entre el mes del nacimiento y los seis (6) meses de edad de los terneros. La misma debe ser practicada por médicos veterinarios o técnicos entrenados, cobrando especial importancia cuando esta edad es superada, ya que se trata de una intervención quirúrgica que debe ser realizada por un médico veterinario capacitado en cirugía de grandes animales. El DESCORNE es una práctica implementada para mejorar el manejo de los animales en los rodeos y minimizar las probabilidades de lesiones, tanto de operarios como de los propios animales. Es aconsejable descornar antes de los catorce (14) días, cuando los cuernos todavía están en formación y, al no existir una inserción al cráneo, deriva en un menor traumatismo de los tejidos y una más simple intervención. Los métodos sugeridos para realizar el descorne son la cauterización directa con hierro caliente del botón o protuberancia córnea (“tocos”) o la extirpación superficial a cuchillo dentro de los primeros días de vida. Esto es importante puesto que con la cornamenta ya desarrollada será necesario una intervención quirúrgica practicada por un médico veterinario. Senasa • 37 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4.3.1.1 PRODUCCIONES EXTENSIVAS Las producciones extensivas recrean en mejor medida las condiciones naturales de vida de los animales, por lo que respetando su condición gregaria, la disponibilidad de agua, alimento y reparo, y el manejo adecuado por parte de los operarios rurales, el bienestar animal estaría correctamente contemplado conforme las Cinco Libertades. 4.3.1.2 PRODUCCIONES SEMI-INTENSIVAS E INTENSIVAS (ENGORDES A CORRAL DE ANIMALES o ESTABULACIÓN DE REPRODUCTORES -DE CARÁCTER TEMPORAL O PERMANENTE-) El encierre para la terminación del engorde o estabulación de reproductores de manera temporal o permanente es una práctica común en la ganadería argentina que demanda consideraciones específicas en relación con el bienestar animal. En primer lugar, el encierre de los animales en corrales debe respetar la superficie mínima por animal que redundará en el acceso a los comederos y bebederos de manera apropiada. Es importante que los animales cuenten con reparo y sombra, y que los bebederos se encuentren en zonas altas del terreno para evitar el encharcamiento. En este mismo sentido, es recomendable que los bebederos estén sobre una superficie de cemento con pendiente adecuada según la localización. Sumado a esto, debe considerarse el EFECTO SUELO derivado de la acumulación de estiércol y orina en la superficie que conlleva al enterramiento de los animales, la afectación de los miembros y pezuñas y la falta de higiene general de los animales. En este sentido, el diseño de los corrales debe considerar una pendiente mínima del 1% para el escurrimiento de residuos, además de la construcción con pisos consolidados, y la adopción de un procedimiento estandarizado de higiene de los corrales y animales por parte del productor o empresa pecuaria. En este mismo sentido, debe entenderse que el hacinamiento animal y las condiciones de producción a corral favorecen la presentación de enfermedades infecciosas, parasitarias o metabólicas que deben ser atendidas por un médico veterinario con las particularidades de cada caso. Finalmente, para el caso de animales estabulados debe cuidarse la superficie por animal, la disponibilidad de agua de bebida y comida en cantidad apropiada, la iluminación y ventilación adecuada, la higiene del ambiente, el tipo de piso y/o cama provista y el acceso al aire libre, entre otros. Se debe recordar que el encierre prolongado modifica el comportamiento natural hacia el desarrollo de estereotipias que pueden prevenirse con salidas al exterior, factores de enriquecimiento ambiental o el acompañamiento con otros individuos. 38 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.3.1.3 INDICADORES ESPECÍFICOS DE BIENESTAR EN BOVINOS DE CARNE ASPECTOS INDIVIDUALES 4 Aspecto general, condición corporal y peso del animal. 4 Suciedad (barro), especialmente en engordes a corral (feedlot). 4 Conducta de alimentación; presencia de hambre y sed; presencia de miedo y conducta de fuga. 4 Dolor o evidencia del mismo por intervenciones zootécnicas reali- zadas (marcación, castración, descorne). 4 Presencia de deshidratación, alteraciones de la respiración o estrés térmico. 4 Enfermedades metabólicas asociadas a déficit nutricional vitamínico o mineral; intoxicaciones por plantas o productos tóxicos, timpanismo o empaste, entre otras. 4 Enfermedades infecciosas (queratoconjuntivitis, enfermedades respiratorias, carbunclo, entre otras). 4 Enfermedades parasitarias (garrapatas, piojos, mosca de los cuer- nos, sarna). 4 Condición de la piel, con atención a los genitales (testículos, ubres). 4 Problemas en el periparto como retención de placenta, metritis, desgarros de vagina. 4 Movilidad y presencia de lesiones clínicas o subclínicas en patas (cojeras). 4 Tratamientos veterinarios y nivel de uso de analgésicos y anti- bióticos. 4 Presencia de rumia normal. ASPECTOS GRUPALES (comportamiento social) 4 Dinámica y distribución del rodeo. 4 Densidad animal. 4 Cabeceos y lamidos. 4 Peleas y disputas de dominancia y agresividad. 4 Alteraciones del comportamiento y estereotipias. 4 Nivel de rumia. 4 Nivel de descanso y pastoreo en el rodeo. RESPUESTA AL MANEJO 4 Velocidad de movimiento y comportamiento ante el arreo. 4 Velocidad de movimiento en los bretes de contención, ingreso y salida de la manga. 4 Cantidad de resbalones y caídas. 4 Nivel de vocalización. Senasa • 39 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4 Comportamiento de los operarios en el arreo: gritos y golpes por parte del personal; presencia de perros agresivos o no entrenados; uso de instrumentos autorizados y no autorizados (picana, cadenas, elementos rígidos y punzantes) para inducir el movimiento. INDICADORES PRODUCTIVOS Y REPRODUCTIVOS 4 Tasas de morbilidad por lesiones, cojeras, problemas metabólicos (acidosis, cetosis, hipocalcemias), diarrea, tos, resfrío, entre otras. 4 Tasas de mortalidad como valores discretos y en series temporales (mensual o anual) por categoría animal. 4 Muertes perinatales. 4 Intervalo entre partos, tasa de concepción, tasa de abortos, tasa de distocias. 4 Producción de carne (ganancia diaria de peso). ASPECTOS DE INFRAESTRUCTURA, EQUIPAMIENTO Y AMBIENTE ASOCIADOS AL CONFORT ANIMAL 4 Estado de las instalaciones básicas, como caminos, corrales, alam- brados, reparos, mangas, cepos, corrales de encierre, rampas, y otros. 4 Cantidad y calidad de comederos y bebederos. 4 Condiciones de estabulación, de corresponder. 4 Presencia de insectos, plagas y animales silvestres incompatibles con la especie (predadores entre otros). 40 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.3.2 BOVINOS DE LECHE (TAMBO) Los sistemas de producción de vacas lecheras pueden ser pastoriles, semipastoriles o intensivos (en confinamiento), dependiendo del nivel de intensificación y suplementación diaria que se brinde a los animales. En particular, los sistemas en confinamiento se pueden realizar en “corral seco” (dry lot en inglés) o en “establos de confinamiento” (free stall en inglés), utilizando en ambos casos corrales de diferente tamaño para albergar vacas de manera temporal o permanente. En todos los casos deben existir suelos con pendientes adecuadas de un 2% y una superficie mínima por animal de 30 a 40 m2. El bienestar de la vaca lechera debe propiciar el normal comportamiento individual y social de los animales, en donde pasa echada entre 12 y 14 horas por día, descansando en periodos que oscilan entre una y tres horas en los cuales realiza la rumia –como fase clave de la digestión que redunda en la producción de leche y actividad metabólica general del individuo– hasta un 60 o 70% del tiempo. Normalmente una vaca llega a dormir lapsos de 30 minutos por día. Desde el aspecto del COMPORTAMIENTO SOCIAL, las vacas lecheras generan grupos basados en jerarquías, que demandan un ambiente apropiado tanto en superficie por animal como en el cuidado de las condiciones de producción para evitar el estrés por peleas de liderazgo y sus consecuencias. En este sentido, es importante generar rodeos de vacas primíparas separadas de las multíparas para mejorar el confort social de ambas categorías. La vaca lechera es muy sensible al ESTRÉS CALÓRICO por lo cual se deben adoptar ciertas medidas para su minimización, como son: 4 Proveer de sombra, natural y/o artificial, móviles o fijas, en todas las categorías de animales (en producción, cría y recría) y en todos los lugares del establecimiento, particularmente los corrales de espera y alimentación, potreros y zona de periparto. 4 Brindar agua de bebida en cantidad (100 a 150 litros por día por animal) y calidad química y microbiológica apropiada, a través de bebederos funcionales estratégicamente ubicados en las instalaciones y que sean de fácil acceso para los animales. 4 Utilizar cantidades apropiadas de ración –de manera tal que no sobre alimento de la ración previa– y disponerlo en zonas sombreadas que no desincentiven la alimentación de los animales. 4 Facilitar el pastoreo en horarios adecuados (tarde o noche) cuando las temperaturas son más bajas; junto a esto planificar “dietas frías” para proveer menor calor metabólico y preservar la salud nutricional. 4 Evitar caminatas largas durante los momentos de mayor calor del día (hacia el mediodía) ya que predisponen al estrés calórico y adaptar consecuentemente los horarios de ordeñe. 4 En las zonas de ordeñe –corral de espera y de suministro de alimentos– garantizar la apropiada ventilación y, en lo posible, la aspersión de agua para refrescar a los animales. Senasa • 41 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Dado el punto crítico que resulta la provisión de agua de bebida, los BEBEDEROS deben estar diseñados para proveer agua en simultáneo con la mayor cantidad de animales, a razón de 60-75 cm por vaca y 1 bebedero cada 10 animales, con rápida recuperación del volumen de funcionamiento considerando un consumo medio por animal de 15-20 litros de agua/minuto. La altura de los bebederos varía entre 60 y 80 cm, estos no deben superar el 60% de la altura a la cruz del animal y una profundidad de entre 20 y 30 cm con el fin de garantizar una apropiada reserva sin generar estancamiento en el fondo y calentamiento innecesario del agua. Los bebederos deben poseer un orificio que permita su vaciado completo y posterior limpieza. Operativamente, el nivel máximo del agua debe quedar calibrado entre 5 y 10 cm del borde superior del bebedero para evitar vuelcos y desbordes. En caso de planear el aumento en la disponibilidad de agua, es preferible aumentar la reserva con más longitud de los bebederos antes que por medio de una mayor profundidad, así se facilitará su renovación y mantenimiento a temperatura adecuada. El lugar alrededor del bebedero debe ser de suelo firme, preferentemente cemento o tierra colorada compactada, con pendientes laterales que eviten encharcamientos. Su ubicación en los corrales debe estar entre los 25 y los 250 metros para evitar el caminar excesivo de los animales. Por otro lado, los COMEDEROS deben permitir una distribución adecuada de la ración y proporcionar espacio suficiente a las vacas para que puedan consumir la cantidad que necesitan, garantizando su fácil limpieza e higiene al menos una vez al día. Deben estar construidos de materiales duraderos, considerando 60-70 cm de longitud de comedero por cada animal para garantizar una alimentación adecuada en cantidad por ingesta. La cantidad de ellos debe garantizar que al menos el 75% de las vacas de un potrero o zona coman al mismo tiempo para minimizar la dominancia, las peleas, las agresiones y consecuentemente el estrés por la competencia en la alimentación. La provisión de una RACIÓN BALANCEADA, apropiada a la categoría y etapa de producción del animal, es clave no solo para garantizar la productividad, sino también para minimizar las alteraciones digestivo-nutricionales que pueden redundar, directamente, en trastornos metabólicos como la acidosis ruminal subaguda (ARSA)1 e, indirectamente, en lesiones podales y cojeras. Cuidar la relación en la ingesta de proteína, energía y fibra es fundamental en este sentido. Resulta una práctica adecuada brindar una ración diaria de alimento tras cada ordeño para evitar que la vaca se tumbe con los esfínteres de los pezones aún abiertos. Además, es interesante establecer grupos de alimentación de los animales según sus estados fisiológicos, para evitar interacciones negativas en el comedero y a establecer raciones diferenciadas y específicas. Recuerde que es importante hacer una diferenciación entre vacas y vaquillonas a la hora de la alimentación, ya que estas últimas comen más veces al día y en menor cantidad por vez. 1  Un animal con ARSA tendrá compromiso en su condición corporal, reducirá el consumo de alimentos y presentará un bosteo blando o líquido; el rodeo tendrá mayoritariamente varios animales afectados, evidenciando un nivel de rumiado menor al 80% en las vacas en descanso. 42 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Al respecto del resto de las instalaciones del establecimiento, cobra importancia disponer de CAMINOS ADECUADOS ya que cuando los mismos no están en buen estado predispone la generación de LESIONES PODALES, asociadas clínicamente con una laminitis que deforma y favorece el sobre-crecimiento de la pezuña, con úlceras y abscesos en la suela que llevan a la cojera del animal. Los pisos de cemento o goma predisponen a lesiones podales en contraposición con camas de arena o paja. En este mismo sentido, es importante controlar el sector de ingreso al corral de espera y la salida de la sala de ordeño, siendo esencial garantizar la ausencia de grietas o pozos, desniveles, piedras, charcos o suciedad excesiva, todos estos factores que predisponen a las lesiones en las patas. La SALA DE ORDEÑE debe tener una construcción con pisos antideslizantes que facilite la limpieza, evite encharcamientos y formación de barro, mantenga una apropiada ventilación por medio de techos a una altura no menor a los 2,80 metros, y una apropiada iluminación tanto para los animales como los operarios (mínimo 200 lux). En relación con el MANEJO DE LOS ANIMALES debe cumplirse con los principios descriptos en los capítulos 2 y 3 del presente manual, atendiendo el manejo suave y tranquilo en todo momento. Una RUTINA DE ORDEÑE en consistencia con el bienestar animal debe iniciarse mediante un arreo e ingreso tranquilo de los animales evitando corridas y resbalones. La cantidad de animales de cada grupo debe propiciar períodos cortos de espera en los corrales de encierre previo, de alrededor de 30 minutos, ya que una mayor estancia sobre el suelo duro favorece las lesiones podales. Es importante evitar los ruidos o distracciones que generen intranquilidad en los animales, o realizar tratamientos veterinarios diferentes a la atención puntual de mastitis. Recuerde que la rutina de ordeñe dividida en varias veces al día no debería superar las cuatro horas totales por jornada. Debido al impacto que tienen las MASTITIS en la producción lechera, debe implementarse un procedimiento sistemático de ordeñe basado en las BUENAS PRÁCTICAS, en el cual se propicie la higiene de la ubre, la adecuada y periódica calibración del equipo de ordeñe y el correcto uso de las pezoneras en relación con la fuerza de succión y el tiempo de aplicación, así como el sellado y desinfección al finalizar el ordeñe. El cumplimiento de los principios de bienestar animal se evidenciará a través de la observación y evaluación de los diferentes INDICADORES que se presentan en el punto 5, tanto por parte del productor como de los operarios, con el fin de de corregir los desvíos antes que afecten el desempeño en la producción. El MANEJO ZOOTÉCNICO de los animales tiene un alto impacto en su bienestar, por lo cual debe garantizarse la buena práctica en cada animal. Específicamente, debe mencionarse que: 4 El DESCORNE debe realizarse en los primeros días posparto, preferentemente ante del día 14, por medio de cauterización directa con Senasa • 43 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL pastas cáusticas o pomadas que no provocan dolor. Eventualmente, con un hierro caliente sobre el botón o protuberancia córnea. 4 La CASTRACIÓN debe realizarse antes de los SEIS (6) meses de edad siguiendo los principios quirúrgicos profesionales veterinarios, garantizando la asepsia y utilizando analgésicos, anestesia local y antibióticos. 4 La REMOCIÓN DE PEZONES SUPERNUMERARIOS es una práctica apropiada si se realiza en animales jóvenes, a partir de una oportuna intervención quirúrgica de un profesional veterinario. 4 Es muy importante la atención sobre las LESIONES PODALES Y COJERAS, sean por causas alimenticias, por el manejo, por el medio ambiente, por procesos infecciosos, por genética o comportamiento, ya que son un factor importante de dolor y estrés en los animales. 4 El CORTE DE LOS PELOS DE LA COLA es recomendado para mejorar la higiene de la zona perineal y la ubre y así facilitar la limpieza diaria en la rutina de ordeñe. Recuerde que NO se recomienda el corte o amputación de la cola o rabo, ya que no existen beneficios en la limpieza e higiene de la ubre o en la incidencia de infecciones mamarias. Por último, en cuanto al MANEJO VETERINARIO debe implementarse un plan sanitario preventivo sobre las principales enfermedades del tambo, por ejemplo, tuberculosis, brucelosis y neosporosis. El plan debe estar basado en la vacunación y la detección temprana y eliminación de los animales positivos cuando corresponda. En caso de que se requieran TRATAMIENTOS VETERINARIOS, los mismos deben realizarse siguiendo las indicaciones de uso de los productos veterinarios y bajo específica supervisión profesional veterinaria, con el fin de prevenir lesiones en las zonas de inyección (grupa, tarso y flancos) o problemas en la administración de los productos. Finalmente, debe adoptarse un PLAN INTEGRAL DE CONTROL DE PLAGAS –tanto de insectos como roedores– ya que resultan vectores de enfermedades y además provocan pérdidas sobre los productos y piensos almacenados. 4.3.2.1 PARTICULARIDADES PARA LA ETAPA PERIPARTO El periparto, como el período entre los dos meses previos al parto y los veinte días posteriores al mismo, es la etapa de mayor estrés en la vaca, el cual debe ser minimizado mediante el cuidado exhaustivo de las condiciones de bienestar. Debe insistirse en la apropiada atención sanitaria, nutricional y de confort para evitar el estrés por cualquiera de sus orígenes. 44 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.3.2.2 PARTICULARIDADES EN LA CRIANZA ARTIFICIAL DE LAS TERNERAS DE REPOSICIÓN El bienestar animal en los TERNEROS RECIÉN NACIDOS es clave ya que nacen fisiológicamente inmunosuprimidos. En este sentido es clave: 4 maximizar las condiciones de BIOSEGURIDAD con que el personal gestiona la zona de la crianza artificial (guachera), transita por ella y manipula los animales y alimentos; 4 garantizar el consumo de calostro o un sustituto nutricionalmente enriquecido durante las primeras 6 horas de vida; 4 proveer una alimentación balanceada de alta calidad, leche cruda o sustituto lácteo, el cual debe tener un contenido proteico mínimo del 18%, y estar libre de agentes infecciosos –con especial atención brucelosis y tuberculosis–, contaminantes y medicamentos veterinarios; 4 brindar adicionalmente agua de bebida limpia, potable y fresca preferentemente a partir de las dos horas posteriores a la ingestión del alimento líquido; 4 realizar el pasaje gradual hacia alimentos sólidos, haciendo el cambio de dieta definitivo cuando se haya desarrollado la capacidad de rumiar. Es indispensable que el MANEJO de la guachera propicie un ambiente confortable, con sombra y reparo a las condiciones climáticas adversas, ventilación y limpieza apropiada. El objetivo es reducir el nivel de estrés de los animales y mantenerlos en buen estado de salud. La sombra en el verano, el reparo y la buena alimentación en el invierno son claves para garantizar el desarrollo apropiado en condiciones de bienestar. Estratégicamente, se debe localizar la guachera en lugares altos con buen drenaje, ya que permite mantener un suelo seco acorde al bienestar de los animales; si se usan ESTACAS, se debe rotar la localización de los animales ya que esto previene la generación de un espacio con alta suciedad y humedad; por el contrario, si se usan CORRALES FIJOS debe cambiarse la cama cada tres días. A nivel higiénico-sanitario, el lugar vacante de una ternera –que pasa a recría o a la enfermería– debe ser desinfectado, por ejemplo, con amonio cuaternario. Luego, debe ser aireado y secado, y más adelante cubierto con cal viva para inactivar los agentes infecciosos. Es ideal que estos lugares permanezcan vacíos y expuestos al sol por 2 o 3 semanas previamente a su reocupación. Recuerde realizar un VACÍO SANITARIO de la guachera al menos una vez al año, permitiendo un período de desinfección y recomposición de la zona previo a un nuevo uso durante el siguiente ciclo productivo. Finalmente, debe recordarse que el manejo apropiado de los animales en esta etapa no solo contribuye a su crianza, sino también al acostumbramiento al trato humano y su amansamiento progresivo. Senasa • 45 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4.3.2.3 PARTICULARIDADES EN LA RECRÍA DE LAS VAQUILLONAS La etapa de la recría es el período clave en donde se salvaguarda la inversión productiva y se propicia el desarrollo de las hembras para alcanzar una madurez que permita un primer parto antes de los 30 meses de edad, y consecuentemente su inicio de producción. En este sentido es importante garantizar una nutrición adecuada que permita ganancias diarias de peso de 600 a 750 gramos por día, sumado a un programa sanitario preventivo adecuado. El manejo apropiado por parte del personal a cargo es clave para lograr el acostumbramiento al vínculo estrecho con los humanos y la mansedumbre para cuando inicie la etapa de ordeñe. Recuerde que los manejos veterinarios y zootécnicos deben realizarse fuera de la sala de ordeñe para evitar posteriores reflejos condicionados. 4.3.2.4 INDICADORES ESPECÍFICOS DE BIENESTAR EN BOVINOS Y BUBALINOS DE LECHE ASPECTOS INDIVIDUALES 4 Aspecto general, condición corporal y peso del animal. 4 Suciedad (barro). 4 Conducta de alimentación; presencia de hambre y sed; presencia de miedo y conducta de fuga. 4 Dolor o evidencia del mismo por intervenciones zootécnicas realizadas (marcación, castración, descorne, extirpación de pezones supernumerarios). 4 Presencia de deshidratación, alteraciones de la respiración o estrés térmico. 4 Enfermedades metabólicas asociadas con déficit nutricional vitamínico o mineral, intoxicaciones por plantas o productos tóxicos, timpanismo o empaste, entre otras. 4 Enfermedades infecciosas (queratoconjuntivitis, enfermedades respiratorias, carbunco, entre otras). 4 Enfermedades parasitarias (garrapatas, piojos, mosca de los cuernos, sarna). 4 Condición de la piel, con atención en los genitales (testículos, ubres). 4 Problemas en el periparto como retención de placenta, metritis, desgarros de vagina. 4 Movilidad y presencia de lesiones clínicas o subclínicas en patas (cojeras). 4 Tratamientos veterinarios y nivel de uso de analgésicos y antibióticos. 4 Presencia de rumia normal. 46 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria ASPECTOS GRUPALES (comportamiento social) 4 Dinámica y distribución del rodeo. 4 Densidad animal. 4 Cabeceos y lamidos. 4 Peleas y disputas de dominancia; agresividad. 4 Alteraciones del comportamiento y estereotipias. 4 Nivel de rumia, descanso y pastoreo del rodeo. RESPUESTA AL MANEJO 4 Velocidad de movimiento y comportamiento ante el arreo. 4 Velocidad de movimiento en los bretes de contención, ingreso y salida de la manga. 4 Cantidad de resbalones y caídas. 4 Nivel de vocalización. 4 Comportamiento de los operarios en el arreo: gritos y golpes por parte del personal; presencia de perros agresivos o no entrenados; uso de instrumentos autorizados y no autorizados (picana, cadenas, elementos rígidos y punzantes) para inducir el movimiento. 4 Manejo de la guachera y condiciones de los terneros. INDICADORES PRODUCTIVOS Y REPRODUCTIVOS 4 Tasas de morbilidad por lesiones, cojeras, mastitis, problemas metabólicos (acidosis, cetosis, hipocalcemias), diarrea, tos, resfrío, y otros. 4 Tasas de mortalidad como valores discretos y en series temporales (mensual o anual) por categoría animal. 4 Muertes perinatales. 4 Intervalo entre partos, tasa de concepción, tasa de abortos, tasa de distocias. 4 Producción de leche. ASPECTOS DE INFRAESTRUCTURA, EQUIPAMIENTO Y AMBIENTE ASOCIADOS AL CONFORT ANIMAL 4 Estado de las instalaciones básicas, como caminos, corrales, alambrados, reparos, mangas, cepos, corrales de encierre, rampas y otros. 4 Cantidad y calidad de comederos y bebederos. 4 Estado de la sala de ordeñe. 4 Tipo y mantenimiento de equipos de ordeñe. 4 Presencia de insectos, plagas y animales silvestres incompatibles con la especie (predadores entre otros). 4 Guachera: infraestructura y condiciones ambientales de crianza. Senasa • 47 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4.3.3 ÉQUIDOS Los équidos en la Argentina no son producidos como animales para consumo humano y su eventual acopio para posterior faena obedece al consumo de su carne en otros países. La posibilidad de producirlos con fines de recreación o deportivos, en sistemas extensivos, semi-intensivos o confinados completamente, debe seguir todos los criterios generales de bienestar y particulares semejantes a la crianza de cualquier especie animal, propiciando la correcta alimentación y salud, el ambiente adecuado y la posibilidad de tener comportamiento social con otros de su misma especie. La prevención de alteraciones de comportamiento y estereotipias en los sistemas estabulados puede realizarse con el manejo de la dieta (por ejemplo, aumentando la proporción de fibra), el enriquecimiento ambiental o la posibilidad de acceso al aire libre o vareo eventual. En todos los casos, debe atenderse el comportamiento natural de esta especie asociado al establecimiento de jerarquías, la conformación de grupos y la necesidad de una superficie mínima para la vida y actividades diarias de cada individuo. Deben respetarse los criterios y normativas asociadas a la MARCACIÓN de los animales, haciendo la diferenciación con el SEÑALAMIENTO, que en caso del caballo debe tener en consideración la sensibilidad de la especie en sus orejas y la susceptibilidad al dolor agudo que ocasiona su manipulación inadecuada. Finalmente, debe remarcarse el cuidado de los équidos en la carga, descarga y transporte, dado el estrés que generan estas actividades en esta especie. 4.3.3.1 INDICADORES ESPECÍFICOS DE BIENESTAR EN EQUINOS ASPECTOS individuales 4 Aspecto general, condición corporal y peso del animal. 4 Conducta de alimentación; presencia de hambre y sed; presencia de miedo y conducta de fuga. 4 Dolor o evidencia del mismo por intervenciones zootécnicas realizadas (marcación, castración). 4 Presencia de deshidratación, alteraciones de la respiración. 4 Enfermedades metabólicas asociadas a déficit nutricional vitamínico o mineral, intoxicaciones por plantas o productos tóxicos, cólicos. 4 Enfermedades infecciosas. 4 Enfermedades parasitarias (garrapatas, piojos, moscas, sarna). 4 Condición de la piel, con atención a los genitales. 4 Problemas en el periparto como retención de placenta, metritis, desgarros de vagina. 48 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4 Movilidad y presencia de lesiones clínicas o subclínicas en patas (cojeras). 4 Tratamientos veterinarios y nivel de uso de analgésicos y antibióticos. ASPECTOS GRUPALES (comportamiento social) 4 Dinámica y distribución del grupo. 4 Densidad animal. 4 Peleas y disputas de dominancia; agresividad. 4 Alteraciones del comportamiento y estereotipias. 4 Nivel de descanso y alimentación. RESPUESTA AL MANEJO 4 Velocidad de movimiento y comportamiento ante el arreo. 4 Velocidad de movimiento en los bretes de contención, ingreso y salida de la manga. 4 Cantidad de resbalones y caídas. 4 Comportamiento de los operarios en el arreo: gritos y golpes por parte del personal; presencia de perros agresivos o no entrenados; uso de instrumentos autorizados y no autorizados (picana, cadenas, elementos rígidos y punzantes) para inducir el movimiento. INDICADORES PRODUCTIVOS Y REPRODUCTIVOS 4 Tasas de morbilidad por lesiones, cojeras, problemas metabólicos (acidosis, cetosis, hipocalcemias) y otros. 4 Tasas de mortalidad como valores discretos y en series temporales (mensual o anual) por categoría animal. 4 Muertes perinatales. ASPECTOS DE INFRAESTRUCTURA, EQUIPAMIENTO Y AMBIENTE ASOCIADOS AL CONFORT ANIMAL 4 Estado de las instalaciones básicas como caminos, corrales, alambrados, reparos, mangas, cepos, corrales de encierre, rampas y otros. 4 Cantidad y calidad de comederos y bebederos. 4 Presencia de insectos, plagas y animales silvestres incompatibles con la especie (predadores entre otros). Senasa • 49 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4.3.4 CERDOS El bienestar animal en la especie porcina es un factor clave por la predisposición de esta especie al estrés y, consecuentemente, su impacto sobre los índices productivos del establecimiento. En primer lugar, la selección de la RAZA Y GENÉTICA de los animales a criar debe estar asociada a las condiciones edilicias y medioambientales del establecimiento. En este sentido, cobra importancia la utilización de LINEAS GENÉTICAS RECESIVAS AL GEN HALOTANO, responsable de susceptibilidad de los individuos al estrés, de la menor tasa de crecimiento, de la elevada incidencia de carne pálida, suave y exudativa (PSE), del bajo número de lechones por camada y alta mortalidad de animales, entre otros. En el MANEJO PRODUCTIVO deben considerarse no solo las cuestiones de infraestructura y sanidad, sino también la ALIMENTACIÓN, como aspecto clave que permite la adecuada condición corporal de las hembras al momento del servicio, la gestación, el parto y el posparto. Por otro lado, el FACTOR AMBIENTAL juega un rol relevante en esta producción, siendo que esta especie demanda espacios delimitados y separados para el descanso, para eliminar sus desechos y no tener contacto permanente con ellos, o húmedos para mantener una temperatura adecuada, además de suelo para expresar su comportamiento natural de hozado o de construcción de nido en el caso de las hembras. En este sentido, cobran importancia las INSTALACIONES EDILICIAS que deben mantener la temperatura y la ventilación en valores apropiados a la edad, peso y densidad de los animales alojados, además de la higiene y el control de plagas cuando se trate de producciones con confinamiento. Es importante recordar que los ambientes calurosos, mal ventilados, con déficit de higiene por excretas en contacto con los animales o presencia de plagas, compromete la sanidad de los animales y consecuentemente favorece la presentación de enfermedades. En particular, se debe hacer hincapié en la disposición de BEBEDEROS que provean agua limpia y fresca de manera constante, dispuestos sobre un suelo de concreto con declive hacia el exterior del corral o potrero y un sistema de colecta que evite los encharcamientos. Los COMEDEROS deben facilitar la disposición del alimento, impedir su caída al suelo y no generar lesiones por contacto en el pecho de los animales. Asimismo, son importantes las INSTALACIONES COMPLEMENTARIAS necesarias para el manejo y las prácticas zootécnicas en los animales, sobre las cuales debe puntualizarse que: 50 • Senasa 4 el CORRAL DE ENCIERRE al comienzo de la manga debe tener forma circular, alambradas de un (1) metro de altura y al menos un (1) m2 por cerdo en la terminación; 4 el EMBUDO debe conectar la manga sin dejar ángulos rectos que favorezcan la detención de los animales; �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4 la MANGA debe ser estrecha para impedir que los animales puedan darse vuelta, debe estar dividida en secciones por medio de puertas corredizas o trancas con una longitud no menor a seis (6) metros, y paredes laterales continuas hasta una altura de cincuenta (50) cm para evitar que los animales introduzcan las patas en los espacios que quedan entre tablas. Su piso debe contar con travesaños cada veinte (20) cm para evitar resbalones o caídas; 4 el CEPO debe proveer sujeción e inmovilización adecuada de los cerdos de diferentes edades y estado corporal; 4 las RAMPAS pueden ser fijas o portátiles. Para el caso de las fijas, se deben ubicar en un lugar donde puedan tener acceso en forma fácil los vehículos de transporte con una inclinación gradual, ya que los cerdos no pueden subir o bajar con facilidad de una rampa muy elevada o que descienda abruptamente. Es recomendable que sea estrecha de modo que los animales no puedan darse vuelta. Por otro lado, además de garantizar las cuestiones generales de sanidad y el ingreso de animales libres de enfermedades mediante la adopción de un PLAN SANITARIO DEL ESTABLECIMIENTO que incluya la profilaxis vacunal, cada establecimiento productor debe implementar un PLAN DE BIOSEGURIDAD que incluya los diferentes aspectos de funcionamiento en asociación directa con el cumplimiento de procedimientos específicos para minimizar los riesgos de ingreso de enfermedades. Sobre las PRACTICAS ZOOTÉCNICAS, debe puntualizarse que: 4 el DESCOLE debe ser una práctica de excepción debido a que el canibalismo2 entre animales resulta un indicador del déficit de bienestar del establecimiento, por lo cual, de ser considerada, debe ser ejecutada por un médico veterinario dentro de las primeras 48 horas del nacimiento del lechón; 4 el LIMADO DE DIENTES O DESCOLMILLADO debe realizase entre los 2 y los 7 días post-nacimiento bajo asesoramiento y supervisión veterinaria; CASTRACION en lechones debe realizarse antes de los 7 días de edad como práctica zootécnica de rasgado de vinza, o de lo contrario mediante intervención quirúrgica veterinaria con el uso de anestesia en animales más grandes; en animales adultos la inmunocastración supervisada por un profesional veterinario es considerada adecuada en la etapa final previo a la remisión a faena de los machos. 4 la 4 la MARCACIÓN Y SEÑALAMIENTO requiere de personal entrenado en la sujeción de esta especie para evitar la generación innecesaria de dolor o estrés en los animales; 4 el DESTETE debe realizarse entre la tercera y cuarta semana de vida 2  El canibalismo en los cerdos se da por hacinamiento, falta de acceso al suelo, paja o algún sustrato que permita la expresión de su comportamiento natural como la falta de un lugar seco donde echarse, entre otras cuestiones. Senasa • 51 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL del lechón, debiendo llevar a cabo una transición previa hacia el alimento sólido, preferentemente a partir de los veintiún (21) días de edad, que le permita siete (7) días más tarde alimentarse por sí mismo. Finalmente, respecto de los SISTEMAS DE PRODUCCIÓN, se pueden caracterizar en explotaciones extensivas, semi-intensivas o intensivas. A continuación se describen aspectos de bienestar animal particulares de las mismas. 4.3.4.1 EXPLOTACIONES EXTENSIVAS o SEMI-INTENSIVAS Por la sensibilidad de esta especie a los factores ambientales, aun cuando una explotación a campo suponga preliminarmente mejores condiciones de bienestar de los animales, es importante resaltar la importancia de brindar instalaciones básicas en los corrales como parideras, reparos y zonas de provisión de sombra, a las que deben estar indefectiblemente anexado al menos un corral de encierre, con su embudo, manga, casilla de operaciones y cepo que permitan la ejecución de las prácticas zootécnicas de manera adecuada, además de otros corrales de aparte, la rampa de embarcado, una balanza y un pediluvio. Debe advertirse que el uso de pozos con agua o charcos no es adecuado debido a los efectos negativos sobre la sanidad de los animales y la predisposición a la presencia de plagas y vectores de enfermedades. 4.3.4.2 EXPLOTACIONES INTENSIVAS En las explotaciones totalmente confinadas, el galpón donde se alojan los animales debe cumplir ciertas condiciones: - ILUMINACIÓN MÍNIMA de 40 watts por al menos ocho (8) horas por día. - AISLAMIENTO ACÚSTICO que garantice menos de 140 dB durante todo el día. - VENTILACIÓN Y SISTEMA DE CONTROL DE LA TEMPERATURA de tal modo de mantener un ambiente aireado entre 13 y 21ºC. - CORRALES que permitan la generación de pequeños grupos donde además se respete la DENSIDAD ANIMAL MÍNIMA desde los 0,15 m2 por animal de hasta 10 kilos de peso vivo hasta 1 m2 por animal de hasta 110 kg. - BEBEDEROS con libre disposición de agua limpia y fresca desde las dos semanas de edad hasta el fin del ciclo productivo. - SISTEMA DE ALIMENTACIÓN que garantice que todos los animales se alimentan al menos una vez al día. - CAMA, como factor de enriquecimiento ambiental que minimiza los conflictos y comportamientos anormales de los animales además de brindar confort físico, absorbiendo la humedad causada por heces, orina y agua; además provee un aislamiento térmico del piso princi52 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria palmente en invierno, y recreación. En este sentido, proveer de paja a razón de 20 gramos/animal/día dividida en dos veces suele minimizar los problemas de comportamiento. - JUGUETES DE GOMA o CADENAS COLGADAS, como instrumentos de enriquecimiento ambiental junto con la CAMA, suelen ser efectivos para el bienestar de los animales y prevenir las estereotipias3. 4.3.4.3 INDICADORES ESPECÍFICOS DE BIENESTAR EN CERDOS ASPECTOS INDIVIDUALES 4 Aspecto general, condición corporal y peso del animal. 4 Suciedad (barro), especialmente en condiciones extensivas o semi-intensivas. 4 Conducta de alimentación, presencia de hambre y sed, presencia de miedo y conducta de fuga. 4 Dolor o evidencia del mismo por intervenciones zootécnicas realizadas (marcación, castración, descolmillado). 4 Presencia de deshidratación, alteraciones de la respiración o estrés térmico. 4 Enfermedades metabólicas asociadas a déficit nutricional vitamínico o mineral, intoxicaciones por plantas o productos tóxicos, entre otras. 4 Enfermedades infecciosas (PRRS, enfermedad de Aujeszky, otras). 4 Enfermedades parasitarias (piojos, moscas). 4 Problemas en el periparto como retención de placenta, metritis, desgarros de vagina. 4 Movilidad y presencia de lesiones clínicas o subclínicas en patas (cojeras). 4 Tratamientos veterinarios y nivel de uso de analgésicos y antibióticos. ASPECTOS GRUPALES (comportamiento social) 4 Dinámica y distribución del grupo. 4 Densidad animal. 4 Peleas y disputas de dominancia, agresividad. 4 Alteraciones del comportamiento y estereotipias. 4 Nivel de descanso y alimentación. 4 Canibalismo (caudofagia). 4 Nivel de juego. 3  Se expresan como movimientos repetitivos o acciones reiteradas, por ejemplo morder las barras de la jaula, manipular el comedero, el suelo o el bebedero, consumir agua excesivamente, masticar en vacío y/o salivar en exceso. Senasa • 53 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL RESPUESTA AL MANEJO - Velocidad de movimiento y comportamiento ante el arreo. - Velocidad de movimiento en los bretes de contención, ingreso y salida de la manga. 4 Cantidad de resbalones y caídas. 4 Nivel de vocalización. 4 Comportamiento de los operarios en el arreo: gritos y golpes por parte del personal; presencia de perros agresivos o no entrenados; uso de instrumentos autorizados y no autorizados (picana, cadenas, elementos rígidos y punzantes) para inducir el movimiento. INDICADORES PRODUCTIVOS Y REPRODUCTIVOS 4 Tasas de morbilidad por lesiones, cojeras, mastitis, problemas metabólicos (acidosis, cetosis, hipocalcemias), diarrea, tos, resfrío y otros. 4 Tasas de mortalidad como valores discretos y en series temporales (mensual o anual) por categoría animal. 4 Muertes perinatales. - Intervalo entre partos, tasas de concepción, abortos y distocias. 4 Tamaño de la camada. 4 Producción de carne (ganancia diaria de peso). ASPECTOS DE INFRAESTRUCTURA, EQUIPAMIENTO Y AMBIENTE ASOCIADOS AL CONFORT ANIMAL 4 Estado de las instalaciones básicas, como caminos, corrales, alambrados, reparos, mangas, cepos, corrales de encierre, rampas y otros. 4 Condiciones de galpones de confinamiento permanente o temporal. 4 Cantidad y calidad de comederos y bebederos. 4 Presencia de insectos, plagas y animales silvestres incompatibles con la especie (predadores entre otros). 54 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.3.5 OVINOS Y CAPRINOS Estas dos especies son criadas juntas, mayoritariamente de manera extensiva, en fuerte vínculo con el productor o tenedor, el cual debe cumplir los lineamientos generales de manejo de los animales. 4.3.5.1 OVINOS En las OVEJAS es importante el comportamiento social. La presencia de la dominancia no es frecuente pero pueden darse peleas durante la suplementación alimentaria. En este sentido, es recomendable que la misma se brinde en comederos donde todos los animales puedan alimentarse al mismo tiempo, salvo que sea un régimen ad libitum (a voluntad). Para el caso de los carneros, la competencia entre ellos durante la época de servicio demanda la separación de machos jóvenes de adultos para minimizar las peleas. En este mismo sentido, es importante atender la sodomía –monta entre machos– durante los períodos de reposo sexual, ya que además de implicar una actividad de dominancia resulta un factor de riesgo de contagio de enfermedades como la brucelosis. Debido a la vulnerabilidad de los corderos en el periparto, es importante no solo la selección de razas o líneas genéticas de ovejas con buena aptitud e instinto materno, sino también reducir el estrés durante las etapas previas al parto, el parto en sí mismo y el posparto. El objetivo es facilitar la generación del vínculo del neonato con su madre –mediante el lamido inmediato posparto– para evitar los rechazos de la cría y la mortalidad neonatal. La planificación del MANEJO NUTRICIONAL Y SANITARIO de la producción es importante, especialmente en categorías específicas como hembras preñadas, carneros en servicio o corderos jóvenes. Deben cuidarse las afecciones podales mediante controles en lapsos de entre 4 y 12 semanas, las miasis y las parasitosis, tanto internas como externas. El uso de vacunas contra las enfermedades clostridiales y la neumonía se considera necesario. El ESPACIO PRODUCTIVO debe considerar el espacio mínimo por animal de acuerdo a su categoría y peso, conforme el CUADRO 3, que se presenta en la página siguiente. Al momento de planificar el DESTETE, se deben considerar las CINCO (5) semanas en producciones carniceras o laneras y TRES (3) semanas en lecheras para facilitar el ramoneo del cordero desde la segunda semana de vida para acostumbrarlo a la alimentación independiente. Senasa • 55 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Cuadro 3. Espacio mínimo para ovejas según categoría Categoría OVEJAS SIN CRÍA OVEJAS CON CRÍA CORDEROS CARNEROS Peso en kg 45 - 60 60 - 90 45 - 60 60 - 90 20 - 30 30 - 40 40 - 50 65 - 90 90 - 135 Espacio en m2/animal Animal con vellón Animal esquilado (*) 1,1 - 1,2 1,2 - 1,4 1,3 - 1,7 1,4 - 1,8 0,7 0,8 1,0 1,9 - 2,8 2,8 - 3,0 0,95 - 1 1 - 1,2 1,1 - 1,45 1,2 - 1,5 0,6 0,7 0,85 1,6 - 2,4 2,4 - 2,55 (*) En animales esquilados se considera un espacio promedio un 15% menor. En el caso de los OVINOS LANEROS, la ESQUILA debe realizarse al menos UNA (1) vez al año con personal entrenado, aprovechando la oportunidad para realizar también la señalada del animal. Durante esta práctica debe prodigarse máxima atención al manejo de los animales, desde su arreo tranquilo hasta la práctica de esquila propiamente dicha, si esta última es realizada con el animal no maneado produce menor estrés y cortes, y favorece la obtención de un vellón de mejor calidad. El manejo general de la RUTINA DE ESQUILA debe hacerse en forma tranquila, con equipos apropiados correctamente calibrados –en cuanto al filo de las cuchillas y el ruido de las máquinas–, y con un operario idóneo, para garantizar una buena práctica en el menor tiempo posible y con el mínimo estrés y lesiones en el animal. En la SEÑALADA debe cuidarse la esterilización de los equipos. En muchos casos, se aprovecha la juntada de animales para realizar el corte de cola en ambos sexos y la castración en los machos. En el caso de la CASTRACIÓN DE LOS CORDEROS, es recomendable realizarla en animales entre los TRES (3) y los SIETE (7) días de edad. En todos los casos se debe realizar de manera rápida e higiénica para devolver los corderos a sus madres y que el vínculo no se vea afectado. En todos los casos, el potrero de reunión debería estar empastado con el fin de evitar que los animales se echen en superficies de tierra que ensucien las heridas de la castración. Para el CORTE DE COLA, la maniobra debe realizarse entre los TRES (3) y los CATORCE (14) días de edad, teniendo cuidado con que el rabo cortado cubra el ano y, en las hembras, la vulva. Por último, debe recordarse que el ovino elige vivir en majadas numerosas, por lo que es importante proveer el espacio adecuado para el movimiento y la alimentación diaria; a esto se debe sumar la importancia del REPARO frente a las condiciones climáticas adversas, especialmente en animales esquilados. 56 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.3.5.2 CAPRINOS Para el caso de las CABRAS, se debe considerar su sensibilidad a las acciones de manejo abruptas que generan estrés y que, en caso de hembras preñadas, pueden desencadenar abortos espontáneos. Este es un aspecto especialmente relevante en situaciones donde los animales ya tienen comprometido su bienestar, por ejemplo, en situaciones de carencia de alimentos por motivo de una sequía o inundación, lo cual debe ser correctamente evaluado entre el productor y el asesor médico veterinario. Las cabras son muy sensibles a los climas extremos por lo que se deben tomar cuidados especiales para minimizar sus efectos. El frío y la lluvia constituyen factores de gran incidencia para los animales en pastoreo, particularmente cuando su condición corporal es baja, por lo que es recomendable brindar un lugar de resguardo natural o artificial. Su comportamiento normal va desde “esconder” las crías durante los primeros días por parte de las madres –para sociabilizarlas más tarde– hasta la afinidad por el juego físico (locomotor) y la exploración. Cuando los caprinos no están en situación de bienestar –es decir no pueden jugar o explorar– desarrollan comportamientos anormales o generan destrucción sobre las instalaciones. Es importante la planificación del MANEJO NUTRICIONAL Y SANITARIO de la producción, especialmente en categorías específicas como hembras preñadas, carneros en servicio o cabritos jóvenes. En climas cálidos debe considerarse la disposición de sal junto al agua de bebida. Deben cuidarse las AFECCIONES PODALES mediante controles, recortes eventuales y tratamiento de infecciones de pezuñas cada 4 a 12 semanas y las parasitosis, tanto internas como externas. Al momento de planificar el DESTETE, se deben considerar las SEIS (6) semanas en producciones carniceras o laneras y las TRES (3) semanas en lecheras, facilitando el ramoneo del cordero desde la segunda semana de vida para su acostumbramiento hasta la alimentación independiente. El ESPACIO PRODUCTIVO debe considerar el espacio mínimo por animal de acuerdo a su categoría y peso, conforme el Cuadro 4 en la página siguiente. En cuanto a las MANIOBRAS ZOOTÉCNICAS, es importante su realización de acuerdo a los siguientes plazos: 4 CASTRACIÓN antes de los SIETE (7) días de edad del cabrito. 4 CAUTERIZACIÓN DEL BOTÓN CÓRNEO entre el día 3 y 10 con hierro candente. 4 REMOCIÓN DE TETAS SUPERNUMERARIAS antes de los 7 días de edad, con anestesia local. En zonas con antecedentes de brotes de tétanos, es recomendable vacunar de manera preventiva antes de realizar estas maniobras. Finalmente, en la PRODUCCIÓN DE CABRAS PARA LA OBTENCIÓN DE LECHE debe cuidarse el manejo y práctica de ordeñe diaria teniendo como referencia los mismos cuidados expuestos en el apartado 4.3.2 sobre vacas lecheras. Senasa • 57 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL CUADRO 4. Espacio mínimo para cabras según categoría Categoría Espacio en m2/animal CABRA ADULTA CABRITOS hasta los 5 meses CHIVOS 1,7 0,7 - 0,9 2,8 - 3,7 4.3.5.3 INDICADORES ESPECÍFICOS DE BIENESTAR EN OVINOS Y CAPRINOS ASPECTOS INDIVIDUALES 4 Aspecto general, condición corporal y peso del animal. 4 Suciedad (barro) en la lana. 4 Conducta de alimentación, presencia de hambre y sed, presencia de miedo y conducta de fuga. 4 Dolor o evidencia del mismo por intervenciones zootécnicas realizadas (marcación, castración, esquila). 4 Presencia de deshidratación, alteraciones de la respiración o estrés térmico. 4 Enfermedades metabólicas asociadas a déficit nutricional vitamínico o mineral, intoxicaciones por plantas o productos tóxicos, entre otras. 4 Enfermedades infecciosas (respiratorias, entre otras). 4 Enfermedades parasitarias (garrapatas, piojos, sarna, melófagos). 4 Condición de la piel y alopecias. 4 Problemas en el periparto como retención de placenta, metritis, desgarros de vagina. 4 Movilidad y presencia de lesiones en clínicas o subclínicas en patas (cojeras). 4 Tratamientos veterinarios y nivel de uso de analgésicos y antibióticos. ASPECTOS GRUPALES (comportamiento social) 4 Dinámica y distribución de las majadas. 4 Densidad animal. 4 Cabeceos, peleas y disputas de dominancia, agresividad. 4 Alteraciones del comportamiento y estereotipias. 4 Nivel de descanso y alimentación del grupo. RESPUESTA AL MANEJO 4 Velocidad de movimiento y comportamiento ante el arreo. 58 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4 Velocidad de movimiento en los bretes de contención, ingreso y salida de la manga. 4 Cantidad de resbalones y caídas. 4 Comportamiento de los operarios en el arreo: gritos y golpes por parte del personal; presencia de perros agresivos o no entrenados; uso de instrumentos autorizados (banderas y otros) y no autorizados (picana, cadenas, elementos rígidos y punzantes) para inducir el movimiento. INDICADORES PRODUCTIVOS Y REPRODUCTIVOS 4 Tasas de morbilidad por lesiones, cojeras, problemas metabólicos (acidosis, cetosis, hipocalcemias), diarrea y otros. 4 Tasas de mortalidad como valores discretos y en series temporales (mensual o anual) por categoría animal. 4 Muertes perinatales. 4 Intervalo entre partos, tasa de concepción, tasa de abortos, tasa de distocias. 4 Tamaño de la camada (mellizeras). 4 Producción de carne (ganancia diaria de peso), leche y lana. ASPECTOS DE INFRAESTRUCTURA, EQUIPAMIENTO Y AMBIENTE ASOCIADOS AL CONFORT ANIMAL 4 Estado de las instalaciones básicas, como caminos, corrales, alambrados, reparos, mangas, cepos, corrales de encierre, rampas, entre otros. 4 Cantidad y calidad de comederos y bebederos. 4 Tipo y mantenimiento de equipos de esquila (de corresponder). 4 Presencia de insectos, plagas y animales silvestres incompatibles con la especie (predadores entre otros). Senasa • 59 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4.3.6 AVES Los sistemas de producción y tenencia de aves domésticas se dividen en estabulación total, en estabulación parcial o al aire libre. Es muy importante que los espacios libres en las inmediaciones de los galpones o corrales estén desmalezados, limpios, libres de desperdicios y sin encharcamientos. La SELECCIÓN GENETICA dentro de la especie aviar producida es importante para maximizar la productividad en relación con las condiciones de crianza, tanto edilicias como medioambientales. Como en todas las producciones intensivas, y en particular debido a la altísima densidad animal de este tipo de producción, es importante la adopción en cada establecimiento de un PLAN DE BIOSEGURIDAD que permita minimizar los riesgos de ingreso de enfermedades en las actividades cotidianas. Conforme las características de comportamiento de las aves, resultan muy sensibles a la PRESENCIA DE PERSONAS Y ANIMALES, los ruidos y las maniobras bruscas. En este sentido, debe caminarse por los corrales o galpones de manera cuidadosa y lenta, sin hacer ruido y evitando lesionarlas innecesariamente, además de prevenir el ingreso de animales domésticos o salvajes. La ALIMENTACION debe ser programada conforme la edad y avance de la crianza de las aves, además de considerar la genética y la planificación comercial del establecimiento. Por lo general, el acceso al alimento y agua de bebida es libre salvo cuando se está cumpliendo con el ayuno sólido previo a la remisión final a faena en donde se retira completamente el primero. Biológicamente, son animales omnívoros adaptados a vivir sobre el suelo, donde encuentran sus alimentos naturales, como son los gusanos, insectos, semillas y materia vegetal. A la hora de elegir la comida, los pollos tienen un pobre sentido del gusto y el olfato y se basan principalmente en el de la vista, seleccionándolo por la medida, el color y la forma de la partícula. En este sentido, seleccionarán partículas con diámetros superiores a 0,8 mm, por lo que el diseño del alimento influye directamente sobre el consumo. Los piensos deben formularse en base a concentrados energéticos y proteicos, asegurándose de que reciben todos los minerales y vitaminas necesarios para su desarrollo, teniendo en consideración su limitada capacidad para aprovechar los productos fibrosos. A nivel del COMPORTAMIENTO, la alta densidad animal en los sistemas intensivos puede desencadenar el PICAJE DE PLUMAS Y EL CANIBALISMO. En estos casos, atenuar la intensidad de la luz, proporcionar material para que los pollos de engorde escarben, introducir modificaciones nutricionales, reducir la densidad de carga o seleccionar las razas genéticamente más apropiadas pueden individual o colectivamente brindar solución. El recorte de pico como solución a estos casos sólo debe considerarse cuando los anteriores manejos no han dado resultado. 60 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Cuando el sistema de producción sea SEMI-INTENSIVO (estabulación parcial), se deben proveer suficientes áreas de salida y entrada para el movimiento de los animales. En los CORRALES AL AIRE LIBRE, debe contarse con un plan de gestión de la tierra, pastizales y plantas venenosas para minimizar el riesgo de contagio a enfermedades infecciosas o parasitarias, o intoxicaciones. Las medidas de gestión podrán considerar entre otras cuestiones el control de aves silvestres, la limitación de la densidad animal o el empleo rotativo de varias parcelas de tierra, además del desmalezado e implementación de un cronograma anual de desinsectación y desrratización. En todos los casos, es importante que las parcelas o corrales al aire libre estén situadas en suelos bien drenados y con mínima posibilidad de anegarse y generar lodo o barro, salvo en caso de patos o gansos en donde la disposición de un espejo de agua resulta un factor de enriquecimiento ambiental positivo. Al respecto de la CRIANZA INTENSIVA (confinada), debe cuidarse: 4 la ILUMINACION, en cuanto a: 1) la cantidad de horas luz; 2) la intensidad, conside- rando que de 5 a 20 lux -penumbra para una persona- ya resulta sensible para las aves; y 3) la longitud de onda del espectro, dado que el rojo y el amarillo las excita y hace aumentar el picaje entre las aves, y en el azul se apaciguan. 4 La TEMPERATURA, debiendo mantener la neutralidad térmica. En los pollitos, debido a sus limitaciones en la autorregulación hasta el día 20, la misma va entre 37,5 y 41,5 º C -para el confort y la minimización del estrés. En aves adultas entre 10 y 23ºC. 4 La HUMEDAD, en vinculación directa con la temperatura, de manera de preve- nir los golpes de calor. 4 La SUPERFICIE MINIMA POR ANIMAL (densidad), de manera de evitar agresiones y canibalismo. Hay que tener en cuenta que las aves no disponen de glándulas sudoríparas, excepto la glándula uropigia situada en la parte posterior de la cola, y que dependen de la evaporación por la vía pulmonar para mantener y reducir la temperatura corporal. El estrés térmico puede llevar al jadeo para eliminar calor y, de ser crónico, al golpe de calor. Por otro lado, la jerarquía social es mejor establecida en grupos pequeños donde pueden reconocerse. Por esta razón, la crianza en jaulas de las ponedoras, con 3 a 6 gallinas por unidad, minimiza la generación de estrés. Finalmente, e indistintamente del sistema de producción, durante el control diario debe atenderse la presencia de animales convalecientes, heridos o enfermos que no pueden alimentarse por sí mismos y propiciarse su sacrificio por método humanitario conforme se describe en el ANEXO II. En un mismo orden, los animales muertos deben retirarse de los corrales o galpones cada vez que sean identificados y ser eliminados de manera segura –por ejemplo, el compostaje junto con otros residuos biológicos de la granja-. Por último, es fundamental que todo establecimiento productor cuente con un médico veterinario como responsable sanitario4, quien debe estar capacitado para el monitoreo de los indicadores de bienestar animal y la corrección de los desvíos junto a los operarios que realizan la gestión diaria de la granja. 4  Resolución Senasa No. 642/2010 para el caso de pollos de engorde. Senasa • 61 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4.3.6.1 POLLOS DE ENGORDE El pollo parrillero requiere resguardo de las condiciones ambientales adversas, siendo importante brindar reparo del sol, acceso a agua de bebida de manera libre y adecuada ventilación. En los sistemas con acceso al aire libre, debe esperarse el emplumado completo de los pollitos para permitir la salida de los animales. En los sistemas con confinamiento, se debe controlar la temperatura, humedad, ventilación y luminosidad durante todo el día, cuidando la baja intensidad de la luz en la adaptación del pollito al ingreso al galpón para luego incrementarla durante la crianza. Asimismo, resulta igual de importante garantizar un período suficiente de oscuridad continuada al día para facilitar el descanso de los animales. Dada la intensidad del ciclo de producción y la importancia del descanso de las instalaciones entre lotes, el VACIO SANITARIO debe ser de al menos CATORCE (14) DIAS, contado desde el último día de la desinfección hasta el día que se comienzan con los preparativos para el siguiente lote. Durante este período se deben realizar las tareas de tratamiento de la cama usada o guano, limpieza, desinfección, desinsectación y desrratización conforme la normativa vigente.5 En particular de los PARAMETROS AMBIENTALES, los galpones deben contar con sistemas de ventilación que aseguren una correcta renovación del aire del interior del galpón que garantice el mantenimiento de los contaminantes ambientales por debajo de sus niveles máximos (ver CUADRO 5). La adopción de sistemas de monitoreo continuo de gases con alarmas al superar los niveles máximos es recomendado en los sistemas confinados. La crianza en suelos elevados debe estar sustentada en instalaciones especiales diseñadas de forma tal que otorguen un adecuado soporte, no causen heridas, aseguren que el estiércol caiga completamente o se retire debidamente y sean de fácil lavado. Cuadro 5. Niveles máximos recomendados de gases contaminantes en el galpón. Amoníaco (NH3) Valor MÁXIMO (ppm) 25 Dióxido de carbono (CO2) Monóxido de carbono (CO) Polvo 3500 100 Mínimo posible En un mismo sentido, si se utilizan slats, los mismos deben estar en correcto mantenimiento e higiene. Las aves de un día deberán colocarse sobre un tipo de suelo adecuado a su tamaño y añadirse una capa de material no contaminado de suficiente profundidad o grosor como para permitir un comportamiento normal y separarlos del suelo. En los sistemas confinados, el MANEJO DEL EFECTO SUELO, entendiendo por esto el mantenimiento y renovación de la cama, el ni5  Resolución Senasa N° 106/2013. 62 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria vel de ventilación y el funcionamiento de los bebederos, deber ser hecho de tal forma que evite la presentación de afecciones como pododermatitis, celulitis y enteritis. Asimismo, se debe planificar la DENSIDAD ANIMAL de manera tal de garantizar que todas las aves puedan acceder al alimento y al agua, desplazarse y cambiar de postura con normalidad. En las recorridas de control, los cuidadores deben poder entrar sin dificultad y moverse en toda la superficie del mismo. 4.3.6.2 PONEDORAS Para la producción de aves de postura deben observarse las instalaciones, bebederos y comederos, condiciones ambientales, comportamiento, estado de los animales y datos de producción en relación con el bienestar animal. En las rutinas diarias, se requiere un manejo tranquilo que no produzca temor ni dolor a las aves. Cuando es necesario retirar una gallina de la jaula, se le deben juntar las dos patas al cuerpo, sosteniéndole las alas, para no ocasionarle ninguna lesión. En el caso de tratarse de gallinas a piso, se deben sujetar por el lomo manteniendo su posición natural. En el MANEJO diario debe garantizarse la higiene de los bebederos y comederos, la provisión de agua de bebida libre de residuos químicos y microbiológicos, la alimentación de todos los animales, y el funcionamiento apropiado de los equipos automáticos de climatización y alimentación. Un galpón en condiciones adecuadas de bienestar debe tener un nivel de gases conforme el siguiente cuadro: Valor MÁXIMO (ppm) Amoníaco (NH3) Dióxido de carbono (CO2) Monóxido de carbono (CO) Polvo 25 5000 100 Mínimo posible CUADRO 6. Niveles máximos de gases contaminantes en el galpón. Uno de los vicios de bienestar común en las aves de postura es el CANIBALISMO, el cual debe prevenirse mediante: 4 El retraso del inicio de la puesta de huevos hasta las 20 semanas de vida; 4 La provisión de una dieta nutricionalmente balanceada, provista en forma de pequeñas partículas –en reemplazo del pellet- y con un porcentaje adecuado de fibras insolubles; 4 El uso de camas de buena calidad, principalmente en los animales jóvenes y durante las primeras semanas en el criadero, para propiciar que se mantengan secas; Senasa • 63 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4 La prevención de las heridas en las aves y el retiro inmediato de aves heridas o muertas de los grupos; 4 Un diseño de las instalaciones que garantice que todas las aves accedan a todos los recursos, alimento y agua entre ellos; 4 La colocación de perchas a una altura mínima de 40 cm del suelo, que sirvan como refugio de las gallinas que se encuentran en el piso, tanto en la fase de cría como durante la vida adulta; 4 La provisión de nidos, preferentemente cerrados y oscuros, para reducir la visibilidad de la cloaca durante la postura. Por otro lado, para la PREVENCION DE LAS ALTERACIONES DE COMPORTAMIENTO, es recomendable crear un entorno más complejo e interactivo, donde las novedades simulen situaciones que ocurrirían en la naturaleza y que le den al ave en cautiverio la oportunidad de escoger y de entretenerse. El PICAJE debe prevenirse mediante el manejo adecuado de las aves en medios apropiados. Si se tuviesen problemas con el mismo, es adecuado eventualmente RECORTAR EL PICO, debiendo realizar el mismo entre los 7 y 10 días del ave. Para realizar el recorte, las aves siempre deben encontrarse en buen estado corporal. El personal debe estar entrenado y contar con el equipo apropiado para eliminar la punta del pico superior y opcionalmente redondear el pico inferior. El recorte de pico, corte de uñas o amputación de crestas o garras son prácticas no aceptadas en consistencia con los principios de bienestar animal en las aves. La producción de huevo comercial a escala industrial requiere el ordenamiento de la crianza mediante un sistema intensivo a base de JAULAS (CONVENCIONALES). En estos casos, es recomendable que la densidad no sea menor a los 550 cm2/ gallina, instalando las mismas a una distancia del piso no inferior a los 70 cm. En caso de utilizar JAULAS ENRIQUECIDAS, es importante que sus materiales, tamaño y equipamiento sean específicamente diseñados para aves, teniendo en consideración además el tamaño de las gallinas y la densidad de animales a alojar en cada una. Indistintamente del tipo de jaula, las gallinas siempre deben tener la posibilidad de moverse sin dificultad, garantizando el respeto de la densidad animal mínima y la posibilidad de realizar escarbado y aleteos como comportamiento natural de estas aves. 64 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.3.6.3 OTRAS AVES DE PRODUCCION: PATOS, GANSOS, PAVOS y FAISANES. La crianza de patos, gansos, pavos y faisanes debe seguir los criterios generales de producción de las aves, respetando las necesidades específicas de un ambiente apropiado y protección a las adversidades climáticas, alimento y agua de bebida, y cuando corresponda, un espejo de agua como espacio necesario para garantizar su comportamiento natural. Es común que estas especies se críen en sistemas extensivos o semi-intensivos, siendo importante salvaguardar los comportamientos naturales de las parvadas en cuanto al liderazgo de los machos y la cantidad de hembras por cada uno. Finalmente, debe hacerse hincapié en la importancia de la alimentación balanceada y el manejo sanitario apropiado, cumpliendo como base con los programas sanitarios nacionales vigentes. Por último, es importante destacar que en la Argentina se encuentra PROHIBIDA LA ALIMENTACION FORZADA DE AVES desde el año 2003 6, con atención a los patos y gansos, considerándose una práctica alejada del bienestar animal en consistencia con los principios generales esbozados. 4.3.6.4 INDICADORES ESPECIFICOS DE BIENESTAR PARA LAS AVES ASPECTOS INDIVIDUALES 4 Aspecto general, condición corporal y peso medio de los animales. 4 Conducta de alimentación; presencia de miedo y conducta de fuga; 4 Dolor o evidencia del mismo por intervenciones zootécnicas reali- zadas (despicado, corte de garra). 4 Presencia de deshidratación, alteraciones de la respiración o estrés térmico (disposición de las alas, jadeos, dificultades o ruidos respiratorios); 4 Regresión de cresta, cierre de párpados y otras alteraciones ocula- res y barbillas hinchadas, entre otras. 4 Estado del plumaje, cloacas picadas o con presencia de sangre. 4 Enfermedades infecciosas (bronquitis y otras). 4 Enfermedades parasitarias (coccidiosis, piojos). 4 Movilidad y presencia de lesiones clínicas o subclínicas en patas. - Tratamientos veterinarios y nivel de uso de analgésicos y antibióticos. ASPECTOS GRUPALES (comportamiento social) 4 Dinámica y distribución de los animales en galpones y/o jaulas. 4 Densidad animal. 6  Resolución Senasa No. 413/2003. Senasa • 65 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4 Alteraciones del comportamiento y estereotipias. 4 Nivel de descanso y alimentación. RESPUESTA AL MANEJO 4 Comportamiento de los operarios en las rutinas de trabajo: rapidez, ruido, agresiones o golpes, entre otros. 4 Agarre de los animales en rutinas de vaciado o llenado de galpones. INDICADORES PRODUCTIVOS 4 Tasas de morbilidad. 4 Tasas de mortalidad como valores discretos y en series temporales (mensual o anual) por categoría animal. 4 Productividad: Cantidad de huevos; producción de carne (ganancia diaria de peso). ASPECTOS DE INFRAESTRUCTURA, EQUIPAMIENTO Y AMBIENTE ASOCIADOS AL CONFORT ANIMAL 4 Estado de las instalaciones básicas de los galpones. 4 Cantidad y calidad de comederos y bebederos. 4 Tipo y mantenimiento de equipos vinculados al tipo de producción; 4 Presencia de insectos, plagas y animales silvestres incompatibles con la especie (predadores entre otros). 66 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.3.7 LAGOMORFOS La tenencia o producción de CONEJOS Y CHINCHILLAS resultan generalmente confinados, en jaulas o cajones, en donde las condiciones de estabulación están bajo control del hombre, siendo así importante el control ambiental, la provisión de agua y comida, y los cuidados de higiene y sanidad necesarios. En general, la disponibilidad de AGUA Y ALIMENTO es libre (ad libitum) durante todo el día, reponiendo a diario la comida de manera manual o automática. La CRÍA EN LAS JAULAS demanda entre 500 y 800 cm2 según se alojen 2, 4 o más animales. Las densidades poblacionales deben respetar desde 12 hasta 20 animales por m2. Se ha mostrado que en este rango el rendimiento en el crecimiento y la conversión alimenticia no son afectadas de manera importante para grupos pequeños. El efecto del PISO de las jaulas, generalmente malla metálica, debe ser considerado como origen de heridas en patas y alteraciones en el comportamiento. Si bien poseen ventajas a la hora de la higiene, para mejorar el bienestar animal es conveniente recubrir las rejas de metal con plástico o utilizar aquellas construidas 100% en este material por su menor impacto en las patas. En los momentos de nacimientos y período de amamantamiento, el enriquecimiento del ambiente con cama de paja o similar es apropiado para el confort de los animales.  En relación con el AMBIENTE, el mismo debe estar aislado de las temperaturas extremas, ya sea en verano o en invierno, manteniendo rangos de temperatura entre 10ºC y 30ºC. El cuidado del ingreso de animales predadores es necesario para evitar el estrés, al igual que el control de insectos y roedores. Dada la incidencia de AFECCIONES DERMATOLÓGICAS, los operarios deben estar capacitados y entrenados en las inspecciones para detectar las posibles dermatitis, parásitos (sarna) o enfermedades sistémicas (mixomatosis, pododermatitis ulcerativa, abscesos por estafilococos) y derivar en la correspondiente atención veterinaria. Es conocido que al principio de la madurez sexual los conejos machos tienen luchas sociales que van acompañadas del aumento en el nivel de testosterona y las disputas de liderazgo, y pueden ocasionar importantes lesiones entre los animales. Finalmente, al igual que en otras producciones intensivas, la atención a la BIOSEGURIDAD, es decir el control de acceso de personas y animales al establecimiento, y especialmente los galpones, la adopción de planes sanitarios preventivos, el control de plagas, la desinfección de ropas, calzados e instrumentos que pueden ser vehículo de enfermedades, resulta fundamental para minimizar los riesgos de enfermedades en los animales. Senasa • 67 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 4.3.7.1 INDICADORES ESPECIFICOS DE BIENESTAR EN LAGOMORFOS ASPECTOS INDIVIDUALES 4 Aspecto general, condición corporal y peso del animal. 4 Conducta de alimentación; presencia de hambre y sed; presencia de miedo y conducta de fuga. 4 Presencia de deshidratación, alteraciones de la respiración o estrés térmico. 4 Enfermedades metabólicas asociadas a déficit nutricional vitamínico o mineral, intoxicaciones, entre otras. 4 Enfermedades infecciosas (dermatitis, mixomatosis, otras). 4 Enfermedades parasitarias (piojos, sarna). 4 Condición de la piel y pelo. 4 Movilidad y presencia de lesiones clínicas o subclínicas en patas. 4 Tratamientos veterinarios y nivel de uso de analgésicos y antibióticos. ASPECTOS GRUPALES (comportamiento social) 4 Dinámica y distribución de los grupos (jaula, piso). 4 Densidad animal. 4 Peleas y disputas de dominancia, agresividad. 4 Alteraciones del comportamiento y estereotipias. 4 Nivel de descanso y alimentación. 4 Gritos, chillidos. 4 Pataleo. RESPUESTA AL MANEJO 4 Comportamiento de los operarios en las rutinas de trabajo: rapidez, ruido, agresiones o golpes, entre otras. 4 Agarre de los animales en rutinas de vaciado o llenado de galpones. INDICADORES PRODUCTIVOS 4 Tasas de morbilidad. 4 Tasas de mortalidad como valores discretos y en series temporales (mensual o anual) por categoría animal. 4 Productividad: Tamaño de la camada; producción de carne (ganancia diaria de peso); producción de pelo. ASPECTOS DE INFRAESTRUCTURA, EQUIPAMIENTO Y AMBIENTE ASOCIADOS AL CONFORT ANIMAL 4 Estado de las instalaciones básicas de los galpones. 4 Cantidad y calidad de comederos y bebederos. 4 Tipo y mantenimiento de equipos vinculados al tipo de producción. 4 Presencia de insectos, plagas y animales silvestres incompatibles con la especie (predadores entre otros). 68 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 4.4 CAPACITACION Como se ha expuesto en el Capítulo 2 sobre Consideraciones Generales, la capacitación de los diferentes actores resulta un pilar fundamental para la concientización y adopción de buenas prácticas en relación con el bienestar animal. Es primordial que los productores, personal de campo y empleados rurales, médicos veterinarios y asociaciones de productores se encuentren capacitados específicamente en materia de bienestar animal en las especies domésticas de producción. Una capacitación apropiada no sólo permitirá mejorar el manejo integral de los animales sino que además facilitará la adopción de procedimientos estandarizados en las rutinas de trabajo no sólo para sistematizar y disminuir los tiempos de trabajo, sino además para facilitar el respeto de las buenas prácticas que se reflejarán en el rendimiento general de la producción. En especial, el saber profesional y técnico (expertise) en las rutinas de ordeñe, esquila y las prácticas zootécnicas características de cada especie y tipo de producción poseen un alto impacto en el bienestar animal, la productividad de los animales y la rentabilidad del establecimiento en su conjunto. Finalmente, es recomendable que cada establecimiento designe un RESPONSABLE DE BIENESTAR ANIMAL, de manera tal de garantizar la observación sistemática de los indicadores de bienestar, propiciar su atención por parte de cada uno de los operarios y la corrección de los desvíos cada vez que ocurran. Senasa • 69 �CUADRO RESUMEN 1 - BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN DE ANIMALES INSTALACIONES TRATAMIENTOS VETERINARIOS Construcción y - Garantizar la atención mantenimiento acordes al veterinaria por tipo de producción, profesionales atendiendo alambrados, matriculados y el uso corrales, comederos y racional de productos aguadas, mangas, cepos, veterinarios aprobados jaulas, cajones y galpones, por el Senasa, conforme además de los reparos, las indicaciones de uso. aguadas y arboledas. Atención en los baños antiparasitarios cuando corresponda. Tenedor / Productor y cooperativas / centros de genética, cabañas, haras, establecimientos productores de reproductores Médicos veterinarios - Garantizar condiciones de bienestar según 5 libertades. - Atención al momento y práctica de destete, castración, descorne y marcación. - Cumplir con el sacrificio humanitario cuando corresponda. - Asistir en el manejo de los animales para la atención veterinaria. Personal de campo BOVINOS DE CARNE - Uso adecuado. - Propiciar el mantenimiento adecuado. - Uso adecuado, informando las roturas o desvíos a atender por el productor respecto del BA. Asociaciones de productores y entidades del agro - Difundir principios y criterios asociados a las instalaciones, conforme los tipos y especies de producción. - Difundir información sobre la importancia de la atención veterinaria oportuna y el uso racional de los productos veterinarios. - Importancia del manejo apropiado y la atención a las prácticas de descorne, castración, remoción de pezones supernumerarios, lesiones podales y cojeras, entre otros. - Especial cuidado durante el periparto, la crianza artificial de terneras (manejo de la guachera) y la recría de las vaquillonas. - Respetar los principios de manejo. - Especial cuidado durante el periparto, la crianza artificial de terneras (manejo de la guachera) y la recría de las vaquillonas. - Atención al uso de instrumentos inductores de movimiento. - Atención a las rutinas de ordeñe. - Cumplimiento de criterio profesional y ético en la: - Cumplimiento de criterio profesional y ético en la: - atención clínica o profiláctica, y el buen uso de los productos veterinarios. - atención clínica o profiláctica y el buen uso de los productos veterinarios. - práctica de castración y descorne. - prácticas zootécnicas. - realización de sacrificio humanitario cuando corresponda. - Difundir información y capacitar sobre las buenas prácticas de producción de bovinos decarne en materia de bienestar animal. ÉQUIDOS - Atención al sistema - Cumplimiento de criterios de producción en generales de cuanto a las necesidades de agua, manejo de la especie durante ración balanceada, su tenencia y/o predisposición al acopio. estrés calórico, problemas - Atención a su metabólicos y sensibilidad al lesiones podales o estrés y el NO uso cojeras. de la picana eléctrica. - En PRODUCCIONES INTENSIVAS atención densidad animal, efecto suelo, propensión a enfermedades. Atención al plan sanitario preventivo. Respetar los principios de BIOSEGURIDAD. - Atención al uso de instrumentos inductores de movimiento. - Cumplir con la atención veterinaria conforme criterios y ética profesional, velando por el uso racional y el respeto de las indicaciones de uso según la especie, vía y dosificación apropiada. BOVINOS DE LECHE - realización de sacrificio humanitario cuando corresponda. - Respetar los principios de manejo. - Atención al uso de instrumentos inductores de movimiento y el NO USO de la picana eléctrica. - Cumplimiento de criterio profesional y ético en la atención veterinaria, buen uso de los productos veterinarios y/o sacrificio humanitario cuando corresponda. - Difundir información - Difundir información y y capacitar sobre las capacitar sobre buenas prácticas de las buenas producción de prácticas de bovinos de leche, los tenencia y puntos críticos manejo de los asociados a la intensidad productiva équidos. - Atención sobre los y los cuidados en aspectos críticos de las materia de bienestar producciones intensivas. animal. �PRODUCTORES DE ALIMENTOS PARA CONSUMO HUMANO CERDOS AVES - Atender a la selección genética, el manejo productivo y alimentación, el enriquecimiento ambiental y las prácticas zootécnicas. - Facilitar instalaciones y cuidado de las condiciones ambientales, según el tipo de producción. - Cumplir con las buenas prácticas en la marcación y destete. - En PRODUCCIONES INTENSIVAS, atención a la iluminación mínima, aislamiento acústico, ventilación, temperatura, cama y enriquecimiento ambiental, además de la densidad animal. Atención al plan sanitario preventivo. - Respetar los principios de BIOSEGURIDAD. - Atención a: - selección genética. - instalaciones y cuidados asociados al ambiente. - manejo productivo y alimentación. - prácticas zootécnicas específicas a cada tipo de producción. - los principios de BIOSEGURIDAD. - retiro de aves muertas y sacrificio humanitario cuando corresponda. - POLLOS DE ENGORDE - factor ambiental / densidad animal. - manejo efecto suelo. - GALLINAS PONEDORAS - factor ambiental / densidad animal. - canibalismo/picaje. - enriquecimiento ambiental para prevenir estereotipias. - uso de jaulas apropiadas, según tipo de producción. - Respetar los principios de manejo. - Atención al uso de instrumentos inductores de movimiento y el uso con excepciones de la picana eléctrica SOLO EN animales adultos. - Cumplimiento de criterio profesional y ético en la: - atención clínica o profiláctica, y el buen uso de los productos veterinarios. - Selección genética según finalidad. - Manejo en majadas y espacios mínimos requeridos por animal. - Atención sobre los machos durante los períodos de inactividad. - Atención a las técnicas zootécnicas de esquila y señalada, y las prácticas veterinarias de descole y castración. - Uso de instrumentos inductores de movimiento. CAPRINOS LAGOMORFOS INDICADORES PARA TODAS LAS ESPECIES CAPACITACIÓN - Selección genética. - Producción en majadas: sensibilidad al estrés climático y las particularidades del manejo. - Atención sobre los machos por su conducta dominante. - Uso de instrumentos inductores de movimiento. - Selección - Atención a los genética. indicadores - Instalaciones y específicos de sensibilidad al bienestar animal ambiente. productivos, - Manejo reproductivos, productivo en individuales, jaulas. grupales, de - Control manejo y veterinario asociados al intensivo con ambiente. atención a las - Atención al uso patologías de instrumentos dermatológicas. inductores de - Respetar los movimiento, principios de cuando BIOSEGURIDAD. corresponda. - Gestión de registros específicos, especialmente en producciones intensivas. - Respetar los principios - Respetar los generales de manejo de principios de manejo. aves. - Uso de - Retirar las aves instrumentos muertas de los inductores de galpones o jaulas. movimiento. NO - Propiciar el sacrificio uso de la picana humanitario cuando eléctrica. corresponda. - Respetar los principios de manejo. - Uso de instrumentos inductores de movimiento. NO uso de la picana eléctrica. - Respetar los principios de manejo. - Conocimiento y - Atender las capacitaciones atención a los en esta materia, indicadores. con énfasis en - Gestión de las prácticas de registros e manejo y los informe de indicadores de desvíos al BA. productor o responsable de bienestar animal, según corresponda. - Cumplimiento de criterio profesional y ético en la planificación de la medicina profiláctica y buen uso de los productos veterinarios. - Cumplimiento de criterio profesional y ético en la: - atención clínica o profiláctica. - práctica de descole y castración. - realización de sacrificio humanitario cuando corresponda. - Cumplimiento de criterio profesional y ético en la: - atención clínica o profiláctica. - práctica de descole y castración. - realización de sacrificio humanitario cuando corresponda. - Cumplimiento de criterio profesional y ético en la planificación de la medicina profiláctica y buen uso de los productos veterinarios. - Conocimiento y - Atender la atención a los capacitación en indicadores. esta materia. - Detección de - Difundir las desvíos y buenas prácticas asesoramiento y principios de al productor. BA en la tenencia y producción de bovinos, bubalinos, équidos, cerdos, ovinos, caprinos, aves domésticas, conejos y chinchillas. - Difundir información y capacitar sobre las buenas prácticas de producción de aves y los cuidados en materia de bienestar animal. - Difundir información y capacitar sobre las buenas prácticas de producción de ovinos y los cuidados en materia de bienestar animal. - Difundir información y capacitar sobre las buenas prácticas de producción de caprinos y los cuidados en materia de bienestar animal. - Difundir - Difundir y información y capacitar capacitar sobre sobre los las buenas indicadores y prácticas de su atención en producción de la producción conejos y de cada chinchillas, y los especie cuidados en animal. materia de bienestar animal. - práctica de descole, limado de dientes y castración. - realización de sacrificio humanitario cuando corresponda. - Difundir información y capacitar sobre las buenas prácticas de producción de cerdos. OVINOS - Velar por el conocimiento de los principios de BA en la producción y propiciar la capacitación de sus empleados y operarios rurales en cuanto al respeto de los principios de bienestar animal. - Difundir y capacitar sobre los principios e indicadores de bienestar animal y su atención en la producción de cada especie animal. �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 72 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 5. TRANSPORTE DE ANIMALES El TRANSPORTE TERRESTRE de animales para consumo humano en Argentina involucra varios actores según la especie y motivo, siendo en todos los casos responsables de velar por el cumplimiento de los principios de bienestar animal de acuerdo a la etapa en la que participen, desde la preparación del lote, la carga y el traslado, hasta la descarga y descanso mínimo de los animales posterior al viaje. El MOTIVO puede referir a una acción comercial o simplemente al movimiento de animales entre establecimientos de un mismo propietario o la participación en exposiciones y ferias de reproductores. Cuando existe COMERCIALIZACION, la misma puede ser en forma directa o indirecta según la cantidad de actores involucrados. En la FORMA DIRECTA, el productor o empresa productora envía los animales hacia el destino final en un viaje único y directo, sea otro productor, frigorífico o matadero, aunque en muchos casos involucrando intermediarios comerciales (por ej. consignatarios o empresas de remates televisados) que realizan la intermediación sin mover los animales del establecimiento de origen; en la FORMA INDIRECTA, el productor traslada los animales transitoriamente hacia su punto de venta –remates feria o establecimientos concentradores principalmente- para luego volver a cargarlos en un transporte para su remisión al destino final. El TRANSPORTE MARITIMO o AEREO es más común en animales deportivos o reproductores, con igual nivel de responsabilidad de los actores por el transporte transitorio de los animales hacia los aviones o barcos, y dentro de éstos durante el traslado hacia el destino final de los mismos. El presente capítulo abarca los tres tipos de transporte con las responsabilidades y principios a cumplir en sus diferentes etapas y actores involucrados. 5.1 RESPONSABILIDADES DE LOS ACTORES 5.1.1 PRODUCTOR o TENEDOR DE ANIMALES, EMPRESA PECUARIA, CABAÑA, CENTROS DE GENETICA, IMPORTADORES Y EXPORTADORES DE ANIMALES - Velar por el bienestar de los animales de su propiedad o tenencia, sea en carácter permanente o transitorio, en todas las etapas previas al transporte, la carga y traslado hasta el destino intermedio o final; - Propiciar la capacitación sobre los principios de manejo de los animales y su cumplimiento por parte de los empleados a su cargo; - Demandar el cumplimiento de los principios de manejo de los animales por parte de choferes y transportistas, empleados de remates feria, establecimientos concentradores y exposiciones, o personal de aduanas y medios de transporte aéreos o marítimos según corresponda; - Contratar transportes terrestres que cumplan los requisitos norSenasa • 73 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL mativos vigentes en cuanto al registro y habilitación, que garanticen la pericia del chofer y las condiciones de transporte de los animales en conformidad con el BA; - Contratar transportes marítimos o aéreos que cumplan con las condiciones de infraestructura y gestión apropiadas conforme los principios de BA; - Garantizar el transporte de animales aptos conforme los criterios de bienestar animal del presente Manual, con especial atención del respeto de la densidad de carga máximo según el tipo de transporte y animales involucrados. - Mantener en buenas condiciones las instalaciones de su establecimiento, con especial atención de los accesos, alambrados, corrales e instalaciones para la carga y descarga de los animales. 5.1.2 PERSONAL PERTENECIENTE A LOS ESTABLECIMIENTOS PECUARIOS, EMPRESAS PECUARIAS, CABAÑAS, CENTROS DE GENETICA, REMATES FERIA, ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES, EXPOSICIONES, EXPORTADORES E IMPORTADORES DE ANIMALES - Conocer y cumplir con los principios de manejo de los animales durante todas las etapas vinculadas al transporte, desde la preparación de el/los animal/es y su carga hasta la descarga y cuidado posterior al viaje; - Cumplir las capacitaciones específicas en bienestar animal facilitadas por su empleador o reguladas por el Senasa cada vez que sean oportunamente definidas; - Hacer uso excepcional de los instrumentos inductores de movimiento conforme se establece en este Manual. 5.1.3 EMPRESA DE TRANSPORTE TERRESTRE Y CHOFERES DE SUS PROPIOS CAMIONES - Cumplir con el registro y habilitación de toda unidad para transporte de animales conforme las regulaciones vigentes en el Senasa o la autoridad nacional de transporte marítimo o aéreo; - Mantener el vehículo en buenas condiciones estructurales y funcionales; - Garantizar el cumplimiento de los principios de bienestar animal durante el transporte establecidos en el presente capítulo por parte de los choferes o conductores, incluyendo la higiene del vehículo en cada viaje y la pericia en la conducción; - Velar por el respeto de las densidades de carga del transporte conforme la capacidad de la unidad y el tipo y categoría del animal involucrado; - Planificar el trayecto de viaje de manera tal de minimizar el tiempo del traslado y detenciones necesarias; 74 • Senasa - Propiciar la pericia en la conducción mediante la capacitación es- �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria pecífica en esta materia de los choferes, incluyendo el accionar ante situaciones de emergencia vinculadas con la rotura del transporte o un accidente que comprometa el bienestar de los animales. 5.1.4 CHOFER / CONDUCTOR - Hacer uso y mantenimiento del vehículo a su cargo en buenas condiciones estructurales y funcionales, incluyendo su lavado y desinfección luego de cada viaje conforme la normativa vigente; - Conocer y cumplir los principios de bienestar animal durante el transporte establecidos en el presente capítulo; - Respetar las densidades de carga del transporte conforme la capacidad de la unidad y el tipo y categoría del animal involucrados; - Hacer uso excepcional de los instrumentos inductores de movimiento conforme se establece en este Manual; - Cumplir con el trayecto de viaje asignado de manera tal de minimizar el tiempo del traslado, incluyendo la realización del menor número de detenciones posibles; - Conducir con la pericia apropiada al transporte de animales, respetando el accionar ante situaciones de emergencia vinculadas con la rotura del transporte o un accidente que comprometa el bienestar de los animales; - Acatar los procedimientos de control que puedan suceder durante el traslado de animales en rutas y caminos nacionales o provinciales. 5.1.5 EMPRESAS DE TRANSPORTE MARITIMO Y AEREO QUE TRANSPORTEN ANIMALES - Mantener los corrales dentro del barco o avión en buenas condiciones estructurales y funcionales; - Garantizar el cumplimiento de los principios de bienestar animal durante el transporte, con atención a la higiene, la provisión de agua y alimento. 5.1.6 PERSONAL DE BARCOS O AVIONES QUE TRANSPORTEN ANIMALES - Conocer y cumplir con los principios de manejo de los animales durante todas las etapas vinculadas al transporte, desde la preparación de el/los animal/es y su carga hasta la descarga y cuidado posterior al viaje según corresponda; - Cumplir las capacitaciones específicas en bienestar animal facilitadas por su empleador o reguladas por el Senasa cada vez que sean oportunamente definidas; - Hacer uso excepcional de los instrumentos inductores de movimiento conforme se establece en este Manual. Senasa • 75 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 5.1.7 REMATE FERIA – ESTABLECIMIENTO CONCENTRADOR - Registrar y habilitar ante el Senasa su establecimiento conforme los requisitos edilicios y de funcionamiento vigentes; - Mantener en buenas condiciones las instalaciones de su establecimiento, con especial atención de los accesos, alambrados, corrales e instalaciones para la carga y descarga de los animales; - Velar por el bienestar de los animales durante su tenencia transitoria que involucra la carga y descarga, manejo, alojamiento y alimentación según corresponda; - Propiciar la capacitación sobre los principios de manejo de los animales y su cumplimiento por parte de los empleados rurales de su establecimiento; - Demandar el cumplimiento de los principios de manejo de los animales por parte de empresas de transporte y choferes; - Concurrir en el uso de transportes habilitados ante el Senasa que cumplan los requisitos normativos vigentes; - Garantizar el transporte de animales aptos conforme los criterios de bienestar animal del presente Manual, con especial atención del respeto de la densidad de carga máximo conforme al tipo de transporte y animales involucrados. 5.1.8 EMPRESA CONSIGNATARIA o INTERMEDIARIO COMERCIAL y MATARIFES - Conocer los principios de bienestar animal en el transporte de animales establecidos en el presente Manual; - Concurrir en el uso de transportes habilitados ante el Senasa que cumplan los requisitos normativos vigentes; - Demandar el cumplimiento de los principios de manejo de los animales por parte de empresas de transporte y choferes, garantizando el transporte de animales aptos y el respeto de la densidad de carga máximo conforme al tipo de transporte y animales involucrados. 5.1.9 MATADERO - Registrar y habilitar ante el Senasa su establecimiento conforme los requisitos edilicios y de funcionamiento vigentes; - Mantener en buenas condiciones las instalaciones de su establecimiento, con especial atención de los accesos, instalaciones descarga de los animales, corrales y mangas, entre otros; - Velar por el bienestar de los animales de su propiedad desde su descarga hasta el encierre en los corrales y acondicionamiento en el plazo previo a la faena, minimizando los tiempos de espera de los animales en el transporte en su arribo; 76 • Senasa - Designar un encargado de bienestar animal de la planta que atenderá sus funciones desde la descarga y estadía previa a la faena de los �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria animales hasta la finalización del degüello y el monitoreo del bienestar en cada rutina de faena; - Propiciar la capacitación sobre los principios de manejo de los animales y su cumplimiento por parte de los empleados de su establecimiento vinculados con la descarga y acondicionamiento de los animales en la etapa pre-faena; - Concurrir en el contrato de transportes que cumplan los requisitos normativos vigentes en cuanto al registro, habilitación y requisitos de higiene, sea este un camión o acoplado; - Demandar el cumplimiento de los principios de manejo de los animales por parte de empresas de transporte y transportistas involucrados en sus operaciones, con especial atención en el respeto de la densidad de carga máxima conforme al tipo de transporte y animales involucrados. 5.1.10 PERSONAL DE MATADERO - Conocer y cumplir con los principios de manejo de los animales durante las etapas de descarga, encierre en corrales y cuidados de los animales en el plazo previo a la faena; - Cumplir las capacitaciones específicas en bienestar animal facilitadas por su empleador o reguladas por el Senasa cada vez que sean oportunamente definidas; - Hacer uso excepcional de los instrumentos inductores de movimiento conforme se establece en este Manual. 5.1.11 MEDICOS VETERINARIOS - Respetar los principios de bienestar animal de los animales bajo su responsabilidad, indistintamente del actor al que brinden servicio profesional, conforme los principios establecidos en este Manual para las etapas del transporte; - Velar por el cumplimiento de los principios de bienestar animal por parte de productores y empresas pecuarias, remates ferias, establecimientos concentradores, exposiciones, frigoríficos y mataderos asociadas al transporte de animales. 5.1.12 AUTORIDADES NACIONALES O PROVINCIALES DE CONTROL VEHICULAR, TRANSITO Y ADUANAS - Concurrir en la realización de procedimientos de control del transporte de animales en todo el territorio nacional o hacia terceros países, en los cuales se verifique el registro y habilitación de los transportes de animales y las condiciones de bienestar constatadas; - Conocer los principios de bienestar animal en el transporte terrestre, marítimo y aéreo de animales para consumo humano. Senasa • 77 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 5.1.13 SENASA - Registrar y habilitar los camiones y acoplados para el transporte de animales para consumo humano, gestionando las bases de datos que sean necesarias; - Ejecutar procedimientos espontáneos de control de tránsito de animales en todo el territorio nacional, verificando el registro y habilitación de los transportes y las condiciones de bienestar de los animales transportados; - Registrar y habilitar los remates feria y establecimientos concentradores en consistencia con los requisitos de infraestructura necesarios para garantizar el cumplimiento de los principios de bienestar animal, gestionando las bases de datos necesarias; - Controlar el desarrollo de remates, ferias y exposiciones de animales, verificando las condiciones de bienestar en los animales que arriban, y/o son manejados y despachados desde estos establecimientos; - Auditar los procedimientos de control de ingreso y acondicionamiento de los animales en el lapso previo a la faena implementados por los frigoríficos y mataderos; - Aplicar sanciones sobre los infractores a la normativa vigente sobre el transporte y bienestar de los animales para consumo humano1; - Llevar a cabo capacitaciones sobre el bienestar en el manejo y transporte de los animales para consumo humano para los diferentes actores involucrados en el transporte y comercialización de los mismos; - Validar instituciones para el dictado de cursos de bienestar animal para los diferentes actores de la cadena, certificando la participación cuando sea acordado; - Disponer de información sobre esta temática para la concientización sobre la importancia del respeto del bienestar animal en el transporte para todos los actores involucrados y el público en general. 1  Resolución Senasa No. 581/2014 y Resolución Senasa No. 46/2013. 78 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 5.2 TRANSPORTE DE ANIMALES POR VIA TERRESTRE 5.2.1 CONDICIONES GENERALES El traslado de animales indistintamente de su especie, destino y finalidad debe realizarse con medios de transporte habilitados ante el Senasa en cumplimiento de condiciones de infraestructura básicas que hacen al bienestar de los animales que se transportan, dado que esta etapa resulta un punto crítico de estrés en donde pueden ocurrir lesiones sobre los mismos. En este sentido, es muy importante que los medios de transporte estén construidos específicamente para su uso con animales, respetando lineamientos mínimos que se presentan en los numerales subsiguientes. Indistintamente si son camiones jaula, semirremolque, acoplados, cisternas, furgones, playos, tráiler o camionetas, se debe cumplir con el registro inicial2 y la revalidación anual ante el Organismo. 5.2.2 ESTRUCTURA DE LOS MEDIOS DE TRANSPORTE TERRESTRE Por fuera de las variaciones en tamaño según el tipo de transporte, todo transporte de ESPECIES MAYORES Y MENORES debe contar con: a) PISO metálico o de otro material, resistente, lavable e impermeable, que resulte antideslizante para los animales, pero con atención a las características de cada especie: Bovinos –piso con cuadrícula de metal de 25 cm de lado o nervaduras; n Equinos –piso rígido con nervaduras laterales; n Cerdos, ovinos y caprinos –piso rígido sin cuadrícula o nervaduras pero con rugosidad suficiente. n b) FRENTE cerrado hasta 20 cm antes del techo de la jaula. c) LATERALES cerrados desde el piso hasta una altura de 120 cm (+/- 20 cm) para unidades de un piso y 80 cm(+/- 10 cm) en los doble piso. Por encima debe tener aberturas longitudinales continuas de ventilación en cada lado, o con perforaciones laterales circulares de un diámetro de al menos 7 cm (+/- 1 cm) y con 6 - 7 perforaciones por metro lineal a partir de una altura del piso de 40 cm (+/- 10 cm). d) PARTE POSTERIOR de igual diseño que los laterales pero sin perforaciones de ventilación en los primeros 120 cm. e) PUERTAS con un ancho mínimo 90 cm, y si es “puerta rampa” de una altura mínima de 160 cm, piso antideslizante y un ángulo de operación menor a los 30°. En todos los casos deben instalarse RODILLOS GIRA2  Registro Nacional Sanitario de Medios de Transporte de Animales Vivos (Resolución Senasa No. 581/2014). Senasa • 79 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL TORIOS internos y externos de diámetro no menor a 6 cm desde los 20 cm del suelo hasta los 120 cm de altura. Están permitidas las puertas laterales. f) SEPARACIONES INTERNAS, en caso de ser adoptadas, que hagan una separación completa entre espacios. g) TECHO con un enrejado que permita la inspección superior y cuente con la/s pasarela/s según sea una única central o dos con una a cada lado. Su altura debe considerar por lo menos 20 cm por encima de la cabeza de un equino o bovino adulto parado en su posición natural. h) COBERTOR, de ser necesario para proteger la condición ambiental de transporte de los animales. En caso de vehículos de 2 o 3 pisos, los mismos no deben tener conexión entre los pisos, y su diseño debe impedir que caigan deyecciones sobre los animales de los pisos inferiores. Para el caso de AVES Y LAGOMORFOS, el medio de transporte resulta una superficie plana en donde se apilan las jaulas de transporte, por lo que éstas últimas son el factor clave a la hora del bienestar animal. Las mismas deben estar construidas de material práctico de fácil limpieza, con un enrejado que no permita sacar la cabeza a los animales, sin filos ni roturas y con puertas o tapas seguras que no lesionen los animales en su operación. Deben garantizar la apropiada ventilación. Para el caso de pollitos bebé, se utilizan cajas de plástico limpio y desinfectado, o alternativamente de cartón de un solo uso, con separadores fijos para evitar el hacinamiento en las esquinas y orificios para ventilación. En todos los casos es muy importante el MANTENIMIENTO adecuado de las unidades de transporte, más allá de la revalidación anual de la habilitación ante el SENASA, de manera de evitar la existencia de tablas o pisos rotos o cualquier elemento agudo que pueda lesionar a los animales durante la carga y descarga o el transporte propiamente dicho. 5.2.3 APARTE DE ANIMALES, CONFORMACION DE LOTES Y ACONDICIONAMIENTO PREVIO AL TRASLADO Los animales que vayan a transportarse deben estar previamente agrupados a estos efectos, entendiendo que el arreo y manejo de los mismos es una situación de estrés que se sumará al transporte propiamente dicho. En este sentido, es importante que la conformación de los lotes de bovinos, equinos, cerdos, ovinos y caprinos sea realizada al menos 4 – 6 horas antes del inicio de la carga, cumpliendo los criterios de manejo de los animales, el encierro en cercanías a la rampa de carga y el respeto del tiempo suficiente para el descanso previo al traslado. Deben atenderse las características propias de cada especie en cuanto a su comportamiento grupal al momento de generar lotes homogéneos, siendo relevante la inspección de los animales y el apartamiento de todos los individuos no aptos 80 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria para el traslado, como son: i) animales con lesiones o enfermedad; ii) animales con agitación excesiva; iii) animales con estado corporal incompatible con el lote conformado; iv) animales que no pueden sostenerse en pie de manera prolongada o poseen una lesión motora que impide su desplazamiento; v) hembras con preñez avanzada o parto inminente; y vi) terneros/potrillos con ombligo sin cicatrizar o que hayan recibido un baño para tratamiento de ectoparásitos dentro de las primeras 24 horas previas Durante el agrupamiento es inevitable el impacto corporal entre individuos, por lo que es importante que el lote sea con animales de iguales condiciones físicas y fisiológicas dentro de cada categoría según raza, edad, sexo, peso, tamaño, estado sanitario, corporal o de gordura, factor además de importancia a la hora de la comercialización. Durante la espera, los animales deben contar únicamente con agua de bebida, tal de respetar el TIEMPO DE AYUNO recomendado cuando su destino es la faena directa. Se debe recordar la importancia del reparo del sol y adversidades climáticas previo a la carga. Para el caso de producciones intensivas donde la carga se inicia desde el propio corral de producción, es importante planificar la jornada de trabajo previamente para facilitar el manejo de los animales y minimizar los problemas que redunden en la generación de estrés. Tiempo (horas) (*) Bovinos Équidos Ovinoscaprinos MÁXIMO 24 24 24 MÍNIMO 12 12 12 Aves y Cerdos lagomorfos 12 24 4 -6 Cuadro 7. Tiempo de ayuno previo a la faena. 12 (*) Estos plazos deben ser cumplidos previo al inicio de las acciones de acondicionamiento y embarque, tal que al arribar al matadero o frigorí�ico se cumplan con las horas mínimas al inicio de la faena. En particular de las AVES y LAGOMORFOS, la conformación de lotes consiste en la captura y acondicionamiento en jaulas apropiadas para el traslado. En caso de galpones con crianza grupal es apropiado subdividir el mismo para facilitar la captura por parte de los operarios específicamente capacitados. El uso de luz suave o azul resulta importante para calmar a los animales durante la acción. Toda ave o lagomorfo que sufra lesiones durante la captura, deberá ser sometido a sacrificio humanitario. La técnica de agarre de estos animales implica la sujeción del lomo de a uno por vez, manteniendo el animal siempre en posición natural. Si se emplean equipos de captura mecánicos de aves, éstos deberán ser diseñados, manejados y mantenidos de forma tal que minimicen las heridas y el estrés. En todos los casos debe evitarse el agarre inapropiado por las alas, patas o cabeza del animal. Senasa • 81 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 5.2.4 ASPECTOS PARTICULARES DURANTE LA CARGA Y DESCARGA DE ANIMALES COMO ACTIVIDADES CONEXAS 5.2.4.1 CARGA Las INSTALACIONES de carga deben estar diseñadas para el uso específico en estas especies, teniendo en cuenta la importancia del piso antideslizante –construido según los criterios expuestos- y el ancho de los pasillos y mangas para el correcto manejo de los animales. La construcción de mangas y corrales de encierre con diseño curvo facilita el movimiento de los animales y la carga en los transportes, lo cual se maximizará además si están construidos con paredes ciegas. No es adecuado construir corrales de encierre en las rampas. A esto debemos agregar la importancia de la ILUMINACIÓN directa uniforme, sea natural y/o artificial, que no encandile a los animales ni genere contrastes de luces y sombras que distraigan al ganado o inhiban ver hacia donde van. En particular, las RAMPAS deben tener la menor pendiente posible, nunca mayor a los 30º. Para los cerdos, la ausencia de rampas –carga y descarga en un mismo nivel por medio de ascensores- o las mínimas inclinaciones en caso de existir, favorece el manejo sin generar estrés. El manejo de los animales debe realizarse respetando los principios generales de bienestar ya expuestos, utilizando el impulso natural a avanzar y mantenerse junto al grupo. El uso de los inductores de movimiento autorizados debe respetar las buenas prácticas; un manejo pacífico resulta más eficaz para el movimiento conjunto del lote. Dentro de lo posible, deben evitarse las distracciones de los animales por: vista de humanos y otros animales en el frente o laterales durante el movimiento por pasillos, pasarelas, mangas y rampas; n reflejos sobre metales brillantes o suelos húmedos; n entradas oscuras a mangas, rampas, corredores o pasillos de inmovilización; n callejones sin salida a la vista de los animales; n cadenas u otros objetos sueltos que cuelguen de las mangas o las cercas; n suelos desiguales o presencia de un declive brusco; n ruidos, silbidos de aire de aparatos neumáticos, golpes y/o choques de objetos metálicos; y n corrientes de aire de los ventiladores o cortinas de aire en la cara de los animales: cambiar la orientación o la posición de los aparatos. n En un mismo medio de transporte pueden trasladarse animales de diferentes 82 • Senasa �Cuadro 8. Densidad de carga por especie animal. BOVINOS NOVILLOS O VACAS (**) Peso medio En kg 360 450 540 630 Astados o con cuernos recortados en más del 10 % de la tropa. Sin cuernos (mochos) Super�icie por animal en m2 1,01 0,96 1,20 1,11 1,42 1,35 1,76 1,67 (*) debe considerarse la buena ventilación del habitáculo según la estación del año en que se realice el transporte. TERNEROS y NOVILLITOS Peso medio En kg 50 70 90 100 150 200 300 Invierno Verano Super�icie por animal en m2 0,16 0,23 0,21 0,28 0,30 0,40 0,36 0,46 0,50 0,60 0,62 0,73 0,86 0,96 EQUIDOS Categoría Adultos Potrillos Ponies Longitud mínima 2,5 2,3 1,8 en metros Ancho mínimo 0,90 0,70 0,50 CERDOS Peso medio En kg 50 70 90 113 Invierno Verano Super�icie por animal en m2 0,26 0,29 0,31 0,35 0,40 0,50 0,50 0,60 OVINOS y CAPRINOS Peso medio En kg 27 36 45 54 Sin lana Con lana densa Super�icie por animal en m2 0,20 0,21 0,23 0,24 0,26 0,27 0,30 0,31 AVES Categoría Pollitos Pollos < 1 kg Pollos 1 a 3 kg Animales de 3 a 5 kg Animales > 5 kg Super�icie cm2 21 a 25 < 175 175 a 450 450 a 550 > 550 Altura cm 10 23 25 34 > 34 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL categorías, tamaños, condición física, peso o edad si cuenta con las divisiones apropiadas, evitando cargar juntos animales: 1) astados con mochos o descornados, 2) chicos y livianos con grandes y pesados, 3) machos con hembras, y 4) gordos con flacos. El uso de divisiones para el traslado de un lote uniforme también es recomendado para delimitar espacios con menos individuos en cada uno, mejorar la comodidad y aumentar la seguridad durante el traslado. En ovinos y caprinos esto es una práctica común. Para el caso de las AVES Y LAGOMORFOS, se deben utilizar contenedores apropiados3 conforme el peso de las aves, las condiciones climáticas y la distancia entre la granja y el matadero, debiendo garantizarse su comodidad, y permitiendo que cada una de las aves transportadas pueda apoyarse sobre el piso del contenedor. Las cajas o contenedores con animales deben ser trasladadas al transporte de manera suave, manual o por medio de plataformas con rieles. La carga podrá mojarse cuando sea necesario, evitando los extremos térmicos -climas con temperatura y humedad relativas altas o el invierno- en donde puede sobrevenir hipotermia y aumentar la mortalidad. Para cada especie, debe respetarse la DENSIDAD DE CARGA conforme el Cuadro 8. Una sobrecarga no sólo generará incomodidad y mayor estrés, sino que además aumentará la probabilidad de caídas de animales que difícilmente podrán volver a levantarse, serán pisados y lastimados, o incluso morir. Asimismo, es importante respetar la distancia entre la cabeza del animal en posición parada natural y el techo del transporte, la cual debe ser de 20 cm en transportes de un (1) piso y de 10 cm en transportes de 2 o 3 pisos. 5.2.4.1.1 ASPECTOS PARTICULARES PARA LA CARGA EN ALGUNAS ESPECIES En CERDOS cuando la temperatura ambiental excede de 23°C deben rociarse con agua antes de cargar y garantizar la apropiada ventilación del habitáculo. Por el contrario, en clima frio menor a 15°C se debe controlar la ventilación para prevenir la pérdida de calor de los animales. n En OVINOS Y CAPRINOS es apropiado dividir el compartimento de carga para mejorar la disposición de los animales y minimizar las lesiones durante el transporte. n En AVES O LAGOMORFOS, las jaulas o contenedores deben ser apiladas en filas separadas 10 cm entre ellas para favorecer la ventilación, aunque contando con cobertura al viento y precipitaciones. n 3  Artículos 13 y 14 de la Resolución Senasa No. 581/2014. 84 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 5.2.4.2 DESCARGA Los principios de la DESCARGA son iguales a los de la carga, siendo de gran importancia tener planificada la logística previa a su realización, contando con operarios capacitados en el manejo de animales, tal de minimizar los tiempos de espera y el estrés generado en los animales. Es importante propiciar la descarga bajo condiciones meteorológicas favorables. Debido al cansancio sumado durante el traslado, debe atenderse el uso de rampas apropiadas en su construcción y ángulo de operación, además del manejo suave y calmo por parte de los operarios. El ritmo de desplazamiento debe ser el ritmo de marcha normal para reducir resbalones y caídas que puedan generar lesiones. Al momento de la descarga debe evaluarse el estado de los animales y de ser necesario realizar el aparte de todos aquellos animales convalecientes para su eventual sacrificio humanitario inmediato (eutanasia). El uso de instrumentos promotores del movimiento debe realizarse cuando existe espacio para el movimiento y conforme a las buenas prácticas de uso que se presentan en el Capítulo 3. 5.2.5 ASPECTOS PARTICULARES DEL TRASLADO O VIAJE El transporte propiamente dicho debe ser realizado con conductores capacitados en materia de bienestar animal y que cuenten con la pericia apropiada para minimizar la generación de estrés en los animales y los potenciales daños o lesiones. La fecha y los horarios del día de traslado se elegirán en función de la estación del año y pronóstico meteorológico favorable. Cuando la temperatura ambiente exceda los 30º C, se evitarán en la medida de lo posible, los traslados de animales en las horas centrales (11 a 16 horas), prefiriendo el traslado durante la noche, al atardecer o de madrugada. En regiones y épocas (otoño-invierno) de menor temperatura o frío, se preferirán los horarios centrales de mayor temperatura. En caso de traslados bajo condiciones climáticas extremas -lluvias torrenciales, temporales de agua y viento, olas de calor, fuertes heladas, nevadas o granizo-, se deben proteger a los animales con cobertores apropiados que no impidan la ventilación necesaria para la especie transportada. Para estos casos, contar con una lona o cobertor de emergencia que pueda disponerse ante condiciones extremas que puedan sorprender al conductor durante un viaje es recomendable. Durante el traslado, el conductor evitará los excesos de velocidad, los movimientos bruscos o el paso a velocidad excesiva en el cruce de vías ferroviarias y/o por accidentes viales como pozos, cunetas, lomas, reductores de velocidad u otros. Es muy importante que el conductor respete el plazo necesario de acomodamiento de los animales entre el fin de la carga (cierre del camión) y el inicio de la marcha, siendo 30 minutos apropiados para minimizar las caídas. Senasa • 85 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL El conductor debe vigilar y controlar la carga a lo largo del viaje, con una primera parada, durante la primera hora, y luego periódicamente con intervalos de 2 a 3 horas o con la frecuencia necesaria según la carga y la duración total del traslado. En cada control se debe observar el estado de los animales, intentando detectar e incorporar a los animales caídos, o acomodándolos según pueda ser considerado. El TIEMPO DE VIAJE NO DEBE SUPERAR LAS VEINTICUATRO (24) HORAS desde el momento de la carga, siendo para esto fundamental la planificación del trayecto a recorrer. A mayor duración, es muy importante planificar adecuadamente las paradas, haciendo tanto de descanso para el conductor como de los animales, debiendo por esto respetar los principios de bienestar animal ya expuestos. Cuando el traslado se realice a un remate feria, establecimiento concentrador, exposición, frigorífico o matadero será importante controlar el estado en el que arriban los animales, contabilizando las caídas y/o muertes halladas tal de informar al propietario de los animales y la empresa de transporte de manera de corregir los desvíos constatados. 86 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 5.3 PARTICULARIDADES DEL TRANSPORTE DE ANIMALES POR VIA MARITIMA Y AEREA El traslado de los animales hacia el barco o avión de transporte debe ser realizado en un transporte terrestre que cumpla con todas las condiciones presentadas en todo el apartado 5.3 ut supra. En particular de los BARCOS y AVIONES, es importante que cuenten con infraestructura apropiada para el transporte de animales de la especie involucrada, en condiciones de bienestar que incluyen el reparo de las condiciones climáticas, la ventilación adecuada, la provisión de agua y alimento y la higiene de los corrales o jaulas . Específicamente, la INFRAESTRUCTURA debe cumplir con: Un diseño acorde a la especie destino y realización en materiales resistentes que no presenten salientes, roturas o elementos de fijación que puedan causar daños al animal; n Piso antideslizante apropiado para la especie destino que sea apto para la limpieza y desinfección; n Colores opacos y apropiada iluminación según la especie destino. n Tanto en alojamiento en corrales como en jaulas se debe contar con bebederos y comederos en cantidad suficiente, además de un espacio para el depósito de los alimentos necesarios para el viaje. En caso de transporte con corrales, debe contarse con uno o más corrales de aislamiento para facilitar las maniobras de inspección, atención veterinaria eventual y limpieza que puedan requerirse durante el viaje. Todo el personal involucrado con el manejo de los animales debe conocer y respetar los aspectos generales de bienestar animal y los principios de comportamiento y manejo de los animales presentados en los Capítulos 2 y 3 de este Manual. Durante el PRE-EMBARQUE, se deben supervisar las condiciones de los animales, en particular el nivel de estrés y aptitud para el viaje, tal de realizar eventuales rechazos de animales no aptos para el viaje. La CARGA debe realizarse de manera tranquila y con la menor cantidad de ruido posible, por rampas y pasillos bien iluminados y con pendientes no mayores al 30%. El alojamiento en los corrales debe respetar el lote conformado en el establecimiento de origen, y en los casos necesarios se podrá añadir cama de paja o aserrín para favorecer la absorción de la orina y excrementos y ofrecer mejor base de apoyo y confort a los animales. Por otro lado, y para el caso de especies mayores trasladadas en corrales, es importante contar con elementos para la sujeción circunstancial de los animales en caso de requerir la aplicación de un medicamento veterinario o que se deba inmovilizar para minimizar el riesgo a lesiones debidas al movimiento del transporte. Indistintamente de la especie, debe propiciarse que los animales cuenten con una superficie mínima para el movimiento y echado de manera cómoda y simultánea de todos los individuos del lote. Senasa • 87 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL En relación al VIAJE PROPIAMENTE DICHO, es fundamental planificar la ruta de viaje tal de minimizar las escalas y tiempo total del mismo, al igual que calcular las necesidades de agua y alimento para los animales a transportar. Indistintamente que el propietario de los animales pueda o no designar uno o más acompañantes para el viaje, la empresa de transporte marítima o aérea debe proveer al menos una persona responsable de la supervisión y cuidado de los animales, con atención sobre la provisión de agua y alimentos según haya sido específicamente programado. Durante el viaje debe garantizarse: La provisión de agua y alimento según lo planificado y el control de las condiciones ambientales, en particular temperatura, ventilación y mínimo nivel de ruido, entre otros; n La supervisión periódica de los animales y, de ser necesario, la aplicación de tratamientos veterinarios por parte de un profesional veterinario; y n La limpieza de los corrales tal de mantener su higiene. n Finalmente, debe resaltarse que la empresa de transporte marítima o aérea debe contar con un PROCEDIMIENTO DE MANEJO DE LOS RESIDUOS y un PLAN DE CONTINGENCIA para emergencias por muerte de animales o cuando por la situación del transporte deba resolverse la situación de los animales embarcados. Ambos procedimientos deben estar en conocimiento de la tripulación y en especial el personal al cuidado de los animales. 88 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 5.4 INDICADORES DE BIENESTAR EN EL TRANSPORTE RESPUESTA AL TRASLADO Y EL MANEJO DE LA CARGA/DESCARGA 4 Tiempo del viaje y cantidad de paradas realizadas; 4 Densidad animal en el vehículo de transporte; 4 Animales caídos, con lesiones, que vocalizan o manifiestan dolor, y muertos; 4 Respuesta a la presencia de las personas en las maniobras; 4 Manejo de operarios y el chofer: gritos y golpes, uso de instrumentos inductores de movimiento, tanto autorizados como restringidos. ASPECTOS INDIVIDUALES 4 Aspecto general del animal, patrones de respiración y movimiento, CANSANCIO, agitación, fatiga o estrés; 4 Conducta de alimentación (de corresponder); 4 Dolor o evidencia del mismo, por lesiones o enfermedades; 4 Evidencia de miedo y conducta de fuga. ASPECTOS GRUPALES (comportamiento social), si corresponde. 4 Cabeceos, lamidos, presencia de peleas y disputas de dominancia; agresividad; 4 Alteraciones del comportamiento y estereotipias; 4 Nivel de rumia, posición de descanso y sueño. ASPECTOS DE INFRAESTRUCTURA, EQUIPAMIENTO Y AMBIENTE ASOCIADOS AL CONFORT ANIMAL 4 Estado de las instalaciones básicas del transporte, en particular pisos y paredes apropiadas; 4 Presencia de comederos y bebederos, y disponibilidad de agua (de corresponder). 5.5 CAPACITACION Resulta fundamental que los actores vinculados al transporte y comercialización de animales productores de alimentos se encuentren capacitados específicamente en materia de bienestar animal en cada una de las etapas específicas. Siendo las situaciones de conformación de lotes, carga y descarga, traslado propiamente dicho y manejo de animales grandes generadoras de estrés que atenta contra el bienestar, es muy importante conocer las particularidades de la especie animal involucrada para minimizar su generación y consecuentemente las pérdidas asociadas a estas etapas. Es clave destacar la importancia de la pericia del conductor durante el traslado de los animales, siendo en este sentido primordial no sólo contar con unidades debidamente registradas, habilitadas y mantenidas, sino también la oportuna capacitación al respecto del bienestar animal y la correcta técnica de conducción de transportes de animales. Senasa • 89 �CUADRO RESUMEN 2 - BIENESTAR ANIMAL EN EL TRANSPORTE HABILITACIÓN / ESTRUCTURA DE TRANSPORTES Productor, tenedor de animales, empresa pecuaria, cabaña y centro de genética Personal de establecimientos pecuarios, embarcaciones y aviones - Contratar transportes registrados y habilitados ante el Senasa. - Demandar choferes con conocimiento y pericia apropiada para el transporte de animales por vía terrestre. - Cumplir con los principios de BA en la conformación y acondicionamiento de lotes previo al transporte, atendiendo el plazo previo a la carga, la uniformidad de los lotes y el ayuno necesario. - Observar el cumplimiento de las condiciones de los transportes de animales. - Realizar el manejo de animales conforme los criterios de BA. - Informar sobre los desvíos identificados. - Registrar y habilitar los transportes, conforme la normativa vigente. - Realizar el correcto mantenimiento de los transporEmpresas de tes, con especial atención a pisos, paredes, puertas y transporte terrestre rodillos. - Propiciar el cumplimiento de los principios de BA por parte de choferes o conductores. Choferes conductores - Realizar un correcto uso y mantenimiento de los transportes, informando los desperfectos que puedan afectar el bienestar de los animales. - Contar con la estructura apropiada para el transporte de animales, realizando su correcto mantenimiento. Empresas de transporte marítimo - Propiciar el cumplimiento de los principios de BA por o aéreo parte de la tripulación y el personal a cargo. Remate feria Establecimiento concentrador CONFORMACIÓN DE LOTES Y ACONDICIONAMIENTO DE ANIMALES - Contratar transportes registrados y habilitados ante el Senasa. - Demandar choferes con conocimiento y pericia apropiada para el transporte de animales por vía terrestre. - Conocer y velar por el cumplimiento de las condiciones reglamentarias de la estructura de los transportes. - Respetar los tiempos de descanso y ayuno indicados. - No aplica. - No aplica. - No aplica. - Conocer y respetar los criterios de BA asociados a la conformación y acondicionamiento de lotes. Empresa consignataria, intermediario comercial y matarifes - Contratar transportes registrados y habilitados ante el - Conocer los criterios de BA asociados a la Senasa. conformación y acondicionamiento de lotes. - Demandar choferes con conocimiento y pericia apropiada para el transporte de animales por vía terrestre. - Conocer y velar por el cumplimiento de las condiciones reglamentarias de la estructura de los transportes. Frigorífico matadero - Concurrir en la admisión y uso de transportes registrados y habilitados ante el Senasa. Personal de frigorífico-matadero - No aplica. Médicos veterinarios - No aplica. Autoridades Nacionales o Provinciales de control vehicular, tránsito y aduanas - Concurrir en el control de registro y habilitación de los transportes de animales. - Velar por el cumplimiento de los principios de BA en el transporte, con especial atención a la DENSIDAD DE CARGA. - No aplica. - No aplica. - Conocer los criterios de BA asociados a estas etapas. - No aplica. �CARGA / DESCARGA TRANSPORTE PROPIAMENTE DICHO CAPACITACION - Velar porque el personal cumpla los principios de manejo de animales en la carga y - No aplica. descarga, conforme los principios de BA. - Respetar las densidades de carga según la especie, tipo de animales y el transporte utilizado. - Conocer los principios de BA asociados al manejo, conformación de lotes, carga y descarga de animales. - Propiciar la capacitación de los operarios del establecimiento en esta materia. - Realizar el manejo de animales en la carga y descarga conforme los principios de BA. - Cumplir con las indicaciones de densidad de carga, según la especie y el transporte utilizado. - No aplica. - Hacer buen uso de los instrumentos inductores de movimiento autorizados. - Conocer los principios de BA en el manejo de animales, con atención a las etapas de transporte. - Cumplir con las capacitaciones específicas en la materia. - Propiciar el respeto de las buenas prácticas de - Planificar los viajes conforme los crite- - Conocer los principios de manejo de animales durante el transporte y rios de BA, minimizando el tiempo de manejo durante estas etapas, y el uso apropiado actividades conexas. viaje y paradas y velando por las condide los instrumentos inductores de movimiento ciones de bienestar de los animales. autorizados. - Propiciar la capacitación de los choferes en esta materia y la acre- Respetar las densidades de carga animal - Velar por el respeto de los principios de ditación de competencias cuando BA en transporte por parte del chofer o conforme la especie, el tipo de animal y transsea necesario. conductor. porte autorizado. - Respetar los principios de manejo de animales - Cumplir con la ruta de viaje planificada, los - Conocer los principios de manejo y descansos y las condiciones de BA durante BA de los animales durante el conforme los lineamientos de BA. el transporte. transporte y actividades conexas. - Velar por las buenas prácticas de carga y descarga de animales, y el uso adecuado de los instru- - Conducir con la pericia apropiada al trans- - Atender las capacitaciones que porte de animales, evitando el movimiento mentos inductores de movimiento autorizados. puedan dictarse en esta materia. exagerado de los animales. - Cumplir con las densidades de carga animal conforme la especie, tipo de animal y transporte - Atender los indicadores de BA y corregir, en - Acreditar competencias cuando sea necesario. utilizado. lo posible, los desvíos presentados. - Conocer las cuestiones generales del - Respetar los principios de manejo de animales - Propiciar la atención y cuidado de los bienestar, comportamiento y manejo animales conforme los principios de BA y conforme los lineamientos de BA. de los animales. las necesidades vinculadas con el viaje. - Velar por las buenas prácticas de carga y descarPropiciar la capacitación de los operaga de animales, y el uso adecuado de los instru- - Atender los indicadores de BA y corregir, rios (tripulación) en esta materia, mentos inductores de movimiento autorizados. en lo posible, los desvíos presentados. especialmente las personas al cuidado de los animales. - Velar porque el personal cumpla los principios de manejo de animales en la carga y descarga y el uso apropiado de los instrumentos inductores de movimiento autorizados. - Respetar las densidades de carga según la especie, tipo de animales y el transporte utilizado. - No aplica. - Conocer los principios de BA y propiciar la capacitación de los operarios del establecimiento. - No aplica. - Conocer los principios de BA para su cumplimiento y salvaguarda. - Demandar el cumplimiento de los principios de BA ante la evidencia de desvíos al arribo a la planta. - Conocer los principios de BA asociados al transporte de animales. - Propiciar la capacitación de los operarios del establecimiento. - Cumplir con los principios de manejo de animales en la descarga y el uso apropiado de - Observar los indicadores de BA al arribo e informar sobre los desvíos constatalos instrumentos inductores de movimiento dos. autorizados. - Conocer los criterios de BA asociados a estas - Conocer los criterios de BA asociados a estas etapas. etapas. - Conocer y respetar los principios de BA en el manejo de animales. - Atender los cursos de BA oportunamente dictados. - Conocer los principios de BA en el manejo de animales. - Velar porque el personal cumpla los principios de manejo de animales en la carga y descarga y el uso apropiado de los instrumentos inductores de movimiento autorizados. - Respetar las densidades de carga según la especie, tipo de animales y el transporte utilizado. - Velar porque el personal cumpla los principios de manejo de animales en la carga y descarga y el uso apropiado de los instrumentos inductores de movimiento autorizados. - Conocer los indicadores de BA y evidenciar los desvíos constatados al chofer - Conocer los principios de BA en el manejo de para su oportuna atención. animales. - Conocer la normativa vigente en materia de registro, habilitación y transporte de animales. - Conocer los principios e indicadores de BA en el transporte de animales. �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 92 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 6. MANEJO DE ANIMALES EN REMATES FERIA, ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES DE HACIENDA, EXPOSICIONES U EVENTO CON AGRUPAMIENTO DE ANIMALES Los eventos en donde se concentran temporalmente animales, sea con motivo de exhibición, competencia o comercialización, son un punto crítico en materia de bienestar animal debido a su dinámica acotada en el tiempo y celeridad en la gestión que atentan contra el manejo adecuado de los animales bajo los principios del bienestar animal. En este sentido, cobra importancia la máxima observancia del manejo de los animales por parte de los operarios durante toda la rutina del evento, lo cual incluye una gran cantidad de cargas y descargas en medios de transporte, conducción por calles y mangas, y apotreramiento en corrales. 6.1 RESPONSABILIDADES DE LOS ACTORES 6.1.1 RESPONSABLE DE REMATE FERIA, ESTABLECIMIENTO CONCENTRADOR, EXPOSICION O EVENTO CON AGRUPAMIENTO DE ANIMALES - Registrar y habilitar ante el Senasa su establecimiento y/o evento conforme los requisitos edilicios y de funcionamiento vigentes; - Mantener en buenas condiciones las instalaciones de su establecimiento, con especial atención de los accesos, alambrados, corrales e instalaciones para la carga y descarga de los animales, mangas y bretes; - Velar por el bienestar de los animales durante su tenencia transitoria que involucra la carga y descarga, manejo, alojamiento y alimentación según corresponda; - Propiciar la capacitación sobre los principios de manejo de los animales y su cumplimiento por parte de los empleados rurales de su establecimiento; - Concurrir en la autorización de ingreso y egreso de transportes para el traslado de animales que se encuentran debidamente registrados y habilitados ante el Senasa conforme los requisitos normativos vigentes; - Garantizar el transporte de animales aptos conforme los criterios de bienestar animal del presente Manual, con especial atención del respeto de la densidad de carga máxima conforme al tipo de transporte y animales involucrados, según se describe en el Capítulo 5 del presente Manual. Senasa • 93 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 6.1.2 PERSONAL DE REMATES FERIA, ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES, EXPOSICIONES O EVENTOS CON AGRUPAMIENTO DE ANIMALES - Conocer y cumplir con los principios de manejo de los animales durante todas las etapas vinculadas al transporte, desde la preparación de el/los animal/es y su carga hasta la descarga y cuidado posterior al viaje; - Cumplir las capacitaciones específicas en bienestar animal facilitadas por su empleador o reguladas por el Senasa cada vez que sean oportunamente definidas; - Hacer uso excepcional de los instrumentos inductores de movimiento conforme se establece en este Manual. 94 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 6.2 PRINCIPIOS GENERALES SOBRE LAS INSTALACIONES Todo establecimiento donde se lleven a cabo remates feria, concentraciones de hacienda, exposiciones o agrupamientos eventuales de animales debe esta habilitado ante el Senasa 1 y estar diseñado específicamente con instalaciones adecuadas para el manejo apropiado de animales de la/s especie/s con la/s que realicen su actividad. En primer lugar, debe poseer un EMBARCADERO para la carga y descarga de animales diseñado y construido en relación al volumen de trabajo a realizar, la/s especie/s que esténinvolucradas y las características específicas para brindar seguridad a los operarios y bienestar a los animales. El embarcadero debe tener el piso en coincidencia con el piso de la jaula del camión y un ancho igual a la puerta del camión, de modo tal de acoplar de manera perfecta, conforme se ilustra en la Figura 10. Figura 10 El piso y los laterales, no deben presentar espacios abiertos que permitan que los animales exterioricen sus extremidades y/o traten de fugarse por ellos, especialmente si no fueran manejados apropiadamente. Es recomendable, a su vez, que los laterales de este tipo deinstalaciones sean ciegos, a fin de evitar que los animales que bajan o suban al transporte observen la presencia de personas y a su vez visualicen mejor el camino a seguir de entrada o salida. 1  Resolución Senasa N° 1421 del año 2000. Senasa • 95 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Figura 11 En todos los casos, para evitar caídas y/o lesiones, la pendiente de la rampa de acceso no debe superar los 20 grados y contar con pisos antideslizantes construidos con: escalones, canaletas transversales; varillones o listones atravesados, separados entre ellos cada 20 cm (ver Figura 11); material rugoso; enrejado de hierro, construido con una malla de barras de acero de 2,5 cm de diámetro, con cuadrículas de 30 cm de lado; u otros materiales que sean avalados por el Senasa. Esto debe respetarse también para los transportes de 2 y 3 pisos siendo entonces importante contar con rampas de altura ajustable o diferentes rampas según la altura de los transportes. En todos los casos deben ser de fácil limpieza y exentas de grietas y desniveles pronunciados. En la salida del camión, previo a la rampa, es recomendable que exista una PASARELA como tramo llano de una longitud de 2 a 3 m para facilitar el ingreso y egreso de los animales desde los transportes. En relación a los CORRALES, los mismos deben ser lo suficientemente grandes para evitar el hacinamiento y prevenir lesiones en los animales. El tamaño de referencia está definido por cuanto la cantidad de animales alojados debe poder echarse simultáneamente de manera cómoda. Todos los corrales deben poseer postes y varillas de madera con alambre, además de alambrado doble, y tranqueras dispuestas en los rincones de los corrales o callejones con un ancho que permita el paso de varios animales juntos aunque sin producir golpes contra postes, varillas o la propia tranquera. Es importante disponer de corrales de distintas superficies para evitar mezclar categorías y lotes de ganado durante la gestión del evento, al igual que una cantidad de ellos esté apartado para utilizar con animales enfermos o peligrosos (5% del total aproximadamente). Los corrales deben contar con bebederos con disponibilidad de agua de bebida de manera permanente y reparo de las condiciones climáticas extremas. El PISO DE LOS CALLEJONES debe estar construidos con pendiente adecuada 96 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria para favorecer el drenado y evitar anegamientos o charcos de agua que puedan reflejar la luz y detener la marcha de los animales, además de facilitar la generación de barro que predisponga a resbalones tanto de animales como de personas. Los ALAMBRADOS deben estar diseñados y construidos de manera tal que ocasionen daños a los animales u operarios, principalmente compuestos de ocho a diez hilos lisos con una altura de entre 1,4 y 1,6 metro, con postes cada 3 metros y 3 - 4 varillas entre ellos a distancias iguales entre ellas para dar resistencia al claro formado. Figura 12 Por otro lado, como INSTALACIONES ACCESORIAS debe disponerse de mangas para animales adultos y terneros en donde examinar los animales y eventualmente realizar algún tratamiento veterinario, que cuente con andenes o estribos en relación directa con la altura de la manga. (ver Figura 12) El piso de las mangas también debe ser antideslizante, ya sea por uso de varillas, malla metálica u hormigón con rugosidad. En las INSTALACIONES PREVIAS A LA MANGA, resulta conveniente que las paredes interiores tengan un tablón a la altura de la paleta de los animales para evitar las lesiones que pueden producirse en los animales por golpes contra partes de la estructura. La BALANZA O BASCULA debe tener piso antideslizante y una estructura que permita el alojamiento del animal sin elementos que puedan lastimarlos o lesionarlos. Debe disponerse de CORRALES DE AISLAMIENTO2 que permitan la segregación de las tropas detectadas con algún tipo de novedad sanitaria. Finalmente, la ILUMINACION es un factor relevante en estos eventos en cuanto a su implicancia en el manejo de los animales. En este sentido, para espacios o circunstancias con limitada luz natural se debe contar con luz artificial dispues2  Resolución Senasa N° 1421/2000. Senasa • 97 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL ta para brindar una iluminación difusa por donde circula el animal y, de ser posible, con regulación específica de la orientación con el fin de facilitar y guiar el movimiento de los animales desde zonas de menor a mayor iluminación. 6.2.1 MANTENIMIENTO DE LAS INSTALACIONES Las instalaciones deben ser inspeccionadas de manera total y minuciosa antes del inicio de cada rutina, buscando partes rotas o elementos punzantes o salientes que puedan ocasionar daño a los animales u operarios. En todos los casos, se deben reparar o enmendar de manera inmediata pozos, tablas o barras rotas, pedazos de metal sobresalientes, clavos o bulones tanto de los lados internos como externos de las instalaciones. Contar con las instalaciones en buen estado es requisito para mantener el registro y habilitación de un predio por parte del Servicio Sanitario. 6.3 DEL INGRESO Y EGRESO DE ANIMALES El ingreso y egreso de animales debe cumplir con los criterios establecidos en el Capítulo 5 sobre transporte, haciendo hincapié en la admisión y utilización de camiones registrados y habilitados ante el Senasa. Resulta importante observar los indicadores de bienestar para evidenciar eventuales desvíos, actuar para corregirlos y/o informar a la empresa de transporte. 98 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 6.4 ASPECTOS PARTICULARES DEL MANEJO DE ANIMALES DURANTE LA JORNADA DE TRABAJO O EVENTO El ámbito en que se desarrollan este tipo de eventos resulta estresante para los animales debido a los variados y diferentes estímulos a los que son sometidos, como por ejemplo la carga y descarga repetida en un corto tiempo, la espera en corrales desconocidos contiguos a otros grupos de animales también desconocidos, y los movimientos y ruidos diferentes a los conocidos, entre otros. Como consecuencia de un mal manejo desde el momento del arribo de los animales al establecimiento, al estrés con el que arriban se le sumará mayor nerviosismo y/o agitación, y llevará a los mismos a buscar evadir todo estímulo negativo a partir de niveles de alerta y reactividad que pueden conducir a la generación de lesiones o contusiones al chocar contra las estructuras de los corrales, pasillos o mangas, además de aumentar el riesgo de los operarios en contacto con ellos. Desde el primer momento, la DESCARGA Y CARGA en los transportes debe cumplir con lo establecido en el Capítulo 5 del presente Manual. No debe permitirse el ingreso de animales incapacitados -con ceguera total, lesiones que impidan su normal movimiento y/o heridas considerables con o sin sangrado-, hembras en estado avanzado de gestación o animales que han sido sometidos recientemente a una intervención quirúrgica, ya que su movilización y manejo es incompatible con los principios de bienestar animal. La DURACION DEL EVENTO es un factor importante pero sin implicar un manejo acelerado de los animales que atente contra los principios generales de bienestar animal. Debe considerarse que los animales que arriban a estos establecimientos ya se encuentran cansados por el traslado y poseen cierto nivel de estrés asociado al mismo. La permanencia transitoria de los animales en las instalaciones debe ser el mínimo posible, proveyendo en todos los casos AGUA DE BEBIDA de maSenasa • 99 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL nera libre3. En caso de una ESTADÍA PROLONGADA -mayor a las 24 horasdebe proveerse de más espacio de corral para moverse, además de alimento en cantidad y calidad adecuada para cada especie y categoría, y reparo ante las condiciones climáticas, principalmente sol, viento y lluvia. La CARGA EN LOS CORRALES (densidad animal) debería rondar entre un 50 y 70% de su superficie, tal de facilitar el movimiento y arreo de los animales sin inducir golpes o amontonamientos sobre las instalaciones. El MANEJO DE LOS ANIMALES debe realizarse de manera tranquila respetando las características propias de cada especie, su zona de balance y su punto de fuga. Debe minimizarse la presencia de personas ajenas al manejo de los animales durante la carga y descarga, arreo de los animales y apotreramiento, entre otros. Los movimientos extraños, ruidos desconocidos, así como la ubicación de personas que no pertenezcan a la feria, pueden originar que se detenga la marcha del lote o la tropa. En este sentido, debe tenerse paciencia para que los animales se orienten y divisen las salidas hacia donde deben dirigirse. Durante el trabajo de aparte, se recomienda que los operarios se aseguren que el animal a ser apartado vea la salida hacia donde debe dirigir su paso, y que tenga espacio suficiente para avanzar hacia ella. La eliminación de las distracciones - objetos, sombras, brillos, perros, ruidos o personas que distraen o asustan al ganado- mejora el arreo de los animales. Cuando deban APARTARSE ANIMALES, se recomienda hacerlo en las mangas de las instalaciones mediante un aislamiento tranquilo y calmo, en forma ordenada y utilizando únicamente instrumentos inductores autorizados. Se debe evitar la CONFORMACION DE LOTES de un único animal, lo cual puede complicar su arreo; en estos casos, es importante incorporar 2 – 3 animales adicionales para facilitar el movimiento en las instalaciones. Por otro lado, no deberían formarse lotes de animales de distintas procedencias que 3  A modo de referencia, un animal consume entre un 8% y un 12% de su peso vivo en agua, dependiendo de la temperatura ambiental, el estado fisiológico, la edad y el sexo. 100 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria atentará contra el bienestar general del mismo. El TRAYECTO entre los corrales y las pistas de exhibición o exposición debe ser lo más corto posible. Caso contrario, deberían existir cadenas de lotes para ir acercando los lotes de animales por etapas y minimizar el estrés del arreo. El USO DE INSTRUMENTOS INDUCTORES DE MOVIMIENTO autorizados debe realizarse conforme los principios generales de bienestar animal. En este sentido, se recomienda la utilización de rebenques de lonja ancha, varas plásticas o flexibles en cuyo extremo se aten bolsas, cintas o tiras de plástico, sonajeros o cencerros, o porras de lona de manera de estimular el movimiento sin que el operario deba introducirse en la zona de lucha del animal. El uso de elementos rígidos contundentes o hirientes como bastones con extremos puntiagudos, cintas o tubos metálicos, látigos, cadenas, arreadores, alambres o correas para golpear a los animales se encuentra prohibido. Por otro lado, el uso eventual de la PICANA4 debe realizarse con aplicaciones individuales EXCLUSIVAMENTE EN BOVINOS Y CERDOS ADULTOS, nunca terneros o lechones, cuando se hayan agotado otras técnicas para impulsar el movimiento, el animal no se encuentre en movimiento pese a disponer de espacio suficiente, o se encuentre comprometida la integridad de el/los operario/s, incluyendo también a los hombres montados a caballo. Es importante destacar la sensibilidad al estrés de la VACA LECHERA DE PRODUCCION por lo que no se aconseja el uso de la picana en su manejo. Finalmente, debe recalcarse que la utilización de HOMBRES A CABALLO debe hacerse con especial cuidado de los principios de bienestar animal, evitando utilizar el animal como fuente de presión y empuje de los animales. El uso de PERROS, estén o no entrenados, no está permitido ni es aconsejable en estos eventos. Al FINALIZAR LA VENTA, los animales mostrarán mucho mayores signos de estrés que previo a su ingreso, por lo que su manejo deberá ser especialmente cuidadoso, evitando la mezcla de animales, categorías y/o tamaños heterogéneos. 4  Resolución Senasa No. 25/2013. Senasa • 101 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 6.5 INDICADORES ESPECIFICOS DE BIENESTAR ANIMAL EN REMATES FERIA, ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES DE HACIENDA, EXPOSICIONES Y AFINES Los indicadores de bienestar animal que deben tenerse en cuenta son: a) AL ARRIBO AL ESTABLECIMIENTO - Cantidad de animales caídos o con lesiones. - Cantidad de hembras con preñez avanzada o animales con intervenciones quirúrgicas recientes. - Estado de los animales (fatiga, cansancio, estrés). b) DURANTE Y AL FINALIZAR EL EVENTO - Identificación de problemas de infraestructura. - Provisión de agua en los corrales (y comida cuando corresponda). - Nivel de uso de la picana y otros instrumentos inductores de movimiento. - Nivel de ruido y gritos. - Resbalones y animales caídos y/o lesionados, o muertos. - Arreos acelerados. - Nivel de agitación en los animales. c) AL FINALIZAR LA CARGA EN LOS TRANSPORTES - Nivel de agitación de los animales. - Animales lesionados o caídos. - Nivel de uso de la picana. - Densidad de carga de los transportes. d) GENERALES DE LA RUTINA DE TRABAJO DEL DIA - Relación entre las horas de trabajo, la cantidad de animales manejados y la cantidad de personas vinculadas al manejo de los animales. - Cantidad de animales caídos y/o lesionados, o muertos. - Cantidad de personas lesionadas durante el trabajo. - Instalaciones rotas o estropeadas. - Quejas o reclamos de los usuarios. Es importante remarcar que un establecimiento con estructura edilicia inapropiada por presencia de roturas, salientes o elementos punzantes no sólo es indicador de una gestión deficiente del mantenimiento sino además de una gestión operativa de los eventos con problemas de manejo que llevan al bajo cuidado de las instalaciones en general, la generación de estos desperfectos y consecuentemente mayores costos de mantenimiento. 102 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 6.6 CAPACITACION DE LOS OPERARIOS Y PERSONAL DE LOS ESTABLECIMIENTOS Es fundamental que todos los operarios y personal que trabaje en estos establecimientos y estén vinculados al manejo de los animales y/o mantenimiento de las instalaciones estén capacitados específicamente en materia de Bienestar Animal. El responsable del establecimiento debe propiciar la realización de capacitaciones específicas en coordinación con el Senasa y toda institución que pueda eventualmente ser autorizada a estos efectos. Son clave los conocimientos en cuanto al comportamiento de cada especie, las buenas prácticas de conducción asociadas a la zona de balance y el punto de fuga y el uso de inductores de movimiento, entre otros. Senasa • 103 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL CUADRO RESUMEN 3 BIENESTAR ANIMAL EN REMATES FERIA Y ESTABLECIMIENTOS CONCENTRADORES INSTALACIONES Responsable de remate feria, establecimiento concentrador, exposición o evento con concentración de animales. - Diseñar, construir y mantener apropiadamente instalaciones adecuadas para la realización de la actividad para la especie y tipo de animales específicos con las que operen. - Uso y mantenimiento adecuado. Personal y operarios de remates feria, establecimientos concentradores, exposiciones o cualquier otra concentración de animales. 104 • Senasa - Informar sobre roturas o reparaciones necesarias. INGRESO Y EGRESO DE ANIMALES - Concurrir en el control de ingreso y uso de transportes registrados y habilitados ante el Senasa, conforme la normativa vigente, con especial atención a la densidad animal y el estado de los animales al momento de la carga y descarga. - Propiciar el cumplimiento de los principios de manejo de animales durante la carga y descarga, salvaguardando el uso apropiado de los instrumentos inductores de movimiento autorizados. - Respetar las regulaciones sobre DENSIDAD DE CARGA, conforme la especie animal y el tipo de transporte. - Observar el cumplimiento de la infraestructura de los transportes, conforme la normativa vigente, informando sobre los desvíos detectados. - Atender las condiciones de ingreso y egreso de los animales respecto del BA, informando sobre los desvíos detectados. - Cumplir los principios de manejo de animales durante la carga y descarga, haciendo buen uso de los instrumentos inductores de movimiento autorizados. - Respetar las densidades de carga indicadas, conforme la especie animal y el tipo de transporte. �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria MANEJO DE ANIMALES DURANTE LA OPERACIÓN DEL ESTABLECIMIENTO - Conocer los principios de manejo de animales consistente con su bienestar durante toda la operación de la feria, atendiendo el uso apropiado de los instrumentos inductores de movimiento autorizados, entre ellos la picana eléctrica. - Propiciar las buenas prácticas de manejo de los animales en consistencia con el BA por parte de los operarios. - Cumplir con los principios de manejo de animales consistente con su bienestar durante toda la operación de la feria, utilizando únicamente instrumentos inductores de movimiento autorizados, entre ellos la picana eléctrica. INDICADORES - Conocer los indicadores de BA asociados al transporte, las actividades conexas y el manejo de animales. - Propiciar el monitoreo y notificación de desvíos. - Impulsar las medidas correctivas necesarias. - Conocer los indicadores de BA en el manejo de animales, observándolos y notificando los desvíos que puedan identificarse. CAPACITACIÓN - Conocer los principios de BA asociados a la gestión de un remate feria, establecimiento concentrador, exposición o evento con animales. - Propiciar la capacitación de los operarios al respecto de los principios de BA en esta actividad. - Conocer los principios de BA asociados a la actividad y el manejo de animales. - Atender todas las capacitaciones sobre BA que sean definidas específicamente. Senasa • 105 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 106 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 7. MANEJO DE ANIMALES EN MATADEROS 7.1 RESPONSABILIDADES DE LOS ACTORES 7.1.1 RESPONSABLE o DIRECCION DE LA PLANTA (MATADERO) - Garantizar el cumplimiento de los principios y recomendaciones de bienestar a lo largo de la toda la rutina, desde la descarga de los animales hasta su degüello. - Designar un responsable de BA para todo la rutina, incluyendo la descarga de los animales y su estadía pre-faena y propiciar la generación de competencia de los operadores a través de su capacitación específica. - Velar por el mantenimiento adecuado de las instalaciones y equipos de trabajo del matadero, y realizar todos los cambios edilicios que fuesen necesarios. - Propiciar el cumplimiento de principios específicos para las faenas rituales de corresponder. 7.1.2 RESPONSABLE DE BIENESTAR ANIMAL DEL ESTABLECIMIENTO - Desarrollar e implementar los procedimientos de bienestar animal para las diferentes etapas vinculadas al manejo de animales dentro de la planta, desde la descarga de los mismos hasta su insensibilización y degüello. - Controlar el cumplimiento de los procedimientos, atendiendo los indicadores de bienestar animal, velando por el registro operativo de las acciones de cada etapa. - Propiciar la corrección de las no conformidades detectadas en las diferentes etapas asociadas al BA en faena. - Cumplir con el sacrificio de emergencia de animales en las situaciones en que su arribo a la planta presente condiciones acordes a la adopción de esta medida. - Informar al responsable directivo de la planta sobre el cumplimiento y no conformidades en materia de BA. 7.1.3 OPERARIOS - Cumplir con las buenas prácticas de manejo de animales y los principios y recomendaciones de BA en faena del presente manual. - Hacer uso apropiado de las instalaciones y equipos, informando sobre las roturas y/o reparaciones que fuesen necesarias. Senasa • 107 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL - Monitorear los indicadores de bienestar animal establecidos en los procedimientos operativos, cumpliendo con los registros específicos e informando sobre los desvíos que puedan sucederse. - Atender las capacitaciones específicas establecidas en el plan anual de capacitaciones de la planta. 7.1.4 JEFE DE SERVICIO DEL SENASA - Propiciar el cumplimiento de los principios y recomendaciones de BA en faena. - Auditar el trabajo del encargado de Bienestar Animal de la planta, con atención sobre las no conformidades y correcciones impulsadas. - Concurrir en la realización de capacitaciones específicas en la materia para los operarios de la planta. 108 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 7.2 DISEÑO DE LAS INSTALACIONES Y EQUIPOS La atención sobre el diseño y mantenimiento de las instalaciones de un matadero es un aspecto clave del Bienestar Animal que debe tenerse en cuenta para que las condiciones ambientales permitan el comportamiento natural de los animales y se minimice su estrés durante la espera y la propia rutina de faena. 7.2.1 ASPECTOS PARA ESPECIES MAYORES Y MENORES Las ZONAS DE DESCARGA Y ESTADÍA previa a la faena se emplazarán dentro del establecimiento en las áreas donde la contaminación sonora sea mínima, tanto las de origen interno derivada de las maquinarias y mecanismos empleados, como de las externas al establecimiento. Para el caso de demoras en la recepción de los animales, se debe contar con un espacio con apropiada circulación de aire en donde los camiones estén protegidos de las condiciones meteorológicas. La RAMPA DE DESCARGA contará con una plataforma de recepción llana de no menos de 3 metros de largo en la que atracará el transporte de hacienda a su misma altura para facilitar la descarga de los animales sobre una superficie visible y sin obstáculos. La misma puede ser FIJA, de materiales resistentes al tránsito de animales, o MOVIL, con la ventaja de poder adaptarse a las diferentes alturas de los transportes. Para los casos de transportes de más de un piso, es muy importante que el matadero cuente con una rampa a la altura de cada uno de ellos para la adecuada descarga de los animales, pudiendo ser fija o móvil. El ANCHO DE LA PLATAFORMA será igual al de la rampa de descarga, permitiendo que losanimales que van descendiendo se formen uno tras otro en fila india, construida con pisos antideslizantes –aunque evitando los diseños con salientes tipo tacos o bulones- y con una pendiente que no supere el 20% sobre el nivel del piso. Se encuentra permitido el uso de bajo relieves para facilitar la propiedad antideslizante. Estas estructuras contarán con paredes laterales ciegas para evitar que los animales vean movimientos externos al momento de la descarga. Se podrán instalar pasarelas elevadas para el acceso del personal encargado de recibir y guiar la hacienda en la descarga conforme los lineamientos de manejo animal de cada especie, además de poder realizar alguna tarea necesaria. La iluminación de los pisos de estas instalaciones será de modo talque los animales vean sectores más iluminados delante de ellos, pero evitando su encandilamiento y la presencia de sombras que se proyectan en los mismos y que impiden la circulación fluida. Las MANGAS DE TRÁNSITO serán de diseños curvos, evitándose en todos los casos los ángulos rectos en los cambios de dirección, debiendo los animales tener por delante como mínimo un espacio libre visible de aproximadamente 6 metros. El piso de estas mangas respetará el diseño antideslizante de bajo relieve, con Senasa • 109 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL superficie uniforme y sin la instalación rejillas o canaletas. Excepcionalmente, de contar con ellas se las debe disimular con una cubierta a nivel del piso de las mangas. Las paredes deben ser ciegas en todos los lugares que lo permitan, especialmente en aquellos lugares linderos con calles internas oalambrados perimetrales donde transiten personas y/o vehículos. Los CORRALES DE DESCANSO deben contar con vallados cuya superficie interna sea uniforme y lisa, tal de evitar lesiones a los animales. No deben existir estructuras salientes punzantes que puedan lesionar a los animales, siendo caso contrario de diseño romo. Las superficies visibles por los animales serán pintadas de colores claros mate. Se debe disponer de agua de bebida libre a los animales en bebederos que garanticen la provisión continua pero sin desbordes, y en caso de superar las 24 horas se debe también proveer alimento. El tamaño de estos corrales debe garantizar un mínimo de metros cuadrados por animal conforme el siguiente Cuadro 9. Cuadro 9. Superficie mínima en los corrales de descanso por especie animal. Super�icie (m2/animal) BOVINOS EQUINOS 2,5 2,5 CERDOS 1,2 OVINOS CAPRINOS 1,2 1,2 En particular de los CERDOS es muy importante que las paredes sean ciegas para evitar que los animales de diferentes lotes se vean entre sí, y de esta manera eliminar los problemas de manejo y comportamiento, como el canibalismo. Por otro lado, para el caso específico de los EQUINOS, se debe contar con CORRALES DE ESTADÍA para esperas mayores a las DOCE (12) horas, en donde cuenten con piso de tierra, agua, sombra y forraje, además de una superficie por animal de 10 m2. El TECHO DE LOS CORRALES debe facilitar que las condiciones ambientales sean satisfactorias para los animales, tanto en climas calurosos como fríos, teniéndose en cuenta la renovación de aire para evacuar vahos y emanaciones irritantes y la regulación de la temperatura ambiental. La iluminación de los corrales será de tipo difusa evitándose la proyección de sombras. En el caso particular del CORRAL DE ENCIERRE PREVIO A LA MANGA DE ABASTECIMIENTO DEL CAJÓN DE NOQUEO, las condiciones estructurales no difieren de las requeridas para las instalaciones en general (paredes laterales ciegas, de superficie lisa o con salientes romos, de revoque alisado y de color claro o mate que no refleje la luz). Su diseño más funcional debe ser circular de 3,5 metros de radio para bovinos, 2,5 metros para ovinos y 2 metros para cerdos, con dos puertas de igual longitud de una sola hoja, con las que se “barren” los animales hacia la manga, y una altura que supere la cabeza de los mismos a efectos de evitar que visualicen fuera de ellas. El ingreso a la manga debe ser en embudo para bovinos y ovinos, pero abrupto en cerdos para evitar que se atoren. El CAJON DE NOQUEO o INSENSIBILIZACION debe poseer piso horizontal 110 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria antideslizante y estar dotado de un mecanismo que permita volcar al animal ya insensibilizado con una inclinación tal que permita su deslizamiento lento y suave hacia la parrilla receptora, en donde se controlará la efectividad de la insensibilización y luego se lo izará al riel de colgado que lo llevará al sector de degollado. En caso de la FAENA RELIGIOSA, debe tenerse en cuenta que este cajón debe estar diseñado específicamente para contar con sujeción de la cabeza conforme la técnica del ritual. Las zonas del encierre de los animales, cajón de noqueo y degüello deben tener el menor ruido posible durante el funcionamiento, manteniendo la adecuada lubricación de las partes móviles y utilizando amortiguadores de sonido en los equipos mecánicos. En todos los casos deben utilizarse EQUIPOS e INSTRUMENTAL diseñados para su uso en la especie que se faena, tal de garantizar el cumplimiento de las buenas prácticas y la correcta insensibilización y degüello. El fabricante del equipo debe brindar instrucciones detalladas a los usuarios sobre el uso de los equipos para garantizar un correcto funcionamiento y la eficacia de la insensibilización. El matadero debe instaurar un programa de mantenimiento preventivo (mantenimiento y/o calibración de los equipos de insensibilización de la planta) conforme las indicaciones de cada fabricante y el tipo de uso y desgaste que tengan. Para la INSENSIBILIZACION por NOQUEO deben utilizarse equipos con regulación de la presión del aire comprimido según el peso medio de los animales que se faenan. En el caso de NOQUEO POR ELECTRONARCOSIS, el equipo debe contar con amperímetro y voltímetro de fácil lectura, garantizar la aplicación de la corriente de manera constante y contar con alarmas cuando la corriente entregada sea menor a la regulada para la faena. El uso de equipos con 2 o 3 electrodos resulta igual de efectivos debiendo contemplar las especificaciones del equipo en cuanto al uso y regulación específica para la especie que se faena. Si se usa la CÁMARA DE GAS para insensibilización con dióxido de carbono, el equipo debe monitorear la concentración del gas en tiempo real y contar con un dispositivo audible y visible que alerte sobre el descenso de la concentración por debajo de su nivel mínimo de trabajo. Indistintamente del método, es obligatoria la existencia de un EQUIPO AUXILIAR de emergencia para resolver situaciones en donde la insensibilización llevada a cabo no haya resultado efectiva, o en donde el equipo primario deje de funcionar. En todos los casos, es importante que en el sector de insensibilización se disponga de documentos con los procedimientos de referencia en el que se especifiquen las características del equipo y los parámetros de calibración (por ejemplo, presión de disparo según peso medio de los animales en caso del martillo neumático o concentración mínimo de dióxido de carbono para la cámara de gas). Asimismo debe contarse con infografías con datos sobre el punto y buenas prácticas de insensibilización y su secuencia, el criterio de insensibilización aplicado Senasa • 111 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL al usar el martillo neumático o la electronarcosis, además de la caracterización de los desvíos y su eventual corrección. 7.2.1.1 ASPECTOS PARTICULARES PARA EQUIDOS En las INSTALACIONES PARA EQUINOS es importante remarcar la necesidad de brindarles espacio adecuado en los corrales para que puedan moverse libremente evitándose golpes o amontonamiento que lleven a peleas. Además, deben contar con libre disposición de agua limpia de bebida, especialmente en el caso de las plantas donde los animales tienen períodos de espera prolongados. 7.2.1.2 ASPECTOS PARTICULARES PARA CERDOS En las INSTALACIONES PARA CERDOS, cuando la inclinación de la rampa sea superior a 10 grados, las mismas deben estar equipadas con un sistema que garantice que los animales transiten sin riesgo ni dificultades, por ejemplo con listones transversales. En los corrales pre-faena, la predisposición de esta especie a la hipertermia demanda que los mismos tengan instalado un sistema de aspersión de agua (foggers) para mantener una temperatura entre 13 y 21 ºC. 7.2.1.3 ASPECTOS PARTICULARES PARA OVINOS Y CAPRINOS En OVINOS Y CAPRINOS, para el tránsito de los animales dentro del establecimiento pueden utilizarse cintas trasportadoras en el acceso al cajón de noqueo, con paredes oblicuas que los sujeta y mantienen parados para poder ser insensibilizados eléctricamente. 112 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 7.2.2 ASPECTOS PARA AVES Y LAGOMORFOS La ZONA DE DESCARGA de los animales debe estar techada para prevenir la exposición directa a la luz del sol y la lluvia, además de contar con ventiladores que garanticen una corriente de aire y aspersores de agua tipo spray ––foggers– para poder realizar un descenso de la temperatura corporal. La descarga de las jaulas podrá realizarse por medios mecánicos siempre que se garantice la minimización de los ruidos. Es importante la ILUMINACION con luces con longitudes de onda corta, es decir con un espectro entre 340 – 380 nm hasta 700 – 730 nm, que favorecen el manejo de las aves, especialmente en tono azul. Las NORIAS DE COLGADO deben ser diseñadas especialmente para la especie que se faena, garantizando la correcta sujeción y la ausencia de puntos que lesionen los animales durante su funcionamiento. En las AVES, el ambiente donde los animales circulan hacia el tanque de insensibilización debe estar en penumbras y contar con una superficie de apoyo. El tanque de agua para el aturdido debe tener el tamaño adecuado según la especie que se faena, además de contar con un sistema para regular el nivel del agua que garantice el mantenimiento del nivel adecuado para la correcta insensibilización de los animales. Para todas las especies, los EQUIPOS DE INSENSIBILIZACION deben estar regulados conforme la especie que se faena, de forma tal que no afecten el sistema cardiovascular del animal y permitan un desangrado apropiado y completo. En este sentido, la regulación de la intensidad de la corriente es clave para su ajuste según el peso, raza y sexo de los animales y la velocidad de la noria. En el caso de la INSENSIBILIZACIÓN INDIVIDUAL POR ANIMAL, el equipo debe estar provisto de tres dispositivos visibles para los operadores: uno que mida la impedancia de la carga y evite su funcionamiento si no circula la intensidad mínima requerida, otro acústico o visual que indique el tiempo de su aplicación al animal, y un tercero que indique la tensión y la intensidad de la corriente utilizada. La inclusión de dispositivos de registro automático del funcionamiento es aconsejable para el control por parte del responsable de bienestar animal de la planta. La noria de tránsito de los animales luego del degüello debe tener una longitud apropiada para garantizar el desangrado completo. En caso de utilizar equipo de escaldado, el mismo debe instalarse en un punto al final de desangrado que garantice que no ingresan animales aún conscientes. Senasa • 113 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 7.3 DESCARGA Y PRE-FAENA 7.3.1 ASPECTOS PARA ESPECIES MAYORES Y MENORES La DESCARGA debe ser tranquila, utilizando las características propias de cada especie en cuanto a su tipo de visión, punto de balance y manejo para impulsar su movimiento, evitando utilizar la violencia o gritos y garantizando que el uso de los instrumentos permitidos sea realizado conforme las especificaciones e indicaciones. La descarga de los animales siempre debe realizarse en el menor lapso posible posterior al ingreso de los animales al matadero, minimizando la generación de estrés y, en particular, teniendo en cuenta el tiempo que los animales han viajado desde su establecimiento de origen. Al acoplar el camión a la rampa de descarga se debe verificar que la misma quede alineada a la jaula y que, en caso de quedar espacio libre entre rampa y puerta de la jaula, la separación sea subsanada rellenando el espacio con fardos o un piso que evite el tropiezo de los animales. En el mismo sentido, es importante contar con protecciones laterales para evitar caídas y/o lesiones de los animales por los espacios entre la puerta y la rampa. En caso de animales que arriben a la planta en alguna condición que demande la realización de un SACRIFICIO DE EMERGENCIA, el mismo debe ser llevado a cabo lo más pronto posible utilizando los equipos y sala específicos para estos efectos. La PERMANENCIA EN CORRALES DE DESCANSO debería ser el mínimo necesario para que los animales, según la especie de la que se trate, alcancen el nivel de homeostasis y no manifiesten estrés. Un animal fatigado o estresado tendrá un desangrado menor o incompleto, además de aumentar la probabilidad que agentes patógenos, como la Escherichia Coli y bacterias anaeróbias, puedan pasar al torrente sanguíneo, contaminar órganos y tejidos y alterar las condiciones higiénicas de la carne y su posterior conservación. Por otro lado, un animal cansado posee menores reservas de glucógeno en los músculos, que posteriormente derivan en una incorrecta maduración de las carnes y la aparición de carnes oscuras, firmes y secas o DFD en su sigla en inglés. El Cuadro 10 a continuación presenta los tiempos mínimos y máximos por especie que deben respetarse, siendo requisito en todos los casos la provisión de agua de bebida a los animales durante el mismo. En caso de permanencias eventuales por más tiempo en los corrales de descan- 114 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria so, debe proveerse alimento y cama a los animales tal de mejorar el bienestar hasta la faena propiamente dicha. Tiempo de espera (horas) BOVINOS EQUINOS CERDOS OVINOSCAPRINOS MÁXIMO 72 12 (*) 12 24 MÍNIMO 6 6 2 6 (*) Superado este plazo deben ser alojados en corrales de estadía, por no más de 10 días hasta su faena. Cuadro 10. Tiempo de espera mínimo y máximo en corrales prefaena por especie. 7.3.1.1 PARTICULARIDADES DE LOS EQUINOS En los EQUINOS es importante evitar la mezcla de distintos grupos de caballos en un mismo corral, tal de evitar peleas y lesiones entre caballos de distintos grupos. 7.3.1.2 PARTICULARIDADES DE LOS CERDOS En los CERDOS es importante descargarlos en pequeños grupos conformados de animales de un mismo establecimiento, arreándolos, en forma silenciosa y por pasarelas ciegas, hacia corrales vacíos y con paredes completas que eviten la visión de los corrales linderos. Es importante respetar la densidad animal para minimizar la generación de estrés durante la espera. Senasa • 115 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 7.3.2 ASPECTOS PARA LAS AVES Y LAGOMORFOS La DESCARGA debe iniciarse en el menor lapso posible posterior al ingreso de los animales a la planta, en un MAXIMO NO MAYOR A LAS TRES (3) HORAS DESDE EL ARRIBO. La zona de descarga debe tener buena ventilación y estar protegida de los extremos climáticos. Indistintamente de ser un procedimiento manual o automático, el mismo debe hacerse garantizando el adecuado manejo de las jaulas, previniendo su caída y agrupándolas en un lugar protegido de las inclemencias climáticas. No es adecuado arrojar o lanzar los animales hacia la zona de descarga. En caso de realizar el PESADO de los animales, se deben evitar los movimientos excesivos que generaran estrés. Cuando se usen jaulas con fondo flexible o perforado, la descarga por expulsión debe realizarse con cuidado para prevenir la generación de heridas. 116 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 7.4 FAENA PROPIAMENTE DICHA El ingreso de los animales a la zona de noqueo debe realizarse manejándolos conforme los criterios generales, utilizando cuando sea necesario los instrumentos inductores de movimiento según sus indicaciones. Es importante que el ingreso al cajón de noqueo se encuentre bien iluminado, evitando sombras y manchas brillantes de luz que puedan inhibir el avance de los animales. 7.4.1 CONSIDERACIONES GENERALES ACERCA DE LA INSENSIBILIZACIÓN EN LAS DIFERENTES ESPECIES La INSENSIBILIZACION es la etapa más importante de la faena ya que se sustenta en el trato humanitario de los animales, dado que el uso correcto de cada técnica garantiza interrupción de las funciones cerebrales y la minimización de la angustia y el dolor mediante la generación de una inconsciencia instantánea que permite el posterior degüello para ocasionar la muerte por falla circulatoria de manera “natural”. Para lograr una correcta insensibilización, se debe realizar una buena sujeción y contención de los animales, evitando el forcejeo, presión excesiva, movimientos bruscos o sacudidas. En caso de utilizar dispositivos mecánicos, los mismos deben garantizar la inmovilización lateral y pectoral pero sin generar una presión que lesione a los animales. Los métodos aceptados en la actualidad1 incluyen la CONMOCION, exceptuando el uso de la maza o martillo2, la ELECTRICIDAD y los GASES INERTES. La CONMOCION como método mecánico puede realizarse mediante el uso de perno cautivo penetrante o de perno cautivo no penetrante, en ambos casos sin proyectil; en el primer caso se produce daño físico en el cerebro para causar la inconsciencia, mientras que en el segundo es la modificación de la presión intracraneana ocasionada por la contusión la que genera la misma. Indistintamente del método, el operario deberá lograr la insensibilización en forma inmediata en el primer intento, siendo para ésto fundamental el disparo sobre el animal inmóvil en la posición correcta, con la pistola ubicada en la posición indicada según la especie animal que se faena. Es muy importante la apropiada calibración de la presión de aire comprimido del equipo según el peso medio de los animales a ser faenados conforme especifican las instrucciones del equipo, tarea bajo la responsabilidad del operario junto al responsable de bienestar animal de la planta. En relación a uso de la ELECTRICIDAD, se debe garantizar la correcta regulación de los equipos en cuanto a su amperaje, el voltaje y la frecuencia, y la ejecución correcta de la técnica tanto en cuanto al ajuste de los electrodos y cables como su limpieza. La adecuada insensibilización se evidencia por el estado inerte del cuerpo y la falta completa de sensibilidad y conciencia. 1  El Senasa podrá eventualmente aprobar otro sistema. 2  Ley 18819/1970. Senasa • 117 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Es importante aclarar que en el noqueo mecánico y eléctrico el animal puede realizar una patada refleja luego de su caída, la cual debe ser ignorada para continuar con la rutina de faena. El uso de GASES solo se encuentra autorizado en aves y cerdos, sea por monóxido o dióxido de carbono, siempre en las concentraciones mínimas indicadas. Las cámaras utilizadas deben contar con iluminación apropiada que no inhiba el ingreso o permanencia de los animales en el recinto, y un dispositivo para monitorear de manera permanente la concentración de CO2 y el tiempo de exposición al gas de la rutina. Más allá del método utilizado, el ambiente de trabajo debe tener el menor ruido humano y/o mecánico posible, y que el movimiento del personal sea en consistencia con los lineamientos generales de bienestar animal. Indistintamente del método utilizado, debe tomarse como referencia que entre la insensibilización y el degüello de una especie mayor o menor debe insumirse el menor tiempo posible, tomando como referencia un tiempo máximo de entre SESENTA (60) y SETENTA Y CINCO (75) segundos según la especie. 118 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 7.4.2 INSENSIBILIZACION POR ESPECIE El operario encargado del noqueo debe conocer previamente el peso promedio de los animales de la tropa para ajustar la presión del martillo, indistintamente del uso de perno perforante o no perforante. El martillo debe accionarse sobre la región frontal en el punto específico definido para cada especie, y en un ángulo de 90° respecto del cráneo del animal, conforme se detalla en las siguientes figuras. 7.4.2.1 BOVINO En los bovinos, la insensibilización mecánica con perno penetrante debe aplicarse en el punto de intersección de dos líneas imaginarias trazadas desde detrás de los ojos hasta las yemas de los cuernos opuestos. Figura 13. Punto de insensibilización mecánica en bovinos El uso del perno no penetrante únicamente es recomendado en animales no mayores a los 10 kg, en cuyo caso la posición del impacto debe realizarse 2 cm por encima del punto anterior para lograr una correcta insensibilización del animal. Para el caso de la CONMOCION ELECTRICA, deben resaltarse las ventajas del uso de equipos automáticos que facilitan el cumplimiento del procedimiento de insensibilización, minimizando los factores humanos de la técnica, y además de eficaces minimizan los factores de estrés de los animales y por lo tanto las manifestaciones asociadas a desvíos del bienestar animal. La corriente mínima a utilizar debe ser de 2,5 amperes. Senasa • 119 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 7.4.2.2 EQUINOS En esta especie se usa la CONMOCION POR PERNO PENETRANTE. El cerebro de los caballos se encuentra situado en una posición alta dentro del cráneo por lo cual el sitio ideal para el noqueo por conmoción es en la mitad de la frente, específicamente tomando dos líneas imaginarias que van desde los ojos a la oreja opuesta, y el noqueo debe hacerse aproximadamente 1 centímetro sobre el punto donde se cruzan dichas líneas. Figura 14 Punto de insensibilización mecánica en equinos 120 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 7.4.2.3 CERDOS Existen variados métodos de insensibilización de cerdos, aunque los más utilizados son la anoxia inducida por dióxido de carbono y la electronarcosis. En ambos casos se debe monitorear que la insensibilización sea efectiva, siendo para esto importante garantizar el correcto funcionamiento de los equipos. Para el caso del uso de la anoxia por dióxido de carbono (cámaras de gas), la cantidad de cerdos que entran en la cámara de gas depende de la capacidad especificada por el fabricante del equipo de insensibilizado. La cámara debe contar con una iluminación que no inhiba el ingreso de los animales ni los encandile, y un dispositivo para monitorear de manera permanente la concentración de CO2 y el tiempo de exposición de los cerdos al gas. Cada rutina debe considerar al menos DOS (2) animales para minimizar el estrés de esta etapa. Está indicado que los cerdos sean expuestos a una concentración mínima de CO2 del 80% por al menos 100 segundos una vez alcanzada esta concentración en toda la cámara según el registro del equipo. De modificarse el tiempo de exposición, el mismo debe asegurar que al finalizar la insensibilización ningún cerdo quede con signos de conciencia, aspecto a ser definido y monitoreado por el responsable de bienestar animal de la planta. En el caso de la electronarcosis, la corriente utilizada no debe ser menor a 1.3 Amperes y la aplicación no tener un tiempo menor a los 3 segundos. Los electrodos deben aplicarse entremedio del ojo y la oreja, con presión para reducir la resistencia eléctrica, en dirección a la columna vertebral. Los electrodos deberán abarcar el cerebro del animal y adaptarse al tamaño de éste. Durante la rutina de insensibilización, los electrodos deben limpiarse cada 20 – 25 aplicaciones. Finalmente, aunque su uso es menor, la insensibilización mecánica con perno penetrante debe realizarse en el centro de la frente entre los ojos conforme se presenta en la figura 15. Figura 15. Punto de insensibilización mecánica en cerdos Senasa • 121 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 7.4.2.4 OVINOS Y CAPRINOS El uso de la electronarcosis debe realizarse con la corriente regulada en 1,0 amp para adultos y 0,7 amp para corderos y cabritos, en ambos casos por un tiempo mínimo de 3 segundos. Cuando se utilice la insensibilización mecánica con perno penetrante será importante la posición óptima del instrumento según sean animales con o sin cuernos. La Figura 16 presenta la posición para animales sin cuernos, mientras que la Figura 17 lo hace para animales con cuernos. Figura 16. Punto de insensibilización mecánica en ovinos Figura 17. Punto de insensibilización mecánica en caprinos 122 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 7.4.2.5 AVES Y LAGOMORFOS Pese a que en las AVES el aturdimiento por electrocución contempla cabeza y tronco y en los LAGOMORFOS sólo la cabeza, en ambos casos debe atenderse la calibración del equipo en cuanto a la corriente mínima (Amperes –A-), la tensión mínima (Voltaje –V-), la Frecuencia máxima (Hertz –Hz-) y el Tiempo mínimo de exposición, además del flujo constante de la corriente. Corriente recomendada (mA) Frecuencia (Hz) POLLOS PAVOS <200 (*) 200 - 400 400 - 1500 PATOS Y GANSOS LAGOMORFOS 100 250 130 60 200 400 - - 150 400 - (*) En todos los casos, la frecuencia mínima no debe ser menor a 50 Hz. Cuadro 12. Corriente recomendada para la insensibilización de las aves - Senasa • 123 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 7.4.3 IZADO (COLGADO) Y SANGRADO (DEGÜELLO) DE LOS ANIMALES Una vez que el animal fue insensibilizado, se extrae del cajón de noqueo y se maneará por la parte distal de uno de sus miembros posteriores por medio de una cadena e izado al riel de sangría. Esto debe ser inmediato a la caída, por lo que en especies menores resulta apropiado ejecutar la rutina con dos operarios, uno para la insensibilización y otro para el enganche e izado. En todos los casos, es importante que se minimice el tiempo entre la insensibilización y el degüello, ya que en este lapso el animal puede recuperar la conciencia y el degüello se realice generando dolor y sufrimiento al animal. Consecuentemente, toda planta de faena debe tener una cantidad de personal acorde al ritmo y necesidades de la faena, junto con un procedimiento operativo documentado que defina claramente las diferentes etapas y sus tiempos de duración específicos por especie que se faena. En conjunto, el tiempo transcurrido entre la insensibilización y el degüello debe se el menor posible tomando como referencia para cada especie los plazos máximos que se presentan en el Cuadro 13. Cuadro 13. Plazo máximo entre insensibilización y degüello recomendado. Especie Método de insensibilización BOVINOS Y BUBALINOS Noqueo con perno penetrante EQUINOS CERDOS OVINOS Y CAPRINOS AVES Y LAGOMORFOS Noqueo con perno no penetrante Electronarcosis Noqueo con perno penetrante Cámara de gas Electronarcosis Electronarcosis Electronarcosis Cámara de gas Tiempo máximo (segundos) Menor a 75 Menor a 15 Menor a 30 Menor a 75 Menor a 30 Menor a 30 Menor a 30 Menor a 20 Menor a 60 El degüello debe realizarse mediante el corte (sección) de las dos arterias carótidas o de los vasos sanguíneos de los que éstas proceden, por ejemplo con incisión del tórax con una varilla. Los cuchillos deben estar bien afilados y ser desinfectados entre cada uso. El personal debe tener conocimientos para reconocer los signos de recuperación de conciencia en los animales, en cuyo caso deberán repetir la insensibilización conforme se encuentre definido en el procedimiento operativo “de emergencia” específico. No se debe pasar a la siguiente etapa de la faena, en particular el desollado, corte de miembros, escaldado, desplumado, corte de cabeza o patas, sin haber completado el sangrado, tomando como plazo mínimo de referencia los treinta (30) segundos y un promedio de un (1) minuto para la sangría. Siempre deben haber cesado todos los reflejos cerebrales para continuar la rutina de faena. 124 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 7.4.3.1 PROCEDIMIENTOS ESPECIFICOS DE DEGÜELLO EN BOVINOS, EQUINOS Y CERDOS El degüello se debe realizar por sección de las dos arterias carótidas o los vasos de los que nacen, utilizando un cuchillo con una hoja de al menos doce (12) cm de largo, con un corte único y continuo. Por lo general se utilizan dos cuchillos, uno para el cuero y otro para la sección de los vasos, debiendo obtener un sangrado rápido y profuso, hasta la pérdida completa de la sangre en un plazo no menor a los treinta (30) segundos. 7.4.3.2 PROCEDIMIENTOS ESPECIFICOS DE DEGÜELLO EN OVINOS Y CAPRINOS Una vez insensibilizado el animal, se debe colgar por un miembro posterior e introducir el cuchillo en la base del cuello para cortar grandes vasos y corazón, a efectos de producir un sangrado rápido. 7.4.3.3 PROCEDIMIENTOS ESPECIFICOS DE DEGÜELLO EN AVES Y LAGOMORFOS El SANGRADO se realiza mediante la sección de los grandes vasos del cuello, ya sea en forma manual o automática, debiendo garantizar el desangrado completo previo al ingreso a la etapa de escaldado, de existir. Senasa • 125 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 7.5 RITOS RELIGIOSOS (HALAL, KOSHER) Para el caso particular de los ritos religiosos, la insensibilización no se realiza en la faena Kosher, mientras que resulta optativo para la faena Halal. En todos los casos se debe contar con un procedimiento estandarizado adoptado en la planta en el cual se especifique la técnica de sujeción y los pasos del ritual de faena. El degüello debe efectuarse inmediatamente después de la sujeción cómoda y suave de la cabeza y cuerpo mediante un cajón de inmovilización específicamente diseñado a estos efectos, tal de minimizar la generación de estrés en el animal. 126 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 7.6 INDICADORES ESPECIFICOS DE BIENESTAR EN EL MATADERO O FRIGORIFICO El monitoreo del bienestar animal es una función del responsable de BA de la planta, y todo aquel en quien éste delegue, que debe realizarse de manera periódica y registrarse en cada rutina de faena que se lleve a cabo en el matadero. Para esto, es necesario la elaboración de un Manual de Bienestar Animal de la planta que abarque todas las etapas críticas. En la ETAPA DE DESCARGA Y ESTADÍA PREVIA A LA FAENA, se medirá periódicamente el número de animales caídos, el número de animales lesionados o con cojeras y la cantidad de resbalones o caídas que se suceden durante el manejo de los animales, además del número de animales que vocaliza y el número de animales sobre los cuales se utilizan los inductores de movimiento (picana). Debe evaluarse los porcentajes a lo largo del tiempo, siendo importante el registro sistemático y la adopción de nuevas capacitaciones específicas como medida correctiva sobre el manejo de los operarios cada vez que se entienda necesario. Para el caso particular de las lesiones –heridas-, las mismas se deben valorar de acuerdo con el número, la localización (cabeza/cuello, flancos/espalda y cuartos traseros), la naturaleza (arañazos o heridas superficiales, heridas abiertas, abrasiones, marcas, abscesos o hematomas), el tamaño y el grado de cicatrización. Es importante tener en cuenta que el tiempo de espera en los corrales es directamente proporcional a la cantidad de heridas contabilizadas en los animales. OTROS INDICADORES EN ESTA ETAPA son la manifestación de miedo, la disponibilidad de agua y alimentos en los corrales según corresponda, el comportamiento de los animales como correlación del nivel de estrés relativo que presentan, y el estado nutricional/corporal de los animales. Animales en estados nutricionales deficientes al ingreso indica la falta de bienestar animal al momento de su carga en origen, cuestión que debe atender el proveedor del matadero. Dentro de la LINEA DE FAENA, la eficacia de la insensibilización por parte de los operarios puede ser evaluada por las características que adopta el cuerpo del animal tras la misma. Específicamente, se debe atender: Que la CABEZA Y EL PESCUEZO estén relajados y flojos, en un plazo entre lo inmediato por insensibilización y los primeros veinte (20) segundos posteriores. Cuando el animal esté colgando de la cadena, su cabeza debe colgar derecha hacia abajo y la espalda debe estar recta. El animal no debe presentar ningún movimiento de la cabeza o columna que haga que la espalda se arquee y endurezca. n En las especies mayores y menores, la LENGUA debe quedar fuera de la boca, derecha y con sus músculos flojos. Una lengua tiesa y enroscada es signo de un posible regreso de la sensibilidad. n Los OJOS deben estar ampliamente abiertos, con una mirada vacía, sin movimiento de los mismos. En caso que se use insensibilización por métodos eléctricos, los bovinos pueden rotar el globo ocular y los porcinos pueden manifestar espasmos de párpados y/o movimientos rápidos e involuntarios de los ojos. n Senasa • 127 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Debe tenerse en cuenta que inmediatamente por insensibilización, el animal cerrará los ojos, pero luego se relajarán pudiendo abrir los párpados y presentar su mirada vacía. Debe observarse sin tocar los ojos, siendo que si el animal abriera y cerrara los párpados podría no haber perdido la conciencia de manera completa. El REFLEJO CORNEAL/PALPEBRAL –tocando con un dedo el ojo para evaluar la respuesta al cierre del párpado- es una técnica válida para evaluar la insensibilización previo al degüello. No deben existir CONTRACCIONES MUSCULARES VOLUNTARIAS, evidenciadas por intentos de erguirse o incorporarse una vez colgados. n La COLA del animal debe estar relajada y colgando hacia abajo en los bovinos, y lateral en equinos n No debe presentarse RESPIRACIÓN RÍTMICA; el resuello o jadeo indican que el cerebro está muriendo siendo correcto por un pequeño plazo hasta su cese completo. n En el caso de los CERDOS, la vocalización es un indicativo de la existencia de conciencia en el animal. n En todas las rutinas de faena, el responsable de bienestar animal de la planta, u otro operario en que se haya delegado la función, debe registrar periódicamente el resultado de la evaluación de la técnica de insensibilización considerando las características descriptas anteriormente. Durante la faena debe considerarse corregir desvíos mediante el ajuste y/o calibración de los equipos. En particular de los CERDOS, se debe evaluar la correcta insensibilización mediante la constatación de ausencia de al menos tres (3) de los siguientes indicadores: Respiración rítmica, Contracciones musculares voluntarias, Reflejo palpebral/corneal o Vocalización. La evaluación como valores relativos, expresados en porcentaje y comparados a lo largo del tiempo, puede indicar no conformidades que deben corregirse principalmente por medio de la capacitación de los operarios. 128 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 7.7 CAPACITACIÓN DEL PERSONAL El responsable/director de un matadero debe designar un responsable de bienestar animal en la planta que, además de llevar a cabo el control en esta materia, debe velar porque todos los empleados directamente vinculados al manejo de animales durante las etapas de descarga, estadía pre faena, insensibilización, colgado y degüello se encuentren capacitados. El responsable de bienestar animal de la planta debe acreditar3 su capacitación acorde a este rol por parte del Senasa, o cualquier otra institución en la cual el servicio sanitario haya específicamente delegado esta función. Es importante que el responsable de bienestar animal de la planta brinde anualmente capacitaciones específicas al personal en el marco del Plan Anual de Capacitación de la planta, o aquellas específicas ejecutadas como medida correctiva de los desvíos constatados, llevando los registros correspondientes para su acreditación ante el Senasa. En este mismo orden, la planta debe contar con Procedimientos Estandarizados para todas las etapas en donde debe garantizarse el cumplimiento de los criterios de bienestar animal, desde la descarga de los animales hasta el degüello, incorporando en los mismos las planillas de registro específicas de cada etapa, los valores de referencia para los indicadores de bienestar (cuando corresponda) y las medidas correctivas a adoptar sobre los desvíos identificados. Específicamente, el responsable de bienestar animal debe capacitar a los operarios en consistencia con estos procedimientos, haciendo hincapié en la atención a los indicadores de bienestar que deben observarse y las acciones que deben tomarse cuando se evidencian desvíos. 3  En el caso de mataderos frigoríficos habilitados para exportar a la Unión Europea, el Reglamento CE No. 1099/2009 establece la obligatoriedad de las plantas de contar con el RESPONSABLE DE BIENESTAR ANIMAL con un “certificado de competencia” que acredite su pericia como punto de partida para capacitar a los operarios involucrados en las etapas sensibles de la rutina de faena y garantizar el cumplimiento de los criterios de bienestar animal en faena. Senasa • 129 �CUADRO RESUMEN 4 - BIENESTAR ANIMAL EN FAENA INSTALACIONES Responsable del matadero Responsable de Bienestar Animal de la planta Operarios de la planta DESCARGA Y PREFAENA INSENSIBILIZACIÓN - Construcción y mantenimiento acordes con el tipo de producción, con atención a la zona de descarga, longitud y ancho de la plataforma, pendiente de la rampa, pisos, mangas, y corrales de descanso y estadía conforme la superficie mínima por animal, corral de encierre, cajón de insensibilización y equipos específicos. - Propiciar el cumplimiento de los principios de manejo acordes al BA, salvaguardando el sacrificio humanitario en animales convalecientes cuando corresponda. - Propiciar el cumplimiento del tiempo de descanso mínimo previo a la faena conforme la especie involucrada. - En las aves, garantizar el cumplimiento de la iluminación y nivel de ruido en la zona de descarga, minimizando el tiempo hasta la faena. - Propiciar el cumplimiento de los principios de insensibilización acordes al BA según la especie involucrada. - En el noqueo mecánico o eléctrico debe atenderse la calibración del equipo (presión según tipo de animal o corriente aplicada y la posición donde se ubica la pistola o electrodos). - En la insensibilización por gases debe callibrarse el equipo para garantizar la concentración del gas y el tiempo de exposición apropiados. - Velar por su uso y mantenimiento adecuado de las instalaciones. - Propiciar la correcta calibración de los equipos de insensibilización (cajón de noqueo, pistolas neumáticas, electrodos, cajones de insensibilización gaseosa). - Desarrollar los procedimientos operativos de trabajo, estableciendo los indicadores de bienestar animal que deben monitorearse, además de los registros específicos (de corresponder), y velar por su disposición en los diferentes puntos de trabajo. - Controlar el desempeño y registros específicos. - Impulsar las medidas correctivas sobre las no conformidades detectadas. - Velar por el cumplimiento del sacrificio humanitario cuando corresponda. - Desarrollar los procedimientos operativos de trabajo, estableciendo los indicadores de bienestar animal que deben monitorearse, además de los registros específicos (de corresponder), y velar por su disposición en la zona de insensibilización de la planta. - Controlar el desempeño y registros específicos. - Impulsar las medidas correctivas sobre las no conformidades detectadas. - Realizar un uso adecuado, informando sobre los desperfectos, roturas y/o reparaciones necesarias. - Cumplir con los principios de bienestar animal asociados al manejo de animales durante la descarga y encierre en corrales. - Atender la provisión de agua, alimento y cama -según corresponda-, de acuerdo a la especie involucrada en la faena durante el período de descanso o estadía. - Observar los indicadores, cumplir con los registros establecidos e informar los desvíos evidenciados al responsable de BA de la planta. - Cumplir con los principios de bienestar animal asociados a la insensibilización de animales. - Observar la adecuada calibración de los equipos y respetar las técnicas de insensibilización conforme al tipo de equipo utilizado. - Observar los indicadores, cumplir con los registros establecidos e informar los desvíos evidenciados al responsable de BA de la planta. �IZADO Y DEGÜELLO RITOS RELIGIOSOS INDICADORES CAPACITACIÓN - Propiciar el cumplimiento de los principios de izado y degüello acordes al BA, con especial atención a los tiempos máximos de izado y el degüello propiamente dicho. - Propiciar el cumplimiento de los principios de faena ritual (kosher o halal) acordes al BA. - Garantizar el equipamiento apropiado para las rutinas de faena religiosa, con especial atención del cajón de sujeción específico para la faena kosher. - Adoptar procedimientos estandarizados en cada etapa de la faena desde el arribo de los animales a la planta, en los cuales se definan los indicadores de bienestar animal específicos que deben ser monitoreados en cada etapa. - Propiciar la capacitación de los operarios de la planta vinculados al manejo de animales y etapas iniciales de la faena vinculadas con el bienestar animal por parte del responsable de BA de la planta o quien sea definido a estos efectos. - Desarrollar los procedimientos operativos de trabajo, estableciendo los indicadores de bienestar animal que deben monitorearse, además de los registros específicos (de corresponder), y velar por su disposición en la zona de izado y degüello. - Controlar el desempeño y registros específicos. - Impulsar las medidas correctivas sobre las no conformidades detectadas. - Desarrollar los procedimientos operativos de trabajo, estableciendo los indicadores de bienestar animal que deben monitorearse, además de los registros específicos (de corresponder), y velar por su disposición en la zona de degüello. - Controlar el desempeño y registros específicos. - Impulsar las medidas correctivas sobre las no conformidades detectadas. - Definir los indicadores de bienestar específicos de cada etapa junto con sus valores de referencia. - Evaluar de manera global el desempeño de la planta. - Cumplir con la acreditación de competencia en materia de bienestar animal en faena por parte del Senasa o cualquier otra entidad que pueda ser acreditada a estos efectos. - Realizar el plan anual de capacitación de la planta, abarcando todos los operarios en las diferentes etapas vinculadas con la recepción, manejo, cuidado, insensibilización y degüello de los animales. - Realizar capacitaciones ad-hoc cuando corresponda. - Cumplir con los principios de bienestar animal asociados al izado y degüello de animales. - Atender el tiempo máximo entre el izado y el degüello, conforme la especie en faena. - Observar los indicadores, cumplir con los registros establecidos e informar los desvíos evidenciados al responsable de BA de la planta. - Cumplir con los principios de bienestar animal asociados a la faena religiosa de animales. - Observar los indicadores, cumplir con los registros establecidos e informar los desvíos evidenciados al responsable de BA de la planta. - Conocer y atender los indicadores establecidos en cada etapa. - Cumplir con los registros que correspondan e informar todos los desvíos evidenciados al responsable de BA de la planta. - Atender a las capacitaciones establecidas en el plan anual de capacitación de la planta. - Requerir capacitaciones ad-hoc en la materia cuando se considere necesario. �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL 132 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 8. CONCLUSIONES Y PROSPECTIVA El Bienestar Animal es una responsabilidad individual de cada una de las personas que tiene contacto temporal o permanente con un animal doméstico, en donde deben garantizarse las Cinco Libertades mediante la provisión de alimentación, ambiente, salud y condiciones apropiadas para su comportamiento natural sin estrés, dolor o sufrimiento. Los principios y recomendaciones para cada especie resultan lógicos y simples desde un comienzo siendo importante su traducción en hábitos y buenas prácticas en cada rutina de trabajo y manejo de los animales por parte de los empleados rurales, operarios o toda persona en contacto con ellos. El estado de bienestar de los animales se consigue por la sumatoria de las acciones y cuidados propiciados todos los días indistintamente de la acción o situación en la que se encuentren, protegiendo las mejoras alcanzadas y previniendo las situaciones de estrés que rápidamente repercuten sobre la fisiología del animal, su comportamiento y los parámetros de rendimiento o productividad específicos. Más allá de la valoración del bienestar animal que puede realizarse en un momento particular de la vida del animal, que involucra un actor y eslabón específico de la cadena, es importante entender que su atención resulta una inversión con un alto retorno en beneficios tanto en lo individual como en lo social, lo ético (humano) y el desarrollo nacional. Cuidar a diario el confort de los animales implica la detección temprana de los desvíos y su corrección, de manera tal de evitar que el estrés se vuelva crónico y sus consecuencias problemáticas en todos los niveles, principalmente el resultado que el actor espera sobre su actividad. Resta insistir en la importancia de la sensibilización, concientización y capacitación de los diferentes actores como una acción sistemática que mejore progresivamente el respeto de sus principios y recomendaciones en cada eslabón y cada actor. Contar con un responsable del bienestar animal en cada establecimiento, etapa o actividad es importante para la observancia de las recomendaciones en esta materia. En este sentido, es fundamental el compromiso de las organizaciones y cámaras del sector agropecuario en general y de las asociaciones de productores de las diferentes especies en particular, las organizaciones no gubernamentales vinculadas a la temática, las universidades nacionales y provinciales, los centros de enseñanza agrotécnicos de diferentes niveles, y las instituciones de gobierno provincial y municipal competentes en la materia, para la difusión y capacitación sobre los principios de Bienestar Animal y su impacto en las diferentes dimensiones mencionadas. El Bienestar Animal en sí mismo demanda la construcción de hábitos en el manejo de cada especie animal, comúnmente conocidos como Buenas Prácticas, que requieren de información accesible y oportuna, además de simple y dirigida a las particularidades del actor destinatario, en cada uno de eslabones de cada cadena y/o actividad pecuaria. En este sentido, insistir de manera sistemática y continuada con capacitaciones, Senasa • 133 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL campañas de concientización y charlas para los diferentes actores es esencial en la internalización de las buenas prácticas y la generación de hábitos correctos de manejo. Es menester un futuro donde, al igual que lo sucedido en otros países del mundo y por sobre la dimensión ética, el bienestar animal se constituya como un atributo de valor (agregado) en las cadenas de producción y comercialización de animales que sea premiado –a razón de incentivo- y demandado individualmente por cada persona o consumidor y colectivamente por la sociedad en su conjunto. No hay dudas que la responsabilidad individual y el respeto de los principios de bienestar animal no sólo determina un beneficio directo, sino que además propicia el desarrollo humano sostenible del país tanto en las dimensión productiva básica como en la ética y social de ser una habitante más del planeta Tierra. 134 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria ANEXO I – DEFINICIONES ANIMAL DOMESTICO DE PRODUCCION: Bovinos, bubalinos, équidos, cerdos, ovinos, caprinos, aves, lagomorfos y camélidos sudamericanos. ACOPLADO: Unidad que mediante una lanza y/o enganche se une a la unidad tractora y sobre su chasis tiene adosado una caja tipo jaula para transportar animales vivos. AGUA POTABLE: Agua que al ser consumida por la población o los animales no causa daño a su salud. ALIMENTACION FORZADA: Procedimiento de alimentación en el cual se instroduce de manera manual o automática alimento en el buche o estómago del animal en contra de su voluntad o capacidad de alimentación. ALIMENTO BALANCEADO: Mezcla de ingredientes cuya composición nutricional permite aportar la cantidad de nutrientes biodisponibles necesarios para cubrir el requerimiento del metabolismo de un animal, en función de su etapa metabólica, edad y peso. ANIMAL DE REPRODUCCIÓN O DE CRÍA: Animal domesticado o en cautiverio que no está destinado a ser sacrificado en breve plazo. ATURDIMIENTO: Procedimiento mecánico, eléctrico, químico o de otra índole que provoque la pérdida inmediata de conocimiento; cuando se aplique antes del sacrificio, la pérdida de conocimiento se prolongará hasta que el sacrificio cause la muerte; cuando no se proceda al sacrificio, el procedimiento permitirá que el animal recobre el conocimiento. BIOSEGURIDAD: Refiere a los procedimientos adoptados en un establecimiento para garantizar el mantenimiento ecológico de los animales, preservando su sanidad y minimizando los factores de riesgo asociados a la actividad. BOVINO: Animal de la familia Bovidae, de los géneros primigenius taurus o primigenius indicus. BUBALINO: Animal de la familia Bovidae, del género Bubalus. CABAÑAS: Establecimiento donde se crían animales reproductores de alto valor genético. En las aves corresponde a Granjas de Abuelos o de Padres. CADENA PECUARIA: Enfoque holístico o sistémico donde la producción de una especie doméstica se conceptualiza de manera completa a través de sus diferentes actores (o eslabones) desde la producción primaria o granja hasta la matanza de los animales para su consumo. CAMIÓN JAULA: Unidad tractora que sobre su chasis tiene adosado una caja tipo jaula para contener animales vivos. CANIBALISMO: Conducta anómala producto de disconfort de las aves que consiste en picoteo de cloaca o extracción total de las plumas de sus congéneres Senasa • 135 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL CAPRINO: Animal del género Capra aegagrus hircus. CARGA: Procedimiento y la acción de dejar fluir a los animales hacia la unidad de transporte desde el lugar de embarque. CAUDOFAGIA: Conducta anómalade los cerdos consecuencia del disconfort que se manifiesta con la mordedura de colas de unos cerdos a otros CERDO: Animal del género Sus scrofa doméstica. CISTERNA: Vehículo que sobre su chasis posee un tanque cisterna con o sin sistema de oxigenación del agua contenida, diseñado especialmente para el traslado de peces. CONDUCTOR / CHOFER: Persona física responsable directa e inmediata de la conducción del medio o vehículo de transporte y del carguío (animales transportados). CUBICACION: Preparación de una solución de baño para tratamientos de parásitos externos de los animales mediante la mezcla de cantidades adecuadas de producto veterinario, estabilizantes (si corresponde) y agua. DENSIDAD O CAPACIDAD DE CARGA Y ESPACIO DISPONIBLE: Número de animales por unidad de superficie disponible y suficiente para que los animales, ni holgados ni apretados, se sostengan entre sí. Para el caso en que se produzcan caídas, puedan pararse y permitan su transporte cómodamente de un lugar a otro. Se determinan cada vez, por categoría según estado y tamaño corporal, conforme peso, formas y volumen. DESCARGA: Procedimiento consistente en descender los animales del vehículo, brindando a los animales la oportunidad que caminen despacio fuera del vehículo, de manera de reducir las posibles lesiones, con esta práctica. DISTRES: Estado de estrés crónico que desencadena importantes alteraciones en el metabolismo y comportamiento de un animal. DURACIÓN DEL TRANSPORTE O VIAJE: Tiempo transcurrido entre la carga del primer animal y la descarga del último animal, incluidos el/los periodo/s en el/ los puntos de parada o espera en el lugar de destino. EMBARCACIÓN JAULA: Vehículo acuático para transportar animales vivos. EQUIDO: Animal del género Equus, que incluye caballos, asnos, mulas y cebras. ESTABULACIÓN PARCIAL o SISTEMA SEMI-INTENSIVO: Los animales se hallan confinados en un galpón, con acceso a una zona restringida al aire libre. ESTABULACIÓN TOTAL, CONFINAMIENTO o SISTEMA INTENSIVO: Los animales se hallan totalmente confinados en un galpón, con control total o parcial de las variables ambientales. ESTEREOTIPIAS: Conductas repetitivas, invariables y sin función aparente que indican una falta de bienestar de manera crónica que no puede ser evadido por el animal. 136 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria ESTRES: Estado anormal en el que los animales tienen que hacer adaptaciones fisiológicas extremas, por ejemplo cambios en el ritmo cardíaco, en el ritmo de respiración, en la temperatura corporal y en la presión sanguínea con el fin de competir con su ambiente. EUTANASIA (SACRIFICIO HUMANITARIO): Acto de inducir la muerte usando un método que ocasione una pérdida rápida e irreversible de la conciencia, con un mínimo de dolor y angustia para el animal. EVALUACIÓN: Comparar el resultado obtenido con el resultado esperado, para establecer el valor de un proceso. FRIGORIFICO: Matadero en el cual se cuentan con cámara de frío para la conservación de las reses o carnes. FURGÓN: Vehículo con caja cerrada, pudiendo ser esta con o sin protección isotérmica destinada al traslado de huevos, aves adultas y aves de un día. GALPONES: Unidad física destinada a alojar aves comerciales. GRANJA DE POLLOS DE ENGORDE: Establecimiento comercial destinado a la producción de carne avícola y productos derivados. HALAL: Ritual religioso de la colectividad musulmana en el cual la matanza se realiza con o sin insensibilización previa con la certificación de un clérigo que garantiza el cumplimiento de los procedimientos específicos. INDICADOR: Instrumento de medida, cuantitativo o cualitativo que refleja la actividad que se quiere comprobar. KOSHER: Ritual religioso de la colectividad judía en el cual la matanza se realiza sin insensibilización previa por parte de un rabino, el cual certifica el cumplimiento de los procedimientos y criterios específicos de esta faena. LAGOMORFO/S: Refiere a los conejos y chinchillas. LECHE: Producto íntegro, no alterado, ni adulterado, del ordeño higiénico, regular, completo y no interrumpido de vacas sanas y bien alimentadas, que no contenga calostro y que esté exento de color, olor, sabor y consistencia anormales. MALNUTRICION: Estado de nutrición de un individuo que aparece como resultado de una dieta desequilibrada, en la cual hay nutrientes que faltan o están en exceso, llevando a la desnutrición o la obesidad, entre otras patologías. MANADA: Varios animales de la misma especie que se crían juntos bajo control humano o un grupo de animales silvestres de instinto gregario. A efectos del Código terrestre, se considera que una manada constituye una unidad epidemiológica (incluye parvada, piara, etc.). MATADERO: Establecimiento donde faenan –matan y descuartizan- animales para consumo, pudiendo ser de habilitación municipal, provincial o nacional. Si posee cámara de frío comúnmente se lo conoce como frigorífico. MEDICIÓN: Comparar algo con un patrón. Senasa • 137 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL MEDIO DE TRANSPORTE DE ANIMALES VIVOS: Toda unidad utilizada en el traslado de los mismos. MERCADO INTERMEDIO: Establecimiento en donde se comercializan animales con diferente destino y finalidad, pudiendo ser de carácter público o privado. MERCADO TERMINAL: Establecimiento en donde la comercialización de animales tiene como fin único la faena, pudiendo ser de carácter público o privado, y donde arriban animales de manera directa de establecimientos productores o indirecta de remates ferias o concentraciones de hacienda. OVINO: Animal del género Ovis orientalis aries. PERÍODO ANTERIOR AL VIAJE O PRECARGA: Tiempo durante el cual se concentran los animales para ser cargados. Es esencial dar un período de descanso después de la revisación y del manejo antes del transporte. PERÍODO DE ADAPTACIÓN: Tiempo posterior a la carga en el que se permitirá que los animales adopten una posición adecuada antes de iniciar la marcha de la unidad. PERÍODO DEL VIAJE: Tiempo entre la carga y la descarga, durante el cual los animales permanecen en el vehículo en movimiento o estacionado. PERSONAL U OPERARIOS CALIFICADOS: Personal capacitado o idóneo, a toda persona que por enseñanza recibida o poseer experiencia y criterio suficiente, tiene contacto directo y responsabilidad física inmediata sobre el manejo de los animales y sobre el uso de instalaciones y medios utilizados con criterios de bienestar animal. PLAYOS: Vehículos con caja playa sin laterales para el transporte de aves o contenedores para peces. POLLO DE ENGORDE: Ave de la especie Gallus gallus criada para la producción comercial de carne y productos derivados, con propósitos comerciales. No se incluyen las aves de corral criadas en poblados ni las parvadas de traspatio (producciones familiares de aves caseras para autoconsumo). PRODUCCION AL AIRE LIBRE: Los animales no están confinados en un galpón en ningún momento del periodo de producción, sino en una zona exterior habilitada para tal fin. PUNTO DE BALANCE: Lugar del animal a la altura de su hombro que define el avance o retroceso del mismo si una persona se para detrás o delante de él respectivamente. PUNTO DE PARADA: Lugar donde se interrumpe el trayecto por motivos indicados de vigilar la carga. REBAÑO: Varios animales de la misma especie que se crían juntos bajo control humano o un grupo de animales silvestres de instinto gregario. A efectos del Código terrestre, se considera que un rebaño constituye una unidad epidemiológica. 138 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria RESPONSABLE DE BIENESTAR ANIMAL: Persona dentro de un establecimiento productor, remate feria, cabaña, haras, frigorífico, matadero, exposición, etc. que es responsable de velar por el cumplimiento de los principios de bienestar animal dentro del mismo y capacitar a los operarios del lugar según corresponda. RESPONSABLE SANITARIO: Profesional veterinario encargado de la sanidad del establecimiento productor, remate feria, establecimiento concentrador, haras, cabañas, etc. SACRIFICIO SANITARIO: Operación efectuada bajo la autoridad de la Autoridad Veterinaria en cuanto se confirma una enfermedad y que consiste en matar a los animales afectados o que se sospecha han sido afectados del rebaño y, si es preciso, en otros rebaños que hayan estado expuestos a la infección por contacto directo con estos animales o indirecto con el agente patógeno causal. Todos los animales susceptibles, vacunados o no, de explotaciones infectadas deberán ser sometidos a sacrificio sanitario y sus canales deberán ser destruidas por incineración o enterramiento o por cualquier medio que impida la propagación de la infección por las canales o los productos de los animales sometidos a sacrificio sanitario. SEMIRREMOLQUE: Unidad que se une a la unidad tractora mediante el sistema de plato y sobre su chasis tiene adosado una caja tipo jaula para contener animales vivos. SLATS: Tipo de piso confeccionado con ranuras y sostenido por vigas que permite el pasaje de las deyecciones animales hacia abajo. SOBRECARGA: Número de animales que según categoría, estado y tamaño corporales excedan los límites correspondientes a la densidad de carga y espacio disponible de acuerdo con la definición mencionada precedentemente. TAMBO: Unidad productiva de bovinos con intenciones de obtención de leche. TENEDOR DE ANIMALES: Persona física o jurídica que tiene a su cargo en carácter permanente o transitorio animales domésticos. TENENCIA: Acción de tener o poseer una cosa. TIEMPO DE DESCANSO: Período continuo duranteel cual los animales no son movilizados ni desplazados, para su rehabilitación, permitiendo su hidratación. TRAILER: Unidad que mediante una lanza o enganche se une a la unidad tractora, destinada al transporte de animales de diferentes especies debidamente acondicionadas para tal fin. TRANSPORTE O TRASLADO: Procedimientos asociados al traslado de animales de un lugar a otro por diferentes medios. TRANSPORTISTA: Toda persona física o jurídica propietaria de vehículos que proceda al transporte automotor por vía terrestre o fluvial de animales, cualquiera sea su especie, finalidad y destino, por cuenta propia o de un tercero. TRAYECTO: Itinerario y distancia entre el lugarde carga y el de descarga. Senasa • 139 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL TROPA O LOTE: Conjunto de animales a ser transportados. UNIDAD DE PRODUCCIÓN LECHERA: Espacio físico e instalaciones en las que se aloja el ganado productor de leche, para su cría, reproducción y producción de leche con el propósito de autoconsumo, abasto o comercialización. Comúnmente conocido como tambo. UNIDAD TRACTORA: Vehículo que a través de un sistema de enganche arrastra un acoplado, semirremolque o tráiler. VEHÍCULO: Unidad rodante automotor o de arrastre provisto de jaula o contenedor para transporte terrestre de animales vivos. ZONA DE FUGA: Espacio propio del animal, dependiente de su nivel de mansedumbre, el cual si es traspaso por una persona o animal extraño desencadena la reacción de alejamiento o fuga. 140 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria ANEXO II –TÉCNICAS DE SACRIFICIO HUMANITARIO POR ESPECIE Cuando un animal se encuentra convaleciente por una enfermedad o lesión que resulta irreversible y/o terminal para su vida, se debe propiciar su sacrificio inmediato por métodos humanitarios que minimicen y no ocasionen innecesariamente sufrimiento al animal. Bovinos Bubalinos Equinos Cerdos Ovinos Caprinos Aves y Lagomorfos Camélidos Especie GAS - - - X - - X - BALA (*) X X X X - - - - ATURDIMIENTO MECÁNICO X X X X X X X X ATURDIMIENTO ELÉCTRICO X X X X X X X X Técnica y método Sin sujeción (*) Método de excepción en animales salvajes. Con sujeción BALA (*) X X X - - - - X ATURDIMIENTO MECÁNICO X X X X - - - X ATURDIMIENTO ELÉCTRICO X X X X X X X X SIN ATURDIMIENTO X X X X X X X X Cuadro A: Métodos y técnicas de sacrificio humanitario por especie Referencias: X: aceptado en la especie. -: No aceptado en la especie. El sacrificio humanitario se diferencia del sacrificio sanitario en cuanto a su motivo, siendo en este último un riesgo de difusión de una enfermedad lo que motiva su decisión, aunque esencialmente las técnicas implementadas para la matanza deben ser humanitarias aun cuando su aplicación sea en una cantidad elevada de animales. En el caso de un establecimiento productor, haras, cabañas, remates feria, establecimientos concentradores o exposiciones, el sacrificio debe realizarse preferentemente bajo la supervisión de un profesional veterinario, siendo importante planificar la disposición final del cuerpo y/o eventualmente su faena para el posterior consumo de acuerdo al riesgo vinculado a la enfermedad o lesión de origen. Senasa • 141 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL En el arribo a un frigorífico o matadero de uno o más animales en una situación crítica, se debe proceder al sacrificio de emergencia inmediato en las instalaciones existentes para este fin, evitando el sufrimiento innecesario. Ante situaciones que ocurran durante el transporte, el sacrificio debe realizarse en el menor tiempo posible al arribo a destino, indistintamente del tipo de establecimiento. Únicamente en caso de accidente o situación de fuerza mayor que resulte un peligro para los humanos, se podrá sacrificar humanitariamente animales en la vía pública. El Cuadro A resume los métodos y técnicas de sacrificio humanitario por especie recomendados por su eficacia y minimización del dolor en los animales. Para mayor información se recomienda la referencia al Código de Animales Terrestres de la OIE en el siguiente link: www.oie.int/index.php?id=169&L=2&htmfile=chapitre_aw_slaughter.htm Por último, se debe recordar la importancia del respeto de los principios de manejo de los animales en estas situaciones, siendo apropiado asistir en el movimiento de ser necesario, minimizando en todos los casos el sufrimiento. 142 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Generales (varias especies) Estándares de BA de la OIE. Título 7, Capítulo 7.1. Introducción a las recomendaciones para el bienestar de los animales. ¿Qué es el bienestar animal? X. Manteca, E. Mainau, D. Temple. Ficha Técnica N° 1. Farm Animal Welfare Education Centre. Junio 2012. http://www.fawec.org/download/Factsheet-n1-es-definicion-bienestar-animal.pdf Miedo causado por una mala relación humano-animal. D. Temple, E. Mainau, X. Manteca. Farm Animal Welfare Education Centre. Nota Práctica. Abril 2014: http://www. fawec.org/download/Nota-Practica-II-miedo-Esp.pdf Estrés en animales de granja: concepto y efectos sobre la producción. Ficha Técnica N° 6. Farm Animal Welfare Education Centre. Abril 2013: http://www.fawec.org/download/Fact_ sheet_n6_es_estres.pdf Bovinos de carne Bienestar animal y sistemas de producción de ganado vacuno de carne. Capítulo 7.9 de la OIE. Manual de Altos Estándares de BA (AEBA) para la producción de carne en la Provincia de La Pampa (2005). Manual de Buenas Prácticas ganaderas con altos estándares de bienestar animal para la producción de bovinos de carne. Organización de Naciones Unidas para el Desarrollo Industrial, ONUDI. 2007. Bienestar Animal y Calidad de la Carne. Buenas Prácticas de Manejo del Ganado. IPCVA. Cuadernillo Técnico N° 1: http://www.ipcva.com.ar/files/ct1.pdf Welfare Quality Assessment Protocol for Cattle: http://www.welfarequality.net/network/45848/7/0/40 Incidencia en las reses faenadas. Machucones. Stella Huertas; Andrés Gil. Facultad de Veterinaria; DILAVE Miguel C. Rubino. Revista Plan Agropecuario: http://www.bienestaranimal.org.uy/files/R103_22.pdf Guía Técnica de Buenas Prácticas en Bienestar Animal para el manejo de bovinos en predios, ferias, medios de transporte y plantas faenadoras. Ministerio de Agricultura, Comisión Nacional de Buenas Prácticas Agrícolas, Gobierno de Chile. Bovinos de leche Guía para el bienestar animal en la producción lechera. Federación internacional de lechería (2008, International Dairy Federation). 2008. Manejo del estrés calórico en vacas lecheras. Ing. Agr. Jorge Ghiano; Ing. Agr. MSc. Miguel Taverna; Lic. Mcs Laura Gastaldi; Tec. Emilio Walter. INTA EEA, Rafaela. Bienestar durante el ordeño. D. Temple, E. Mainau, X. Manteca. Farm Animal Welfare Education Centre. Nota Práctica. Enero 2014. Bienestar Animal: Criterios para su implementación. Aguilar N. A. y Rossner M. V. INTA, 2014. Acidosis ruminal en el ganado lechero. Bretschneider G., INTA, EERA Rafaela. Información técnica INTA, 2010. Bienestar Animal. Etología Aplicada. Broom D. M. (Galindo-Orhiuela Ed.) UNAM, México: 51-57, 2004. Report of the technical committe to enquire into the welfare of animals kept under intensive liverstock husbandry. Brambell, F. W. R. (chairman), HMSO, London, 1965. El enfoque de Temple Grandin en bienestar animal del ganado. Curtis C., Hoard´s Dairyman, Ago. 2010. Hablando de bienestar-confort animal. Dillon J. y Grigera J., Rev. Producir XXI 19 (235): 37-44, 2011. Manual de buenas prácticas en explotaciones lecheras. FAO 2004 (En línea: ftp:// ftp.fao.org/docrep/fao/008/y5224sOO.pdf. Guía para bienestar animal en lechería-Federación Internacional de Lechería 2008. Federación Internacional de Lechería (OIE), Bruselas, Bélgica. Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epi. , 28 (3), 1183-1191, 2009. Guía para el bienestar animal en la producción lechera de la Federación Internacional de Lechería 2008. FIL-IDF. 2009. Rev., Sci. Tech. Int. Epiz 28 (3): 1183-1191. Manejo del estrés calórico del ganado lechero en entorno tropical y subtropical. Flamenbaum I. Congreso Panamericano de la Leche, San José, Costa Rica, 2008. El maltrato sale caro. Ghezzi M. D. Ganadería y compromiso. Marcelo Ghezzi. IPCVA Bs. As. 49: 10-11 www.produccionanimal.com.ar Manejo del estrés calórico. Ghiano J., Taverna M., Gastaldi L., Walter E. INTA EEA Rafaela, Santa Fe, 2014. Senasa • 143 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Productividad y confort en vacas lecheras. Glauber C. y Barreiro P. Rev., Veterinaria Argentina XXXI, 312, abril 2014. Congreso Internacional Bienestar Animal. Grandin T., Montevideo, Uruguay, julio 2012. Calidad de agua y contaminación de agua en tambos. Herrero M. A. y col. AAPA. En prensa, 2001. El protocolo Welfare Quality en vacunos de leche. Indicadores de bienestar animal. Manteca X. San Francisco, Córdoba, APROCAL, 10/05/2011. Animal Welfare, economics and policy. Mcinerney J. En línea: http://archive.defra.gov. uk/evidence/economics/foodfarm/reports/documents/animalwelfare.pdf. 2004. Valoración del bienestar animal en la granja de vacunos de leche. Otaeguik, I. U. Universidad Pública de Navarra, España. febrero 2013. Behavioural aspects of animal domestication. Price E. O. Quarterly Review of Biology 59:1-32. XLI Jornadas uruguayas de buiatría. Re Hernán, Paysandú, Uruguay, 2013. Manual de Buenas Prácticas de manejo en rodeos de sistemas de producción lechera. Área Producción primaria y comunicaciones. Bienestar Animal. SANCOR. Sunchales, Pcia. Santa Fe (2012). Care for the wild: An integrative view on wild and domesticated animals. Swart, J. A. A. Environmental Values 14 (2): 251-263. 1984 Claudicaciones en la vaca lechera y su relación con el bienestar animal. Tadich B. Néstor. REDVET Vol. IX N° 10B, octubre 2008. Manejando el estrés. Recomendaciones para reducir el impacto del calor en el ganado bovino. Taverna M., Ghiano J., Gastaldi L., Walter, E. INTA Lechero 2012. Evaporative cooling for Holstein dairy cows under grazing conditions. Valtorta S. E. y Gallardo M. R., Int. J. Biometorol. 48: 213-217, 2004. Curso postgrado. Bienestar animal y producción en vacas lecheras. Van Eerdemburg, Frank. 16 y 17 julio 2012, Facultad de Veterinaria, Montevideo, Uruguay. Cerdos La mordedura de colas en cerdos. D. Temple, E. Mainau, X. Manteca. Ficha Técnica N° 8. Farm Animal Welfare Education Centre. Febrero 2014: http://www.fawec.org/download/ Fact_sheet_n8_es_mordedura_cola_cerdos.pdf Impacto económico del estrés causado por el transporte en el ganado porcino. D. Temple, E. Mainau, X. Manteca. Ficha Técnica N° 9. Farm Animal Welfare Education Centre. Mayo 2014: http://www.fawec.org/download/Fact_sheet_n9_es_transporte_estres.pdf Welfare Quality Assessment Protocol for Pigs: http://www.welfarequality.net/network/45848/7/0/40 Pollos parrilleros Guía del manejo del pollo de engorde. Arbor Acres. 2009. http://es.aviagen.com/assets/Tech_Center/BB_Foreign_Language_Docs/Spanish_TechDocs/smA-Acres-Guia-deManejo-del-Pollo-Engorde-2009.pdf Bienestar animal y sistemas de producción de pollos de engorde. Capítulo 7.10. OIE. Cuestiones de bienestar animal en la producción comercial de pollos de engorde. Christine Janet Nicol, School of Veterinary Science, University of Bristol, Bristol, Reino Unido. FAO: http://www.fao.org/docrep/016/al723s/al723s00.pdf Buenas prácticas de bienestar en avicultura de engorde. Ariane Cristina de Castro, zootecnista; Gustavo Marques Mostaço, ingeniero agrícola. NUPEA/ESALQ/USP; Iran José Oliveira da Silva, Coordinación, ingeniero agrícola, NUPEA/ESALQ/ NUPEA/ESALQ/Universidad de San Pablo. Welfare Quality Assessment Protocol for Poultry: http://www.welfarequality.net/ network/45848/7/0/40 Gallinas ponedoras Cuestiones de bienestar animal en la producción comercial de huevos. Christine Janet Nicol, School of Veterinary Science, University of Bristol, Bristol. Reino Unido. FAO. Buenas prácticas de bienestar en gallinas ponedoras. Ana Carolina Donofre, zootecnista, NUPEA/ESALQ/USP; Ana Luiza Mendonça Pinto, médica veterinaria, NUPEA/ESALQ/USP; Ariane Cristina de Castro, zootecnista, NUPEA/ESALQ/Universidad de San Pablo: http://www.fao.org/docrep/016/al722s/al722s00.pdf Guía de buenas prácticas de manejo y bienestar animal en granjas avícolas de puesta. Asociación española de productores de huevos. Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio Ambiente. Gobierno de España: http://www.aseprhu.es/images/archivos/af_ guia_granjas_avicolas_baja_res_14180313.pdf Equinos Bienestar animal en equinos destinados al sacrificio: transporte, reposo y aturdimiento. Marianne P. Werner Becker; Carmen Gallo. Universidad Austral. Valdivia. Chile: http://intranet.uach.cl/dw/canales/repositorio/archivos/28/4122.pdf 144 • Senasa �Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Buenas prácticas de manejo para equinos: http://www.bienestaranimal.org.uy/files/ Cartilla%20Equinos.pdf Cabras y ovejas Bienestar animal en ovinos, en establecimientos agropecuarios, durante el transporte y en frigoríficos. C. González; D. Civit; M. Díaz; I. Faverio; M. Lamboglia. Vet. Arg. - Vol. XXX - Nº 299 - Marzo 2013. Cuidado humanitario de los animales de granja. Caprinos para carne, fibras y leche. Humane Farm Animal Care. 2005. Manual de altos estándares de Bienestar Animal (AEBA) para cabras lecheras. Organización de Naciones Unidas para el Desarrollo Industrial (ONUDI). Bienestar Animal en la cadena agroalimentaria de ovinos a nivel de empresas ganaderas, transporte y procesos en frigoríficos. C. Gonzalez, I. Faverio, M. Lamboglia. UNCPBA. Cuidado humanitario de los animales de granja, estándares para el cuidado de los animales. Capítulos sobre ovinos y caprinos. HFAC. 2005. Transporte Buenas prácticas de manejo durante el embarque y transporte a la planta de sacrificio. Dra. Stella M. Huertas. Bienestar Animal y Calidad de la Carne. Enfoques químicos y experimentales. Capítulo 4. 1ª. Edición: http://www.bienestaranimal.org.uy/files/04_ BP%20Manejo%20embarque%20y%20transporte.pdf Faena Guía online de aturdimiento. Desangrado. Humane Slaughter Association: http://www.hsa.org.uk/desangrado-y-descabello/desangrado Reglamento (CE) Nº 1099/2009 de la Comisión Europea Decreto 4238/1968 - Capítulo XXXII – Senasa, República Argentina. Orden de Servicio 02/2004. Bienestar Animal, Senasa, Argentina. The poultry and pig sector in Argentina: Husbandry practice and animal. Welfare Horne, P. L. M van, C. P. A. van Wagenberg, M. A. de Winter, R. Hoste, S. I. Senesi, M. M. Barilatti, M. Daziano, L. D. C. Martino and M. M. T. Becerra. Importancia del microambiente para el desempeño fisiológico y efectos negativos del estrés calórico sobre la capacidad fisiológica y de producción en los caprinos y ovinos. Araúz, E. (2009). www.engormix.com. Etología aplicada en los ovinos. Sisto, B. A. (2004). En Etología aplicada. Galindo, F. A; Orihuela, T. A. Editores: UNAM, FMVZ, México. pág: 133-146. Contusiones en canales ovinas y su relación con el transporte. Tarumán, J. A. y Gallo, C. B. (2008). Arch. Med. Vet. 40, 275-279. Introducción a las recomendaciones para el bienestar de los animales. OIE. Código Sanitario para los Animales Terrestres. 2013. Grupo Bienestar Animal. Facultad de Veterinaria. UDELAR. Centro Colaborador OIE en BA. www.bienestaranimal.uy El cerdo, su bienestar y el de la sociedad. Alonso, M., Ramírez, R. y Mota. D. Memorias de la 15ava. Reunión Annual CONASA, México, D. F. 2007. The well-being of farm animals. Benson, G., Rollin, B. Blackwell Publishing. UK 2004. Indicators of poor welfare. Broom, D. M. 1986. Br. Vet. J., 142, 524-526. Stress and Animal Welfare. Broom, D. M. and Johnson, K. G. 1993. (pp.211). Chapman and Hall. London. From an animals point of view: motivation, fitness and animal welfare. Dawkins, M. S. 1990. Behav. Brain Sci. 13, 1-61. Etología Aplicada en Ovinos. Sisto, A. 2004. En: Etología Aplicada (Galindo, F. y Orihuela, A., editores), UNAM, México. Manual Práctico de Bienestar Animal. INTA, Chaco, Formosa, Argentina. Manual de Buenas Prácticas para el Bienestar Animal en Cerdos. Asprocer, Chile 2010. Reglamento (CE) N° 1/2005 del Consejo, de 22 de diciembre de 2004, relativo a la protección de los animales durante el transporte y las operaciones conexas y por el que se modifican las Directivas 64/432/CEE y 93/119/CE y el Reglamento (CE) N° 1255/97. Bienestar animal y calidad de carne durante los manejos previos al faenamiento en bovinos. Carmen Gallo, Néstor Tadich, B. REDVET, Revista Electrónica de Veterinaria, vol. IX, núm. 10B, octubre, 2008. Veterinaria Organización España. Bienestar Animal en Chile y la UE: Experiencias compartidas y objetivos futuros. Silvi Marina, Italia. Septiembre 26-27, 2005. Faena de aves y lagomorfos Reglamento de Productos, Subproductos y Derivados de Origen Animal, Decreto 4238/68. Argentina. Reglamento (Consejo de la Unión Europea) Nº 1099/2009 relativo a la protección de los animales en el momento de la matanza, 24 de septiembre de 2009. Senasa • 145 �MANUAL DE BIENESTAR ANIMAL Reglamento (Consejo de la Unión Europea) N° 1/2005 relativo a la protección de los animales durante el transporte y las operaciones conexas, 22 de diciembre de 2004. Directiva 2007/43/CE por la que se establecen las disposiciones mínimas para la protección de los pollos destinados a la producción de carne, 28 de junio de 2007. Directiva 93/119/CE relativa a la protección de los animales en el momento de su sacrificio o matanza, 22 de diciembre de 1993. Las aves y la luz de color. Lewis P. D y Morris T. R. (2000). World’s Poultry Sci Journal, 56, 189-207. Restraint and handling of wild and domestic animals. Fowier, M. E. (1978). Ames: Iowa State, University Press. Influence of fasting and transit on ruminal and blood metabolites in beef steers. Galyean, M. L., Lee R. W. y Hubbert M. E. (1981). Journal of Animal Science, 53, 7. Equipment of low stress small animal slaughter. Giger, W., Prince R. P., Westervelt R. O. y Kinsman D. M. (1977). Trans. ASAE, 20, 571. Ability of cattle to distinguish among different wavelengths of light. Gilbert, B. J. y Arave C. W. (1986). Journal of Dairy Science, 69, 825. Survey of behavioral and physical events which occur in hydraulic restraining chutes for cattle. Grandin, T. (1975). Temple: M. S. Thesis, Arizona State University. Observations of cattle behavior applied to the design of cattle handling facilities. Grandin, T. (1980). Applied Animal Ethology, 6,19. Pig behavior studies applied to slaughter plant design. Grandin, T. (1982). Applied Animal Ethology, 9,141. Design of ranch corrals and squeeze chutes for cattle. Grandin, T. (1983a). En University of Nebraska, Lincoln (ed.). Great Plains Beef Cattle Handbook. Oklahoma: Regional Cooperative Extension Project, Oklahoma State University. Welfare requirements of handling facilities. Grandin T. (1983b). En S. H. Baxter, M. R. Baxter, and J. A. C. McCormack (eds.). Farm Animal Housing and Welfare. Boston: Martinus Nijhoff. Race system for cattle slaughter plants with 1.5 m radius curves. Grandin, T. (1984a). Applied Animal Behaviour Science, 13, 295. Reduce stress of handling to improve productivity of livestock. Grandin, T. (1984b). Vet. Met., 79, 827. Cardiac arrest stunning of livestock and poultry. Grandin, T. (1985-86). En: M. W. Fox y L. D. Mickley (eds.) Advances in Animal Welfare Science. Boston: Martinus Nijhoff. Animal handling. Grandin, T. (1987). Veterinary Clinics North America, 3, 323. Double rail restrainer for livestock handling, Grandin, T. (1988). International Journal of Agricultural and Biological Engineering, 41, 327. Behavioral principles of livestock handling. Grandin, T. (1989a). The Professional Animal Scientist, 5 (2), 1. Voluntary acceptance of restraint by sheep. Grandin, T. (1989b). Applied Animal Behaviour Science, 23, 257. Effect of rearing environment and environmental enrichment on behavior and neural development in young pigs. Grandin, T. (1989). En: Ph. D. Dissertation. Champaign: University of Illinois. Design of loading facilities and holding pens. Grandin, T. (1990a). Applied Animal Behaviour Science, 28, 187. Humanitarian aspects of Shehitah in the United States. Judaism. Grandin, T. (1990b). 39, 536. Recommended Animal Handling Guidelines for Meat Packers. Grandin, T. (1991 a). Washington DC: American Meat Institute. Double rail restrainer for handling beef cattle. Grandin, T. (1991b). American Society of Agricultural Engineers, ASAE paper 915004. Principles of abattoir design to improve animal welfare. Grandin, T. (1991e). En: J. Matthews (ed.) Progress in Agricultural Physics and Engineering. Wallingford: CAB International. Electro-immobilization versus mechanical restraint in an avoid choice test for ewes. Grandin, T., Curtis, E., Widowski, T. M. y Thurmon, J. C. (1985). Journal of Animal Science, 62, 1469. Effect of naltrexone on relaxation induced by flank pressure in pigs. Grandin, T., Dodman, N. y Shuster, L. (1989). Pharmacology Biochemistry and Behavior, 23, 839. Humane Slaughter. Gregory, N. G. (1988). 34th Int. Cong. of Meat Science and Technology, Workshop on Stunning. Brisbane: CSIRO Meat Laboratory. Behaviour as an index of welfare. Hugues, B. D. (1976). En Proceedings 5th European Poultry Conference and exhibition. Malta: World’s Poultry Science Association (WPSA). Curso de cunicultura on-line de la UPV. Fernández, J. 2006, Valencia. Application of gnawing sticks in rabbit housing. Pincz Z., Orova Z., Nagy I., Jordan D., Stuhec I., Luzi F., Verga M. y Scendro Zs. 2007. World Rabbit Sci. 2007, 15: 29-36. Etología de los animales domésticos. Jensen, P., 2004. Editorial Acribia S. A., Zaragoza. 146 • Senasa ��Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria, Av. Paseo Colón 367, Ciudad Autónoma de Buenos Aires � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Manual de bienestar animal: un enfoque práctico para el buen manejo de especies domésticas, durante su tenencia, producción, concentración, transporte y faena. Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2016 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Dirección Nacional de Sanidad Animal Dirección Nacional de Inocuidad y Calidad Agroalimentaria Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0006 Abstract A summary of the resource. Este manual ha sido elaborado en consonancia con los últimos saberes técnicos y científicos del Bienestar Animal a nivel mundial. Todos los actores de las cadenas pecuarias -específicamente bovinos y bubalinos, équidos, cerdos, ovinos, caprinos, aves y lagomorfos- han sido abarcados en cuanto a sus responsabilidades y competencias, incluyendo desde la tenencia y crianza primaria en el campo hasta el transporte, la comercialización y la faena. Esta temática demanda la atención conjunta e integrada de cada una de las personas que tienen responsabilidad directa o indirecta sobre los animales, tanto por el aspecto ético intrínseco como por el impacto negativo que genera cuando no es atendida correctamente. El bienestar de los animales resulta una inversión que minimiza los problemas y las pérdidas en cada una de las etapas y consecuentemente favorece la rentabilidad y productividad en cada eslabón de la cadena. Table Of Contents A list of subunits of the resource. 1. Antecedentes 2. Consideraciones generales de bienestar animal. 2.1 Definición, principios básicos y criterios de bienestar animal. 2.2 BA y estrés 2.3 Alimentación 2.4 Instalaciones para la tenencia o producciones de animales 2.5 Sanidad, atención médica veterinaria y prácticas zootecnicas 2.6 Bioseguridad 2.7 Indicadores de bienestar animal 2.8 Capacitación de los actores 3. Características del comportamiento y del manejo de los animales 3.1 Aspectos generales del comportamiento de las especies domésticas 3.2 Comportamiento natural y aspectos específicos del manejo por especie 3.2.1 Bovinos y Bubalinos 3.2.2 Équidos 3.2.3 Porcinos 3.2.4 Ovinos y caprinos 3.2.6 Lagomorfos 3.3 Arreo y manejo en grupo en especies mayores y menores 3.3.1 Uso de instrumentos inductores de movimiento 4. Tenencia y producción primaria de animales domésticos 4.1 Responsabilidades de los actores 4.1.1 Productor o tenedor de animales/cooperativa de productores/centros de genética/cabañas/haras/establecimientos de cría de reproductores (padres y abuelos) 4.1.2 Personal de campo/peones y cuidadores de animales 4.1.3 Médico veterinario 4.1.4 Asociaciones de productores y entidades agropecuarias 4.1.5 Usinas lácteas 4.1.6 SENASA 4.2 Aspectos generales en la tenencia y producción de animales para consumo humano 4.2.1 Tenencia de animales con fines deportivos, educacionales o recreativos 4.2.2 Organizacion de un sistema de producción 4.2.3 Instalaciones, manejo, alimentación, sanidad, bioseguridad y atención médica veterinaria 4.3 Aspectos particulares por especie y tipo de producción 4.3.1 Bovinos de carne 4.3.2 Bovinos de leche (tambo) 4.3.3 Équidos 4.3.4 Cerdos 4.3.5 Ovinos y caprinos 4.3.6 Aves 4.3.7 Lagomorfos CUADRO RESUMEN 1 - BIENESTAR ANIMAL EN LA PRODUCCIÓN DE ANIMALES PRODUCTORES DE ALIMENTOS PARA CONSUMO HUMANO 5. Transporte de animales 5.1 Responsabilidad de los actores 5.1.1 Productor o tenedor de animales, empresa pecuaria, cabaña, centros de genética, importadores y exportadores de animales 5.1.2 Personal perteneciente a los establecimientos pecuarios, empresas pecuarias, cabañas, centros de genética, remates feria, establecimientos concentradores, exposiciones, exportadores e importadores de animales 5.1.3 Empresa de transporte terrestre y choferes de sus propios camiones 5.1.4 Chofer/conductor 5.1.5 Empresas de transporte marítimo y áereo que transporten animales 5.1.6 Personal de barcos o aviones que transportan animales 5.1.7 Remate feria - establecimiento concentrador 5.1.8 Empresa consignataria o intermediario comercial y matarifes 5.1.9 Matadero 5.1.10 Personal de matadero 5.1.11 Médicos veterinarios 5.1.12 Autoridades nacionales o provinciales de control vehicular, tránsito y aduanas 5.1.13 SENASA 5.2 Transporte de animales por vía terrestre 5.2.1 Condiciones generales 5.2.2 Estructura de los medios de transporte terrestre 5.2.3 Aparte de animales, conformación de lotes y acondicionamiento previo al traslado 5.2.4 Aspectos particulares durante la carga y descarga de animales como actividades conexas 5.2.5 Aspectos particulares del traslado del viaje 5.3 Particularidades del transporte de animales por vía marítima y áerea 5.4 Indicadores de bienestar en el transporte 5.5 Capacitación CUADRO RESUMEN 2 - BIENESTAR ANIMAL EN EL TRANSPORTE 6. Manejo de animales en remates feria, establecimientos concentradores de hacienda, exposiciones u evento con agrupamiento de animales 6.1 Responsabilidad de los actores 6.1.1 Responsable remate feria, establecimiento concentrador, exposición o evento con agrupamiento de animales 6.1.2 Personal de remates feria, establecimientos concentradores, exposiciones o eventos con agrupamiento de animales 6.2 Principios generales sobre las intalaciones 6.2.1 Mantenimiento de las instalaciones 6.3 Del ingreso y egreso de animales 6.4 Aspectos particulares del manejo de animales durante la jor6.5 Indicadores específicos de bienestar animal en remates feria. Establecimientos concentradores 6.6 Capacitación de los operarios y personal de los establecimientos. 7. Manejo de animales en mataderos 7.1 Responsabilidades de los actores 7.1.1 Responsable o dirección de la planta (matadero) 7.1.2 Responsable de bienestar animal 7.1.3 Operarios 7.1.4 Jefe de servicio del SENASA 7.2 Diseño de las instalaciones y equipos 7.2.1 Aspectos para especies mayores y menores 7.2.2 Aspectos para aves y lagomorfos 7.3 Descarga y pre-faena 7.3.1 Aspectos para especies mayores y menores 7.3.2 Aspectos para las aves y lagomorfos 7.4 Faena propiamente dicha 7.4.1 Consideraciones generales acerca de la insebilización en las diferentes especies 7.4.2 Insensibilización por especie 7.4.3 Izado (colgado) y sangrado (degüello) de los animales. 7.5 Ritos religiosos (halal, kosher) 7.6 Indicadores específicos de bienestar en el matadero o frigorífico 7.7 Capacitación del personal CUADRO RESUMEN 4 - BIENESTAR ANIMAL EN FAENA 8. Conclusiones y perspectiva ANEXO I - DEFINICIONES ANEXO II - TÉCNICAS DE SACRIFICIO HUMANITARIO POR ESPECIE https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/5f6bdf2a9f47e0dfaea17340b0af00b3.pdf 3e035107a9adb6d1e7f39a0329edacca PDF Text Text Manual de Buenas Prácticas Agrícolas �PRÓLOGO LA AGROINDUSTRIA TIENE MUCHO FUTURO Durante los últimos 20 años la tendencia sobre las demandas del consumidor no solo se enfocan en la variedad y cantidad, sino que dan muestra que cada vez es más exigente respecto a la inocuidad y la calidad de los alimentos que se comercializan, y en particular, de aquellos que desde la producción van directamente a la mesa de los consumidores. En este rubro, se encuentran principalmente las frutas y hortalizas. El Ministerio de Agroindustria de la Nación se ha fijado como uno de sus ejes de gestión convertir a la Argentina en el supermercado del mundo, atendiendo las necesidades alimentarias, pero a su vez aportando conocimiento, investigación, desarrollo y tecnología, en un marco sostenible desde lo ambiental, económico y social. Para lograrlo en el camino deben cumplirse condiciones necesarias que permitan generar competitividad y calidad en los alimentos que producimos. Así se están promoviendo acciones tendientes a contribuir con la seguridad alimentaria y nutricional de los alimentos, pero a su vez también trabajando con todos los actores de las cadenas de valor para concientizarlos respecto de la importancia de implementar e innovar en sistemas de gestión de la calidad como las Buenas Prácticas Agrícolas (BPA) ya que está demostrado que estos mejoran la eficiencia productiva: reducen costos y permiten asegurar la trazabilidad de los productos. Esta última herramienta fundamental para seguir recuperando la confianza de consumidores internacionales, presentando a nuestros alimentos más oportunidades para el ingreso a mercados más exigentes. En este marco, en diciembre de 2017, la Comisión Nacional de Alimentos (CONAL), aprobó la incorporación al Código Alimentario Argentino de las Buenas Prácticas Agrícolas para la producción frutihorticola, estableciendo que en dos años el sector de frutas deberá contar en su totalidad con las BPA incorporadas y en tres años, lo deberá incorporarse al hortícola. Esta nueva exigencia implica desarrollar herramientas de formación y capacitación para llegar a todos los productores del país, como así también a quienes tendrán la responsabilidad de formarlos, y trabajar articuladamente entre organismos públicos y privados nacionales, junto con las provincias y las asociaciones de productores locales para cumplir con el objetivo previsto. Así Agroindustria viene desarrollando una serie de acciones que buscan difundir y capacitar a referentes de la producción de alimentos y bebidas. Como producto de estas actividades se pone a disposición el documento que estamos compartiendo. El gran desafío es crear una gran red de información, intercambio y asistencia técnica para acompañar al universo de productores y empacadores en la implementación de esta herramienta que permitirá ser competitivos y referentes mundiales por la calidad y cantidad de nuestros alimentos. Dr. Luis Miguel ETCHEVEHERE Ministro de Agroindustria MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 1 �INTRODUCCIÓN En la actualidad se puede observar que la sociedad muestra una creciente preocupación por la salud y el cuidado del medio ambiente, espacios donde la producción de alimentos juega un rol muy importante y obliga a todos los que intervienen en estos procesos productivos a ser responsables en las decisiones y en las acciones que se adoptan. A esto se suma un aumento en la demanda y la necesidad de los consumidores de conocer la procedencia y composición de los alimentos, incrementando de esta forma las exigencias sobre los sistemas de producción agropecuaria. Como respuesta concreta a lo antedicho se ha Incorporado al Código Alimentario Argentino (CAA) el Artículo 154tris que en su redacción dice: que toda persona física o jurídica responsable de la producción de frutas y hortalizas deberá cumplir con las Buenas Prácticas Agrícolas, cuando se realicen una o más de las actividades siguientes: producción primaria (cultivo-cosecha), almacenamiento y/o comercialización. Sin perjuicio de las indicaciones del presente Manual .Se le recuerda que deberá dar cumplimiento a la normas provinciales y municipales vigentes en materia de aplicacion y gestión de los productos fitosanitarios (agroquimicos) A partir de esta situación se hace obligatoria e indispensable la aplicación de las buenas prácticas agrícolas con el fin de asegurar una producción inocua, sustentable y eficiente. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 2 �GLOSARIO CAA BPA Buenas Prácticas Agrícolas BPM Buenas Prácticas de Manufactura MINAGRO RENSPA RENAF DTV Código Alimentario Argentino Ministerio de agroindustria de la Nación Registro Nacional Sanitario de Productores Agropecuarios Registro Nacional de la Agricultura Familiar Documento de Trânsito Vegetal SENASA Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria SIG-DTV Sistema Integrado de Gestión del Documento de Tránsito Vegetal CUIT CONAL SAGPyA Secretaría de Agricultura, ganadería y Pesca de la Nación SPRyRS Secretaría de Políticas, Regulación y Relaciones Sanitarias MSyAS INTA Clave Única de Identificación Tributaria Comisión Nacional de Alimentos Ministerio de Salud y Acción Social Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria ¿QUÉ SON LAS BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS (BPA)? Las BPA son acciones orientadas a la sostenibilidad ambiental, económica y social de los procesos productivos agropecuarios que garantizan la calidad e inocuidad de los alimentos y de los productos no alimenticios. Es decir que son un conjunto de prácticas aplicadas con el objetivo fundamental de obtener alimentos sanos e inocuos, cuidando el medio ambiente, la salud de los trabajadores y de la sociedad en su conjunto. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 3 �IMPLEMENTACIÓN DE LAS BUENAS PRÁCTICAS En este manual se detallarán los 7 puntos contemplados por la Resolución N° -----/2018, que son de implementación obligatoria para la producción y comercialización de los productos frutihortícolas. Para una mejor compresión del texto se citan como párrafos resaltados a aquellos extraídos de la mencionada resolución. 1. DOCUMENTACIÓN OBLIGATORIA - TRAZABILIDAD Los productores deben cumplir con la inscripción en el Registro Nacional Sanitario de Productores Agropecuarios (RENSPA). » ¿QUÉ ES EL RENSPA? Es el REGISTRO NACIONAL SANITARIO DE PRODUCTORES AGROPECUARIOS que depende del SENASA y exige el registro de todos aquellos que realizan actividades agrícolas y/o ganaderas permitiendo asociar al productor con su producción y el predio que explota. Por ello, todos los productores agropecuarios del país, independientemente de la condición frente a la tierra, el sistema de producción utilizado, el destino o la escala, deben poseer su número de RENSPA. Incluye a tenedores de animales y a toda institución pública o privada que realice alguna actividad productiva, o posea animales en sus predios, como universidades, institutos de investigación, fundaciones, centros de inseminación, organizaciones de productores, etcétera. » ¿PARA QUÉ SIRVE? Es una herramienta de gran valor para la ejecución de políticas públicas ya que: • Fortalece el control sanitario preservando la sanidad animal y vegetal, y consecuentemente, la calidad, higiene e inocuidad de los productos agropecuarios, insumos y alimentos. • Posibilita al SENASA el control de las normas que obligan a los productores a prevenir, erradicar y controlar enfermedades y plagas. • Permite una rápida respuesta ante una emergencia fitozoosanitaria o una crisis relacionada con la inocuidad de los alimentos • Vincula al productor con las políticas fitozoosanitarias que impulsa el Estado Nacional. • Habilita trámites con otros organismos. Los REQUISITOS para registrarse en el RENSPA son sencillos y pueden acceder a ellos a través de las siguientes direcciones: » PARA PREINSCRIPCIÓN: https://aps2.senasa.gov.ar/Renspa/faces/pages/altaRenspa.jsp » PARA INSCRIPCIÓN FINAL: Lluego de realizada la pre inscripción el trámite finaliza en las oficinas del organismo de su zona donde el productor recibirá su constancia del RENSPA. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 4 �» El RENSPA SE DEBE ACTUALIZAR • Anualmente (excepto aquellos que vacunan contra fiebre aftosa). • Toda vez que se cambie de actividad. Para realizar este trámite se ingresa a https://auth.afip.gob.ar/contribuyente_/login.xhtml Los productores deberán identificar los alimentos fruti-hortícolas producidos, empleando etiqueta/rótulo, consignándose los datos previstos en la normativa vigente. La Resolución 58/2007 de la ex SAGPyA, resolvió que las hortalizas frescas con destino a los Mercados de Interés Nacional deberán contar con “Marca comercial e identificación expresa (persona física o jurídica) del productor y del empacador, de corresponder”. También establece que la Identificación de la Mercadería cuente con Número de RENSPA, por lo tanto, la obligación de inscripción en el mencionado Registro Nacional será progresiva en función de los programas sanitarios o fitosanitarios que ejecute el SENASA. Esta exigencia es complementaria de la normativa vigente previa para Frutas frescas cítricas consideradas en la Resolución 145/83, de la 554/83 para Fruta fresca no cítrica y la Resolución 247 /83 que reglamenta las normas de tipificación, empaque y fiscalización de las hortalizas frescas. Esta última sufre modificaciones en su Capítulo V a través de la mencionada Res. 58/2007. Los productores deberán trasladar los productos fruti-hortícolas producidos, empleando el Documento de Tránsito Sanitario Vegetal (DTV), cuando las autoridades sanitarias lo exijan, previsto en normativa vigente. » DOCUMENTO DE TRÁNSITO VEGETAL (DTV) El SENASA aprobó mediante la Resolución N° 31/2015 el DTV que resguarda los movimientos de los productos, subproductos y derivados de origen vegetal por el territorio de la República Argentina, sujetos a su jurisdicción. La herramienta informática y documental DTV permite conocer el origen de la mercadería, desde que sale del establecimiento productivo, y a lo largo de toda la cadena de comercialización, resultando de gran utilidad para conocer la trazabilidad de los productos vegetales. El ingreso y egreso de todos los productos, subproductos y derivados de origen vegetal de un establecimiento debe realizarse bajo el amparo del correspondiente documento oficial. Por eso, debe generarse antes del traslado del producto, acompañarlo en todo su recorrido y ser exhibido en los controles de ruta. La exhibición del documento es obligatoria ante las autoridades que lo soliciten. En caso de no cumplir con la documentación correspondiente, los infractores podrán recibir sanciones, como la destrucción de plantas, productos y subproductos o cualquier otra medida que resulte necesaria de acuerdo a las circunstancias de riesgo sanitario. Este documento es una declaración jurada que emite el mismo interesado a través de un sistema informático (llamado SIGDTV) al que se accede desde la página de SENASA; www. senasa.gob.ar MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 5 �El SIGDTV autoriza al interesado a gestionar en dicho sistema los DTV de sus establecimientos siempre y cuando estos se encuentren debidamente inscriptos en el registro oficial y tengan registrados los productos a movilizar. Cuando la carga arriba al destino, el receptor de la carga es el responsable de cerrar el movimiento en el SIGDTV y conservar el documento impreso. 2. PRODUCTOS FITOSANITARIOS 2.1 ¿QUÉ PRODUCTOS PUEDO UTILIZAR? Los productores deberán cumplir con las recomendaciones y las restricciones de uso, indicadas en el marbete/etiqueta y registrar la aplicación. Sólo deberán utilizar productos fitosanitarios autorizados por el SENASA, en sus envases originales y para los cultivos permitidos. La DIRECCIÓN DE AGROQUÍMICOS Y BIOLÓGICOS del SENASA administra y mantiene actualizados los Registros de su competencia. A su vez, es la responsable de controlar el cumplimiento de las normas técnico-administrativas referidas a la elaboración y/o formulación de productos fitosanitarios, fertilizantes y enmiendas utilizados para la producción agrícola y el control de plagas vegetales. También Inscribe, registra y audita los establecimientos que elaboran y/o formulan productos fitosanitarios, como así también propone la inscripción de toda persona física o jurídica u objeto a ser registrado en el ámbito de su competencia. La Resolución 608 del año 2012 establece límites máximos de residuos para determinados productos alcanzando a los cultivos de acelga, perejil, lechuga, rúcula, repollito de bruselas, achicoria, espinaca, frutilla radicheta, berro, coliflor, escarola, albahaca, cilantro, salvia, romero, tomillo, orégano, eneldo y brócoli. El SENASA también ha establecido tolerancias administrativas con ampliaciones de uso para cultivos menores donde se especifican tolerancias de residuos específicas para esos usos. 2.2 ¿CÓMO DEBO APLICARLOS? Cada fitosanitario tiene su selectividad y especificidad, y han sido aprobados y registrados para ciertos usos y NO para otros.  Los productores deberán cumplir con las recomendaciones y las restricciones de uso, indicadas en el marbete/etiqueta y registrar la aplicación. Respetar el tiempo de “reingreso” a los cultivos tratados según las indicaciones que figuren en el marbete y respetar el período de carencia, que es el tiempo mínimo que debe transcurrir entre la última aplicación y la cosecha. No se deben utilizar productos vencidos; verificar fecha de vencimiento antes de su aplicación. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 6 �Utilizar los elementos de protección personal (EPP) necesarios para manipular los agroquímicos: • Mameluco • Delantal impermeable • Guantes de nitrilo • Gorro impermeable o capucha • Botas • Antiparras • Máscaras respiratorias » Forma y orden correctos en que deben colocarse los elementos de seguridad: 1. Guantes. Es lo primero que debe colocarse y lo último que debe quitarse el operario. Es un elemento de gran importancia ya que las manos tienen una alta exposición al producto manipulado. Los guantes deben ser largos para cubrir como mínimo la mitad del antebrazo. 2. Mameluco. el cuerpo debe cubrirse con un traje que incluya brazos y piernas completos. Los trajes deben ajustarse a las extremidades para impedir que ingrese producto a través de las aberturas en las mismas. 3. Delantal. Ofrece una protección “extra” al aplicador frente a las salpicaduras. 4. Botas. Se recomienda utilizar botas de goma, altas (deben cubrir las pantorrillas) que no deben estar forradas. Las botas deben quedar colocadas por debajo del pantalón. 5. Máscara respiratoria. Es imprescindible contar con una máscara para la manipulación y aplicación de productos fitosanitarios. Hay máscaras de diferentes tipos y niveles de seguridad. Su elección dependerá del tipo de producto fitosanitario que se utilice. Su elección debe estar condicionada al producto a utilizar. 6. Antiparras. Protegen los ojos y el rostro ante salpicaduras durante la manipulación y aplicación de los productos. 7. Gorro impermeable o capucha. Protege el cuero cabelludo del contacto con productos fitosanitarios. » Todo el equipo debe lavarse adecuadamente después de cada uso. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 7 �2.3 ¿CÓMO ALMACENAR LOS PRODUCTOS? Los productos fitosanitarios se deben almacenar, en un depósito específico, cerrado con llave, separado de otros enseres y aislado de lugares donde se produce el cultivo o donde se manipula y/o conserva el producto cosechado, a fin de evitar la posibilidad de contaminación. El depósito debe estar bien ventilado e iluminado con luz natural y artificial, debidamente señalizado con carteles de advertencia. Es conveniente ubicar los envases sobre estanterías, alejados de la pared. Los sólidos en los estantes superiores y los líquidos en los inferiores por la posibilidad de que estos últimos se derramen. Lo ideal es que al pie de las alacenas de almacenamiento existan rejillas de escurrimiento ante la posibilidad de derrames de productos líquidos o, simplemente para facilitar la limpieza del depósito. Con este fin debe darse a los pisos la pendiente adecuada hacia las rejillas de drenaje. 2.4 ¿QUÉ DEBO HACER CON LOS ENVASES VACÍOS? Nos referiremos al Manejo de envases según reglamentación legal vigente. Para ello se ha promulgado la Ley Nº 27.279, “Sistema de Gestión Integral de Envases Vacíos de Fitosanitarios”. Según la misma se debe proceder primeramente a clasificar el tipo de envase que se someterá al “proceso de reducción”. Para ello hay que determinar a cuál de las dos Clases posibles pertenece el recipiente: » CLASE A: puede ser sometido a proceso de reducción a partir del “Triple Lavado” ya que el residuo en su interior contiene sustancias que se diluyen en agua. » CLASE B: NO puede ser sometido a proceso de reducción a partir del “Triple Lavado” ya que el residuo en su interior contiene sustancias que NO se diluyen, NO se dispersan o NO se mezclan con el agua. Para el caso de recipientes CLASE A debe realizarse el “Triple Lavado” que se describe a continuación: 1. Llenar 1/4 el envase con agua limpia. 2. Poner la tapa y agitarlo por 30 segundos. 3. Verter el contenido en el tanque de la pulverizadora o mochila. Se deben repetir estos pasos 3 veces y luego perforar los envases en el fondo para evitar su re-uso, a menos que se prevea su devolución al fabricante. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 8 �Luego de este procedimiento se llevaran los envases CLASE A al Centro de Almacenamiento Transitorio (CAT) autorizado y especialmente dispuesto a tal fin. Para el caso de tratarse de envases CLASE B se deberán separar y enviar directamente al Centro de Almacenamiento Transitorio (CAT) autorizado. » RECORDAR 1: una vez vacío un envase contenedor de fitosanitarios, el usuario y el aplicador serán objetivamente responsables de garantizar el procedimiento de reducción de residuos aplicando el criterio de separación en las dos (2) clases establecidas. » RECORDAR 2: queda prohibida toda acción que implique abandono, vertido, quema y/o enterramiento de envases vacíos de fitosanitarios en todo el territorio nacional, del mismo modo que la comercialización y/o entrega de envases a personas físicas o jurídicas por fuera del sistema autorizado. 2.5 CALIBRACIÓN DE EQUIPOS DE PULVERIZACIÓN Uno de los factores más importantes para lograr una aplicación eficiente del producto fitosanitario es la correcta calibración del equipo pulverizador, reduciendo la deriva y evitando la posibilidad de sobredosis o de la aplicación de una dosis menor a la indicada. » MÁQUINA PULVERIZADORA O MOCHILA: 1. Elegir la pastilla de acuerdo a objetivo de la aplicación. 2. Calibración cargando una cantidad determinada de agua y recorrer una distancia conocida mientras se pulveriza a velocidad constante. 3. Una vez hecha la pulverización se debe medir el sobrante de agua en el tanque. 4. Vincular el dato obtenido de “caudal aplicado” con el ancho de trabajo afectado a la aplicación. » PULVERIZADORES DE ARRASTRE: 1. Verificar todos los componentes del sistema, que no haya pérdidas, que todos los picos proyecten en forma similar. 2. Control del desgaste de las pastillas: se realiza fuera del equipo en un banco de pruebas preparado para esto. 3. Evaluación de la uniformidad de aspersión del botalón: a través del caudal individual en (l/min) de cada uno de los picos. Para esto se debe: • Poner en funcionamiento la barra pulverizadora completa a una presión y rpm del motor establecidas. • Recoger el agua proyectada por cada pico en un tiempo determinado. Ejemplo: 30 segundos y medir lo recolectado en cada pico. • Con los datos obtenidos se calcula el caudal individual promedio. A este valor se le agrega o quita un porcentaje establecido 5 o 10 % para obtener un rango de caudales tolerables, se deben revisar los picos que entreguen un caudal por fuera de este rango. 4. Establecer las condiciones de trabajo. Considerar el cultivo y la enfermedad, plaga o maleza sobre la que se va a pulverizar. Las variables a fijar son la velocidad de trabajo, volumen (lt/ ha.), tipo de pastillas, presión de trabajo para esas pastillas, altura del botalón. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 9 �5. Control del volumen deseado en lt/ha con la fórmula: (Caudal individual promedio (l/min)x 600) (Velocidad (.km/hora)x distancia entre picos a utilizar (m) ) = 6. Controlar la calidad de la aplicación (grado de cobertura lograda) con el uso de tarjetas hidrosensibles. 7. Ajuste de las condiciones de trabajo para el caso de que la cobertura lograda no sea la esperada. Se harán los cambios que se consideren necesarios, tales como: tipos de pastillas, presión, volumen asperjado, etc. 2.6 RECETA AGRONÓMICA El productor deberá conocer la legislación provincial relacionada a la obligatoriedad de contar con una receta agronómica en aquellas provincias que tengan normativa al respecto. 3. AGUA Podemos establecer dos clases de agua según el uso que se haga de la misma: AGUA PARA HIGIENE Y CONSUMO Los productores deberán implementar medidas eficaces que garanticen que el agua a ser utilizada en la explotación cumpla con los requisitos establecidos en el CAA para higiene y consumo de personal, y para el agua de uso agrícola deberán cumplir con la Resolución Ex SAGPyA 71/99 inciso 4.3.4. Los productores deberán realizar análisis fisicoquímicos y microbiológicos del agua utilizada para higiene y consumo. Los análisis efectuados deberán realizarse en los laboratorios habilitados por la autoridad sanitaria competente. Se define AGUA POTABLE: según el Artículo 982 Código Alimentario Argentino - (Resolución Conjunta SPRyRS y SAGPyA N° 68/2007 y N° 196/2007) “Con las denominaciones de Agua potable de suministro público y Agua potable de uso domiciliario, se entiende la que es apta para la alimentación y uso doméstico: no deberá contener sustancias, o cuerpos extraños de origen biológico, orgánico, inorgánico o radioactivo en tenores tales que la hagan peligrosa para la salud. Deberá presentar sabor agradable y ser prácticamente incolora, inodora, límpida y transparente. El agua potable de uso domiciliario es el agua proveniente de un suministro público, de un pozo o de otra fuente, ubicada en los reservorios o depósitos domiciliarios. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 10 �AGUA DE USO AGRÍCOLA Se debe realizar un uso eficiente, seguro y racional del agua. Para realizar un uso eficiente se deben tener en cuenta los siguientes puntos: • Conocer el ciclo de desarrollo del cultivo y la sensibilidad al estrés hídrico en cada etapa. • Calcular las necesidades hídricas del cultivo. Se puede realizar mediante el cálculo de evapotranspiración. • Conocer el tipo de suelo y sus características físicas. • Elección de un sistema de riego que permita cubrir las necesidades del cultivo minimizando pérdidas de agua y erosión. Podemos definir al agua para uso agrícola de la siguiente manera: agua que se utiliza en los cultivos por razones agronómicas como el riego, control de heladas, lavado de equipo e instrumental, aplicación de fitosanitarios, soluciones de fertilizantes, cultivos hidropónicos y otras operaciones similares. Según la Resolución Ex SAGPyA 71/99 inciso 4.3.4. Debe estar libre de contaminaciones fecales humanas y/o de animales y de sustancias peligrosas (ej.: E. coli, coliformes, parásitos, Shigella sp, Listeria monocitógenes, metales pesados, arsénico, cianuro, etc.). En el caso de cultivos hidropónicos el agua debe cambiarse con frecuencia y, cuando se recicla, se debe tratar para minimizar la contaminación microbiana y química. ¿Cómo obtener una muestra de agua para su análisis? Para un análisis físico químico se requieren 2 litros de agua. Preferentemente se debe tomar la muestra en un envase de vidrio; puede usarse envase de plástico. Es necesario que el envase se encuentre perfectamente limpio y tenga un cierre hermético. Si el agua a analizar es de un sistema de distribución, se abre el grifo, se deja correr 4 ó 5 minutos (ya que el volumen próximo a la punta de la canilla sufre corrosión) y se toma la muestra. Cuando la muestra proceda de ríos, arroyos, lagos, estanques, etc., se tratará de efectuar las tomas lejos de las costas y a una profundidad de 20 cm. Si el agua a analizar es de un pozo excavado o fuente similar, el procedimiento es el mismo que en el caso anterior. Se puede atar una pesa en la parte externa del recipiente de recolección, para facilitar el procedimiento. En todos los casos se llena completamente el envase y se tapa. Es importante que no quede cámara de aire en el envase. Rotular y enviar al laboratorio con nombre, fecha de la toma, lugar de procedencia, tipo de análisis requerido (aptitud para riego, consumo animal), fuente de provisión (si es de origen superficial indicar río, arroyo, laguna, estanque o lo que corresponda). Si es de origen subterráneo indicar pozo surgente, semisurgente, de balde, etc., profundidad de la napa, distancia y orientación de los pozos negros más próximo y todo otro dato que se considere de interés. El envío debe ser en forma refrigerada o a temperatura no muy alta. Para un análisis microbiológico se deben utilizar recipientes de recolección estériles evitando la posibilidad de contaminación de la muestra. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 11 �Toma de un grifo de una bomba accionada a mano o molino o a motor: conviene elegir un grifo que está comunicado directamente con la cañería ascendente del pozo, se limpia la boca del grifo y se deja salir el agua libremente. Si se trata de un pozo en uso continuo, basta dejar correr el agua durante media hora, si el pozo se utiliza muy poco se deberá dejar salir el agua durante 5 horas como mínimo. Rotular y enviar al laboratorio como en el caso anterior. 4. MANIPULACIÓN En la manipulación de las hortalizas y frutas al momento de la cosecha, acondicionamiento y empaque en el predio, es fundamental cumplir con las pautas de higiene básicas, principalmente el lavado adecuado de las manos de todos los operarios (manipuladores). El lavado de manos deberá realizarse antes de comenzar a trabajar y después del uso de las instalaciones sanitarias, con agua potable y elementos adecuados para la limpieza de manos. En el caso que no se cuente con agua potable, los manipuladores deberán utilizar “agua tratada” por alguno de los siguientes métodos: hervido, clarificación o cloración. Tratamiento: Operación destinada a eliminar elementos indeseables que deben ser autorizadas por la autoridad sanitaria competente. ANEXO I DEL ARTICULO 983 del CAA (Res. MsyAS Nº494 del 07/07/1994). * ver definición de agua potable en la página anterior. 5. ANIMALES Se deberá impedir el ingreso de animales a las áreas cultivadas y a las zonas de manipulación de producto cosechado. Esto se vincula a la necesidad de reducir al máximo la posibilidad de contaminación biológica en los cultivos. Deberá impedirse el ingreso de animales domésticos, de granja y otros animales de trabajo (que no estén cumpliendo actividades), a través prácticas que eviten su entrada, proliferación y acercamiento. En el caso de los animales de trabajo que se utilicen para otras tareas deberán estar sanos, vacunados y desparasitados. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 12 �6. USO DE FERTILIZANTES ORGÁNICOS Y ENMIENDAS Los fertilizantes orgánicos, enmiendas y sustratos adquiridos a terceros utilizados en las actividades de producción primaria contempladas en la presente, deben estar registrados en el SENASA. Existe en SENASA (Resolución 264/2011) un nuevo reglamento para el registro de fertilizantes, enmiendas sustratos, acondicionadores, protectores y materias primas que actualizó la normativa para los productos a los que se aplica, tomando en cuenta para ello la presencia de nuevas tecnologías, tipos de productos, plantas elaboradoras, mezcladoras, diferentes especificaciones, protocolos, etc. Los fertilizantes orgánicos y/o enmiendas orgánicas producidos por el responsable de la producción primaria, deben someterse a tratamiento, compostado u otros que minimicen el riesgo sanitario. Cabe aclarar que según la Resolución Ex SAGPyA 71/99 inciso 4.3.5. Abonos. Compostado: Proceso al que se someten los sustratos orgánicos que a través de procesos bioxidativos controlados, incluyendo una etapa inicial termofílica, estabiliza la materia orgánica, elimina olor y reduce el nivel patogénico. *Recordar que según la Resolución Ex SAGPyA 71/99 inciso 4.3.5. Abonos; se prohíbe expresamente la utilización de residuos provenientes de sistemas cloacales y pozos sépticos, como enmiendas orgánicas, así como el uso de enmiendas orgánicas sin tratamiento. 7. RESPONSABLE TÉCNICO Deberá contar con la asistencia de un Técnico / Profesional), para asesorar en la implementación de las BPA, capacitado en la temática a través de personal de Organismos Nacionales, Provinciales, Municipales, Universidades, escuelas agrotécnicas, Programa Cambio Rural y otros programas relacionados, Organismos Descentralizados, profesionales independientes y entidades privadas reconocidas. Además el Técnico / Profesional es importante en el asesoramiento, planificación y supervisión del uso correcto de los agroquímicos en todas las etapas de la producción. MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 13 �REGISTROS 8. ANEXO. Recomendaciones de planillas para registros REGISTRO 1 - INFORMACIÓN GENERAL Empresa/ Establecimiento y/o Razón social N° RENSPA Dirección Localidad Provincia Teléfono del propietario ( ) Tipo ¨ Fijo ¨ Celular ¨ Fax ( ) Tipo ¨ Fijo ¨ Celular ¨ Fax E-mail Teléfono del encargado/ mediero Dirección Responsable de la implementación de BPA Dirección Localidad Teléfono ( ¨ Fijo ¨ Celular ¨ Fax ) E-mail DATOS ADICIONALES Principales productos Antigüedad en la producción • • • • Producciones secundarias • • Nº de socio Entidad en la que se encuentra asociado Comercialización Mercado mayorista: Transporte propio ¨ Sí ¨ No Galpón de empaque ¨ Sí ¨ No ¨ Sí ¨ No / Empresa particular: ¨ Sí ¨ No Observaciones: MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 14 �REGISTRO 2: APLICACIÓN DE FITOSANITRIOS EN MATERIAL VEGETAL DE INICIO Semilla o plantín:.............................................................................. Variedad:................................................................ Observaciones (problemas climáticos o de otra naturaleza) Aplicador/ responsable Maquina utilizada Dias a cosecha Vol total aplicado Dosis aplicada/ha Dosis recomendada/ha Producto utilizado* Plaga, enfermedad y/o maleza Fecha Superficie (ha): ................................................................................. N°/Nombre del lote:......................................... *Nombre comercial REGISTRO 3: DESINFECCIÓN QUÍMICA DEL SUELO Aplicador/ Responsable Método de aplicación Dosis (unidad / volumen o sup) Principio activo Producto* Fecha Causa/motivo Cultivo/variedad N°/nombre del lote y superficie Productor:................................................................................................................................................................................ *Nombre comercial MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 15 �REGISTRO 4: ESTERILIZACIÓN DE SUSTRATOS Aplicador/ Responsable Método de aplicación Dosis (unidad / volumen o sup) Principio activo Producto* Fecha Causa/motivo Cultivo/variedad N°/nombre del lote y superficie Productor:................................................................................................................................................................................ REGISTRO 5: DE FERTILIZACIONES, ABONOS Y ENMIENDAS Observaciones DAplicador/ responsable Forma de aplicación Dosis (unidad/ vol o sup) Producto* Fecha Cultivo/variedad N°/nombre del lote y superficie Productor:................................................................................................................................................................................ * Fertilizantes químicos, abonos orgánicos (guano, estiércol, etc.) * Nombre comercial MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS 16 �REGISTRO 6: APLICACIÓN DE FITOSANITRIOS EN MATERIAL VEGETAL DE INICIO Semilla o plantín:.............................................................................. Variedad:................................................................ Observaciones (problemas climáticos o de otra naturaleza) Aplicador/ responsable Maquina utilizada Dias a cosecha Vol total aplicado Dosis aplicada/ha Dosis recomendada/ha Producto utilizado* Plaga, enfermedad y/o maleza Fecha Superficie (ha): ................................................................................. N°/Nombre del lote:......................................... *Nombre comercial REGISTRO 7: INVENTARIO DE FITOSANITARIOS Producto (nombre comercial) Principio activo Fecha de compra MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS AGRÍCOLAS Cantidad ( kg o litros ) Fecha de vencimiento 17 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Manual de Buenas Prácticas Agrícolas Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria / Secretaria de Agroindustria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2018 Relation A related resource Resolución Conjunta 5/2018 Secretaria de Regulación y Gestión Sanitaria - Secretaria de Alimentos y Bioeconomía Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0002 Abstract A summary of the resource. El presente manual es una guía orientativa para la implementación de las Buenas Prácticas Agrícolas, las cuales fueron establecidas en el Código Alimentario Argentino (CAA) como obligatorias en la producción primaria (cultivo-cosecha) de frutas y de hortalizas, y en su almacenamiento hasta su comercialización dentro del establecimiento productivo. Se detalla: documentación obligatoria, productos fitosanitarios, agua, manipulación, animales, uso de fertilizantes orgánicos y enmiendas, responsable técnico y recomendaciones de planillas para resgistros. Guía de Buenas Prácticas https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/a0536af112ad52c021a705c370217b18.pdf 90e44e8a4f1293136c60122510239fcd PDF Text Text MANUAL DE DIAGNÓSTICO DE Brucella ovis Versión 1.0/2015 DIRECCION GENERAL DE LABORATORIOS Y CONTROL TECNICO DIRECCION NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis AUTORIDADES Ing. Agr. Diana Guillén Presidente M. V. Luis Carné Vicepresidente Dr. J.L. Ferro Director Nacional de Sanidad Animal Lic. Verónica Torres Leedham Directora General de Laboratorio y Control Técnico Dr. Jorge Rodríguez Toledo Director de Laboratorio Animal Página 2 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis OBJETIVO El presente Manual está dirigido a los Laboratorios veterinarios que realicen el diagnóstico serológico de la Brucelosis ovina. Contiene los requisitos técnicos necesarios para realizar las pruebas con carácter oficial. Las mencionadas técnicas son internacionalmente reconocidas y recomendadas por la ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE SANIDAD ANIMAL (OIE) y EL SENASA. Versión 1.0/2015. Elaborado por: Miguel Trezeguet, M.V., MSc Ana M. Nicola, M.V., MSc Sebastián Elena. M.V., MSc Cristina Franco, Vet. Nicolás Venditti, Vet. Página 3 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis INDICE 1. Introducción 1.1 Etiología 1.2 Epidemiologia 1.3 Patogenia 1.4 Manifestaciones clínicas 2. Diagnóstico de Laboratorio 2.1 Medidas Generales 2.2 Aseguramiento de calidad 2.3 Control de calidad de insumos 2.4 Equipos 2.5 Registro de entrada de muestras 2.6 Características y condiciones de las muestras 2.6.1 Condiciones de recepción de las muestras 2.6.2 Condiciones de rechazo de las muestras 3. Diagnóstico de Brucella ovis 3.1 Identificación del Agente 3.2 Pruebas serológicas 3.3 Inmunodifusión en gel de agar 3.4 Fijación de complemento 4. Elisa indirecto 4.1 Equipos 4.2 Materiales 4.3 Guía de problemas y soluciones 5.Referencias 6 6 6 7 8 9 9 11 12 13 13 13 13 14 14 14 14 15 18 42 43 43 45 46 Página 4 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis ABREVIATURAS                   Ag: Antígeno C’: Complemento de cobayo DILAB: Dirección de Laboratorios y Control Técnico ELISA: Enzimoinmunoensayo FC: Fijación de Complemento IDGA: Inmunodifusión en gel de agar IELISA: Enzimoinmnnoensayo Indirecto LPS: Lipopolisacárido M: Molar OIE: Organización Mundial de Sanidad animal PA: Poder anticomplementario RENSPA: Registro Nacional Productor agropecuario UI/ml: Unidades Internacionales por mililitro UIFC: Unidad Internacional fijadora del complemento UC: Unidad de complemento UH: Unidad de hemolisina SH: Sistema hemolítico TV: Tampón veronal calcio- magnesio Página 5 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 1. INTRODUCCION La Brucella ovis es el agente causal de la “Epididimitis Ovina”; esta es una enfermedad infecciosa transmisible que afecta únicamente a ovinos. No es considerada una zoonosis. En los machos se caracteriza por epididimitis e infertilidad. La patogenicidad en la oveja es discutida, causa infertilidad, fundamentalmente en hembras de primer servicio, abortos tardíos y mortalidad neonatal. 1.1. Etiología   Género: Brucella Especie: Brucella ovis Es un cocobacilo Gram-negativo; inmóvil; no hemolítico; no esporulado; sin cápsula; microaerófilo (debe cultivarse en ambiente con 10% de CO 2 para su aislamiento); catalasa positivo; intracelular facultativo. B. ovis, así como las otras integrantes del género, resiste la decoloración por ácidos débiles, en la tinción de Ziehl-Neelsen modificada por Stamp, se observan cocobacilos rojos en fondo azul. El resultado debe ser siempre confirmado por el cultivo bacteriológico. B. ovis presenta inmunogenicidad cruzada con B. canis, ambas especies son las únicas integrantes del género Brucella que son morfológicamente de forma rugosa (cepas rugosas). 1.2. Epidemiología La epididimitis de los carneros producida por B. ovis ha sido diagnosticada prácticamente en todos los países donde se crían ovinos. Tanto machos como hembras pueden infectarse, pudiendo transformarse en portadores; pero, en la epidemiología de la enfermedad, el macho es quien adquiere un papel predominante debido a su capacidad de difundir la enfermedad a otras majadas; siendo la puerta de entrada de la infección al establecimiento libre, la introducción de animales enfermos. Es una enfermedad de carácter venéreo, el material de elección para la transmisión el semen, siendo la vía más importante la encarnerada. Un macho infectado lo transmite a una hembra sana que actúa como vector mecánico, transmitiendo la enfermedad a los machos que la cubren. Los carneros vasectomizados o retajos también pueden infectarse participando en la transmisión de la enfermedad. Página 6 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis La B. ovis se acantona en las vesículas seminales, epidídimos y también se elimina por la orina. Los contagios se producen con mayor frecuencia entre la pubertad y los 15 a 18 meses de edad. La prevalencia en machos reactores serológicos positivos y con manifestaciones clínicas de epididimitis, aumenta con la edad. En los machos jóvenes B. ovis es de menor importancia que otras bacterias (Actinobacillus seminis y Histophilus ovis) como agente etiológico de epididimitis. El agente se elimina por semen, secreciones vaginales, leche y orina, de forma intermitente. También, se ha comprobado, que la bacteria puede recuperarse de secreciones uterinas de ovejas hasta 10 días después del aborto. Aunque se ha descripto como vías de entradas al organismo animal por mucosas nasal, ocular y oral, estas parecen no tener la importancia que tiene la enfermedad provocada por otras especies del género Brucella que afecta a otras especies domésticas. 1.3. Patogenia Las vías más frecuentes de penetración de la bacteria es a través de las mucosas peneana, rectal o vaginal, donde puede permanecer por algún tiempo, para después migrar a los linfonódulos regionales. En estos se multiplica y va siendo liberada al torrente sanguíneo a medida que las células infectadas son destruidas. Esta constante eliminación de bacterias estimula el sistema inmune, que produce inmunoglobulinas G, cuya presencia es de importancia en el diagnóstico. Al final del segundo mes de infección se produce una bacteriemia y el agente se localiza preferentemente en el área genital. En el 90 % de los casos se ubica en la cola del epidídimo, donde provoca una reacción de edema intersticial e inflamación en los tejidos adyacentes a la capa basal del epitelio. Produce edema con llegada de polimorfonucleares y macrófagos, hiperplasia y degeneración vacuolar de epitelio tubular, con ruptura y extravasación del material seminal al intersticio, con la consecuente formación de un granuloma espermático. Durante estas primeras etapas hay un ligero aumento de tamaño y consistencia de la cola del epidídimo, que es prácticamente impalpable, pero en este momento ya existe serología positiva y alteraciones seminales. Las mayores lesiones no son debidas al agente, sino que son debidas al granuloma espermático. Estas alteraciones se desarrollan durante un periodo de meses, tiempo durante el cual se encuentran gran cantidad de microorganismos en el eyaculado. El granuloma espermático resultante semeja a un absceso y la cola puede estar agrandada de tamaño 4 ó 5 veces por la reacción fibrosa. Si el material seminal pasa a la cavidad vaginal causa una severa inflamación con fuertes adherencias. No se produce orquitis primaria, sino que la degeneración testicular es secundaria al estasis en los túbulos seminíferos, que a menudo lleva a calcificación. El órgano afectado es estéril. La Brucella ovis también puede provocar seminovesiculitis. En las ovejas la patogenicidad es baja, pudiendo darse placentitis a nivel trofoblástico, Página 7 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis llevando a isquemia y necrosis de los cotiledones, dando como consecuencia el aborto. 1.4. Manifestaciones clínicas No existen manifestaciones clínicas generales. Solamente 1/3 de los carneros enfermos presentan lesiones palpables. Los casos agudos, son difíciles de detectar clínicamente, se ve en animales jóvenes con edema y aumento del tamaño del escroto, fiebre, depresión y anorexia, a los 3 a 5 días baja la inflamación pero las colas del epidídimo continúan agrandadas. En los casos crónicos la manifestación clínica característica de la enfermedad es una inflamación en la cola del epidídimo, que puede extenderse al cuerpo y cabeza del órgano, los epidídimos se palpan aumentados de tamaño, indurados y con menor elasticidad. En la mayoría de los casos las lesiones son unilaterales, pero pueden observarse ambos testículos afectados. En casos avanzados puede detectarse orquitis con aumento de tamaño o atrofia testicular y degeneración del testículo afectado, así como adherencias de las túnicas que lo envuelven. La fertilidad puede variar desde normal a nula dependiendo del grado de la lesión. En el espermograma se observan gran número de leucocitos, anomalías secundarias (cabezas sueltas y defectos de cola) y células en bote, que son células epiteliales que sufren necrosis; baja concentración espermática y motilidad de masa disminuida. También puede evidenciarse la presencia de microorganismos (no siempre). En las hembras puede observarse vaginitis y cervicitis post-servicio. También se observa aborto e infertilidad, especialmente en las borregas de primera cría. El aborto ocurre en el último tercio de la gestación y el porcentaje es reducido. Luego del aborto puede observarse retención de placenta y lesiones de la placenta fetal, que consisten en placas amarillo-grisáceas en los espacios intercotiledonarios. La infertilidad es temporaria, comportándose normalmente en la próxima época de servicios. También provoca nacimientos de corderos débiles que mueren al poco tiempo de nacidos. Página 8 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 2. DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO 2.1 Medidas generales de bioseguridad y seguridad en el laboratorio Las personas que trabajan con agentes infecciosos o materiales potencialmente infectados deben conocer los riesgos potenciales, y estar capacitados en las prácticas y técnicas requeridas para manipular dichos materiales en forma segura. El director o la persona a cargo del laboratorio es responsable de brindar u organizar la capacitación adecuada del personal. Cada laboratorio debe desarrollar o adoptar un manual con procedimientos de bioseguridad que identifique los riesgos que se encontrarán o puedan producirse, y que especifique las prácticas y procedimientos destinados a minimizar o eliminar las exposiciones a estos riesgos. Se debe alertar al personal acerca de los riesgos especiales y se les debe exigir que lea y cumpla las prácticas y procedimientos requeridos. El acceso al laboratorio debe ser limitado o restringido. El laboratorio debe ser diseñado para que su limpieza sea sencilla y contar con una pileta para el lavado de manos. Las superficies de las mesas de trabajo deben ser impermeables al agua y ser resistentes al calor moderado y a solventes orgánicos, ácidos, álcalis y productos químicos utilizados para descontaminar la superficie de trabajo y los equipos. Los muebles de laboratorio deben tener la capacidad de soportar cargas y usos previstos. Los espacios entre las mesas de trabajo, gabinetes y equipos deben ser accesibles para su limpieza. Si el laboratorio tiene ventanas que se abren hacia el exterior, deben estar provistas de mosquiteros. Se deben usar ambos, batas o uniformes de laboratorio de protección adecuados durante la permanencia en el mismo. Se debe retirar y dejar esta ropa de protección en el laboratorio antes de dirigirse a otras áreas (por ejemplo, cafetería, biblioteca, oficinas administrativas).Se debe usar además calzado cerrado y cabello recogido. Se deben usar guantes cuando las manos entren en contacto con materiales infecciosos, superficies o equipos contaminados. Puede ser apropiado el uso de dos pares de guantes. Los guantes se retiran al terminar el trabajo o se descartan y se hace cambio de guantes cuando estos entraron en contacto directo con el material Página 9 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis infeccioso o cuando está comprometida la integridad del guante. Los guantes descartables no se lavan, no se vuelven a usar ni se utilizan para tocar superficies “limpias” (teclados, teléfonos, entre otras), y no se deben usar fuera del laboratorio. Las personas deben lavarse las manos frecuentemente durante el trabajo en el laboratorio, luego de manipular materiales potencialmente viables, luego de quitarse los guantes y antes de retirarse del laboratorio No está permitido comer, beber, fumar, usar lentes de contacto, maquillarse o almacenar alimentos para consumo personal en áreas de trabajo. Se debe utilizar protección ocular para los procedimientos en los que se puedan producir salpicaduras de material infeccioso u otros materiales peligrosos. La iluminación debe ser adecuada para todas las actividades, evitando los reflejos y el brillo que puedan molestar la visión. Está prohibido pipetear con la boca; se debe utilizar dispositivos mecánicos y aplicar procedimientos para el manejo seguro de objetos cortantes o punzantes. Todos los procedimientos se llevan a cabo con precaución a fin de minimizar la creación de salpicaduras o aerosoles. Las superficies de trabajo se descontaminan antes y después de finalizar las tareas y ante todo derrame de material viable. Todos los cultivos, stocks y otros desechos debidamente segregados se descontaminan antes de ser desechados mediante un método de descontaminación aprobado, como por ejemplo, mediante autoclave. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio inmediato son colocados en un recipiente duradero, estanco y cerrado para su transporte desde el laboratorio. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio inmediato se embalan de conformidad con las normas locales, estatales y federales aplicables antes de retirarlos del establecimiento de acuerdo a las indicaciones de la Ley 24051 de Residuos Peligrosos. Agente: Brucella (B. abortus, B. canis, B. melitensis, B. suis y B. ovis). El género Brucella clasificado por el “Manual de Bioseguridad en el Laboratorio de la OMS”, en el Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo) agentes patógenos que suelen provocar enfermedades humanas o animales Página 10 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis graves, pero que de ordinario no se propagan de un individuo a otro. Existen medidas preventivas y terapéuticas eficaces. La brucelosis sigue siendo la infección bacteriana de laboratorio más comúnmente reportada. Tanto B. abortus, B. canis, B. melitensis como B. suis pueden provocar la enfermedad en personal de laboratorio atribuidos a la exposición directa o accidental a material infeccioso Hasta la fecha, no se han reportado casos humanos, provocados por B. ovis y es considerada como no zoonótica. Sin embargo, en las zonas donde coexiste infección de B. melitensis con B. ovis, se requiere especial cuidado al manipular muestras, que serán transportados al laboratorio en recipientes para sustancias infecciosas (6.2) Riesgos de laboratorio: El agente puede estar en sangre, en el fluido cerebroespinal, en el semen y, a veces, en la orina. La mayoría de los casos de laboratorio se han producido en instalaciones de investigación y producción y, se debieron a la exposición a las cepas de Brucella patógenas para el hombre, cultivados en grandes cantidades. También se han producido casos en el ámbito del laboratorio clínico por aspirar cultivos bacteriológicos. En estos casos, generalmente, ha habido contacto directo de la piel con los cultivos o con especímenes clínicos infecciosos de animales (por ejemplo, sangre, descargas uterinas). Los aerosoles generados durante los procedimientos de laboratorio, el pipeteo, las inoculaciones parenterales accidentales y los aerosoles hacia los ojos, nariz y boca también han provocado infecciones. Precauciones: Para toda la manipulación de cultivos de Brucella spp. y para estudios experimentales con animales, se debe trabajar con equipos de contención y en instalaciones del Nivel de Bioseguridad 3. 2.2. Aseguramiento de calidad en el Laboratorio Los laboratorios deberán cumplimentar la reglamentación vigente de acuerdo a las BPL (SENASA), Norma ISO/IEC 17025, OIE Quality Standard and guidelines for veterinary Laboratorios: Infectious diseases (2008) Para que los resultados del diagnóstico sean uniformes y confiables, deben efectuarse siguiendo técnicas estandarizadas, con operadores capacitados en la realización e interpretación de los resultados, utilizando equipos y reactivos controlados. Los procedimientos de laboratorio están sujetos a múltiples causas de error que deben ser detectados para poder aplicar acciones correctivas. Página 11 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Los procedimientos se pueden monitorear mediante el control interno, con la utilización diaria de sueros con títulos conocidos y el control externo con interlaboratorios con un laboratorio de referencia. El control permanente de la calidad de los resultados, junto a las buenas prácticas de laboratorio que incluyen la utilización de técnicas evaluadas, personal capacitado y operaciones estandarizadas, garantizan el diagnóstico. 2.3. Control de calidad de insumos Todos los insumos y reactivos que se utilizan en el laboratorio deben estar establecidos con fórmulas y procedimientos detallados en manuales disponibles en el área de trabajo. La composición, tipo de envase, identificación y lugar de almacenamiento debe ser la indicada en los manuales. No introducir cambios que no estén registrados y autorizados por el responsable del laboratorio. Todos los insumos y materiales de referencia deben cumplir con las especificaciones establecidas. El agua empleada en el laboratorio de diagnóstico debe ajustarse a las especificaciones recomendadas para cada uso. En general para el lavado del material de vidrio se usa agua de tipo III, purificada y con una conductividad específica máxima de 5.0 micromhs/cm, 0.2 mega Homs/cm de resistencia específica (mínima), 0.01 mg/l (como máximo) de silicatos y de metales pesados. En la preparación de soluciones para pruebas serológicas, soluciones tamponadas, medios de cultivo y colorantes se emplea agua purificada de tipo II. Admite como máximo una conductividad específica de 2.0 micromhs/cm, 0.5 mega Homs/cm (mínimo) de resistencia específica, 0.01 mg/l (máximo) de silicatos y de metales pesados. Para preparar reactivos y soluciones de referencia, realizar pruebas de ELISA y reconstituir liofilizados se utiliza agua de tipo I. Debe tener una conductividad específica de 0.1 micromhs/cm (máximo), una resistencia específica de 10.0 mega Homs/cm (mínimo) y el mismo límite de silicatos y metales pesados que los tipos anteriores. Los reactivos biológicos que se emplean en las técnicas, deben utilizarse de acuerdo a las especificaciones del Manual de Procedimientos Operativos, respetando las indicaciones para la conservación, almacenamiento y titulación. Los reactivos y kits diagnósticos que se utilizarán y comercializarán en el país, para diagnóstico oficial deberán ser debidamente registrados y aprobados ante el SENASA. Página 12 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 2.4. Equipos El laboratorio debe tener un inventario, programa de control y mantenimiento de los equipos que emplea en el diagnóstico. 2.5. Registro de entrada de muestras Los laboratorios deben contar con un registro de entrada de muestras, en el que conste como mínimo la siguiente información:  Fecha de recepción de muestras.  Cantidad de muestras.  Especie.  Fecha de extracción de muestras.  Procedencia: establecimiento, número de RENSPA.  Localidad: departamento, partido, provincia.  Remitente: veterinario acreditado, nombre y número de registro, otorgado por la Dirección Nacional de Sanidad Animal (DNSA) SENASA.  Motivo del envío: saneamiento, traslado, importación, exportación y otros.  Fecha de emisión de los resultados. 2.6. Características y condiciones de las muestras 2.6.1. Condiciones de "recepción" de las muestras:  Sangre entera o suero refrigerados.  Suero congelado.  Tubos con identificación clara, de preferencia sobre cinta de papel o similar adherida al tubo; con marcación firme e indeleble en el cuerpo del tubo. 2.6.2. Condiciones de "rechazo" o demora del procesamiento de las muestras:  Falta de planillas protocolo o planillas incompletas.  Sangre entera congelada. Página 13 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis  Sangre entera o suero, contaminados.  Sueros hemolizados.  Tubos no identificados. Los Laboratorios deberán ser exigentes con la calidad de las muestras a procesar, como así también con la planilla de toma de muestra firmada por el veterinario acreditado actuante que debe acompañar a las muestras. Los informes que elabore el Laboratorio deberán ser precisos para poder desarrollar adecuadamente las acciones de saneamiento. 3. Diagnóstico de Brucella ovis 3.1 Identificación del agente: Lesiones clínicas (epididimitis y orqui-epididimitis) en carneros puede ser indicativo de la existencia de la infección, pero se requieren exámenes de laboratorio para confirmar la enfermedad. La confirmación de laboratorio puede basarse en métodos directos o indirectos. El diagnóstico directo se realiza mediante el aislamiento bacteriológico de B. ovis de muestras de semen o tejidos de carneros, o secreciones vaginales, la leche y los tejidos de ovejas, en medios selectivos adecuados. Brucella ovis es similar a las otras Brucella spp. en su morfología, propiedades de tinción y las características culturales, excepto que da reacciones negativas a las pruebas de oxidasa y ureasa. Los métodos moleculares se han desarrollado para la identificación complementaria basado en secuencias genómicas específicas. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) puede proporcionar medios adicionales de detección. Sin embargo, se prefiere el diagnóstico indirecto basado en pruebas serológicas para el diagnóstico de rutina. 3.2 Pruebas serológicas: La prueba de Fijación del Complemento (FC), la prueba de inmunodifusión en gel de agar (IDGA) y ensayos inmunoenzimáticos indirectos (I-ELISA) usando antígenos de superficie solubles obtenidos de la cepa B. ovis REO 198, se deben utilizar para el diagnóstico. La sensibilidad de la pruebas de IDGA y I-ELISA son similares y pueden ser más elevada que el FC. Una combinación en paralelo de la prueba IDGA y I-ELISA parece dar los mejores resultados en términos de sensibilidad, pero con respecto a la sencillez y el costo, la prueba IDGA es la prueba más factible para el diagnóstico de B. ovis en laboratorios no especializados. Sin embargo, debido a la falta de métodos normalizados reconocidos a nivel internacional para la IDGA y I-ELISA, la prueba prescrita para el comercio internacional sigue siendo la FC. Antígenos HS para su uso en pruebas serológicas deben ser preparados a partir de Brucella ovis cepa REO 198 es CO 2 y suero independiente. Página 14 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis El Suero Estándar Internacional anti-Brucella ovis (1985) es la referencia utilizada para comparar y estandarizar el resto de los patrones secundarios. Este estándar de referencia está disponible para los laboratorios de referencia nacionales y debe utilizarse para establecer los estándares secundarios o nacionales frente a los cuales puedan prepararse los estándares de trabajo que se utilizarán en el laboratorio de diagnóstico de forma sistemática en el día a día. 3.3. Inmunodifusión en gel de agar Materiales:     Micropipetas de 10-100µl. Placas de Petri (100mm de diámetro) / porta objetos Recipientes varios. Puntas de pipetas (tips). Equipos:         Centrífuga. Heladera. Freezer. Vortex. Sacabocado perforador de agar. Bomba de vacío. Cámara húmeda. Caja de lectura con fondo oscuro. Reactivos:  Antígeno HS preparado a partir de Brucella ovis cepa Reo 198 aprobado por SENASA. Conservar el Antígeno en el freezer a -20 ± 5° C, en envase de vidrio, No de poliestireno. No se debe conservar en la heladera.  Suero control positivo. Drogas y Soluciones:     Agar Noble o agarosa. Cloruro sódico. Ácido Bórico. Cloruro Potásico. Página 15 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis  Agua destilada. Preparación de tampón borato (preparado con ácido bórico [12,4 g]; cloruro potásico [14,5 g] y agua destilada [1.600 ml]; ajustado a pH 8,3 con una solución de NaOH (0.2 M), y llevado hasta 2.000 ml de volumen final con agua destilada). Para preparar el agar se disuelve 1g de agarosa (o agar Noble), 10 g de NaCl en 100 ml de tampón borato hirviendo mientras se agita continuamente. Se cubren los portaobjetos o placas de petri colocados sobre una superficie plana, con la cantidad necesaria del agar fundido para formar un lecho de 2,5 mm de espesor (aproximadamente 3,5 ml para los portaobjetos estándar y 13-14 ml en placas de Petri de 100 mm) Después de que el agar se haya solidificado (15–20 minutos) en una superficie nivelada, se recomienda dejar al menos una hora en heladera para asegurar que el agar este bien firme cuando se perfora, se recortan los pocillos utilizando un sacabocado para agar. Los pocillos deberán ser de 3 mm de diámetro y estar separados 3 mm entre ellos, y estar dispuestos según un patrón hexagonal alrededor de un pocillo central que también tendrá 3 mm de diámetro. Ejecución del ensayo: Descongelar y mezclar bien los sueros y el antígeno utilizando preferentemente vortex o invirtiendo el tubo (o envase) varias veces. Con micropipeta cargar los pocillos 2, 4 y 6 en forma individual con los sueros a procesar y en los pocillos 1, 3 y 5 el suero control positivo. Por último cargar en el pocillo central el antígeno. (Fig. 1) Los pocillos serán llenados completamente teniendo la precaución de no desbordar, ni dejar burbujas. A su vez ningún pocillo debe quedar sin cargar. Revisar bien las rosetas y descatar aquellas donde, por una mala perforación, el agar esté rajado y haya comunicación entre los pocillos. Incubar en cámara húmeda a temperatura ambiente 22 ± 4 ºC, 48 horas. Realizar una primera lectura a las 24 hs y la lectura definitiva a las 48 hs. Página 16 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Fig. 1 Diagrama de siembra de sueros y antígeno Suero problemas: Pocillos 2, 4 y 6 Sueros controles: Pocillos 1, 3 y 5 Antígeno: Pocillo central 1 6 2 5 3 4 Lectura e interpretacion de resultados: La lectura se efectúa bajo haz de luz suave indirecta sobre un fondo oscuro revelando las bandas de precipitación. Antes de una lectura definitiva, si se observan líneas inespecíficas, se recomienda lavar las placas de agar durante una (1) hora en una solución en agua de citrato sódico al 5% para limpiar las líneas de precipitación inespecíficas. Las reacciones se clasifican en: POSITIVAS: Cuando se aprecia una banda o línea de precipitación definida entre el pocillo central (Ag) y los orificios de los sueros problemas, mostrando una identidad total o parcial con la del suero control positivo. También pueden aparecer líneas de precipitado que no den una identidad total y que pueden corresponder a componentes antigénicos minoritarios de los extractos HS (en las infecciones debidas a otras especies del género Brucella también pueden generarse con frecuencia anticuerpos frente a estos componentes). Estas reacciones también deben considerarse positivas. NEGATIVAS: Cuando no se aprecia ninguna banda de precipitación entre el orificio central (Ag) y los orificios de los sueros problema. Criterios de aceptación del resultado De no observar la presencia de la banda de precipitación de los controles positivo, la prueba será considerada como no válida y deberá ser repetida. Página 17 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 3.4 Fijación de complemento Materiales:  Material de vidrio de volúmenes varios.  Pipetas de : 1 ml, 2 ml, 5 ml y 10 ml.  Gradillas.  Parafilm para cubrir placas.  Puntas de pipetas (Tips).  Tubos de centrífuga cónicos.  Tubos de Khan.  Placas de polipropileno de 96 pocillos con fondo en U. Equipos:  Estufa 37 ± 2°C.  Termo de nitrógeno líquido o freezer (- 70°C ± 10ºC).  Baño termostático 60-63°C.  Agitador de placas.  Espectrofotómetro (540nm).  Micropipetas automáticas monocanales y multicanales de rango 10 µl a 200 µl.  Termométros certificados.  Peachímetro.  Balanza. Reactivos:  Suspensión de glóbulos rojos 2% (GR 2%).  Hemolisina producida en conejo (H).  Complemento de cobayo (C).  Antígeno de Brucella ovis (Cepa Reo 198) (Ag). Sueros:  Suero control positivo.  Suero control negativo.  Sueros problemas a analizar. Soluciones (Anexo I):  Tampón veronal calcio magnesio 5X (TV 5X).  Tampón veronal calcio magnesio 1X , pH 7,3-7,4. (TV 1X). Página 18 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis EJECUCION DE LA PRUEBA (Microtécnica): Utilizar microplacas de 96 pocillos fondo en U. Presentar la microplaca de manera que las letras indiquen columnas (diluciones del suero) y los números indiquen las filas (sueros a analizar). De esta manera, en cada placa se incluyen 12 muestras de suero para análisis y a cada muestra se le realizan 8 diluciones en base 2 (1:2 a 1:256). El procedimiento se desarrolla en caliente (incubación en estufa a 37 ± 2°C) y utiliza los siguientes reactivos en volumenes de 25 µl: a) b) c) d) e) Tampón Veronal 1X. Sueros inactivados a 60 – 63°C Solución de complemento de cobayo en TV 1X que contenga 2 UC/ml. Solución de antígeno en TV 1X a la dilución de trabajo. Sistema hemolítico obtenido por la mezcla de volúmenes iguales de una solución de hemolisina en TV 1X que contenga 2 UH/ml y de una suspensión de eritrocitos de carnero en TV 1X al 2%. Inactivación de los sueros Las muestras de suero se inactivan en baño termostático para eliminar el complemento natural contenido en las mismas. La temperatura del baño se controlará mediante la introducción de un termómetro certificado durante todo el tiempo de exposición de las muestras al agua. Los sueros se inactivan por 30 minutos en baño termostático a 60ºC – 63°C (en caso de que los sueros sean anticomplementarios, se recomienda realizar otra ciclo de inactivación de 30 minutos). Las muestras podrán ser sumergidas en el baño termostático de la siguiente forma:  En tubos de khan tapados herméticamente, contenidos en gradillas, debidamente identificados. La inactivación de las muestras podrá realizarse un día antes del análisis. En este caso, una vez retiradas del baño termostático se dejarán a temperatura ambiente durante al menos 30 minutos para luego conservar en heladera. Si el análisis se realizaría después de las 24 hs, las muestras ya inactivadas se conservaran a -20 ± 5° C. Página 19 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Controles utilizados Sueros controles:  Control positivo o o o  Pre-diluir el suero control positivo 1/12,5 con TV 1X, inactivar, alicuotar y conservar a –20 ± 5 º C. Dispensar 25 µl/pocillo de TV 1X en la fila 1 de la placa control desde 1G hasta la 1A. Dispensar en el pocillo H1, 50 µl del suero control positivo diluido previamente 1/12,5 con TV 1X, tomar 25 µl de suero del pocillo H1 y pasarlo al pocillo G1, homogeneizar bien los dos componentes, luego pasar 25 µl al siguiente pocillo F1, y repetir la misma secuencia hasta el pocillo A1. Tabla 1 Control negativo Se realiza una dilución en base 1:2 de la siguiente manera: o Dispensar 25 µl/pocillo de TV 1X en la fila 2 de la placa control desde 2H hasta la 2A, o Dispensar en el pocillo H2, 25µl del suero control negativo, homogeneizar bien, tomar 25 µl del pocillo H2 y pasarlo al pocillo G2, homogeneizar bien los dos componentes, luego pasar 25 µl al siguiente pocillo F2, y repetir la misma secuencia hasta el pocillo A2. Tabla 1  Control de la ausencia de poder anticomplementario del antígeno o o o o  Dispensar por duplicado (H3 y G3) en la microplaca de los controles 25 µl/pocillo de la solución de antígeno 25 µl/pocillo de TV 1X 25 µl/pocillo de C Controles del sistema hemolítico Sin complemento: Dispensar 75 µl de TV 1X por duplicado (H4 y G4) en la placa de controles. Con complemento: Se dispensa en H5 o 50 µl/pocillo de TV 1X o 25 µl/pocillo de C Página 20 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Tabla 1: Placa de controles C B A Control de SH con C’ D Control del SH sin C' E Control de ausencia de ant. delAg 1:25 1:50 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 25µl 50 µl Suero POS 1:2 Dilución suero control negativo F Dilución suero control positivo G H 1:12,5 25µl 25µl 25µl 25µl 25µl 25µl 25µl 1 25µl TV 1:4 25 µl Suero 25µl puro NEG 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 25µl 25µl 25µl 25µl 25µl 25µl 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 2 25µl 25µl TV 25µl Ag 25µl C’ 25µl TV 25µl Ag 25µl C’ 75µl TV 75µl TV 4 50µl TV 25µl C’ 50µl TV 25µl C’ 5 3 Dilución de las muestras de sueros problemas En otra placa,  Dispensar en cada pocillo 25 µl de TV 1X, de acuerdo a la cantidad de sueros a procesar.  Dispensar 25 µl de suero en el pocillo H1, homogeneizar bien los dos componentes con pipetas monocanal o multicanal, luego pasar 25 µl del pocillo H1 al G1, homogenizar y pasar 25 µl al pocillo F1, luego repetir la misma secuencia hasta el pocillo A1.  La secuencia de operaciones se detalla en la Tabla 2. Las diluciones se realizarán con pipetas monocanal o multicanal. La homogenización de los dos componentes de cada dilución se mezclan mediante el pipeteo por cinco veces consecutivas como mínimo. Página 21 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Preparación de la solución de antígeno y complemento y su distribución en la microplaca de los sueros controles positivo y negativo y en los sueros a analizar.    Se preparan las soluciones de C y Ag según la dilución de trabajo establecida como óptima.(Ver Anexo II) Una vez diluidos los sueros con la TV 1X, dispensar la solución de antígeno a razón de 25 µl /pocillo, en todos los pocillos excepto en la columna H de la dilución 1:2 que actuarán como controles de poder anticomplementario (AC) de cada suero. A continuación dispensar 25 µl/pocillo de la solución de C en todos los pocillos de la microplaca. Tabla 3. Primera incubación en caliente  Cubrir y agitar las microplacas en agitador de placas durante 2 – 4 minutos  Incubar las microplacas en estufa a 37 ± 2°C durante 30 minutos. Página 22 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Tabla 2: Distribución de las muestras problemas a analizar en una microplaca de 96 pocillos fondo en U (12 sueros × 8 diluciones) 25µl suero 6 25 µl TV 25µl suero 7 25 µl TV 25µl suero 8 25 µl TV 25µl suero 9 25 µl TV 25µl suero 10 25 µl TV 25µl suero 11 25 µl TV 25µl suero 12 25 µl TV 1:8 1:16 1:32 1:64 A 25µl suero 5 25 µl TV 1:4 B 25µl suero 4 25 µl TV C 25µl suero 3 25 µl TV D 25µl suero 2 25 µl TV E 25µl suero 1 25 µl TV F 25 µl G H 1:2 1:128 1:256 25µl 1 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 25µl TV 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 En la columna H con la dilución 1:2 se evalúa la actividad anticomplementaria de cada suero a analizar. En lugar del antígeno se debe completar el volumen final con 25 µl solución TV 1X. Agregado del sistema hemolítico  Finalizada la primera incubación, dispensar el sistema hemolítico a razón de 25 µl en todos los pocillos de las placas. Tabla 3 Segunda incubación en caliente (ídem anterior) Centrifugación/reposo de la microplaca  Finalizada la segunda incubación, centrifugar las microplacas a 2000 rpm durante 5 minutos o bien dejar en reposo en heladera durante una hora antes de su lectura. Página 23 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Tabla 3: Distribución final de los reactivos por pocillo de la placa H G F E D C B A 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 25µl TV 25µl Ag 25µl C’ 25µl TV 25µl Ag 25µl C’ 25µl suero 1 50 µl TV 25µl C’ 25µl TV 25µl Ag 25µl C’ 25µl TV 25µl Ag 25µl C’ 25µl TV 25µl Ag 25µl C’ 25µl TV 25µl Ag 25µl C’ 25µl TV 25µl Ag 25µl C’ 1 1ºincubación 25µl SH 25µl SH 25µl SH 25µl SH 25µl SH 25µl SH 25µl SH 25µl SH 2ºincubación Cálculos y expresión de los resultados El grado de fijación del complemento se manifiesta por la presencia o ausencia de hemólisis del sistema hemolítico. Se expresa en forma de UIFC (unidades internacionales fijadoras del complemento) según el título o dilución de la muestra (1:4,1:8, etc) seguido de 1, 2, 3 o 4 cruces según el grado de fijación de complemento en dicha dilución. El título menor que se cuantifica es 1:4 + (16,6 UIFC) y el rango de trabajo esta comprendido entre 1:4 + y 1:256 ++++ (16,6 a 1702,7 UIFC). El poder anticomplementario de los sueros se controla en la columna H, dilución 1:2. La presencia de al menos un 25% de sedimento de eritrocitos (+) en la fila H (dilución 1:2) indica que el suero problema puede tener poder anticomplementario. En tal caso se informa el resultado ¨PA¨, y se solicitará una nueva extracción de suero para repetición del ensayo. El resultado de la reacción será “positivo” o “negativo”. En el primer caso la reacción positiva se cuantificará mediante la determinación del título y su grado de hemólisis o fijación del complemento. Reacción positiva:  Sedimentación en grado variable de los eritrocitos en el fondo del pocillo. Página 24 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis  El sobrenadante estará afectado por un cierto tinte rojizo en función de la hemólisis que se haya producido. ++++ +++ ++ + 0% de hemólisis o 100% fijación del complemento (completa) Sobrenadante translúcido, en el fondo de la placa un botón de depósito de eritrocitos 25% de hemólisis o 75% de fijación del complemento Sobrenadante rojizo en un 25% de intensidad; en el fondo un depósito claro de eritrocitos 50% de hemólisis o 50% de fijación del complemento Sobrenadante rojizo en un 50% de intensidad; en el fondo un depósito tenue de eritrocitos 75% de hemólisis o 25% de fijación del complemento. Sobrenadante rojizo en un 75% de intensidad; en el fondo un depósito muy tenue de eritrocitos Reacción negativa: 100% de hemólisis con ausencia de depósito de eritrocitos. Interpretación de los resultados Existe un sistema de unidades basado en el Estándar Internacional para el Suero antiBrucella ovis (Estándar Internacional 1985). Este suero contiene 1000 UlFC/ml. Si este suero se analiza con un método determinado y da, por ejemplo, un título de 100, entonces el factor para un suero desconocido analizado mediante ese método se puede hallar a partir de la fórmula: 1.000/100 × título del suero problema = número de UIFC (unidades internacionales de FC) de anticuerpo en el suero problema por ml. Los resultados deben expresarse siempre en UIFC, calculados con relación a aquellos obtenidos en una titulación en paralelo con un suero patrón nacional, que a su vez ha sido estandarizado con el suero Estándar Internacional. Se considerara la muestra positiva cualquier valor ≥50 UIFC/ml (1/8 ++++). Para la expresión de los resultados se puede utilizar la formula con el suero patrón antes mencionada o emplear una tabla establecida (Tabla 4) basada en el presente manual en el Procedimiento IZS TE B2. 1.6 SOP 004 del Centro Internacional de Referencia OIE para Brucelosis Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell ”Abruzzo e del Molise G. Caporale. Teramo. Italia Página 25 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Dilución % de fijación del C UIFC + 16,6 ++ 20 +++ 23,2 ++++ 26,6 + 33,2 ++ 40 +++ 46,4 ++++ 53,2 + 66,4 ++ 80 +++ 92,8 ++++ 106,4 + 132, 8 ++ 160 +++ 185,6 ++++ 212,8 + 265,6 ++ 320 +++ 371,2 ++++ 425,6 + 531,2 ++ 640 +++ 742,4 ++++ 851,2 + 1062,4 ++ 1280 +++ 1484,8 ++++ 1702,4 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 Tabla 4. Interpretación de los resultados expresada en UIFC Página 26 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Lectura de los controles El ensayo es satisfactorio si los controles han dado los resultados esperados: Controles Resultado Esperado 50 % de fijación (++) Suero control positivo en la dilución 1:200 que corresponde a 1000 UIFC 100% de hemólisis Suero control negativo en todos las diluciones, ausencia de fijación de complemento 100% de hemólisis Control de poder anticomplementario de los sueros ausencia de fijación del complemento en la dilución 1/2 (sin antígeno) Control de ausencia de poder anticomplementario del antígeno 100 %hemólisis Control del sistema hemolítico sin C 0% de hemólisis Control del sistema hemolítico con C 100% de hemólisis En el caso que los controles no se encuentren dentro de los límites aceptables, el ensayo será considerado como no válido y la prueba deberá ser repetida. Página 27 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 3.4.1. ANEXO I Preparación de soluciones Tampón Veronal Calcio magnesio (TV) Solución madre (5X) NaCl Na 5-5 dietil barbiturato Ácido clorhídrico 1 N (*) Solución concentrada de Ca++ y Mg++ Agua destilada c.s.p. 83 g 10,19 g 34,58 ml 5 ml 2000 ml a) En un matraz aforado de 2000 ml, disolver el NaCl y el barbiturato de sodio en 500 ml de agua destilada. b) Agregar el ácido clorhídrico 1N. c) Agregar 5 ml de la solución concentrada de Ca++ y Mg++, la cual se prepara de la siguiente manera: CaCl 2 .2 H 2 O Mg Cl 2 .6 H 2 O Agua destilada 4,4 g 20,3 g 100 ml d) Completar el volumen hasta 2000 ml con agua destilada y mezclar. Solución de trabajo 1X (pH 7,3 -7,4) Realizar una dilución 1:5 con agua destilada de la solución madre 5X. Conservar en heladera 5 ± 3°C Tiempo de validez: 5 días. Página 28 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 3.4.2. ANEXO II Metodología para la preparación estandarización de la suspensión de glóbulos rojos de carnero al 2% Materiales:  Cámara de Neubauer.  Material de vidrio de volúmenes varios.  Pipetas de: 1 ml, 2 ml, 5 ml y 10 ml.  Gradillas.  Tips.  Tubos de centrifuga graduado.  Micropipetas de 10 – 200 µl. Equipos  Se utilizan los mismos equipos descriptos en 3.4 (ensayo de FC). Soluciones  Tampón veronal 1X pH 7,3-7,4.  Glóbulos rojos de carnero (adquiridos comercialmente) Drogas  Cloruro de Sodio.  5-5 dietilbarbiturato de sodio.  Cloruro de Magnesio.  Cloruro de Calcio.  Ácido Clorhídrico.  Citrato de Sodio. Preparación de los Glóbulos rojos a) Lavado de glóbulos rojos:      Filtrar la sangre a través de una gasa y depositar en un tubo cónico de centrífuga graduado en 10 ml. Centrifugar la sangre aproximadamente a 2000 rpm durante 5 minutos. Descartar el sobrenadante, tratando de arrastrar los leucocitos que forman una capa amarillenta en la parte superior de la columna de hematíes. Suspender los eritrocitos en TV 1X en una proporción 1 volumen de GR + 5 volúmenes de TV 1X, homogeneizar cuidadosamente. Centrifugar aproximadamente a 2000 rpm durante 5 minutos y luego eliminar el sobrenadante con una pipeta. Página 29 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis  Repetir la suspensión de los eritrocitos y la centrifugación dos veces más. Luego de la última centrifugación descartar el sobrenadante. b) Estandarización de glóbulos rojos al 2%: El método para la estandarización de la suspensión de glóbulos rojos se puede realizar por medio de dos técnicas:   Método espectrofotométrico. Método en cámara de Neubauer. Método espectrofotométrico: Preparar la concentración de GR al 2%(0,2 ml GR + 9,80 ml de TV 1X). Tubo 1: blanco de lectura para el espectrofotómetro. Agregar en un tubo: 5,6 ml de agua destilada + 0,4 ml de TV 1X.  Dispensar 2,5 ml en cada cubeta del espectrofotómetro (dependerá del modelo de espectrofotómetro utilizado). Tubo 2: Para determinar la lisis 100% de los GR Realizar una dilución 1:15, con agua destilada: 0,2 ml de glóbulos rojos al 2% + 2,8 ml de agua destilada.  Una vez lisados los eritrocitos, se lee la densidad óptica (DO) a 540nm contra el blanco.  La DO esperada es de 0.330 ± 0.05 (Esto deberá ser determinado según el modelo de espectrofotómetro utilizado en el laboratorio). Método en cámara de Neubauer:  Determinar el volumen de la columna de glóbulos y calcular la cantidad de solución TV 1 X necesaria para hacer una suspensión al 2%aproximadamente (0,2 ml GR + 9,80 de TV).  Realizar el recuento de glóbulos rojos en la cámara.  La suspensión deberá tener 5,4 X 108 GR/ml. Página 30 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 3.4.3. ANEXO III Determinación de la dilución de trabajo óptima del complemento y hemolisina Se realiza previamente al ensayo. Se busca determinar en conjunto el valor de sensibilización de la hemolisina para los GR de carnero expresado como UH (Unidades Hemolíticas) y la concentración de uso del complemento en la reacción de fijación del complemento expresado como UC (unidad complemento). Reactivos y Soluciones  Suspensión de glóbulos rojos al 2%.  Hemolisina: se conservará según instrucción del fabricante. Se titulará cada lote recibido, previa dilución 1:100 con agua destilada (dilución ¨madre¨), que se conservará a -20º C ± 5ºC hasta el momento de su uso, en cantidades suficientes para un día de trabajo.  Complemento de cobayo: conservado a (-70ºC) o en nitrógenos líquido a (186°C).  Tampón veronal calcio 1X.  Tampón veronal 5X. Condiciones de realización Trabajar a temperatura de laboratorio22°C ± 4°C. Las incubaciones del ensayo se realizarán en estufa a 37°C ± 2º C.  La titulación simultánea del complemento y la hemolisina se debe realizar cada vez que un nuevo lote de complemento, hemolisina y/o glóbulos rojos son producidos.  El control de 2 Unidades de C debe ser realizado cada día antes del ensayo usando GR 2%.  El complemento que sea objeto de titulación debe descongelarse a temperatura de laboratorio. Una vez descongelado se mantendrá en refrigeración y solo se sacará de la heladera en el momento de su utilización. Si se prevee que se va a utilizar más de un vial se mezclan y se titula el pool. Tras su uso diario se guardará a una temperatura de (-70º C) o en nitrogeno líquido a (– 186° C.) Página 31 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Preparacion de las diluciones Dilución del complemento:  Preparar una dilución 1:10 de complemento en TV 1X (130µl de complemento + 1170 µl de TV 1X) y conservar en una caja con hielo durante la titulación. Realizar las siguientes diluciones de complemento a partir de la dilución 1:10 (Tabla 5) y conservar en caja con hielo durante la titulación Tabla 5. Diluciones del complemento Dilución Complemento 1/10 TV 1X 1/30 1/40 1/50 1/60 1/70 1/80 1/100 1/120 1/140 1/160 1/240 1/280 200 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 400 µl 300 µl 400 µl 500 µl 600 µl 700 µl 900 µl 550 µl 650 µl 750 µl 1150 µl 1350 µl  Dilución de hemolisina:  Hemolisina 1:100 en TV 1X o 10 µl de hemolisina o 990 µl de TV 1X  Hemolisina 1:500 en TV 1X o 500 µl de (hemolisina 1:100) o 2000 µl de TV 1X A partir de la dilución de hemolisina 1:500 preparar en tubos las siguientes diluciones (Tabla 6 ) Página 32 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Tabla 6. Dilución de hemolisina Hemolisina Tubo Dilución 1/500 TV 1X 1 2 3 4 5 6 7  500 µl 500 µl 250 µl 125 µl 250 µl 250 µl 250 µl 1/1000 1/1500 1/2000 1/4000 1/6000 1/ 8000 1/10000 500 µl 1000 µl 1000 µl 1500 µl 2500 µl 3500 µl 4500 µl Preparación del sistema hemolítico o Preparar y enumerar un set de 7 tubos, uno por cada dilución de hemolisina. o Agregar en cada tubo 500 µl de hemolisina de cada dilución. o Agregar 500 µl de glóbulos rojos estandarizados al 2 % en todos los tubos que contienen las diluciones de hemolisina. o Incubar en estufa a 37º ±2 °C durante 15 minutos. Titulación cruzada en microplaca del complemento y la hemolisina (Tabla 9) a) Distribución de TV 1X  Desde la fila A hasta la fila G de la microplaca agregue 50 µl/pocillo de TV 1X. b) Distribución del Complemento  Agregue 25 µl/pocillo de cada dilución del complemento en todos los pocillos de la microplaca excepto en la fila H como se muestra en la Tabla 7. Tabla 7. Distribución de las diluciones del complemento 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 1/30 1/40 1/50 1/60 1/70 1/80 1/100 1/120 1/140 1/160 1/240 1/280 B 1/30 1/40 1/50 1/60 1/70 1/80 1/100 1/120 1/140 1/160 1/240 1/280 C 1/30 1/40 1/50 1/60 1/70 1/80 1/100 1/120 1/140 1/160 1/240 1/280 D 1/30 1/40 1/50 1/60 1/70 1/80 1/100 1/120 1/140 1/160 1/240 1/280 E 1/30 1/40 1/50 1/60 1/70 1/80 1/100 1/120 1/140 1/160 1/240 1/280 F 1/30 1/40 1/50 1/60 1/70 1/80 1/100 1/120 1/140 1/160 1/240 1/280 G 1/30 1/40 1/50 1/60 1/70 1/80 1/100 1/120 1/140 1/160 1/240 1/280 H Página 33 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis c) Distribución del Sistema Hemolítico  Finalizada la incubación de las diluciones del sistema hemolítico distribuir 25 µl/pocillo del sistema hemolítico en la misma microplaca según el esquema indicado en la tabla 8 Tabla 8. Distribución de las diluciones de la hemolisina 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 B 1500 1500 1500 1500 1500 1500 1500 1500 1500 1500 1500 1500 C 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 D 4000 4000 4000 4000 4000 4000 4000 4000 4000 4000 4000 4000 E 6000 6000 6000 6000 6000 6000 6000 6000 6000 6000 6000 6000 F 8000 8000 8000 8000 8000 8000 8000 8000 8000 8000 8000 8000 G 10000 10000 10000 10000 10000 10000 10000 10000 10000 10000 10000 10000 H CSH c/C 1000 CSH s/C 1000 CI GR Tabla 9 Complemento Hemolisina 1000 A 1500 B 2000 C 4000 D 6000 E 8000 F 10000 G H 30 40 50 60 70 80 100 120 140 160 240 280 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 CSH c/C 1000 CSH s/C 1000 CI GR d) Distribución de los controles  Control del sistema hemolítico con complemento (CSH c/C)  Dispensar en el pocillo H1:  50 µl de TV 1X  25 µl de complemento dilución 1:30  25 µl del sistema hemolítico 1:1000  Control del sistema hemolítico sin complemento (CSH s/C)  Agregar en el pocillo H2:  75 µl de TV 1X  25 µl del sistema hemolítico 1:1000  Página 34 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis  Control de integridad de glóbulos rojos (CI GR)  Agregar en el pocillo H3:  75 µl de TV 1X  25 µl de glóbulos rojos al 2 % e) Incubación: Ídem explicación de la técnica de complemento (3.4). f) Centrifugación/reposo de la placa: Ídem explicación de la técnica de complemento. (3.4). Expresión de resultados: Ídem explicación de la técnica de complemento (3.4). Lectura de controles. Ídem explicación de la técnica de complemento (3.4). Lectura de la titulación  Título del complemento: Es la mayor dilución del complemento donde se observa un 100 % de hemólisis con la mayor dilución de la hemolisina. Esto representa 1 unidad de complemento (UC), pero para la ejecución del ensayo se usará 2 unidades de complemento (2UC)  Título de la hemolisina: Es la mayor dilución de hemolisina donde se observa un 100 % de hemólisis con la mayor dilución del complemento. Esto representa 1 unidad de hemolisina (UH), pero para el ensayo principal se usará 2 unidades de hemolisina (2UH). Cálculo de la dilución de trabajo (DDT) Supongamos que UC = 1/120(según el desarrollo en el presente procedimiento). DDT 2 x UC = 2 x 1/ 120 = 1/60 Para calcular la dilución de trabajo de la hemolisina se procede de la misma manera: Supongamos que UH = 1/2000 DDT 2 x UH = 2 x 1/2000 = 1/:1000 Control de 2 Unidades de complemento (2 U) Una vez obtenida la dilución de trabajo se realizará el control de 2 UC y 2 UH, también se chequeará las diluciones de complemento 1/50 y 1/70 y para la hemolisina la dilución 1/1000 y 1/2000; esto nos permitirá seleccionar la dilución óptima de trabajo. Página 35 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis La prueba se efectuará por duplicado utilizando 4 pocillos por cada dilución de complemento. a) Preparación de sistema hemolítico:  Preparar dos tubos con 1000 µl de las diluciones de hemolisina 1/1000 y 1/2000  Agregar a los tubos 1000 µl de glóbulos rojos estandarizado al 2%  Agitar e incubar en estufa a 37º C ±2 °C 15 minutos. b) Preparación del complemento:  Preparar 3 diluciones de complemento (1/50, 1/60, 1/70) c) Distribución en la microplaca  Dispensar 25 µl/pocillo de TV 1X en las columnas según el esquema indicado en la Tabla 10. Tabla 10. Distribución de TV 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A B 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl C D 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl  En la misma placa dispensar 50 µ/pocillo de complemento de la diluciones 1/50, 1/60 y 1/70 en las columna 1, 5 y 9 respectivamente como se indica en la Tabla 11. Página 36 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Tabla 11. Distribución del complemento 1 2 3 4 5 6 1/50 1/60 7 8 9 10 1/70 A B 50µl 50µl 50µl 50µl 50µl 50µl C D 50µl 50µl 50µl 50µl 50µl 50µl 11 12  Con la pipeta multicanal pasar 25 µl /pocillo de la columna 1 a la columna 2. La homogenización de los dos componentes de cada dilución se realizará mezclando mediante la acción de pipetear durante 5 veces. Recoger 25 µl/pocillo de la columna 2 y pasar a la columna 3, volver a homogeneizar, recoger 25 µl/pocillo y pasar a la columna 4, homogeneizar y recoger 25 µl/pocillo y descartar. Repita la misma operación con las diluciones que se encuentran en la columna 5a 8 y 9 a 12  Las diluciones del complemento quedarán dispuestas en la microplaca como muestra la Tabla 12 Tabla 12. Diluciones del complemento 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 25µl 2UC 25µl 1UC 25µl 1UC 25µl 2UC 25µl 1UC 25µl 2UC 25µl 1UC C 25µl 2UC 25µl 1UC 25µl 2UC 25µl 1UC 25µl 2UC 25µl 1UC D 25µl 2UC 25µl 1UC 25µl 2UC 25µl 1UC 25µl 0,25 UC 25µl 0,25 UC 25µl 0,25 UC 25µl 0,25 UC 25µl 1UC 25µl 1UC 25µl 0,5 UC 25µl 0,5 UC 25µl 0,5 UC 25µl 0,5 UC 25µl 2UC 25µl 2UC 25µl 0,25 UC 25µl 0,25 UC 25µl 0,25 UC 25µl 0,25 UC 25µl 2UC B 25µl 0,5 UC 25µl 0,5 UC 25µl 0,5 UC 25µl 0,5 UC 25µl 2UC 25µl 1UC 25µl 0,5 UC 25µl 0,5 UC 25µl 0,5 UC 25µl 0,5 UC 25µl 0,25 UC 25µl 0,25 UC 25µl 0,25 UC 25µl 0,25 UC  Dispensar 50 µl de TV 1X en todos los pocillos.  Agregar 25 µl/pocillo de SH 1/1000 (previamente incubado 15 min a 37º ± 2 °C) en la fila A y B y 25 µl /pocillo de SH 1/2000en la fila C y D. d) Incubación: Ídem explicación de la técnica de complemento (3.4) e) Centrifugación/reposo de la placa: Ídem explicación de la técnica de complemento (3.4) Página 37 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Lectura y elección de la dilución de trabajo La dilución del complemento y hemolisina que se aceptará deberá dar como resultado Resultado Esperado En la primera y segunda dilución (2 UC y 1UC) 100% de hemólisis En la tercera dilución (0,5 UC) 50 % de hemolisis En la cuarta dilución (0,25 UC) 0 % de hemolisis Página 38 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 3.5.4. ANEXO IV Titulación del Antígeno La titulación tiene como objeto determinar la dilución de trabajo óptima del antígeno que debe emplearse en la cuantificación de anticuerpos para el serodiagnóstico de brucelosis. Este procedimiento se aplicará para cada lote de antígeno que vaya a emplearse como reactivo en dicho ensayo. Está reacción requiere de un título mínimo para que la misma se lleve a cabo, es decir, se debe garantizar una concentración mínima de antígeno que reaccione con los anticuerpos y sea capaz de fijar el complemento. Para garantizar esta concentración se realizará esta titulación de antígeno. Realización 1. Dilución e inactivación de los sueros controles positivos y negativos. Inactivar por 30 minutos en baño maría (60°C– 63°C). Una vez inactivado realizar las siguientes diluciones del suero positivo con TV 1X: 1/150, 1/175, 1/200, 1/225, 1/250. 2. Se prepara en tubos las siguientes diluciones del antígeno Brucella ovis con TV 1X: 1/5, 1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320 y 1/640. Tabla 13. Distribución de los sueros controles y del antígeno Antígeno Sueros A C++ 1/150 B C++ 1/175 C C++ 1/200 D C++ 1/225 E C++ 1/250 F C- Neg. 1 2 3 4 5 6 7 8 1/5 1/10 1/20 1/40 1/80 1/16 0 1/32 0 1/64 0 9 10 11 12 G H     Dispensar 25 µl de cada dilución del suero control positivo en el pocillo correspondiente según la tabla 1 (fila A a E), desde la columna 1 a la 8. Dispensar 25 µl del suero control negativo desde la fila F1 hasta F8. Distribuir 25 µl de la dilución de trabajo de complemento en los pocillos que contiene las diluciones de trabajo de suero control positivo y suero negativo. Agregar 25 µl de la dilución correspondiente de antígeno según la tabla 1. Página 39 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis Primera incubación en caliente   Cubrir y agitar las microplacas en agitador de placas durante 2 – 4 minutos. Incubar las microplacas a 37 ± 2°C durante 30 minutos. Agregado del sistema hemolítico  Finalizada la primera incubación, dispensar el sistema hemolítico a razón de 25 µl en todos los pocillos de la placa. Segunda incubación en caliente   Cubrir y agitar las microplacas en agitador de placas durante 2 – 4 minutos Incubar las microplacas a 37 ± 2°C durante 30 minutos. Centrifugación/reposo de la microplaca  Finalizada la incubación, centrifugar las microplacas a 2000 rpm durante 5 minutos o bien dejar en reposo durante una hora antes de su lectura en heladera. Lectura de la titulación El nuevo lote de antígeno debe presentar un título en el cual el suero control positivo arroja un resultado de ++ en 1:200 y negativo en 1:250, título que corresponde a 1000 UIFC/ml de suero. El suero negativo debe arrojar resultado negativo (100% de hemólisis). Página 40 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 3.4.6. ANEXO V Preparación de la escala visual para la interpretación de los resultados En un tubo de ensayo se coloca 1 ml de la suspensión de glóbulos rojos al 2% + 9ml de TV 1X. En otro tubo de ensayo colocar 1ml de la suspensión de glóbulos rojos al 2% + 7ml de agua destilada, agitar para provocar la completa hemólisis de los GR. (solución de hemoglobina), y agregarle 2ml de TV (5x) para mantener la presión osmótica. Estos dos tubos mantienen la misma relación de GR. intactos en el primer caso y de glóbulos lisados en el segundo, que el que el 0% de hemólisis y el 100% de hemólisis en la prueba. De esta manera mezclándolas en distintas proporciones podremos obtener la imagen que corresponde a los distintos grados de hemólisis, luego de centrifugar durante 5 minutos a 1000 rpm (Tabla 14). Tabla 14. PORCENTAJE DE HEMÓLISIS REACTIVOS EN µl 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% Solución de hemoglobina 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Suspensión de glóbulos rojos 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Página 41 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 4. Enzimoinmunoensayo Indirecto (I ELISA) Se realizará siguiendo el protocolo de los kits comerciales validados y aprobados para el diagnóstico oficial de la brucelosis ovina con el valor de corte establecido por SENASA. El enzimoinmunoensayo (ELISA) es un método empleado habitualmente para la detección y/o cuantificación de sustancias, generalmente proteínas, que se encuentran en concentraciones muy bajas. El método combina la especificidad de unión de los anticuerpos con la amplificación de "señal" que brindan las reacciones catalizadas por enzimas. En la práctica clínica es la técnica inmunológica más empleada. Se utiliza para cuantificar, entre otras cosas, hormonas, marcadores tumorales, para determinar la presencia de antígenos microbianos y para la determinación cualitativa o cuantitativa de anticuerpos totales o frente a algún antígeno en particular. ELISA Indirecto. Consta de las siguientes etapas: • 1. Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de estudio (generalmente en los kits comerciales la placa ya está preparada con el antígeno pegado a la misma) 2. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados. 3. Adición de los controles y sueros problemas, en la dilución indicada en el protocolo, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarán específicamente con los antígenos fijados al soporte. 4. Incubación 5. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. •Es importante que la placa no se seque, lo que podría incrementar la actividad inespecífica del ensayo. 6. Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los anticuerpos específicos añadidos en el paso anterior y que se encuentran fijados a los antígenos. 7. Incubación 8. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. • 9. Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. 10. Frenado Página 42 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 11. Lectura colorimétrica del producto final coloreado. 4.1 Equipos:          Heladera con temperatura controlada (5 ±3 ºC) Freezer con temperatura controlada (-20 ±5 ºC) Vortex Centrífuga Timer Fotómetro de placas automático con filtros (405 nm, 414 nm, 450nm) Agitador orbital de placas Peachímetro (rango de 0 a 14 ± 0,01 pH). Lavador de placas 4.2 Materiales:             Micropipetas monocanal de volumen variable (0,5 a 10 µl, 5 a 50 µl, 50 a 200 µl y 200 a 1000 µl). Micropipetas multicanal de volumen variable (5 a 50 µl y 50 a 250µl). Dispensadores automáticos. Timer o reloj de laboratorio. Propipetas. Selladores de placas de acetato o parafilm. Cubetas plásticas para pipetas multicanales. Microtubos o microplacas (para realizar las diluciones previas de los sueros). Criotubos de polipropileno para el almacenamiento de los sueros. Gradillas. Material de vidrio (probetas, pipetas, erlenmeyers, etc. de distintos volúmenes). Toallas o papel absorbente. Modelo de Distribución de los sueros controles y muestras problemas en la placa de 96 pocillos B C D E F G H 1 C++ C++ C+ C+ CCCc Cc 2 1 1 2 2 3 3 4 4 3 5 5 4 9 9 5 13 13 6 17 17 7 21 21 8 25 25 9 29 29 10 33 33 11 37 37 12 41 41 44 44 Página 43 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis A continuación se citan algunas precauciones a tener en cuenta para ejecutar la técnica de Elisa:           Seguir expresamente las instrucciones del kit para la preparación de todos los reactivos Mantener los reactivos a temperatura ambiente antes de su utilización. No mezclar reactivos ni instrucciones de diferentes lotes o kits. Evitar cualquier contaminación de los reactivos. No utilizar los kits una vez superada la fecha de caducidad. Utilizar una punta de pipeta nueva por cada muestra y reactivo a analizar. Incluir sistemáticamente un control positivo y un control negativo. Utilizar agua desionizada o destilada para la preparación/dilución de los reactivos que se empleen en el ensayo. Corroborar que el lector de placas posee el filtro con el cual se debe leer la placa y seguir las instrucciones de uso del equipo Se recomienda trabajar las muestras por duplicado, para verificar la repetibilidad del operador. Página 44 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 4.3 Guía de problemas y soluciones Señal Posible causa Solución Color irregular 1.Error de pipeteo 2.Falta de mezcla de reactivos 3.Falta de lavados Práctica Mejorar técnica Precaución No hay color 1. Se omitió el substrato 2. Errónea concent. Substrato 3. Substrato con pH erróneo 4. Conjugado muy diluido 5. Se omitió el conjugado Revisar Revisar Controlar pH Revisar Revisar 1. Conjugado muy concentrado 2. Falla en el lavado 3 Substrato contaminado Controlar Mejorar técnica Revisar 1. Reacción inespecífica 2. Material de vidrio sucio 3. Agua de mala calidad 4. Poco detergente (Tween 20) 5. Tampones contaminados Cambiar solución de lavado Mejorar lavado Controlar calidad Revisar Preparar soluciones nuevas 1. Substrato muy concentrado 2. Conjugado muy concentrado 3. Solución substrato con pH erróneo 4. Concent. Cromógeno errónea Revisar Controlar dilución Controlar Revisar 1. Substrato muy diluido 2. Conjugado muy diluido 3.Solución substrato con pH erróneo 4.Concentración Cromógeno errónea 5.Concent de Tween errónea Revisar Revisar dilución Revisar Revisar Revisar 1. Incubación despareja 2. Resecación por aire 3. Tampón de lavado residual Utilizar estufa Mantener la placa cubierta Eliminarlo Color parejo en toda la placa Elevado color de fondo “background” Desarrollo de color muy rápido Desarrollo de color muy lento Efecto borde Página 45 / 46 �Manual de Diagnóstico de Brucella ovis 5. REFERENCIAS  Alton, G.G.; Jones, L.M; Angus, R.D.; Verger, J.M. 1988. Serological methods. Techniques for the Brucellosis laboratory. Institut National de la Recherche Agronomique, Paris, France, pp. 157-167.  Blasco J.M. (1990). Brucella ovis. In: Animal Brucellosis, Nielsen K. & Duncan J.R., eds. CRC Press, Boca Raton, Florida, USA, 351–378.  GALL D., NIELSEN K., VIGLIOCCO A., SMITH P., PEREZ B., ROJAS X. & ROBLES C. (2003). Evaluation of an indirect enzyme-linked immunoassay for presumptive serodiagnosis of Brucellaovis in sheep. Small Rumin. Res., 48, 173–179.  IstitutoZooprofilatticoSperimentaledell”Abruzzo e del Molise G. Caporale. Procedimiento IZS TE B2. 1.6 SOP 004 del Centro Internacional de Referencia OIE para Teramo. Italia  Nielsen K., Gall D., Kelly W., Vigliocco A, Henning D and Garcia M. (1996).Immunoassay Development. Aplication to Enzyme Immunoassay for the diagnosis of Brucellosis. ISBN 0662-24163-0. Agriculture and AgriFoodCanada.  Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE). Manual de las Pruebas de Diagnóstico y de las Vacunas para los Animales Terrestres. 2009. Capítulo 2.7.9.SéptimaEdición. Volumen 2 SENASA, Manual de diagnóstico serológico para Brucelosis Bovina. 2009  VIGLIOCCO A.M., SILVA PAULO P.S., MESTRE J., BRIONES G.C., DRAGHI G., TOSSI M. & NIELSEN K. (1997). Development and validation of an indirect enzyme immunoassay for detection of ovine antibody to Brucella ovis. Vet. Microbiol., 54, 357–368. Página 46 / 46 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Manual de diagnóstico de Brucella ovis Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2015 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Dirección Nacional de Sanidad Animal Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0017 Abstract A summary of the resource. El presente Manual está dirigido a los Laboratorios veterinarios que realicen el diagnóstico serológico de la Brucelosis ovina. Contiene los requisitos técnicos necesarios para realizar las pruebas con caracter oficial. Las mencionadas técnicas son internacionalmente reconocidas y recomendadas por la OIE y SENASA. Table Of Contents A list of subunits of the resource. 1. Introducción 1.1 Etiología 1.2 Epidemiología 1.3 Patogenia 1.4 Manifestaciones clínicas 2. Diagnóstico de Laboratorio 2.1 Medidas Generales 2.2 Aseguramiento de la calidad 2.3 Control de calidad de insumos 2.4 Equipos 2.5 Registro de entrada de muestras 2.6 Características y condiciones de las muestras 2.6.1 Condiciones de recepción de las muestras 2.6.2 Condiciones de rechazo de las muestras 3. Diagnóstico de Brucella Ovis 3.1 Identificación del Agente 3.2 Pruebas serológicas 3.3 Inmunodifusión en gel de agar 3.4 Fijación de complemento 4. ELISA indirecto 4.1 Equipos 4.2 Materiales 4.3 Guía de problemas y soluciones 5. Referencias Enfermedades de los Ovinos Laboratorios https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/0b73209d0fd05faede1e255000ee7ef5.pdf b58aa19220929c75946df713bb53503a PDF Text Text �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 ÍNDICE Introducción ...............................................................................................................2 Objetivos....................................................................................................................2 Responsabilidades ....................................................................................................2 Veterinario responsable sanitario del establecimiento ...............................................2 Laboratorio adherido / Director técnico .....................................................................3 Veterinario de la Oficina Local del Senasa ................................................................5 Programa de Sanidad Aviar.....................................................................................5 Actividades en granjas de pollo de engorde ..............................................................6 1. Frecuencia de toma de muestra ............................................................................6 2. Indicaciones...........................................................................................................6 3. Método de muestreo ..............................................................................................6 Actividades en granjas de gallinas de postura...........................................................9 1. Frecuencia de toma de muestra ............................................................................9 2. Indicaciones...........................................................................................................9 3. Método de muestreo ..............................................................................................9 Medidas a adoptar ante una granja positiva ............................................................12 Links Senasa ...........................................................................................................14 Flujograma...............................................................................................................15 Marcha Bacteriológica .............................................................................................16 1 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 Introducción El presente Manual de Procedimientos contiene los principios básicos técnicos y operativos del “Programa de vigilancia y control de la contaminación por Salmonella spp. en granjas avícolas comerciales” establecido por la Resolución Senasa N° 86 del 4 de marzo de 2016, es de aplicación en forma obligatoria en todas las granjas de pollos parrilleros y granjas de gallinas de posturas comerciales del país. El presente manual está dirigido a los veterinarios responsables sanitarios avícolas, a los responsables técnicos de los laboratorios adheridos y a los veterinarios de las oficinas locales del Senasa. Objetivos Controlar y disminuir la presencia de Salmonella ser. Enteritidis, Salmonella. ser. Typhimurium y Salmonella. ser. Heidelberg en el ambiente de establecimientos avícolas de pollos de engorde y gallinas de postura comerciales, mitigando la contaminación del producto avícola final, con estos gérmenes que ponen en riesgo la Salud Pública. Responsabilidades Veterinario responsable sanitario del establecimiento Cada granja avícola deberá contar con un profesional veterinario como responsable sanitario ante el Programa de Sanidad Aviar, que será el encargado de la implementación del presente programa en la granja a su cargo. Por consiguiente debe: a. Tomar la muestra del establecimiento. b. Remitir la muestra al laboratorio adherido al Programa de Sanidad Aviar (Se adjunta link de la lista de laboratorios adheridos en la página 14). c. Enviar la planilla de resultados a la oficina local del Senasa correspondiente a la jurisdicción del establecimiento, proporcionada por el laboratorio adherido. La 2 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 misma debe estar firmada por el Director técnico.(Se adjunta link de planilla de informe de resultados pág. 14) d. Ante la presencia de Salmonella ser. Enteritidis, S. ser. Typhimurium y S. ser. Heidelberg, deberá contactarse en forma inmediata con el veterinario de la oficina local correspondiente a su zona. e. Implementar las medidas necesarias para la eliminación del agente en cuestión. f. Realizar un descargo por escrito de las medidas adoptadas en el establecimiento afectado y presentarlas en la oficina local. Laboratorio adherido / Director técnico a. El laboratorio adherido debe poseer Director Técnico con Título habilitante. b. Contar con un libro de actas foliado donde deberá registrar la totalidad de las muestras que ingresan. Deberán constar los siguientes datos: fecha de ingreso y Nº de Protocolo interno/n° de acta, RENSPA, procedencia, fecha de toma de muestra, tipo, cantidad de muestra, pruebas a realizar, resultados, fecha del mismo y fecha y firma del responsable que retira el resultado. c. Utilizar el método descripto en el Anexo D de la Norma ISO 6579 (2002), para “Detección de Salmonella spp. en heces de animales y en muestras a nivel de producción primaria”. Como medio selectivo se utiliza el medio semisólido Rappaport-Vassiliadis modificado (MSRV) o caldo Rappaport Vassiliadis (opcional) (Ver flujograma pág. 15) d. Serotipificación: se debe proceder a la serotipificación de 1 (UNA) cepa de cada muestra positiva como mínimo, siguiendo el esquema de White-Kaufmann-Le Minor. Como métodos alternativos se pueden utilizar las pruebas moleculares para identificación de genotipos. Cada laboratorio debe hacer la tipificación serológica (pruebas de aglutinación) utilizando los sueros polivalentes OS-A y OS-B y luego realizar la serotipificación para el hallazgo de los serovares Enteritidis, Typhimurium y Heidelberg pertenecen a ese serogrupo. 3 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 e. Cuando los laboratorios no estén en condiciones de realizar las pruebas de tipificación serológica o por técnicas moleculares, deben remitir la cepa aislada de Salmonella a la Dirección del Laboratorio Animal (Dilab), perteneciente a la Dirección General de Laboratorios y Control Técnico del Senasa. Talcahuano 1660 Martínez, Buenos Aires. Previo al envío, se debe informar a mesa de entradas vía electrónica: mesalabadm@senasa.gob.ar con copia a maherrera@senasa.gob.ar o comunicarse por cualquier consulta a los siguientes teléfonos, (011) 48746702/03 en el horario de 8 a 15 hs. La muestra debe ser remitida con el protocolo “AVES- Tipificación de Salmonella spp”. (Se adjunta link de protocolo de tipificación en la página 14). f. Una vez concluidas las pruebas diagnósticas, los resultados serán remitidos en el formulario de resultados, debe estar firmada por el director técnico (se adjunta link de planilla de resultados en la página 14) a la oficina local, ya sea por el veterinario del establecimiento, propietario o responsable técnico del laboratorio. g. Ante un hallazgo positivo de algunas de las Salmonellas solicitadas por la Resolución N°86/2016 por el laboratorio adherido, deben informar al veterinario responsable de la granja y éste comunicar en forma inmediata al veterinario de la oficina local cercana al establecimiento. h. Conservación de las cepas: cuando el laboratorio adherido tenga la capacidad de serotipificar, debe conservar las cepas aisladas por un período no menor a UN (1) año, para estudios posteriores de fago tipificación; pruebas de sensibilidad antimicrobiana u otras. i. Debe presentar al Programa de Sanidad Aviar, de manera anual, un informe de los diferentes serotipos aislados. El cual debe detallar número de RENSPA, nombre del titular, fecha de aislamiento y bacteria aislada. 4 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 Veterinario de la Oficina Local del Senasa Los profesionales con asiento en las oficinas locales deben: a. Recibir del veterinario responsable del establecimiento, del propietario de la granja avícola o del responsable técnico del laboratorio, las copias del formulario de resultados. Las mismas deben estar firmadas por el Director técnico. (Se adjunta link de formulario de resultados en la página 14) b. Cargar dicho informe en el Sistema Integrado de Gestión de Sanidad Animal (Sigsa), como antecedente sanitario, los cuales figuran como: - MUESTREO DE SALMONELLA SPP. EN AVES - PRODUCCION DE CARNE - MUESTREO DE SALMONELLA SPP. EN AVES - PRODUCCION DE HUEVO c. Será el encargado de actuar e informar al Programa de Sanidad Aviar ante la comunicación de los hallazgos positivos de Salmonella ser. Enteritidis, S. ser. Typhimurium y/o S. ser. Heidelberg (Ver página 12: Medidas a adoptar ante una granja positiva). Programa de Sanidad Aviar a. Cuando la Dilab confirme la serotipificación de la bacteria debe informar a la Oficina Local para su posterior prosecución. b. El Programa es el responsable del control de gestión, seguimiento del desarrollo y, particularmente, de la planificación de las inspecciones destinadas a constatar los resultados obtenidos. 5 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 Actividades en granjas de pollo de engorde 1. Frecuencia de toma de muestra En las granjas de pollos parrilleros se debe realizar la toma de muestra con una frecuencia de 1 (UNA) vez por año. 2. Indicaciones Los resultados deben estar antes del ingreso del próximo lote, las mismas deberán muestrearse dentro de las 3 (TRES) semanas previas a la faena. 3. Método de muestreo 3.1 Cantidad de muestra Cuando la granja disponga de 5 (CINCO) o más galpones, deben extraerse muestras de 2 (DOS) galpones y en las granjas de menos de 5 (CINCO) galpones, la muestra debe tomarse de 1 (UN) galpón. 3.2 Materiales a utilizar  Guantes desechables,  Calcetines/calzas estériles,  Sachet de 250 ml de solución fisiológica estéril al 0,9%,  Bolsa contenedora estéril (bolsa tipo “stomacher”),  Conservadora,  Material para refrigeración.  Otros: tijera, cinta adhesiva ancha (cinta de embalar), marcador indeleble, protocolos, etc. 3.3 Procedimiento de muestreo La muestra estará constituida por DOS (2) pares de calcetines por galpón. Los pasos a seguir son: 6 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 1º. Colocarse guantes desechables de un solo uso previa manipulación del material. 2º. Colocarse un cubre calzado al bajar del vehículo e ingresar a la granja. 3º. Primer par de calcetines: una vez en la entrada del galpón, y antes de colocárselos, humedecerlos utilizando aproximadamente 100 ml de solución fisiológica estéril al 0,9%, vertiendo la solución diluyente dentro de la bolsa individual que contiene cada par de calcetines. Una vez humedecidos, colocárselos sobre el cubre calzado. Este último par de calcetines será el que contendrá la muestra. 4º. Dividir la superficie del galpón en dos secciones (Figura 1), caminar dentro de cada sector para dar como mínimo 100 pasos por cada par de calzas (100 pasos ~ 50 metros lineales). Asegurarse de que todas las partes del sector son muestreadas. Cada par debe abarcar aproximadamente el 50 % del área del galpón. Figura 1 5°. Una vez finalizado el primer sector del galpón, quitarse los calcetines externos cuidadosamente para que no se desprenda el material adherido (se podrá dar la vuelta a los calcetines para retener el material en su interior) e introducirlas dentro de la bolsa estéril. 6º. Proceder con el segundo par de calcetines, repetir el punto 3º y hacer lo mismo en la otra mitad del galpón para luego seguir con el punto 5º. 7 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 7º. Los dos pares de calzas serán colocados en la misma bolsa (enviadas mezcladas como una sola muestra), la cual deberá cerrarse con una cinta ancha (preferiblemente cinta de embalar). 8°. Los calcetines colocados en la bolsa, cerrada y etiquetada convenientemente deberán conservarse en todo momento a temperatura de refrigeración y enviarse refrigeradas al laboratorio dentro de las 24 horas de tomada la muestra, utilizando el protocolo de muestreo (se adjunta link de protocolo en la página 14). NOTA: Los dos pares de calcetines correspondientes a un galpón, se analizarán como única muestra, por lo tanto se realizará 1 (UNA) marcha bacteriológica. 1galpón= 2 pares de calcetines =1 marcha bacteriológica 2 galpones= 4 pares de calcetines = 2 marchas bacteriológicas 8 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 Actividades en granjas de gallinas de postura 1. Frecuencia de toma de muestra En las granjas de gallinas de postura se debe realizar la toma de muestra con una frecuencia de 2 (DOS) veces por año. 2. Indicaciones Se debe muestrear aves que se encuentran dentro de las siguientes etapas:  Aves de 18-27 semanas (comienzo de la postura).  Aves de 70-86 semanas (con un máximo de NUEVE (9) semanas previas al envío a faena).  Aves replumadas en postura, preferentemente a partir de la 5ta. semana de producción. 3. Método de muestreo 3.1 Cantidad de muestra Cuando la granja disponga de 5 (CINCO) o más galpones, deben extraerse muestras de 2 (DOS) galpones y en las granjas de menos de 5 (CINCO) galpones, la muestra debe tomarse de 1 (UN) galpón. 3.2 Materiales a utilizar  Guantes desechables,  Frascos de plástico con tapa a rosca de un mínimo de 250 cc,  Cuchara plástica de primer uso  Conservadora,  Material para refrigeración.  Otros: tijera, cinta adhesiva ancha (cinta de embalar), marcador indeleble protocolos, etc. 3.3 Procedimiento de muestreo 9 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 3.3.1 En galpones tradicionales Será preciso recoger una mezcla de materia fecal de la fosa. La muestra debe estar constituida por 2 (DOS) muestras de 150 gramos de materia fecal fresca cada una (utilizar dos frascos de 250 cc). La materia fecal se deberá recolectar en forma aleatoria de 60 lugares diferentes de las fosas. Es decir, de cada sitio seleccionado recolectar aproximadamente 2,5 gr. de materia fecal fresca (1/2 cucharadita). La distribución de las muestras debe ser representativa de todo el galpón. Tener en cuenta que algunos granjeros podrían llegar a colocar cal viva sobre la materia fecal, en este caso, seleccionar los galpones que no fueran sometidos a ese tratamiento o bien solicitar no realizar el tratamiento por al menos 15 a 20 días y regresar posteriormente para la toma muestra en otro período. c orrectame NOTA: Se debe procesar por separado cada muestra de 150 gr de materia fecal, por lo tanto se realizarán 2 (DOS) marchas bacteriológicas. 1 galpón = 2 muestras de materia fecal = 2 marchas bacteriológicas 2 galpones = 4 muestras de materia fecal = 4 marchas bacteriológicas. Aclaración: Cuando se trate de gallinas ponedoras a piso se debe tomar la muestra de la misma manera que en granjas de pollo de engorde (ver pág. 6) 3.3.2 En galpones automáticos En estos galpones se utilizan cintas que recogen el guano de jaulas, que se ponen en funcionamiento a intervalos regulares y descargan en un sistema transportador, por lo tanto, el día del muestreo se debe solicitar al granjero que ponga en funcionamiento las cintas de evacuación del guano o los raspadores temprano, y que no limpie el polvo de las cintas porta huevos ni de debajo de las jaulas antes de que haya tenido lugar el muestreo. Con guantes descartables nuevos, se debe tomar 2 (DOS) muestras constituidas por 150 gr. de materia fecal fresca de 60 lugares diferentes de las cintas 10 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 transportadoras, de manera que todos los bloques estén representados en la muestra. Se debe complementar con una muestra de 150 g de polvo seco tomadas de al menos 20 lugares de las diferentes instalaciones del galpón. Determine con el encargado o propietario de la granja los mejores lugares del galpón para recoger el polvo. Normalmente son las rejillas de los ventiladores de extracción, los salientes adyacentes, vigas, divisorias o tuberías o cintas transportadoras de huevos. Si es posible es preferible tomar polvo de las partes bajas. Solamente recolecte polvo seco. Los frascos deben ser colocados en una bolsa, cerrada y etiquetada, luego colocarse en una conservadora, estando en todo momento a temperatura de refrigeración y deberá remitirse al laboratorio dentro de las 24 horas de tomada la muestra, utilizando el protocolo de referencia de remisión de muestras adjunto (Se adjunta link del modelo de protocolo de referencia página 14) NOTA: Se debe procesar por separado cada muestra de 150 gr de materia fecal, y una muestra de150 g de polvo seco, por lo tanto se realizarán 3 (TRES) marchas bacteriológicas. 1galpón = 2 muestras de materia fecal + 1 muestra de polvo seco = 3 marchas bacteriológicas 2 galpones = 4 muestras de materia fecal + 2 muestras de polvo seco = 6 marchas bacteriológicas 11 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 Medidas a adoptar ante una granja positiva Se considera granja positiva cuando se detecte la presencia de Salmonella ser. Enteritidis, S. ser. Typhimurium y/o S. ser. Heidelberg (distintas de las cepas vacunales) en el ambiente. En este caso, el veterinario responsable del establecimiento, el responsable técnico del laboratorio, o bien, el Programa de Sanidad Aviar, comunicarán inmediatamente al veterinario oficial local con jurisdicción en el establecimiento en cuestión. En las granjas de Pollo de engorde el veterinario del Senasa debe: 1. Informar al Programa de Sanidad Aviar 2. Dar de baja la autogestión del establecimiento, permitir la faena del lote (en caso de estar en granja) y no permitir el ingreso del próximo lote. 3. Debe solicitar un descargo por parte del responsable veterinario del establecimiento de las medidas que implementará para solucionar dicha contaminación. 4. Debe inspeccionar la granja, a fin de identificar las medidas que considere insuficientes y/o deficientes e instruirá sobre las medidas de bioseguridad, control de plagas y buenas prácticas que deban adoptarse (Acta de constatación y Planilla de inspección a predios avícolas). 5. Corroborar el cumplimiento de las medidas dispuestas (Acta de constatación y Planilla de inspección a predios avícolas), permitir el ingreso de aves y dar de alta la autogestión, en caso de considerarlo pertinente. 6. Enviar la información al Programa de Sanidad avesygranja@senasa.gob.ar, para cerrar el caso. 12 Aviar vía mail: �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 2018 En las granjas de granjas de gallinas de huevos para consumo el veterinario del Senasa debe: 1. Informar al Programa de Sanidad Aviar 2. Debe solicitar un descargo por parte del responsable veterinario de las medidas que implementará para solucionar dicha contaminación ambiental. 3. Inspeccionar la granja, a fin de identificar las medidas que considere insuficientes y/o deficientes e instruirá sobre las medidas de bioseguridad, control de plagas y buenas prácticas que deban adoptarse (Acta de constatación y Planilla de inspección a predios avícolas). 4. Corroborar el cumplimiento de las medidas dispuestas (Acta de constatación y Planilla de inspección a predios avícolas) 5. Las medidas implementadas pueden ser respaldadas con el uso de vacunas vivas y/o inactivadas contra S. Gallinarum y/o S. Enteritidis u otra serovariedad oportunamente aprobadas por el Senasa, a fin de alcanzar una reducción efectiva en la diseminación de Salmonellas y/o inhibición de su crecimiento en huevos. 6. Enviar la información al Programa de Sanidad avesygranja@senasa.gob.ar, para cerrar el caso. 13 Aviar vía mail: �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 Links Senasa Listado de laboratorios adheridos al PNSA http://www.senasa.gob.ar/cadena-animal/aves/produccion-primaria/sanidadanimal Resolución Senasa Nº 86/2016 http://www.Senasa.gob.ar/normativas/resolucion-86-2016-ministerio-deagroindustria Protocolo de remisión de muestras de aves de la Res. N° 86/2016 http://www.senasa.gob.ar/sites/default/files/ARBOL_SENASA/ANIMAL/AVES/P ROD_PRIMARIA/SANIDAD_ANIMAL/MANUALES/2.protocolo_de_remision_m uestras_para_salmonella_en_granjas.pdf Protocolo para la tipificación de Salmonella spp. http://www.senasa.gob.ar/sites/default/files/ARBOL_SENASA/ANIMAL/AVES/P ROD_PRIMARIA/SANIDAD_ANIMAL/MANUALES/3._protocolo_tipificacion_sa monella_movil.pdf Planilla de informes de resultados de la Res. N° 86/2016 http://www.senasa.gob.ar/sites/default/files/ARBOL_SENASA/ANIMAL/AVES/P ROD_PRIMARIA/SANIDAD_ANIMAL/MANUALES/4._planilla_de_informe_de_r esultados_para_salmonella_para_pc.pdf 14 2018 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 Flujograma Método de detección de Salmonella spp. según Norma ISO 6579(2002) Muestra Agua de Peptona Tamponada (APT) 1:10 (25g+225ml) Rappaport Vassiliadis Semisólido Modificado (MSRV) 41,5±1ºC 24 h±3 XLD Agar 37±1ºC 24 h±3 37°C± 1 18h ± 2 Caldo Rappaport Vassiliadis (opcional) Otro medio selectivo Confirmación Bioquímica TSI-LIA-SIM-UREA-CITRATO Confirmación serológica OS-A /OS-B OS-A + Tipificación propia ó 15 Envío a la Dilab 2018 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 Marcha Bacteriológica Cuatro etapas sucesivas: 1) Pre enriquecimiento 2) Enriquecimiento selectivo 3) Siembra en placa e Identificación 4) Confirmación de Identidad 1) Pre enriquecimiento en medio líquido no selectivo El medio de pre enriquecimiento líquido no selectivo que se debe utilizar es Agua de Peptona Tamponada (APT) a temperatura ambiente, se añade en una proporción de 1:10 (25g +225ml), se mezcla bien y se incuba a 37 ± 1ºC durante 18 ± 2h. Este paso es de gran importancia en la recuperación de Salmonella spp. debido a que recupera números bajos o salmonellas lesionadas. Asimismo mantiene el pH favoreciendo el crecimiento de Salmonella. 2) Enriquecimiento selectivo El medio de enriquecimiento selectivo semisólido que se debe utilizar es el Rappaport Vassiliadis Semisólido Modificado (MSRV), se inocular 3 gotas de los cultivos de APT a una temperatura de 41,5 ± 1ºC durante 24 ± 3h, lectura de 24h o en su defecto caldo Rappaport Vassiliadis, dilución 1:10, a 41,5 ± 1ºC durante 24 ± 3h. 3) Siembra en placa e Identificación Se debe usar dos medios selectivos sólidos: De forma obligatoria debe utilizarse Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD) y como segundo medio selectivo sólido se recomienda SS o Agar MacConkey o medio de cultivo cromogénico 16 2018 �Manual de procedimientos de la Resolución Senasa N° 86/2016 Equilibrar placas a T° ambiente y sembrar a 37 ± 1ºC durante 24 ± 3h. 4) Confirmación Se debe seleccionar las colonias sospechosas para su posterior confirmación. Tomar al menos 5 colonias sospechosas de cada uno de los medios sólidos selectivos. Cuando las colonias no estén bien aisladas o son sospechosas se recomienda reaislar las colonias en agar nutritivo antes de la confirmación. Utilizar 5 (cinco) pruebas bioquímicas a saber: TSI-LIA-SIM-UREA-CITRATO e incubarlas 37 ± 1ºC durante 24 h y proceder a su lectura. Realizar la confirmación serológica mediante la utilización de sueros somáticos OSA y OSB o mediante sueros polivalentes pertenecientes al género Salmonella spp. Antes de realizar el serotipado se debe comprobar que no sea cepa Autoaglutinable usando con solución Cloruro Sódico (NaCl 0.85%). En caso de no realizar la serotipificación debe enviarse la cepa aislada a la Dilab (ver pág.4 punto e). 17 2018 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Manual de procedimiento operativos. Programa de vigilancia y control de la contaminacion por salmonella spp. en granjas avicolas comerciales. Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2018 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Programa de Sanidad Aviar Dirección Nacional de Sanidad Animal Relation A related resource Resolución Senasa N° 86/20016 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0069 Abstract A summary of the resource. El presente Manual de Procedimientos contiene los principios básicos técnicos y operativos del “Programa de vigilancia y control de la contaminación por Salmonella spp. en granjas avícolas comerciales” establecido por la Resolución Senasa N° 86 del 4 de marzo de 2016, es de aplicación en forma obligatoria en todas las granjas de pollos parrilleros y granjas de gallinas de posturas comerciales del país y está dirigido a los veterinarios responsables sanitarios avícolas, a los responsables técnicos de los laboratorios adheridos y a los veterinarios de las oficinas locales del Senasa. Table Of Contents A list of subunits of the resource. Introducción Objetivos Responsabilidades Veterinario responsable sanitario del establecimiento Laboratorio adherido / Director técnico Veterinario de la Oficina Local del Senasa Programa de Sanidad Aviar Actividades en granjas de pollo de engorde 1. Frecuencia de toma de muestra 2. Indicaciones 3. Método de muestreo Actividades en granjas de gallinas de postura 1. Frecuencia de toma de muestra 2. Indicaciones 3. Método de muestreo Medidas a adoptar ante una granja positiva Links Senasa Flujograma Marcha Bacteriológica https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/39dd1833ac756eae39d3ff2b017fe40c.pdf 580cb04112f0314058bcc462b2431d2d PDF Text Text MANUAL DE PROCEDIMIENTO Diagnóstico serológico de brucelosis (B. abortus, B. melitensis, B. suis) Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (Senasa) Edición 2025 �El Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria es un organismo descentralizado, responsable de ejecutar las políticas nacionales en materia de sanidad y calidad animal, vegetal y de la inocuidad de los alimentos de su competencia, así como de verificar el cumplimiento de la normativa vigente en la materia. Equipos de trabajo Coordinación de Bacteriología Dirección de Laboratorio Animal Dirección General de Laboratorios y Control Técnico Coordinación General de Comunicación Institucional Edición 2025 �Índice Introducción 6 Objetivos 6 Abreviaturas y definiciones 6 Medidas generales de bioseguridad y seguridad en el laboratorio 7 Principios de bioseguridad 7 Prácticas operativas seguras y hábitos personales 8 Limpieza y desinfección del laboratorio 10 Eliminación de residuos peligrosos (patológicos/químicos) 10 Aseguramiento de la calidad en el laboratorio 10 Control de calidad de insumos 11 Equipos 13 Sobre la enfermedad 13 Descripción de la enfermedad 14 Infección por Brucella en ganado bovino 14 Infección por Brucella en ovejas y cabras 15 Infección por Brucella en cerdos 15 Infección por Brucella en otras especies: domésticas, salvajes 16 en cautiverio o en libertad Riesgo zoonótico y requisitos de bioseguridad Técnicas de diagnóstico Pruebas serológicas Procedimientos de trabajo para el diagnóstico de brucelosis en el laboratorio de red 17 18 18 20 �Registro de entrada de muestras 20 Características y condiciones de las muestras 21 Condiciones de recepción de las muestras 21 Condiciones de rechazo o demora del procesamiento de las 21 muestras Informes de resultados Pruebas screening con antígeno tamponado en placa (BPAT y RBT) 22 23 para la detección de anticuerpos contra Brucella spp Desarrollo 23 Ejecución del ensayo de BPAT 23 Ejecución del ensayo de Rosa de Bengala 24 Lectura e interpretación de resultados de las pruebas de scree- 25 ning con antígeno tamponado en placa Informes de resultados Pruebas de seroaglutinación lenta en tubo (SAT/2-ME) 25 26 Desarrollo 26 Ejecución del ensayo 27 Incubación 28 Lectura e interpretación de resultados 28 Informes de resultados 30 Preparación de soluciones para las pruebas de SAT/2-ME 31 Prueba del anillo en leche (PAL o MRT) solo para bovinos 31 Desarrollo 32 Toma de la muestra 33 Ejecución del ensayo 33 Lectura 33 Modificación de la prueba para tanques muy grandes 34 Enzimoinmunoensayo indirecto (I ELISA) (para suero o leche) 34 Etapas 35 Desarrollo 36 �ELISA por competición / bloqueo Desarrollo Ensayo de polarización fluorescente para la detección de anticuerpos 38 38 41 contra brucella en suero Desarrollo 42 Ejecución del ensayo 42 Lectura e interpretación 43 Fijación de complemento 44 Desarrollo 44 Manejo y conservación de las muestras 45 Condiciones del ensayo 46 Ejecución 46 Lectura de resultados 48 Anexos 52 Bibliografía 68 �Introducción El presente manual está dirigido a profesionales que se desempeñan en la Red de Nacional de Laboratorios del Senasa (Redlab) respecto a las técnicas relacionadas con el diagnóstico serológico de brucelosis. Estas técnicas son internacionalmente reconocidas y recomendadas por la Organización Mundial de Sanidad Animal (OMSA) y el Senasa. Objetivos • Colaborar con el mejor desempeño y competencia de los laboratorios que realizan el diagnóstico serológico de la brucelosis en diferentes especies animales inscriptos en la Redlab. • Proporcionar a la Redlab un instrumento que facilite el desarrollo adecuado, sistematizado y estandarizado de los procedimientos técnicos que se realizan en los laboratorios. • Contribuir a la aplicación de las medidas de bioseguridad y controles de calidad que deben cumplirse cuando se desarrolle un procedimiento técnico. • Contar con un instrumento que sirva de guía para la evaluación y monitoreo de las actividades del laboratorio. Abreviaturas y definiciones • Ag: Antígeno • Biovariedad: bv • BPAT (Buffered plate antigen test): Aglutinación con antígeno bufferado en placa • CELISA: Enzimoinmunoensayo competitivo • C’: Complemento de cobayo • DGLYCT: Dirección General de Laboratorios y Control Técnico • DLA: Dirección de Laboratorio Animal • DNSA: Dirección Nacional de Sanidad Animal • DT: Dilución de Trabajo • ELISA: Enzimoinmunoensayo • FCT: Fijación de Complemento Test • FPA: Ensayo de Polarización Fluorescente • GR: Glóbulos Rojos • IELISA: Enzimoinmunoensayo Indirecto • IgG: Inmunoglobulina G • IgM: Inmunoglobulina M • LPS: Lipopolisacárido • 2-ME: 2- Mercaptoethanol • M: Molar • mP: milipolarización MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 6 �• MRT (PAL): Prueba de anillo en leche • OMSA: Organización Mundial de Sanidad Animal • PAC: Poder anticomplementario • RBT: Rosa de Bengala Test • Renspa: Registro Nacional de Productores Agropecuarios • SAT: Seroaglutinación lenta en tubo • SB: Solución Buffer • Senasa: Servicio de Sanidad y Calidad Agroalimentaria • SH: Sistema Hemolítico • UI/ml: Unidades Internacionales por mililitro • UIFCT/ml: Unidad Internacional fijadora del complemento Test por mililitro • UA: Unidad de Antígeno • UC: Unidad de Complemento • UH: Unidad de Hemolisina Medidas generales de bioseguridad y seguridad en el laboratorio Se entiende por bioseguridad: La disciplina que trata el manejo seguro y la contención de microorganismos infecciosos y materiales biológicos peligrosos. La práctica del manejo seguro de microorganismos patógenos y sus toxinas en el laboratorio biológico se realiza a través de la aplicación de los principios de contención y la evaluación de riesgos. Principios de bioseguridad El término “contención” se utiliza para describir métodos seguros para manejar materiales infecciosos en el medio ambiente del laboratorio, donde son manipulados o conservados. El objetivo de la contención es reducir o eliminar la exposición de quienes trabajan en laboratorios u otras personas, y del medio ambiente externo a agentes potencialmente peligrosos. Contención primaria: la protección del personal y del medio ambiente inmediato del laboratorio de la exposición a agentes infecciosos es provista tanto mediante buenas técnicas microbiológicas como a través del uso de Equipos de Protección Personal (EPP) de seguridad adecuados. La aplicación de vacunas al personal cuando corresponda puede brindar un mayor nivel de protección del personal. Contención secundaria: la protección del medioambiente externo al laboratorio de la exposición a materiales infecciosos se logra a través de una combinación del diseño de la instalación y prácticas operativas. Por lo tanto, los elementos de contención incluyen prácticas y técnicas de laboratorio, equipos de seguridad y el diseño de la instalación. La evaluación del riesgo del trabajo a realizar con un agente específico determinará la combinación apropiada de estos elementos. Prácticas y técnicas de laboratorio: el elemento más importante de la contención es el cumplimiento estricto de las prácticas y técnicas microbiológicas MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 7 �estándares. Las personas que trabajan con agentes infecciosos o materiales potencialmente infectados deben conocer los riesgos potenciales, y también deben estar capacitados y ser expertos en las prácticas y técnicas requeridas para manipular dichos materiales en forma segura. Cada laboratorio está obligado a desarrollar o adoptar un manual de operaciones o de bioseguridad que identifique los riesgos que se encontrarán o puedan producirse, y que especifique las prácticas y procedimientos destinados a minimizar o eliminar las exposiciones a estos riesgos. Se debe alertar al personal acerca de los riesgos especiales y se le debe exigir que lea y cumpla las prácticas y procedimientos requeridos. El personal capacitado y bien informado acerca de las técnicas de laboratorio adecuadas, procedimientos de seguridad y riesgos asociados a la manipulación de agentes infecciosos debe ser el responsable de la conducción de los trabajos con cualquier agente o material infeccioso. Esta persona tiene la obligación de consultar a profesionales especializados en bioseguridad u otros profesionales de la salud y seguridad respecto de la evaluación del riesgo. Cuando las prácticas de laboratorio estándares no son suficientes para controlar los riesgos asociados a un agente o a un procedimiento de laboratorio particular, quizás sea necesario aplicar medidas adicionales. El director del laboratorio es responsable de seleccionar prácticas de seguridad adicionales, que deben guardar relación con los riesgos relacionados con el agente o procedimiento. El director o la persona a cargo del laboratorio es responsable de brindar u organizar la capacitación adecuada del personal. Prácticas operativas seguras y hábitos personales • Limitar o restringir el acceso al laboratorio. • Diseñar el laboratorio para que su limpieza sea sencilla. Las superficies de las mesas de trabajo deben ser impermeables al agua y ser resistentes al calor moderado y a solventes orgánicos, ácidos, álcalis y productos químicos utilizados para descontaminar la superficie de trabajo y los equipos. • Seleccionar muebles de laboratorio con capacidad de soportar cargas y usos previstos. Los espacios entre las mesas de trabajo, gabinetes y equipos deben ser accesibles para su limpieza. • Cada laboratorio debe contener una pileta para el lavado de manos. • Adecuar la iluminación para todas las actividades, evitando los reflejos y el brillo que pueda molestar la visión. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 8 �• Proveer mosquiteros para las ventanas del laboratorio que se abren hacia el exterior (en lo posible deberían ser fijas). • Usar ambos, delantales, batas o uniformes de laboratorio de protección adecuados durante la permanencia en el mismo. Retirar y dejar esta ropa de protección en el laboratorio antes de dirigirse a otras áreas (por ejemplo, cafetería, biblioteca, oficinas administrativas); además, usar calzado cerrado y cabello recogido. • Es obligatorio el uso de guantes cuando es probable que las manos entren en contacto con materiales infecciosos, superficies o equipos contaminados (puede ser apropiado el uso de dos pares de guantes). Descartar los guantes cuando están contaminados y retirarlos cuando se completa el trabajo con los materiales infecciosos o cuando está comprometida la integridad del guante. Los guantes descartables no se lavan, no se vuelven a usar, ni se utilizan para tocar superficies “limpias” (teclados, teléfonos, picaportes, entre otros), y no se deben usar fuera del laboratorio. • No está permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto, maquillarse o almacenar alimentos para uso humano en áreas de trabajo. • Utilizar protección ocular para los procedimientos en los que se puedan producir salpicaduras de microorganismos u otros materiales peligrosos. Las personas que usan lentes de contacto en laboratorios deben también utilizar antiparras o un protector facial. • Lavarse las manos luego de manipular materiales viables, luego de quitarse los guantes y antes de retirarse del laboratorio. (Ver Anexo I). • Almacenar los alimentos fuera del área de trabajo en gabinetes o refrigeradores designados y utilizados con este único fin. • Está prohibido pipetear con la boca: utilizar dispositivos de pipeteo mecánicos. Aplicar políticas para el manejo seguro de objetos cortantes o punzantes. • Llevar a cabo todos los procedimientos con precaución a fin de minimizar la creación de salpicaduras o aerosoles. • Descontaminar las superficies de trabajo como mínimo una vez por día, luego de finalizar las tareas y ante todo derrame de material viable. • Descontaminar todos los cultivos, stocks y otros desechos reglamentados antes de ser desechados mediante un método aprobado, como por ejemplo, mediante autoclave. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio inmediato son colocados en un recipiente duradero, estanco y cerrado para su transporte desde el laboratorio. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio inmediato se embalan de conformidad con las normas locales, estatales MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 9 �y federales aplicables antes de retirarlos del establecimiento de acuerdo a las indicaciones de la Ley 24.051 de Residuos Peligrosos. • El laboratorio debe tener las hojas de seguridad1 de cada sustancia química que utiliza en formato impreso y capacitar al personal sobre las mismas. Limpieza y desinfección del laboratorio Todo laboratorio debe tener un programa con métodos de limpieza y desinfección bien definidos para disminuir los riesgos de contaminación con materiales peligrosos acorde a las características del lugar y volumen de trabajo. La limpieza de los laboratorios incluye a los equipos, mesas de trabajo, heladeras, freezer, aberturas, etc. Dentro de la limpieza se debe incluir el control de insectos y roedores. Eliminación de residuos peligrosos (patológicos/químicos) El laboratorio debe elaborar un procedimiento de la manipulación, clasificación y descarte de los residuos peligrosos ya que pueden causar daño, directa o indirectamente a seres vivos o contaminar el suelo, el agua, la atmósfera o el ambiente en general. Se consideran residuos patológicos/químicos al material biológico de diversos orígenes que puede no tener características infecciosas pero sí de toxicidad. Un residuo se considera tóxico cuando es capaz de, a determinadas dosis, provocar una acción química o químico-física que cause daño en la salud, luego de estar en contacto con la piel o las mucosas o de haber penetrado en el organismo por cualquier vía. Los residuos serán acumulados en recipientes colocados convenientemente y en cantidad suficiente en el lugar de generación de los mismos. Los mismos se podrán tratar mediante los siguientes métodos: incineración, enterramiento por relleno de seguridad, esterilización por autoclave, ya sea por el mismo laboratorio o por empresas dedicadas a ese fin. Se ajustará a la normativa establecida por la jurisdicción donde se encuentra el laboratorio. Aseguramiento de la calidad en el laboratorio Se debe cumplimentar la reglamentación vigente de acuerdo a las BPL (buenas prácticas de laboratorio), requisitos particulares del Senasa y la Norma ISO/IEC 17025 (última versión vigente) según la categoría del laboratorio. Es un documento que indica las particularidades y propiedades de una determinada sustancia para su uso más adecuado (en inglés, Material Safety Data Sheet o MSDS). El principal objetivo de esta hoja es proteger la integridad física del operador durante la manipulación de la sustancia. Esta hoja o ficha contiene las instrucciones detalladas para su manejo y persigue reducir los riesgos laborales y medioambientales. 1 MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 10 �Para que los resultados del diagnóstico sean uniformes, confiables y trazables, deben efectuarse siguiendo técnicas estandarizadas, con operadores capacitados en la realización e interpretación de los resultados, utilizando equipos y reactivos controlados. Los procedimientos de laboratorio están sujetos a múltiples causas de error que deben ser detectados para poder aplicar correcciones o acciones correctivas. Los procedimientos se pueden monitorear mediante controles internos con la utilización diaria de sueros controles internos con títulos conocidos; mientras que el control externo –que se refiere al realizado por un laboratorio de referencia– se puede hacer mediante auditorías que revisen los métodos analíticos, la organización del trabajo del laboratorio y los procedimientos de control de calidad internos implementados. Respecto a la participación en ensayos interlaboratorios, los mismos deben ser provenientes de organismos reconocidos y programas de ensayos de aptitud. Se deben mantener documentados los resultados y, en caso de obtener resultados no satisfactorios, implementar las acciones correctivas pertinentes para su seguimiento y cierre. Del mismo modo podrán utilizarse otras herramientas a los fines de garantizar el desempeño adecuado y asegurar la calidad de los resultados de ensayo, como la confección de gráficos de control2. El control permanente de la calidad de los resultados junto con las buenas prácticas de laboratorio que incluye la utilización de técnicas evaluadas, personal capacitado y operaciones estandarizadas, garantiza el resultado confiable del diagnóstico. Control de calidad de insumos Todos los insumos y reactivos que se utilizan en el laboratorio deben ser establecidos con fórmulas y procedimientos detallados en manuales disponibles en el área de trabajo. La composición, el tipo de envase, la identificación y el lugar de almacenamiento deben ser los indicados en los manuales. No introducir cambios que no estén registrados y autorizados por el responsable del laboratorio. Todos los insumos y materiales de referencia deben cumplir con las especificaciones registradas. 2 Diagrama que sirve para examinar si un proceso se encuentra en una condición estable, o para asegurar que se mantenga en esa condición. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 11 �Los reactivos biológicos que se emplean en las técnicas de ensayo deben utilizarse de acuerdo a las especificaciones del manual de procedimientos operativos correspondiente, respetando las indicaciones para la conservación, almacenamiento y titulación. Los reactivos para el diagnóstico de brucelosis que se comercializan en la República Argentina, deben cumplir la normativa vigente del Senasa y aprobar el control de calidad de cada lote o serie indicado en la estampilla correspondiente. Se debe llevar un registro de cada lote de antígeno/kit que se utiliza con la fecha de uso. En los laboratorios se requiere usar agua con mínimo de impurezas. Los requisitos de calidad o pureza se encuentran establecidos sobre la base de diferentes normas o criterios, dependiendo de las instituciones u organismos internacionales que establecen las referencias. Entre éstas se encuentran la American Society for Testing and Materials (ASTM), British Standards Institution (BSI) y la International Organization for Standardization (ISO). Actualmente están definidos los diferentes niveles de pureza del agua en función de los parámetros físico-químicos, tales como conductividad eléctrica, resistividad, contenido de carbono, oxígeno o sílice. Clasificación del agua de acuerdo a su característica fisicoquímica. Especificaciones según ISO 3696 Parámetros Fisicoquímicos Grado 1 Grado 2 Grado 3 Conductividad eléctrica valor máximo a 25 ºC, µS/cm 0,1 1 5 Resistividad, MΩ 10 1 0,25 Absorbancia (UA a 254 nm) 0,001 0,01 -- Sílice Total valos máximo mg/l 0,01 0,02 1 pH -- -- 5,0 a 7,5 Clasificación de los tipos de agua según NC-ISO 3696: 2004 Grado 1- Exenta básicamente de contaminantes constituidos por iones disueltos o coloidales y materias orgánicas. Es apropiada para los requisitos de análisis más exigentes, incluyendo la cromatografía líquida de alta definición. Se puede preparar por un tratamiento adicional del agua de grado 2 (por ejemplo osmosis inversa o desionización seguida de filtrado a través de una membrana con tamaño de poro de 0,2 µm para separar las partículas, o por redestilación en un aparato de sílice fundido). Grado 2- Con muy pocos contaminantes inorgánicos, orgánicos o coloidales. Es apropiada para análisis delicados, incluyendo la espectrometría de absorción atómica (EAA) y la determinación de componentes en cantidades mínimas. Se puede preparar por destilación múltiple o por desionización u osmosis inversa seguida de destilación. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 12 �Grado 3- Apropiada para la mayoría de los trabajos de química en laboratorios por vía húmeda y la preparación de soluciones de reactivos. Se puede preparar mediante una sola destilación, por desionización o por osmosis inversa. Salvo indicación en contrario, se puede utilizar para el trabajo normal de análisis. Equipos El laboratorio debe tener inventario del equipamiento y un programa de control y mantenimiento de los equipos que emplea en el laboratorio. El equipamiento que afecte la calidad de los resultados de ensayo, debe mantenerse controlado, estipulando dentro de un programa los intervalos de control, calibración /verificación y mantenimiento de los mismos. Sobre la enfermedad3 Brucelosis es el nombre genérico que se aplica a las infecciones–humanas o animales– causadas por distintas especies del género Brucella, principalmente Brucella abortus, B. melitensis y B. suis. La infección del ganado ovino por B. ovis se describe por separado en el Capítulo 3.7.7 Epididimitis ovina (Brucella ovis) del manual de la OMSA. Agente: Brucella (B. abortus, B. melitensis, B. suis) El género Brucella forma parte de la familia Brucellaceae, que a su vez forma parte del orden Rhizobiales, en la clase alphaproteobacteria. Presenta una estrecha relación genética con ciertos agentes patógenos de las plantas y simbiontes de los géneros Agrobacterium y Rhizobium, así como con agentes patógenos de animales (Bartonella) y bacterias oportunistas o del suelo (Ochrobactrum). La evidencia genética e inmunológica indica que todos los miembros del género Brucella están estrechamente relacionados. Sin embargo, teniendo en cuenta que existen diferencias relevantes entre las principales variantes en cuanto al tipo de hospedador y a la epidemiología, así como evidencias moleculares de variaciones genómicas, el Comité Internacional de Sistemática de Procariotas, Subcomité de Taxonomía de Brucella, adoptó en 2005 una decisión firme sobre el retorno a las posiciones anteriores a 1986 en lo relativo a la taxonomía de Brucella; la consecuencia de ese posicionamiento es la reaprobación de las seis especies de Brucella con sus biovariedades reconocidas. Los nombres clásicos relacionados con las seis especies de Brucella están publicados en las Listas Autorizadas de Nombres de Bacterias de 1980, y las cepas típicas designadas aparecen asociadas a esos nombres publicados y validados: Brucella abortus, B. melitensis, B. suis, B. neotomae, B. ovis y B. canis. Las Fuente: Capítulo 3.1.4.- Manual Organización Mundial de Sanidad Animal -OMSA)- versión 2022. 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 13 �tres primeras se subdividen en biovariedades por sus características de cultivo y serológicas. En la última década se han aislado cepas de Brucella de mamíferos marinos que no pueden adscribirse a ninguna de las especies ya reconocidas. Hay estudios en curso destinados a establecer su posición en la taxonomía de este género y se ha propuesto que podrían clasificarse en dos nuevas especies, B. ceti y B. pinnipedialis. Recientemente se ha aislado una nueva cepa, denominada Brucella microti, en el topillo campesino (Microtus arvalis) y en zorros y suelo de Europa Central (Scholz et al., 2008). También se han descrito por primera vez ciertas cepas aisladas de infecciones humanas de implantes mamarios y de pulmón, aunque todavía no está claro cuál es el reservorio natural de las mismas. Si bien solo se han descrito dos cepas de cada nuevo tipo, formalmente se han publicado como décima y onceava especies de Brucella, B. inopinata y B. papionis, respectivamente (Scholz et al., 2010; Whatmore et al., 2014). Por último, las cepas aisladas de roedores, zorros y ranas se han caracterizado como cepas atípicas de Brucella claramente diferenciables de las especies descritas actualmente, pero todavía no se han aprobado como nuevas especies de Brucella. Descripción de la enfermedad Infección por Brucella en ganado bovino La infección por Brucella en el ganado bovino suele estar causada por biovariedades (bv.) de Brucella abortus. En algunos países, sobre todo del sur de Europa, África y Asia occidental, en los que el ganado bovino se cría en estrecha relación con ganado ovino o caprino, la infección también puede deberse a B. melitensis (Verger, 1985). En ocasiones, B. suis puede causar una infección crónica de la glándula mamaria del ganado bovino, pero no se ha observado que cause aborto ni que se transmita a otros animales. La infección por Brucella en ganado bovino se transmite a nivel mundial, pero varios países del norte y centro de Europa, así como Canadá, Japón, Australia y Nueva Zelanda se consideran libres tanto de B. abortus como de B. melitensis. Esta enfermedad suele ser asintomática en animales de corta edad y en hembras no gestantes. Tras la infección por B. abortus o B. melitensis, las hembras adultas gestantes presentan placentitis, que suele dar lugar a aborto entre el quinto y el noveno mes de gestación. Incluso en ausencia de aborto, en la placenta, los líquidos fetales y las secreciones vaginales producen una profusa excreción del microorganismo. La glándula mamaria y los ganglios linfáticos relacionados también pueden resultar infectados, y es posible que se excreten microorganismos con la leche. Las siguientes gestaciones suelen llegar a término, pero la infección uterina y mamaria reaparece, con cantidades bajas de microorganismos tanto en los productos del parto como en la leche. En las infecciones agudas, el microorganismo se encuentra presente en la mayoría de ganglios linfáticos principales del organismo. Los bovinos machos adultos pueden presentar orquitis/epididimitis y la brucelosis puede ser una causa de infertilidad en ambos sexos. Los higromas, que suelen afectar a las articulaciones de las extremidades, son un signo frecuente en caso de brucelosis en algunos países tropicales y pueden ser el único indicador manifiesto de infección; el líquido de los higromas suele estar infectado por Brucella. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 14 �Infección por Brucella en ovejas y cabras La infección por Brucella en ovejas y cabras (excepto la infección por B. ovis) está causada principalmente por las biovariedades de B. melitensis. En ovejas y cabras se han observado infecciones esporádicas causadas por B. abortus o B. suis, pero estos casos son extremadamente infrecuentes. La infección por Brucella en ovejas y cabras es endémica en la región del Mediterráneo, pero se dan casos en todo el mundo. América del Norte (excepto México) se considera libre del agente, del mismo modo que el norte y el centro de Europa, el sudeste asiático, Australia y Nueva Zelanda. Patológica y epidemiológicamente, la infección por B. melitensis en ovejas y cabras es muy similar a la infección por B. abortus en ganado bovino. En la mayoría de los casos, las vías principales de transmisión de Brucella son la placenta, los líquidos fetales y las secreciones vaginales expulsadas por las ovejas y cabras infectadas, ya sea al abortar o al parir a término. La expulsión de Brucella también es frecuente en las secreciones de la ubre y en el semen, y puede aislarse Brucella de distintos tejidos, como los ganglios linfáticos de la cabeza, el bazo y los órganos asociados a la reproducción (útero, epidídimo y testículos), así como de lesiones artríticas (Alton et al., 1988). Infección por Brucella en cerdos La infección por Brucella en cerdos está causada principalmente por las biovariedades 1, 2 o 3 de B. suis. En cerdos también se han observado infecciones esporádicas por B. abortus o B. melitensis, pero estos casos son muy infrecuentes. La enfermedad tiene lugar en muchos países en los que se crían cerdos. En general, la prevalencia es baja, pero en algunas regiones, como América del Sur o el sudeste asiático, la prevalencia puede ser mucho más alta. En algunos países, la brucelosis porcina puede ser un problema grave, aunque actualmente no reconocido. Se ha observado infección por la bv 1 de Brucella suis en jabalíes de algunos estados del sur de EE.UU., así como de Queensland (Australia) y de otros países de Oceanía. En estos países, se han documentado varias infecciones humanas en personas que practicaban la caza y manipulaban material obtenido de jabalíes. En general, la enfermedad se transmite por la ingesta de alimento contaminado por productos del parto o de un aborto, o bien por secreciones uterinas. Los cerdos se comen de inmediato los fetos abortados y las membranas fetales. La transmisión durante la cópula también es frecuente, y la excreción de B suis en el semen tiene implicaciones para el personal que lleva a cabo la inseminación artificial. En los cerdos, como en los rumiantes, tras la bacteriemia inicial, B. suis coloniza las células del tracto reproductor de ambos sexos. En las hembras, resultan invadidas la placenta y los fetos, mientras que en los machos la invasión tiene lugar en uno o más de los siguientes tejidos: testículos, próstata, epidídimo, vesículas seminales o glándulas bulbouretrales. En los machos, las lesiones, que suelen ser unilaterales, empiezan con una hiperplasia que puede avanzar a absceso; la fase final se caracteriza por esclerosis y atrofia. Pueden aparecer artritis en varias articulaciones, y a veces tiene lugar una espondilitis. En las cerdas, el signo más frecuente de brucelosis es el aborto en cualquier momento de la gestación, aunque es más habitual entre los días 50 y 110. La secreción vaginal no suele ser evidente y, en los rebaños infecMANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 15 �tados de forma crónica, el signo clínico más relevante es la infertilidad, no el aborto. En los machos, la brucelosis tiene más probabilidades de ser persistente, y ocasiona lesiones en el tracto genital que a menudo dan lugar a una interferencia con la actividad sexual, que puede ser temporal o irreversible. El verraco puede excretar Brucella con el semen sin ninguna anomalía aparente en los órganos sexuales ni interferencia con la actividad sexual. En ambos sexos puede aparecer una tumefacción articular y de las vainas de los tendones, cojera y, en ocasiones, parálisis posterior. Un porcentaje considerable tanto de cerdos como de cerdas se recupera de la infección, a menudo en un plazo máximo de 6 meses, pero muchos quedan infectados de por vida (Olsen et al., 2012). La infección causada por la bv 2 de B. suis difiere de la causada por la bv 1 y la bv 3 en cuanto a la gama de hospedadores, la distribución y la patogenicidad. Históricamente, la distribución geográfica de la bv 2 de B. suis ha sido un amplio territorio situado entre Escandinavia y los Balcanes. La prevalencia en jabalíes parece ser alta en toda Europa continental (EFSA, 2009). En los brotes de Europa, los jabalíes intervienen como fuente de transmisión de la bv 2 a cerdos criados en el exterior, y se consideran el principal reservorio salvaje de esta infección (EFSA, 2009). La bv 2 de Brucella suis causa lesiones miliares, sobre todo en tejidos reproductivos, que a menudo se vuelven purulentas. Hasta la fecha, la bv 2 se ha documentado en muy pocos casos como causa de brucelosis humana. No obstante, sí se han observado infecciones por la bv2 en cazadores con inmunocompromiso que hayan estado excesivamente expuestos debido a prácticas como el destripado y despellejado de jabalíes o liebres. Asimismo, en ganado bovino y ovino de Europa expuesto a jabalíes infectados, se han observado casos, aunque muy infrecuentes, de infección por la bv 2 de B. suis sin signos clínicos. Infección por Brucella en otras especies: domésticas, salvajes en cautiverio o en libertad Se ha observado infección por B. abortus y B. melitensis en el dromedario (Camelus dromedarius) y en el camello (C. bactrianus), así como en camélidos de América del Sur: la llama (Lama glama), la alpaca (Lama pacos), el guanaco (Lama guanicoe) y la vicuña (Vicugne vicugne), y se ha relacionado con el contacto con rumiantes grandes y pequeños infectados por B. abortus y B. melitensis. Asimismo, se ha observado brucelosis en el búfalo doméstico (Bubalus bubalis), el bisonte americano y el europeo (Bison bison y B. bonasus, respectivamente), el yak (Bos grunniens), el elk/wapiti (Cervus elaphus), el búfalo africano (Syncerus caffer) y varias especies de antílopes de África. Los signos clínicos de brucelosis en estos animales son similares a los que se observan en el ganado bovino, ovino y caprino. La infección por Brucella melitensis en rumiantes salvajes puede tener lugar cuando estas especies se encuentran en estrecho contacto con ovejas y cabras de zonas enzoóticas. Los signos de la brucelosis en estos animales son similares a los que se observan en bovinos, ovinos y caprinos, pero en varias especies de rumiantes salvajes (como el rebeco [Rupicapra rupicapra], el íbex alpino [Capra ibex] y la cabra ibérica [Capra pyrenaica] salvaje) se ha observado artritis purulenta o calcificada y orquitis, así como uveítis y problemas neurológicos. Estas especies se consideran portadores terminales, que no pueden transmitir la enfermedad, la cual suele desaparecer de forma natural en cuanto la infección por Brucella se ha erradicado del ganado doméstico, a no ser que tengan lugar efectos antropogénicos. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 16 �Existen dos tipos distintos de situación epidemiológica respecto a la infección por B. suis en otras especies no porcinas. En el primer caso, la infección por B. suis tiene lugar en animales que no son el hospedador natural de la infección concreta mediante la ingesta de materiales contaminados o por cohabitación con hospedadores naturales infectados. Por ejemplo, zorros y lobos del ártico pueden contraer la bv 4 de B. suis del reno; los perros y los roedores, como ratas o ratones, pueden contraer otras biovariedades de B. suis por cohabitación con hospedadores infectados; y el ganado bovino y los caballos pueden resultar infectados por cohabitación o interacción con porcinos infectados. Las bacterias infectantes pertenecen siempre a las biovariedades definidas de especies hospedadoras naturales. En el segundo caso, los hospedadores naturales de B. suis o microorganismos similares a B. suis son especies salvajes. Un ejemplo es la denominada brucelosis murina de la Comunidad de Estados Independientes (CIS) y los países bálticos, donde pequeños roedores resultan infectados por la bv 5 de B. suis. Una situación similar se ha observado en Australia, donde, a partir de roedores, se han aislado cepas parecidas a B. suis pero con características distintas; finalmente se ha considerado que son distintas de B. suis en función del perfil genético. Además del jabalí, la liebre común europea (Lepus europaeus) también se considera reservorio de la bv 2 de B. suis y se ha observado que interviene como posible fuente de transmisión al ganado doméstico. En la liebre común europea, la enfermedad se caracteriza por la formación de nódulos de tamaños variables comprendidos entre el de una semilla de mijo y el de una cereza o incluso mayor; a menudo se vuelven purulentos. Estos nódulos pueden desarrollarse en casi cualquier lugar, a veces en el tejido subcutáneo o intramuscular, en el bazo, el hígado o los pulmones y en los órganos reproductivos de ambos sexos. La condición corporal de la liebre puede quedar sorprendentemente intacta. Otras especies también pueden resultar infectadas por cohabitación con cerdos, jabalíes o liebres infectados por la bv 2 de B. suis. El destripado o despellejado de jabalíes en explotaciones bovinas podría ser una vía de transmisión al ganado bovino. La bv 4 de Brucella suis causa una zoonosis grave en renos salvajes o domesticados (Rangifer tarandus y sus distintas subespecies) en toda la región del Ártico, incluidos Siberia, Canadá y Alaska. Rangifer tarandus es muy susceptible a la infección por B. suis, que causa fiebre, abatimiento y distintos signos locales, como aborto, retención de placenta, metritis, a veces con secreciones sanguinolentas, mastitis, bursitis y orquitis. La transmisión al ser humano puede tener lugar por contacto directo o por el consumo de leche cruda u otros productos cocidos de manera insuficiente procedentes del reno, especialmente la médula ósea. Riesgo zoonótico y requisitos de bioseguridad Ciertas especies de Brucella, sobre todo B. melitensis, B. abortus, B. suis –y probablemente en menor medida B. canis– son fácilmente transmisibles al ser humano, en el que causan un proceso febril (fiebre ondulante) que puede avanzar a una forma más crónica y también producir complicaciones graves que afecten a los sistemas músculo esquelético, cardiovascular y al sistema nervioso central. Deben aplicarse medidas de precaución para prevenir la infección humana. La infección se contrae básicamente por vía oral, respiratoria o conjuntival, pero la ingesta de productos lácteos crudos constituye el principal riesgo para el MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 17 �público general en los lugares en los que la enfermedad es endémica. Existe un riesgo ocupacional en veterinarios, trabajadores de mataderos y ganaderos que manipulen animales/canales infectados y fetos abortados o placentas. La brucelosis también es una de las infecciones de laboratorio más fáciles de contraer, y todas las manipulaciones de laboratorio relacionadas con cultivos vivos o material que pueda estar infectado o contaminado deben realizarse a un nivel de bioseguridad y contención adecuado, que se determinará a partir de un análisis del riesgo biológico. Se han realizado recomendaciones específicas relativas a las precauciones en materia de bioseguridad que deben aplicarse con los materiales infectados por Brucella (se ofrece más información en Alton et al., 1988; Comité Mixto FAO/OMS de Expertos en Brucelosis, 1986; OMS, 1953; OMS, 2004). Todos los abortos en el ganado deben considerarse como casos sospechosos de brucelosis y deberían investigarse. El cuadro clínico no es patognomónico, aunque la historia del rebaño puede servir de ayuda. El diagnóstico inequívoco de infecciones por Brucella solo puede hacerse por aislamiento e identificación de Brucella, pero en situaciones en las que no es posible el análisis bacteriológico, el diagnóstico puede basarse en métodos serológicos. Técnicas de diagnóstico Pruebas serológicas No existe una prueba única que permita la identificación de Brucella. Normalmente se necesita una combinación de los métodos serológicos y bacteriológicos. Ninguna prueba serológica aislada es adecuada en todas y cada una de las situaciones epidemiológicas, presentando limitaciones en el análisis de animales individuales. Se deben considerar todos los factores que influyen en la relevancia del método de prueba y de sus resultados para una aplicación o interpretación diagnóstica específica. Los métodos serológicos que se describen en este manual son métodos estandarizados y validados, con características de realización adecuadas para ser consideradas pruebas obligadas o alternativas en el comercio internacional. Esto no impide el uso de pruebas modificadas o similares o la utilización de reactivos diferentes. Sin embargo, los métodos y reactivos descritos en esté manual suponen un estándar de comparación respecto a la realización esperada del diagnóstico. Debe resaltarse que la prueba de seroaglutinación lenta en tubo (SAT) se considera inadecuada a efectos del comercio internacional. La prueba de fijación de complemento (FCT) es más específica que la SAT para el diagnóstico y además posee un sistema estandarizado de unidades. Para el control de la brucelosis a nivel nacional o local, son adecuadas para el análisis las pruebas con antígeno tamponado de Brucella, es decir, la prueba con rosa de bengala (RBT) y la prueba de aglutinación tamponada en placa (BPAT), así como el enzimoinmunoensayo (ELISA) y el ensayo de polarización fluorescente (FPA). Las reacciones positivas deben volverse a analizar utilizando una estrategia confirmatoria adecuada. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 18 �En otras especies, como por ejemplo en búfalos (Bubalus bubalus), bisonte americano y europeo (Bison bison, Bison bonasus), yak (Bos grunniens), elk/wapiti (Cervus elaphus), camellos (Camelus dromedarius, C.bactrianus) y camélidos sudamericanos, la infección por Brucella sigue un curso similar al del ganado bovino. Para estos animales pueden utilizarse los mismos procedimientos serológicos, pero cada uno debe ser validado en el animal estudiado. Tabla 1 Métodos analíticos disponibles para el diagnóstico de infección por Brucella abortus, melitensis o suis (Manual OMSA, 2022). Propósito Método Demostrar ausencia de infección en la población Demostrar ausencia de infección en animales individualesa Contribuir a las políticas de erradicaciónb Confirmar casos clínicos sospechososc Determinar la prevalencia de la infección – vigilancia en el rebaño / manada Determinar el estado inmunitario en animales individuales o en poblaciones tras la vacunación - - Identificación del agente Métodos de tinción - Cultivo PCRd - - + +++ +/++ Detección de la respuesta inmune BBAT (RBT o BPAT) +++ ++ ++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + +++ + +++ +++ + + + + ++ ++ ++ + +++ - +++ ++ +++ +++ ++ ++ + - Pruebas basadas en el NH y proteínas del citosole - - + ++ - - Prueba en leche de tanquef I- ELISA en leche o prueba de anillo en leche +++ - +++ + +++ - FPA CFT I-ELISA C-ELISA BST SAT Clave: +++ = método recomendado; ++ = método adecuado; + = puede utilizarse en ciertas situaciones, pero el costo, la fiabilidad u otros factores limitan su aplicación; - = no adecuado para esta finalidad. PCR = reacción en cadena de la polimerasa; BBAT = pruebas con antígeno tamponado de Brucella (es decir, RBT [rosa de bengala] y BPAT [prueba de aglutinación en placa tamponada]); CFT = fijación de complemento; I- o C-ELISA = enzimoinmunoanálisis indirecto de competición; FPA = prueba de polarización de la fluorescencia; BST = prueba de la brucelina; SAT = prueba de aglutinación en suero; NH = hapteno nativo. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 19 �a Solo aplicable a rebaños / manadas, países o zonas libres de la infección por Brucella. b Para aumentar la eficiencia de las políticas de erradicación en rebaños/ manadas, se recomienda combinar pruebas para aumentar la sensibilidad en cuanto al diagnóstico, es decir, al menos dos pruebas serológicas, como BBAT o FPA y CFT o I- ELISA. La sensibilidad aumenta aún más si se aplica simultáneamente serológica y BST. c En zonas de prevalencia baja o casi libres, el valor predictivo de los resultados positivos en las pruebas serológicas puede ser muy bajo. En tales situaciones, para confirmar casos clínicos suele ser necesario identificar el agente causal. En rebaños/manadas infectados, un resultado positivo en cualquier prueba serológica puede considerarse una confirmación de un caso clínico. Todo animal que dé positivo en cualquier prueba debe considerarse infectado, incluso en ausencia de signos clínicos. En zonas de prevalencia baja o casi libres, los resultados positivos aislados pueden confirmarse mediante cultivo (o PCR) o BST. En países o zonas libres, los animales sospechosos son los que dan positivo tanto en una prueba serológica de cribado como en una confirmativa (pruebas en serie) y pueden confirmarse mediante cultivo (o PCR) y/o BST. d Es posible que se obtenga falsos positivos. e En las zonas en las que se practica la vacunación subcutánea con S19 o Rev. 1, esta prueba puede ayudar a diferenciar entre los anticuerpos generados a partir de la vacunación y los generadores a partir de la infección. f Solo ganado lechero. Procedimientos de trabajo para el diagnóstico de brucelosis en el laboratorio de red Registro de entrada de muestras Todo laboratorio debe contar con un instructivo o procedimiento de recepción, manejo y rechazo de muestras. Es responsabilidad del veterinario acreditado que envía las muestras asegurarse la correcta identificación, embalaje y documentación que acompaña a las mismas. Los laboratorios deben contar con un registro de entrada de muestras (en papel o software con back- up), en el que figure como mínimo la siguiente información: • Fecha de recepción de muestras. • Cantidad de muestras. • Especie. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 20 �• Fecha de extracción de muestras. • Procedencia: establecimiento, número de Renspa. • Localidad: departamento, partido, provincia. • Remitente: veterinario acreditado, nombre y número de registro, otorgado por la Dirección Nacional de Sanidad Animal (DNSA), Senasa. • Motivo del envío: • DOES (Determinación Obligatoria del Estatus Sanitario). • MuVe (Muestreo de Vigilancia Epidemiológica para mantenimiento del estatus). • SAN (Saneamiento de rodeo bajo plan), CSM (Certificado de seronegatividad para el Movimiento). • Control interno (según requerimiento de veterinario acreditado). • Remuestreo, otros. Características y condiciones de las muestras Condiciones de recepción de las muestras: • Sangre entera o suero refrigerados • Suero congelado • Leche para PAL refrigerada (no congelada) • Leche para IELISA refrigerada/congelada • Tubos con identificación clara, de preferencia sobre cinta de papel o similar adherida al tubo; otra opción es la marcación firme e indeleble en el cuerpo del tubo • Planillas/protocolo completas de toma de muestras (Anexo II, Resolución Senasa 67/2019) Condiciones de rechazo o demora del procesamiento de las muestras: • Falta de planillas/protocolo o planillas incompletas de toma de muestras (Anexo II, Resolución Senasa 67/2019) • Falta de la firma del veterinario acreditado en la planilla de extracción, responsable de la toma de muestra • Sangre entera congelada • Leche para PAL congelada, contaminada • Sangre entera o suero, contaminados • Sueros hemolizados • Tubos no identificados • Volumen insuficiente Los laboratorios reconocidos y autorizados deben ser exigentes con la calidad de las muestras a procesar, como así también con la planilla de toma de muestra firmada por el veterinario acreditado actuante que debe acompañar a las muestras. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 21 �Informes de resultados Los informes que elabore el laboratorio deben ser precisos para poder desarrollar adecuadamente las acciones de saneamiento (Ver modelo Anexo I del presente manual). En el informe de resultados debe constar: • Logo del laboratorio/Dirección/Tel./e-mail/ Número de identificación del laboratorio • N.° de protocolo interno • Fecha de extracción de muestras • Fecha de recepción de muestras • Fecha de informe o emisión de resultados • Cantidad de muestras • Especie • Procedencia: establecimiento, número de Renspa • Localidad: Departamento, partido, provincia • Remitente: Veterinario acreditado, nombre y número de registro, otorgado por la Dirección Nacional de Sanidad Animal (DNSA), Senasa • Motivo del envío: DOES (Determinación Obligatoria del Estatus Sanitario), MuVe (Muestreo de Vigilancia Epidemiológica para mantenimiento del estatus), SAN (Saneamiento de rodeo bajo plan), CSM (Certificado de seronegatividad para el movimiento), control interno (según requerimiento de veterinario acreditado), remuestreo • Columnas con la información del tubo / caravanas / edad / fecha de vacunación / pruebas utilizadas / resultados con los valores obtenidos (SAT-2ME, ELISA, FCT, FPA), valor de corte e interpretación cuando corresponda • Información de los antígenos / kits utilizados • Firma del director técnico del laboratorio • Observaciones • Paginación x de y • Que conste en todas las páginas N.° del protocolo y N.° de Renspa Animales para examinar: Hembras vacunadas mayores de 18 meses y animales no vacunados mayores de 6 meses. Figura 1: Diagrama de diagnóstico serológico de brucelosis en la República Argentina. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 22 �Pruebas screening con antígeno tamponado en placa (BPAT y RBT) para la detección de anticuerpos contra Brucella spp Son pruebas tamiz de aglutinación en placa. Se fundamentan en la inhibición de las aglutininas inespecíficas a bajo pH. Detectan anticuerpos IgG y algunos IgM específicos. Desarrollo Materiales: • Micropipetas de10-100 µl. • Gradillas. • Caja de lectura o aglutinoscopio (aproximadamente de 45 cm de largo x 35 cm de ancho x 15 cm de profundidad) con tapa, provista de una placa de vidrio marcada con cuadrados de aproximadamente 4 cm de lado, que se apoya cerca de la parte superior de la caja de manera que pueda quitarse y ponerse fácilmente. • La caja debe estar iluminada de modo que la luz incida oblicuamente y por debajo (cubiertas parcialmente), de la mezcla de suero y antígeno. El interior de la caja debe pintarse de negro opaco. • Debe colocarse dentro del aglutinoscopio una pequeña cámara húmeda para evitar la evaporación de las muestras. • Mezcladores de acero o plástico. Equipos: • Heladera con temperatura controlada (5 ± 3 º C). • Freezer con temperatura controlada (-20 ± 5 ° C). • Vórtex. • Centrífuga. • Timer. Reactivos: • Antígeno BPAT con volumen celular aprox. de 11%. • Antígeno Rosa de Bengala, volumen celular aprox. de 8%. • Conservar el Antígeno en la heladera a 5 ± 3 ° C. No se debe congelar, lo cual lo inutiliza, ya que se modifica la sensibilidad. • Suero control interno positivo. • Suero control interno negativo. • Cada laboratorio debe preparar sus sueros controles internos de trabajo positivo y negativo, codificarlos, utilizarlos cada día de trabajo y registrarlos. Ejecución del ensayo de BPAT • Descongelar y mezclar bien los sueros utilizando vórtex. • Llevar las muestras de suero y antígeno a temperatura ambiente (22 ± 4 º C) como mínimo unos 45-60 minutos previos a la realización del ensayo. • Garantizar la homogeneización del antígeno, agitando suavemente por inversión durante no menos 10 minutos (No usar vórtex). • Colocar sobre el aglutinoscopio (con cámara húmeda), la placa de vidrio (limpia y seca), se recomienda pasar papel absorbente embebido en alcohol 70º de ambos lados de la misma. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 23 �• Con micropipeta automática apoyada sobre la placa de vidrio, se depositan 80 µl de suero, previo mezclado con vórtex. Utilizar un tip o punta de pipeta para cada suero. • Con micropipeta descargar 30 µl de antígeno próximo a la gota del suero, con la precaución de no tocar el suero para no contaminar con el tip el frasco de antígeno. • Mezclar bien, con mezclador de acero o plástico, el suero con el antígeno abarcando una superficie circular aproximada de 3 cm de diámetro. • Se retira la placa de vidrio y se imprimen 3 movimientos en forma rotativa hasta homogeneizar la mezcla. • Se coloca la placa sobre el aglutinoscopio con cámara húmeda y se tapa, permaneciendo la luz apagada. • Se efectúa una nueva rotación, pasados 4 minutos. A los 8 minutos, rotando de nuevo la placa y con la luz encendida, se procede a la lectura. Figura 2: Aglutinoscopio. Ejecución del ensayo de Rosa de Bengala • Colocar la placa de vidrio sobre el aglutinoscopio, como se indicó en la prueba de BPAT. • Con micropipeta automática apoyada sobre la placa de vidrio, se depositan 30 µl de suero. Utilizar un tip para cada suero. • Con micropipeta descargar 30 µl de antígeno próximo a la gota de suero. • Se mezcla bien, con mezclador de acero o plástico, el suero con el antígeno, abarcando una superficie circular de aproximadamente 2 cm de diámetro. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 24 �• Se retira la placa de vidrio y se imprimen movimientos en forma rotativa durante 4 minutos a razón de 10 a 12 movimientos por minuto. Esto se puede hacer en forma manual o con rotadores diseñados especialmente. • Finalizados los 4 minutos y rotando la placa sobre la caja de lectura o aglutinoscopio con la luz encendida, se procede a la lectura sobre fondo blanco. En el caso de muestras de sueros caprinos y ovinos, la OMSA recomienda utilizar la prueba de Rosa de Bengala modificado (RBTm), el cual consiste en mezclar 75 µl de suero y 25 µl de antígeno. Lectura a los 4 minutos, como se detalla en la explicación anterior. Lectura e interpretación de resultados de las pruebas de screening con antígeno tamponado en placa Las reacciones se clasifican en: POSITIVAS: Cuando se forman grumos, aun siendo finos (no confundir con aglutinaciones inespecíficas producidos por impurezas, hemólisis, etc.). Estas muestras deben someterse a las pruebas confirmatorias de SAT / 2-ME, FPA, ELISA o FCT. NEGATIVAS: Cuando la mezcla suero-antígeno es de turbidez homogénea y sin grumos. Estas muestras se informan como negativas y no se realizan las pruebas complementarias. + - + Figura 3: Lectura BPAT/RBT - Informes de resultados Se aceptan las siguientes expresiones de resultados en las planillas: Positivo Negativo + - POS NEG P N MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 25 �Criterios de aceptación del resultado En paralelo a las muestras problema se dispensan los sueros controles internos negativos y positivos. Para aceptar los resultados, ambos controles deben arrojar la lectura correspondiente. Si los controles no arrojan la lectura esperada, se deben revisar las posibles causas, calidad de los sueros controles, antígeno, calibración de pipetas, etc. Pruebas de seroaglutinación lenta en tubo (SAT/2-ME) Las pruebas de seroaglutinación detectan la presencia de los anticuerpos IgM e IgG. Los anticuerpos IgM aglutinan más intensamente que los IgG ya que, al ser las moléculas pentavalentes, poseen un mayor número de sitios de unión. El título de un suero se determina por la inversa de la dilución más alta que causa un determinado grado de aglutinación y se expresa en unidades que corresponden al recíproco de esa dilución. La prueba de 2-mercaptoethanol (2-ME) es una prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG, se basa en que los anticuerpos IgM, con configuración de pentámero, se degradan en cinco subunidades semejantes por la reducción de enlaces disulfuro, debido a la acción de ciertos compuestos que contienen el radical tiol, tales como el 2-mercaptoethanol. Estas subunidades conservan sus características de antigenicidad, pero pierden la actividad de anticuerpo plurivalente y se comportan como univalentes. Aun cuando las subunidades están integradas por dos cadenas pesadas y dos livianas, al combinarse con el antígeno no originan complejos suficientemente grandes como para aglutinar, probablemente como consecuencia de algún impedimento estérico. Las moléculas de IgG, en cambio, no sufren un efecto obvio que altere su actividad para dar reacciones objetivas como la aglutinación. La prueba se usa, por lo tanto, como evidencia presuntiva de la presencia de anticuerpos de la clase IgG. Desarrollo Materiales: • Micropipetas de10-100 µl. • Gradillas. • Caja de lectura o aglutinoscopio (aproximadamente de 45 cm de largo x 35 cm de ancho x 15 cm de profundidad) con tapa. La caja debe estar iluminada de modo que la luz incida oblicuamente y por debajo (cubiertas parcialmente). El interior de la caja debe pintarse de negro opaco. • Tubos de serología: tipo Wasserman de 13 por 100 mm o tubos de Khan de vidrio. • Probetas (100 ml y 1000 ml). • Pipetas 1, 2, 5 y 10ml. • Recipientes de vidrio de volúmenes variados. • Propipetas. • Dispensador automático o pipetas graduadas de 1-10 ml. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 26 �Equipos: • Heladera con temperatura controlada (5 ± 3 ºC). • Freezer con temperatura controlada (-20 ± 5 °C). • Estufa con temperatura controlada (37 ± 2 ºC). • Balanza. • Vórtex. • Centrífuga. • Timer. • Termómetro calibrado. Reactivos: 1. Antígeno SAT, volumen celular aprox.4.5%.4 2. Suero control interno positivo. 3. Suero control interno negativo. Cada laboratorio debe preparar sus sueros controles internos de trabajo positivo (determinar el título) y negativo, codificarlos, utilizarlos cada día de trabajo y registrarlos. Drogas y soluciones5: • Cloruro de sodio p.a. • Fenol p.a. • 2-mercaptoethanol p.a. • Solución salina al 0,85 %. • Solución salina fenolada al 0,5 %. Ejecución del ensayo Ambas pruebas (SAT y 2-ME) se realizan simultáneamente procediendo de la siguiente manera: • Descongelar y mezclar bien los sueros utilizando vórtex. • Llevar las muestras de suero y de antígeno a temperatura ambiente 22 ± 4 ºC al menos una hora antes de la ejecución del ensayo. • Garantizar la homogeneización del antígeno, agitando suavemente por inversión durante no menos de 10 minutos (no usar vórtex). • Por cada muestra de suero problema positivo a BPAT, colocar en una gradilla 1 hilera de 8 tubos de 13 x 100 mm o tubos de Khan. Identificar la gradilla con el número de protocolo. • Identificar el primer tubo de cada hilera con el número correspondiente al suero problema. En los primeros 4 tubos se realiza la prueba de SAT; se deja un espacio libre y en los 4 tubos siguientes de la misma hilera, se realiza la prueba de 2-ME. • Por cada muestra de suero debidamente identificada, se utilizan tubos en los cuales se dispensa con micropipeta 80 µl de suero en el fondo del primer tubo, 40 µl se distribuyen en el segundo tubo, 20 µl en el tercero y 10 µl en el cuarto. • Repetir el procedimiento descripto para depositar las mismas cantidades de suero en los tubos de 2-ME. 4 Conservar el antígeno en la heladera a 5 ± 3 ° C. No se debe congelar porque esto lo inutiliza al modificar la sensibilidad. 5 Tener copia impresa de la hoja de seguridad de cada droga. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 27 �• Incluir un suero control interno positivo (título conocido) y negativo, además de un control de soluciones y antígeno sin suero. • Con un dispensador automático o con micropipeta de 1 ml, agregar 1 ml de solución de 2-ME (0,1 M) en cada tubo de este grupo y mezclar muy bien agitando la gradilla. • Con un dispensador automático o con micropipeta de 1 ml, agregar 1 ml de solución salina fenolada al 0,5 % a cada uno de los tubos del grupo de SAT. • Dejar las gradillas con las mezclas durante 45 a 60 minutos a temperatura ambiente 22 ± 4 ºC y, posteriormente, dispensar a cada tubo 1 ml de antígeno de SAT diluido al 2 % (0,09 % de brucelas) en solución salina 0,85 %. • Mezclar bien agitando la gradilla y llevar a estufa. Consideraciones generales: • Las muestras que resulten positivas a BPAT o RBT deben confirmarse por las técnicas de SAT y 2-mercaptoethanol, ELISA, FPA o FCT. • La existencia de hemólisis excluye el empleo del método de tubo y placa. La presencia de hemólisis en las muestras de suero interfiere en la prueba de aglutinación en tubo, no solo porque la coloración puede enmascarar la reacción de aglutinación, sino porque se forma un precipitado como resultado de la acción del fenol que contiene la solución de antígeno sobre la hemoglobina libre. Es muy difícil distinguir esta falsa reacción de la aglutinación específica de la unión antígeno-anticuerpo. Incubación La incubación se realiza a 37 ± 2 ºC durante 40-48 horas y tiene por objeto obtener en el tiempo más corto posible el máximo de aglutinación. Se recomienda tomar y registrar las temperaturas máximas y mínimas de la estufa durante el transcurso de las 40-48 horas de la incubación, para verificar la estabilidad de la estufa. Lectura e interpretación de resultados Una vez finalizada la incubación de las muestras, se realiza la lectura de las pruebas contra el fondo negro opaco de la caja de lectura o aglutinoscopio, iluminada desde atrás con una fuerte luz que atraviese los tubos. La aglutinación del complejo antígeno-anticuerpo bajo la forma de grumos y su depósito en el fondo del tubo por gravedad determina la clarificación de la columna de líquido en el tubo; después de una leve agitación del tubo, se mantienen los grumos firmes. La aglutinación es el resultado directo de la unión específica de los anticuerpos presentes en el suero, con las Brucellas inactivadas contenidas en el antígeno. Las determinaciones se deben basar tanto en la claridad/turbidez de las MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 28 �mezclas como en el grado de aglutinación y la firmeza de los grumos al agitar suavemente el tubo. El título se determina por la inversa de la dilución más alta donde se observa aglutinación en el tubo, en el que se presenta una disminución evidente de la turbidez y los grumos firmes se mantienen a pesar de una agitación leve. Si esto ocurre, por ejemplo, en los 3 primeros tubos solamente, el título del suero (recíproco de la dilución) es de 100 UI / ml de aglutinación en SAT o en 2-ME. El grado de aglutinación en cada una de las distintas diluciones puede clasificarse como completo (+), incompleto (I) o negativo (-). • Aglutinación completa es aquella en que el líquido de la mezcla suero-antígeno aparece límpido, translúcido y la agitación suave no rompe los grumos. • Aglutinación incompleta es la que muestra la mezcla suero-antígeno parcialmente turbia y una suave agitación no rompe los grumos. • Negativa es aquella en que la mezcla suero-antígeno no evidencia aglutinación, la columna líquida aparece turbia y una suave agitación no revela grumos. Fenómeno de zona En ciertas ocasiones, puede ocurrir que se encuentre aglutinación en las diluciones más altas, pero no en las diluciones más bajas. Esta inhibición de la aglutinación en las diluciones bajas es llamada “fenómeno de zona” y está asociado a un exceso en la concentración de anticuerpos en el suero en las diluciones más bajas, lo que provoca una aglutinación no visible por estar fuera de la zona de equivalencia de la unión antígeno-anticuerpo. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 29 �Figura 4: Esquema Prueba simultánea de SAT y 2-ME. Informes de resultados Ejemplo: Negativo Neg I 25 25 1/25 I: Incompleto Tabla 2 Interpretación de los resultados para hembras bovinas mayores de 18 meses de edad vacunadas con Brucella abortus cepa 19 entre los 3 a 8 meses de edad BPAT SAT 2-ME INTERPRETACIÓN - NH * NH NEGATIVO + ≤ 50 - NEGATIVO + I 100 - SOSPECHOSO + 100 - SOSPECHOSO + I 200 - SOSPECHOSO + 200 - POSITIVO + 25 a 50 I 25 NEGATIVO + ≤ 25 ≤ 25 NEGATIVO + ≥ I 50 ≥ I 50 POSITIVO * NH: No se hace MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 30 �Tabla 3 Interpretación de los resultados para animales no vacunados (bovinos y otras especies) mayores de 6 meses de edad BPAT SAT 2-ME INTERPRETACIÓN - NH NH NEGATIVO + 25 - NEGATIVO + I 50 - SOSPECHOSO + 50 - SOSPECHOSO + I 100 - SOSPECHOSO + 100 - POSITIVO + 200 - POSITIVO + ≥ 25 ≥ 25 POSITIVO Preparación de soluciones para las pruebas de SAT/2-ME Solución salina 0,14 m • Cloruro de sodio 8,5 g • Agua destilada 1000 ml Solución salina fenolada Solución salina 0,14 M con la adición de 0,5 % de fenol. Conservar a temperatura ambiente por un plazo de 30 días. Se recomienda preparar el volumen necesario de trabajo diario o semanal. Solución 2-ME 0,1 m • 2-Mercaptoethanol 7,8 ml • Solución salina 0,14 M. 992,2 ml Importante: no utilizar solución salina fenolada El 2-mercaptoethanol es sensible a la luz y al calor y se deteriora rápidamente por exposición al aire. Se debe conservar en frasco color ámbar herméticamente cerrado a temperatura ambiente (22 ± 4 ºC). Leer detenidamente la hoja de seguridad. Evitar la inhalación, manipularlo en lo posible con máscara de gases o en cabina de extracción. Nunca pipetear con la boca. La solución de 2-mercaptoethanol ya preparada se puede conservar por una semana a temperatura ambiente (22 ± 4 ºC). Se recomienda preparar el volumen necesario de trabajo diario o semanal. • Solución de antígeno SAT (wright) al 2 % • Solución salina 0,14 M (no utilizar solución salina fenolada) 98 ml • Antígeno SAT (wright) (4,5 %) 2 ml MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 31 �La solución de antígeno al 2 % se puede conservar por una semana en heladera (5 ± 3 ºC). Descartar toda aquella solución que presente turbidez o signos de contaminación. Prueba del anillo en leche (PAL o MRT) solo para bovinos La prueba se diseñó para detectar la presencia de anticuerpos en leche de bovinos. Estos anticuerpos reaccionan con el antígeno coloreado con hematoxilina formando un complejo antígeno anticuerpo que queda adherido a la superficie de los glóbulos grasos y asciende con ellos a la superficie, de esta manera forma una capa o anillo de crema de color púrpura azulada, de intensidad variable según el grado de la reacción. Paralelamente, desaparece parcial o totalmente la tinción de la columna de leche. Si la muestra no contiene anticuerpos específicos, el antígeno no se fijará a los glóbulos grasos y permanecerá uniformemente distribuido, coloreando la columna de leche, mientras que la capa de crema forma un anillo de color blanco natural. Esta prueba se usa especialmente como diagnóstico presuntivo para detectar rebaños infectados. También se emplea en la vigilancia epidemiológica en áreas de control de la brucelosis. El porcentaje de grasa de la muestra influye en la prueba, ya que la formación del anillo de crema en la superficie dependerá del tenor graso. Los animales de rebaños positivos a la prueba de anillo en leche deben ser examinados por las pruebas serológicas para identificar aquellos infectados. Desarrollo Materiales: • Tubos de serología: tipo Wassermann de 13 mm por 100 mm, o tubos de Khan de vidrio claro y completamente limpio. • Pipetas 1 ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml. • Micropipetas de 10 a 100 µl y 1 ml. • Gradillas. • Timer. Equipos: • Heladera con temperatura controlada (5 ± 3 ºC). • Estufa con temperatura controlada (37 ± 2 ºC). • Termómetro calibrado. Reactivos: • Antígeno PAL con volumen celular aprox.4 %. • Conservar el antígeno en la heladera a 5 ± 3 °C. No se debe congelar, lo cual lo inutiliza, ya que se modifica la sensibilidad. • Muestras de leche refrigerada (no congelada). • Solución de formalina 1 %. • Muestras de leche controles positivo y negativo. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 32 �Ejecución del ensayo Las muestras de leche se deben mantener en refrigeración a una temperatura de 5 ± 3 ºC hasta que hayan transcurrido no menos de 24 horas desde su recolección (preferiblemente, 48 a 72 horas). No deben haber sido congeladas, calentadas, sometidas a agitación violenta ni conservadas durante más de 72 horas. • Llevar las muestras de leche y antígeno a temperatura ambiente (22 ± 4 º C) como mínimo unos 45-60 minutos previos a la realización del ensayo. Mezclar cada muestra invirtiendo varias veces el recipiente (tubo o frasco). • Garantizar la homogeneización del antígeno, agitando suavemente por inversión durante no menos 10 minutos (no usar vórtex). • Colocar 1 ml de la muestra en un tubo de vidrio 13 x 100 mm o tubo de Khan. La altura de la columna de leche en el tubo debe ser como mínimo de 25 mm. • Agregar 30 µl de antígeno a cada tubo. Mezclar bien invirtiendo el tubo varias veces, sin que se llegue a formar espuma. No debe quedar antígeno sobre las paredes. • Incubar en estufa a 37 ± 2 º C, durante una hora. Lectura - Anillo de crema, blanco; columna de leche, azul. + Anillo de crema y columna de crema, del mismo color, o casi igual. ++ Anillo de crema de color más pronunciado que la columna de leche. +++ Anillo de crema, azul oscuro; la columna de leche tiene aún un poco de color. ++++ Anillo de crema, azul oscuro; la columna de leche es blanca. Cualquier grado de + debe interpretarse como positivo. Observaciones • El exceso o la escasez de crema dificultan la interpretación de la prueba. También, la agitación vigorosa dificulta su realización. • El calentamiento de la leche interfiere con los resultados; por lo tanto, la prueba no se puede efectuar con leches pasteurizadas. • Cuando la prueba se efectúa el mismo día en que se ha recolectando la leche, se pueden obtener algunos resultados falsos positivos o dudosos. • La leche de calostro puede dar resultados falsos positivos. • La leche de vacas con mastitis también puede dar falsos positivos o impedir la interpretación de la prueba debido al descoloramiento del antígeno. • La leche de vacas próximas a secarse puede dar resultados dudosos o falsos positivos. • Hay vacas infectadas con Brucella que no eliminan anticuerpos por la leche. Estas vacas son positivas en las pruebas de sangre y negativas en la prueba del anillo. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 33 �Modificación de la prueba para tanques muy grandes Para hacer más sensible la prueba, aumentar la cantidad de leche manteniendo constante la cantidad del antígeno (30 µl). Cuando se ajusta la PAL para aplicarla a rebaños de gran tamaño (2 o 3 ml de leche), se añaden 0,1 ml de una mezcla de crema negativa no pasteurizada al tubo de ensayo y, a continuación, 30 µl del antígeno de la prueba del anillo. Después de mezclar, la prueba se incuba y se lee de la misma forma que para la PAL no ajustada. La mezcla de crema negativa se recoge mediante la separación de la leche compuesta por varias muestras y sin pasteurizar correspondiente a un rebaño de 25 o más vacas que sean negativas a brucelosis. < 150 vacas 1 ml de leche 150 – 450 vacas 2 ml de leche 451- 700 vacas 3 ml de leche Figura 5: Prueba de vigilancia epidemiológica para muestras de pool de leche. Enzimoinmunoensayo indirecto (I ELISA) (para suero o leche) Se realiza siguiendo el protocolo de los kits comerciales validados y aprobados para el diagnóstico oficial de la brucelosis en la República Argentina con el valor de corte establecido por el Senasa. El enzimoinmunoensayo (ELISA) es un método empleado habitualmente para la detección o cuantificación de sustancias, generalmente proteínas, que se encuentran en concentraciones muy bajas. El método combina la especificidad de unión de los anticuerpos con la amplificación de “señal” que brindan las reacciones catalizadas por enzimas. En la práctica clínica es la técnica inmunológica más empleada. Se utiliza para cuantificar, entre otras cosas, MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 34 �hormonas, marcadores tumorales, para determinar la presencia de antígenos microbianos y para la determinación cualitativa o cuantitativa de anticuerpos totales o frente a algún antígeno en particular. Etapas Previo al inicio de la ejecución del ensayo, equilibrar todos los componentes del kit a temperatura del laboratorio. 1. Adición en cada pocillo de los controles y sueros/leche problemas en la dilución indicada en el protocolo, de tal forma que si hay presencia de anticuerpos, estos reaccionarán específicamente con los antígenos fijados al soporte. 2. Incubación. 3. Lavado para eliminar los anticuerpos que no se hayan pegado al antígeno o uniones inespecíficas. Es importante que la placa no se seque, lo que podría incrementar la actividad inespecífica del ensayo. 4. Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima (generalmente anti IgG de especie), los cuales reaccionan con los anticuerpos específicos añadidos en el paso anterior y que se encuentran fijados a los antígenos. 5. Incubación. 6. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados (conjugado) que no hayan reaccionado. 7. Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. 8. Adición de la solución de frenado. 9. Lectura colorimétrica de la placa. Figura 6: Esquema ELISA indirecto. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 35 �Desarrollo Materiales y equipamiento: • Lector de placas automático con filtros (405 nm, 414 nm, 450 nm). • Computadora. • Agitador orbital de placas. • Lavador manual o automático de placas. • Heladera (5 ± 3 º C) y freezer (-20 ± 5 ºC). • Estufa de incubación (37 ± 2 ºC). • Vórtex. • Sistema purificador de agua (mínima calidad de agua requerida: destilada o desionizada). • Micropipetas monocanal de volumen variable (0,5 –10 µl, 5 - 50 µl, 50 -200 µl, 200 - 1000 µl). • Micropipetas multicanal de volumen variable (5 - 50 µl, 30 -300 µl). • Propipetas. • Dispensadores automáticos. • Timer. • Selladores de placas de acetato o parafilm. • Cubetas plásticas para pipetas multicanales. • Microtubos (para realizar las diluciones previas de los sueros), tubos o placas fondo en U. • Criotubos de polipropileno para el almacenamiento de los sueros. • Gradillas. • Material de vidrio (probetas, pipetas, erlenmeyers, etc., de distintos volúmenes). • Toallas o papel absorbente. Reactivos: Están incluidos en los kits comerciales autorizados por el Senasa y contienen: • Buffer de lavado • Buffer de dilución • Conjugado • Sustrato cromógeno • Solución de frenado • Sueros controles • Placas o tiras de 8 pocillos con el Ag pegado MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 36 �Precauciones para tener en cuenta al ejecutar la técnica de Elisa: • Seguir expresamente las instrucciones del kit para la preparación de todos los reactivos. • Ambientar los reactivos del kit a temperatura ambiente por lo menos una hora antes de su utilización. • No mezclar reactivos ni instrucciones de diferentes lotes o kits. • Evitar cualquier contaminación de los reactivos. • No utilizar los kits una vez superada la fecha de caducidad. • Utilizar una punta de pipeta nueva por cada muestra y reactivo. • Utilizar agua desionizada o destilada para la preparación / dilución de los reactivos que se empleen en el ensayo. • Corroborar que el lector de placas posee el filtro con el cual se debe leer la placa y seguir las instrucciones de uso del equipo. • Se recomienda trabajar las muestras por duplicado, para verificar la repetibilidad del operador. • Incluir sistemáticamente un control positivo y un control negativo siempre que se utilice el kit. • El sustrato es extremadamente sensible a la luz y a las contaminaciones, por lo que, se recomienda retirar del frasco únicamente el volumen que se vaya a utilizar y nunca devolver el sustrato sobrante al frasco original. • La solución de frenado es un ácido fuerte. En caso de contacto con la piel lavar inmediatamente con abundante agua. Figura 7: Placa de Elisa. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 37 �ELISA por competición / bloqueo La técnica consiste en la adsorción del antígeno lipopolisacárido liso (LPS-l) de Brucella sobre una matriz sólida (microplaca de 96 pocillos). A continuación, se añade la dilución de los sueros y el anticuerpo monoclonal, específico para un epitope de la cadena O del LPS-l. Se mezclan los dos junto con el antígeno adherido y se dejan incubar. Después de la incubación, se lava la microplaca y a continuación se añade el conjugado de anticuerpo antimonocolonal conjugado con enzima. Es importante mencionar que el anticuerpo del conjugado ha sido previamente adsorbido con suero normal (no infectado) de bovino, equino y humano para reducir las reacciones inespecíficas entre especies. La etapa final de la prueba es la adición de la solución substrato/cromógeno. Después de un periodo de tiempo fijo, se frena la reacción y se mide fotométricamente. Entre cada uno de los pasos del ensayo la placa debe ser lavada debidamente. En la ausencia de anticuerpos anti Brucella en los sueros problemas (sueros negativos), el anticuerpo monoclonal se liga con el epitope de la cadena O del LPS-l, lo cual es indicado en la prueba por el desarrollo de color. En el caso que el suero problema contenga anticuerpos anti Brucella (suero positivo), estos compiten con el anticuerpo monoclonal por sitios del epitope e inhiben el enlace del anticuerpo monoclonal con la porción de cadena O del LPS-l, manifestándose por la ausencia de color en el ensayo. Los sueros con anticuerpos posvacunales por B. abortus cepa 19 compiten en menor grado con el anticuerpo monoclonal porque su afinidad, especificidad y concentración es baja, lo que usualmente resulta en una reacción negativa (excepto los animales vacunados en los tres meses anteriores al sangrado). Diversos CELISA/bloqueo comerciales se encuentran disponibles en el mercado. En el caso del Elisa de bloqueo, sobre las placas con el LPS de Brucella abortus pegado, se depositan las muestras de suero, las cuales en el caso de contener anticuerpos específicos se unirán al antígeno. Tras eliminar el material no unido mediante lavados, se añade el anticuerpo monoclonal específico del LPS (epítope C) conjugado con una enzima. En el caso de que las muestras contengan anticuerpos frente a LPS, estos no permitirán la unión del conjugado, mientras que, si las muestras no contienen este tipo de anticuerpos, el conjugado se unirá libremente al antígeno de la placa. Tras sucesivos lavados para eliminar el material no unido, podremos revelar las reacciones acontecidas en la placa mediante la adición del sustrato adecuado, el cual desarrollará una reacción colorimétrica en presencia de la enzima (es decir en presencia del monoclonal conjugado con enzima). De este modo la aparición de una reacción coloreada, indicará que la muestra evaluada no contiene anticuerpos específicos del LPS de Brucella spp. y la ausencia de color indicará que la muestra es positiva y contiene dichos anticuerpos. Desarrollo Materiales y equipamiento, reactivos, cuidados y precauciones, manejo y conservación de las muestras: Idem Elisa indirecto. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 38 �Figura 8: CELISA. Tabla 4 Guía de problemas y soluciones en la técnica de ELISA Señal Posible causa Solución 1. Error de pipeteo 2. Falta de mezcla de reactivos 3. Falta de lavados Práctica Mejorar técnica Precaución 1. Se omitió el substrato 2. Concentración substrato errónea Revisar Revisar 3. Conjugado muy diluido 4. Se omitió el conjugado Revisar Revisar Color parejo en toda la placa 1. Conjugado muy concentrado 2. Falla en el lavado 3. Substrato contaminado Controlar Mejorar técnica Revisar Elevado color de fondo “background” 1. Reacción inespecífica 2. Material de vidrio sucio 3. Agua de mala calidad Cambiar solución de lavado Mejorar lavado Controlar calidad Desarrollo de color muy rápido 1. Substrato muy concentrado 2. Conjugado muy concentrado Revisar Controlar dilución Desarrollo de color muy lento 1. Substrato muy diluido 2. Conjugado muy diluido 3. Concentración cromógeno errónea Revisar Revisar dilución Revisar Efecto borde 1. Incubación despareja 2. Resecación por aire 3. Tampón de lavado residual Utilizar estufa Mantener la placa cubierta Eliminarlo Color irregular No hay color MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 39 �Figura 9: Modelo de protocolo de Trabajo ELISA. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 40 �Ensayo de polarización fluorescente para la detección de anticuerpos contra brucella en suero El ensayo de polarización fluorescente (FPA) para la detección de anticuerpos contra Brucella tiene la capacidad de ser una prueba multiespecies, lo que permite el diagnóstico presuntivo en bovinos, porcinos, caprinos, ovinos, ciervos y bisontes. Este ensayo, validado para bovinos, tiene la capacidad de distinguir animales infectados con Brucella de los animales vacunados con B. abortus cepa 19 a partir de los 3 meses posvacunación aproximadamente, y de los animales con reacción cruzada con bacterias gramnegativas en más del 90% de los casos. A diferencia de los enzimoinimunoensayos, el FPA es un ensayo homogéneo que no requiere la necesidad de varias etapas de lavado. Los reactivos son agregados secuencialmente en solución y el tiempo total de la prueba no excede los 5 minutos para cada muestra. En resumen, la prueba involucra la adición de una determinada cantidad de suero a una solución tampón de dilución en un tubo de vidrio. A continuación, la muestra es equilibrada por aproximadamente cinco minutos, posteriormente se realiza una primera lectura en el analizador fluorescente para obtener una lectura blanco de referencia (autofluorescente). A continuación, el antígeno conjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC) es agregado a la solución y luego la muestra es equilibrada nuevamente por un mínimo de dos minutos para permitir que el antígeno y el anticuerpo interactúen. La muestra es leída nuevamente en el polarizador. Si anticuerpos específicos contra Brucella están presente (suero positivo), el resultado será un valor alto de unidades de mili polarización (mP). En ausencia de anticuerpos anti Brucella (suero negativo), el resultado es un valor bajo en mP. El valor de corte para distintas especies animales para la República Argentina se ha determinado en: Bovinos: • Animales negativos: < 94 mP. • Animales sospechosos: Los valores entre 94 mP y 104 mP. • Animales positivos: valores igual o mayor a 105 mP. Caprinos y porcinos: • Animales negativos: < 85 mP. • Animales positivos: valores igual o mayor a 85 mP. Ovinos (para el diagnóstico de B. melitensis, no para B. ovis): • Animales negativos: < 80 mP. • Animales sospechosos: Los valores entre 80 mP y 90 mP. • Animales positivos: valores igual o mayor a 91 mP. Se modifica el valor de corte en la especie ovina (para el diagnóstico de B. melitensis, no para B. ovis) con una sensibilidad del 97 % y una especificidad del 95 %. Programa GraphPad Prism. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 41 �Desarrollo Materiales y equipamiento: • Lector de polarización fluorescente. • Vórtex. • Micropipetas monocanal de volumen variable (0,1– 10 µl, 20 –200 µl, 200– 1000 µl). • Heladera (5 ± 3 º C) y freezer (-20 ± 5 º C). • Tubos de vidrio: Tubos de borisilicato de 10 x 75 mm. • Material de vidrio. • Termómetro de temperatura ambiental. • Computadora e impresora. Reactivos: Están incluidos en los kits comerciales autorizados por el Senasa e incluyen: • Buffer de dilución. • Sueros controles positivo y negativo. • Antígeno marcado con isotiocionato de fluoresceína. Ejecución del ensayo Preparación de los reactivos Se deben seguir las instrucciones del prospecto que acompaña al kit comercial. Preparación del equipamiento/instrumentos El usuario debe leer el manual de instrucciones y familiarizarse con los controles de los instrumentos, calibración y la solución de los problemas de todos los equipos previos a la ejecución del ensayo. Preparación de la prueba En el día de la prueba preparar y analizar los sueros controles, siguiendo con lo especificado en los puntos indicados a continuación. Si el valor de mP de los sueros controles no se ajusta dentro de los límites especificados, el ensayo debe ser rechazado. Dejar a temperatura ambiente los reactivos, sueros controles y problemas por lo menos dos (2) horas antes de su uso. Se debe controlar y registrar en la planilla de trabajo la temperatura ambiente al momento del ensayo. Encender el equipo y seguir las instrucciones de uso: • Para bovinos dispensar 990 µl de la solución tampón de dilución de sueros en los tubos de vidrio de borosilicato (10x 75mm). • Dispensar 10 µl de suero bovino (dilución 1/100) a analizar dentro de los tubos y mezclar bien con vórtex evitando la formación de espuma. • Para porcinos y caprinos dispensar 960 µl de la solución tampón de dilución de sueros en los tubos de vidrio de borosilicato (10x 75mm). • Dispensar 40 µl de suero porcino o caprino (dilución 1/25) a analizar dentro de los tubos y mezclar bien con vórtex. • Para ovinos (B. melitensis) dispensar 975 µl de la solución tampón de dilución de sueros. • Dispensar 25 µl de suero ovino (dilución 1/40). MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 42 �• Esperar como mínimo cinco minutos a que la solución suero-Buffer se estabilice. • Continuado el período de equilibración, realizar la lectura blanco de las muestras. • Dispensar 10 µl de antígeno conjugado con FITC determinado en cada tubo y mezclar bien con vórtex. Es importante evitar la formación de espuma en la muestra. En caso de que el suero se vea contaminado con partículas en suspensión, dejar el suero equilibrarse por lo menos 10 minutos para asegurarse que estas partículas hayan sedimentado o centrifugar el mismo. Las partículas inespecíficas pueden interferir con la lectura de la muestra dado que la misma se basa en el peso molecular de las partículas en suspensión. • Dejar que la muestra y el antígeno se equilibren por lo menos por dos minutos. • Leer las muestras exactamente en el mismo orden que fueron blanqueadas. Figura 10: Esquema ensayo de polarización fluorescente. Lectura e interpretación Los sueros controles del ensayo deben estar dentro de los límites especificados por el fabricante del kit utilizado según el control de calidad desarrollados durante la estandarización, optimización e implementación del ensayo. Los resultados de los sueros controles y problemas son expresados en unidades de mili polarización (mP) de la actividad del suero contra el antígeno. Se debe controlar y registrar en la planilla de trabajo la temperatura ambiente al momento del ensayo. Aceptación de los controles Si los valores de mP de los sueros controles están fuera de los límites especificados, la prueba será rechazada y los controles y las muestras deben ser repetidas. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 43 �Fijación de complemento La fijación del complemento (FCT) es la prueba de referencia internacional para el diagnóstico serológico de la brucelosis bovina, ovina y caprina. La prueba permite la detección y cuantificación relativa de los anticuerpos específicos antibrucélicos “capaces de fijar” el complemento (IgG1 y algunas IgM específica), cuya presencia en determinados niveles posee una gran correlación con el estado de “Animal infectado”. La FCT es una prueba confirmatoria ampliamente usada y aceptada pese a la complejidad de su realización y a la necesidad de buenas instalaciones y personal entrenado para titular y mantener los reactivos adecuadamente. La técnica se desarrolla en dos etapas: en la primera, el antígeno y el suero problema (cuyo complemento se destruyó previamente por calentamiento a baño maría) se incuba en presencia de complemento de cobayo. Después de dejar reaccionar la mezcla de reactivos, se mide en la segunda etapa la cantidad de complemento libre (que indica la ausencia o presencia de anticuerpos antibrucelares en suero y su cantidad) mediante la incorporación de un “sistema indicador” o “sistema hemolítico” formado por eritrocitos de carneros recubiertos de anticuerpos de conejo (hemolisina) como complejo antígeno-anticuerpo alternativo. La presencia de anticuerpos en el suero problema induce la formación de inmunocomplejos en la primera etapa de la reacción que determina la activación del sistema complemento y el agotamiento de sus factores. En la segunda etapa de la reacción no existe complemento libre que pueda activarse ante la presencia del “sistema hemolítico”. El resultado es la ausencia de hemólisis (resultado positivo). Alternativamente, la lisis de los eritrocitos (hemólisis) es indicadora de la existencia de complemento libre en la segunda etapa de la reacción, que no se agotó en la primera por no haberse formado inmunocomplejos ante la ausencia de anticuerpos antibrucelares (resultado negativo). Se han propuesto varios métodos para FCT que utilizan diferentes concentraciones de eritrocitos de oveja (GR) frescos o conservados (normalmente se recomienda una suspensión al 2 %, 2,5 % o al 3 %). Los GR están sensibilizados con un volumen igual de suero anti-GR de conejo diluido (hemolisina) hasta contener varias veces (en general de dos a cinco veces) la concentración mínima necesaria para producir un 100 % de lisis de los GR en presencia de soluciones titulada de complemento de cobayo. Desarrollo Materiales: • Tubos de ensayo. • Material de vidrio de volúmenes varios. • Gradillas. • Film para cubrir placas. • Puntas de pipetas (tips). • Placas de polipropileno de 96 pocillos con fondo en U. • Cubetas o reservorios de plástico para reactivos. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 44 �Equipos: • Pipetas monocanales con rangos de 2 µl a 20 µl, 20 µl a 200 µl y 500 µl a 5000 µl. • Pipetas multicanales de rango 20 µl a 200 µl. • Centrífuga. • Centrífuga de placas. • Estufa con temperatura controlada (37 ± 2 ºC). • Heladera con temperatura controlada (5 ± 3 °C). • Freezer con temperatura controlada (-20 ± 5 °C). • Agitador de microplacas. • Vórtex. • Baño térmico. • Espectrofotómetro. Reactivos: • Solución buffer: Ver Anexo FCT I Solución GR 2%: ver Anexo FCT II Titulación Hemolisina: Ver Anexo FCT III Sistema hemolítico Anexo FCT IV • Titulación Complemento: Ver Anexo FCT V Titulación Antígeno: Ver Anexo FCT VI Sueros controles: • Suero control positivo bovino. • Suero control negativo bovino. Manejo y conservación de las muestras • Conservar los sueros en heladera (5 ± 3 º C) no más de dos días, para períodos mayores, conservarlos a –20 ± 5 º C. • Evitar repetidos ciclos de congelamiento/ descongelamiento. • No usar sueros contaminados, que presenten precipitados o intensa hemólisis. • Homogeneizar con el uso de vórtex los sueros antes de usarlos. Inactivación de los sueros Los sueros controles y las muestras de suero se inactivan 30 minutos en baño termostático a 58 ± 2 ºC para eliminar el complemento natural contenido en las mismas. La temperatura del baño termostático se controla mediante la introducción de un termómetro certificado en el agua durante todo el tiempo de exposición de las muestras. - Los sueros ovinos se inactivan por 30 minutos en baño termostático entre 60 - 63 °C (en caso de que los sueros sean anticomplementarios, se recomienda realizar otro ciclo de inactivación de 30 minutos). - Las muestras podrán ser sumergidas en el baño termostático en tubos de ensayo tapados herméticamente, contenidos en gradillas, debidamente identificados. Volumen de suero sugerido para inactivar: 200 µl. - La inactivación de las muestras podrá realizarse un día antes del análisis. En este caso, una vez retiradas del baño termostático se dejan a tem- MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 45 �peratura ambiente durante al menos 30 minutos para luego conservar en heladera. Si el análisis se realiza después de las 24 horas, las muestras ya inactivadas se conservan a -20 ± 5 ºC. Condiciones del ensayo El procedimiento se desarrolla en caliente (incubación en estufa a 37 ± 2 º C) y se utilizan los siguientes reactivos en volúmenes de 25 µl: a. Diluciones en base 2, a partir de 1/2 de los sueros problemas en SB. b. Solución de complemento de cobayo en SB que contenga 2 UC (100 %). c. Solución de antígeno en SB a la dilución de trabajo. d. Sistema hemolítico obtenido por la mezcla de volúmenes iguales, de una solución de suero hemolítico en SB que contenga 2UH (100 %) y de una suspensión de glóbulo rojos de carnero en SB al 2 %. Ejecución Dependiendo del número de muestras que se realizarán, se podrán incluir los controles en la misma placa o utilizar una placa para los sueros y otra para los controles. Dilución de las muestras de suero El procedimiento de dilución se realiza de forma general en placa fondo en U, mediante la utilización de volúmenes de 25 μl. La secuencia de operaciones se detalla en la tabla 1. La homogeneización de los dos componentes de cada dilución se realiza mediante 5 aspirado/dispensado con la micropipeta. Tabla 1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 Suero 25 µl 25 µl de la dilución 1/2 25 µl de la dilución 1/4 25 µl de la dilución 1/8 25 µl de la dilución 1/16 25 µl de la dilución 1/32 25 µl de la dilución 1/64 25 µl de la dilución 1/128 SB 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25µl Sueros controles Control positivo: El procedimiento de dilución se realiza mediante la utilización de volúmenes de 25 μl, siguiendo la secuencia de operaciones que se detalla en la tabla 2. La homogeneización de los dos componentes de cada dilución se realiza mediante 5 aspirado/dispensado con la micropipeta. Tabla 2 1/12,5 1/25 Suero positivo 01/05 25 µl SB - 25 µl 25 µl 1/50 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 25 µl de la dilución 1/25 25 µl de la dilución 1/50 25 µl de la dilución 1/100 25 µl de la dilución 1/200 25 µl de la dilución 1/400 25 µl de la dilución 1/800 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25µl MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 46 �Control negativo: El suero control negativo se diluye siguiendo el mismo protocolo de los sueros problema (1/2, 1/4, 1/8 etc.). Controles del ensayo a. Control de la ausencia de poder anticomplementario del antígeno: Se dispensa por duplicado en la placa 25 μl/pocillo de SB, 25 μl/pocillo de C y 25 μl/pocillo de antígeno. b. Control sistema hemolítico con complemento: Se dispensa por duplicado en la placa 50 μl/pocillo de SB y 25 μl/pocillo de C. c. Control sistema hemolítico sin complemento: Se dispensa por duplicado en la placa 75 μl/pocillo de SB. Disposición de los sueros en la placa Los controles y muestras diluidas deben quedar dispuestas en la placa fondo en U (25 µl/pocillo) según indica la tabla 3. Tabla 3 1 Control positivo 2 Control negativo 3 muestra 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 1/12,5 1/2 1/2 1/2 1/2 1/2 1/2 1/2 1/2 1/2 1/2 1/2 B 1/25 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 C 1/50 1/8 1/8 1/8 1/8 1/8 1/8 1/8 1/8 1/8 1/8 1/8 D 1/100 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 1/16 E 1/200 1/32 1/32 1/32 1/32 1/32 1/32 1/32 1/32 1/32 1/32 1/32 F 1/400 1/64 1/64 1/64 1/64 1/64 1/64 1/64 1/64 1/64 1/64 1/64 G 1/800 1/128 1/128 1/128 1/128 1/128 1/128 1/128 1/128 1/128 1/128 1/128 H 1/1600 1/256 1/256 1/256 1/256 1/256 1/256 1/256 1/256 1/256 1/256 1/256 Preparación y dispensado de las soluciones de antígeno y complemento • Preparar la solución de C según la dilución de trabajo establecida como óptima y dispensar 25 µl/pocillo de dicha solución en todas las muestras. • Preparar la solución de antígeno según la dilución de trabajo establecida como óptima y dispensar 25 µl/pocillo de dicha solución en todos los pocillos salvo en la dilución 1/2 (muestras y control negativo) y 1/12,5 (control positivo) Fila A, las cuales actuarán como controles de poder anticomplementario (PAC) de cada suero. Primera incubación en caliente • Tapar y agitar la placa en agitador de placas durante 2-4 minutos. • Incubar a 37 ± 2 ºC durante 30 minutos. Dispensado del sistema hemolítico • Quince (15) minutos antes de finalizar la primera incubación, preparar e incubar a 37 ± 2 ºC durante 15 minutos el sistema hemolítico según el Anexo FCT IV. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 47 �• Finalizada la primera incubación, dispensar 25 μl/ pocillo del sistema hemolítico en todos los pocillos de las placas incluida la placa de los controles. Segunda incubación en caliente • Tapar y agitar las placas en agitador de placas durante 2-4 minutos. • Incubar a 37 ± 2 ºC durante 30 minutos. Centrifugación de la placa Finalizada la incubación, centrifugar la placa a una fuerza de 1000 RPM durante 3 minutos o bien dejarla en reposo en heladera durante una hora antes de su lectura. Lectura de resultados El grado de fijación del complemento se manifiesta por la presencia (negativos) o ausencia (positivos) de hemólisis del sistema hemolítico. La reacción positiva se cuantificará mediante la determinación del título y su grado de hemólisis. Reacción positiva • Sedimento en grado variable de los glóbulos rojos en el fondo del pocillo. • El sobrenadante estará afectado por un cierto tinte rojizo en función de la hemólisis que se haya producido. Este grado de hemólisis debe cuantificarse y consignarse mediante un sistema de cruces. Figura 11: Placa fijación de complemento. ++++ Sobrenadante translúcido, en el fondo botó de depósito de GR 0 % de hemólisis +++ Sobrenadante rojizo en un 25 % de intensidad, en el fondo un deposito claro de GR 25 % de hemólisis ++ Sobrenadante rojizo en un 50 % de intensidad, en el fondo un deposito tenue de GR 50 % de hemólisis + Sobrenadante rojizo en un 75 % de intensidad, en el fondo un deposito muy tenue de GR 75 % de hemólisis Sobrenadante rojo cristalino, ausencia de depósito de GR 100 % de hemólisis Negativo MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 48 �Determinación del título del suero Será la inversa de la dilución más alta que siga dando algún grado de sedimentación de los GR. Este grado de fijación será informado mediante el sistema de cruces descripto y convertido a UIFCT. - En el caso de los bovinos vacunados con Brucella abortus S19, para el diagnóstico de las Brucellas lisas (B. abortus), se considera un resultado positivo cualquier valor ≥ 40 UIFCT (1/8 ++). - Para animales no vacunados (bovinos, caprinos, ovinos y porcinos) se considera positivo cualquier valor ≥ 20 UIFCT (1/4 ++). Expresión de los resultados en unidades internacionales de fijación del complemento El sistema de expresión de los resultados en UIFCT, ajustados al suero patrón internacional OIEISS (en el caso de las Brucellas lisas), usado a continuación, se basa en el “Procedimiento IZS TE B2. 1.6 SOP 004 del Centro Internacional de Referencia OIE para Brucelosis” (Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell”Abruzzo e del Molise G. Caporale. Teramo. Italia) y el “Manual de Procedimiento del Laboratorio Agroalimentario” (Gobierno de Aragón. España. Tabla 4). Tabla 4 Interpretación en UIFCT Dilución % de Fijación del Complemento 1000 UIFCT (1/200) + ++ +++ ++++ 16,6 20 23,2 26,6 1:8 + ++ +++ ++++ 33,2 40 46,4 53,2 1:16 + ++ +++ ++++ 66,4 80 92,8 106,4 + ++ +++ ++++ 132, 8 160 185,6 212,8 1:64 + ++ +++ ++++ 265,6 320 371,2 425,6 1:128 + ++ +++ ++++ 531,2 640 742,4 851,2 + ++ +++ ++++ 1062,4 1280 1484,8 1702,4 1:4 1:32 1:256 MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 49 �Controles del ensayo La aprobación del ensayo debe realizarse si los controles han dado los resultados esperados: Controles Resultado esperado Suero control positivo 50 % de fijación (++) en la dilución 1:200 que corresponde a 1000 UIFCT (Brucellas lisas) Suero control negativo 100 % de hemólisis en todos las diluciones, ausencia de fijación de complemento Control de poder anticomplementario de los sueros 100 % de hemólisis ausencia de fijación del complemento en la dilución 1:2 (sin antígeno) Control de ausencia de poder anticomplementario del antígeno 100 % hemólisis Control del sistema hemolítico sin C 0 % de hemólisis Control del sistema hemolítico con C 100 % de hemólisis Criterio de aceptación del análisis: El ensayo se debe considerar APROBADO/NO APROBADO a) APROBADO: • Los controles de antígeno, sistema hemolítico con y sin complemento dan los resultados pre-establecidos. • El control de suero positivo da el resultado pre-establecidos (1:200) con una variación máxima de (± 2 ++). • El control negativo da un resultado Negativo. b) NO APROBADO: si uno de los controles no da el resultado esperado, se repite el ensayo. La presencia de, al menos, un 25 % de sedimento de eritrocitos (+) de la fila A (dilución ½) indica poder anticomplementario en la muestra. En este caso, se informa el resultado de PAC, lo que implica la solicitud de una nueva extracción de la toma de muestra. Para facilitar la lectura e interpretación de los resultados se puede preparar una escala visual del siguiente modo: • En un tubo se coloca 100 µl de la suspensión de glóbulos rojos al 2 % + 900 µl de SB 1X. • En otro tubo colocar 100 µl de la suspensión de glóbulos rojos al 2 % + 700 µl de agua destilada, agitar para provocar la completa hemólisis de los GR (solución de hemoglobina), y agregarle 200 µl de SB 5X para mantener la presión osmótica. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 50 �Estos dos tubos mantienen la misma relación de GR. intactos en el primer caso y de glóbulos lisados en el segundo, que el que el 0 % de hemólisis y el 100 % de hemólisis en la prueba. De esta manera mezclándolas en distintas proporciones podremos obtener la imagen que corresponde a los distintos grados de hemólisis, luego de centrifugar durante 5 minutos a 1000 rpm. PORCENTAJE DE HEMÓLISIS Reactivos en µl 0% Solución hemolisada Suspensión de glóbulos rojos 0 100 10 % 10 90 20 % 20 80 30 % 40 % 50 % 60 % 70 % 80 % 90 % 30 40 50 60 70 80 90 100 60 50 40 30 20 10 0 70 MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 100 % 51 �Anexos MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 52 �Anexo FCT I: Solución Buffer (SB) Realizar una solución de stock de calcio/magnesio como indica la tabla 1, luego conservar en refrigeración durante 6 meses o eliminar si hay turbidez producto de contaminación. Solución de stock calcio 0,3 M y magnesio 1 M Ca Cl2. Mg 3,7g Cl2. 9,5 g Agua destilada 100 ml • Añadir 1ml de solución stock a 1 litro de solución salina 0,85 % (NaCl2 8,5 g/agua destilada 1 litro). • La solución de trabajo debe tener un pH de 7,3 - 7,4. • Luego de su uso, conservar en refrigeración por 7 días. II: Preparación de la suspensión de GR 2 % a) Lavado de los GR 1. Homogeneizar cuidadosamente el frasco que contiene los eritrocitos. 2. En un tubo cónico resuspender los eritrocitos en una proporción de 1 volumen de GR + 5 volúmenes de SB, luego homogeneizar cuidadosamente. 3. Centrifugar aproximadamente a 1500 rpm durante 5 minutos y luego eliminar el sobrenadante con una pipeta. 4. Repetir la resuspensión de los GR en SB, centrifugar de la misma manera anteriormente descripta y luego eliminar el sobrenadante con una pipeta. 5. Realizar la última resuspensión de los GR en SB y centrifugar aproximadamente a 1500 rpm durante 10 minutos. 6. Luego de la última centrifugación descartar el sobrenadante, el cual debe estar libre de hemólisis. 7. El método para la estandarización de la suspensión de glóbulos rojos 2 % se podrá realizar por medio de dos técnicas. • Método espectrofotométrico. • Método en cámara de Neubauer. Método espectrofotométrico: 1. Tomar del tubo cónico 0,2 ml de GR ya lavados y diluirlo en 9,8 ml de SB (2 %). 2. Realizar un blanco de lectura en el espectrofotómetro dispensando 2,5 ml agua destilada en la celda o tubo del espectrofotómetro. 3. Determinar la lisis 100 % de los GR realizando una dilución 1/15 con agua destilada, agregando en un tubo que contiene 2,8 ml de agua destilada 0,2 ml de glóbulos rojos al 2 %. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 53 �4. Una vez lisados los eritrocitos, leer la densidad óptica (DO) a 545 nm. 5. La DO esperada debe ser de 0.330 ± 0.05. El laboratorio debe determinar según el modelo de espectrofotómetro cual es la DO optima que indique la concentración de GR al 2 %. Método en cámara de Neubauer: 1. Tomar del tubo cónico 0,2 ml de GR ya lavados y diluirlos en 9,8 ml de SB (2 %). 2. Realizar una dilución 1/200 y hacer el recuento de glóbulos rojos en la cámara. 3. La suspensión deberá tener 5,4 (± 0,2) X 108 GR / ml. III: Titulación Hemolisina Preparación de las soluciones “madres” de hemolisina Se prepararán 15 diluciones de hemolisina (tabla 1). En cada tubo se dispensan los siguientes volúmenes de SB y de hemolisina. La solución se homogeniza mediante agitación en vórtex. Tabla 1: Preparación de las soluciones “madres” de hemolisina N.° de tubo Dilución SB (ml) Hemolisina 1 1/50 4,9 100 µl 2 1/100 2 2 ml T1 3 1/150 7,45 50 µl 4 1/200 1 1 ml T2 5 1/250 12,5 50 µl 6 1/500 1 1 ml T5 7 1/1000 6 2 ml T5 8 1/2000 1 1 ml T7 9 1/3000 2 1 ml T7 10 1/4000 3 1 ml T7 11 1/5000 4 1 ml T7 12 1/6000 5 1 ml T7 13 1/7000 3 0,5 ml T7 14 1/8000 3,5 0,5 ml T7 15 1/9000 4 0.5 ml T7 MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 54 �Preparación de las soluciones “hijas” de hemolisina • En la filas B, C, D, G y H de una placa fondo en U dispensar 25 µl/pocillo de SB excepto de las columnas 10, 11 y 12 de las filas A, B, C y D (tabla 2). • En la filas A (excepto las columnas 10, 11 y 12) y F de la placa dispensar 50 µl/pocillo de las diluciones “madres’’ de hemolisina preparadas en la batería de tubos de ensayo, según protocolo de la tabla 1. • Con una pipeta multicanal recoger 25 µl por pocillo de la fila A y pasar a la fila B. La homogenización de los dos componentes de cada dilución se realiza mezclando mediante 5 golpes de aspirado y dispensado de la pipeta. Recoger 25 µl / pocillo de la fila B y pasar a la fila. • Volver a homogenizar. Recoger 25 µl / pocillo de la fila C y pasar a la D. Homogeneizar y recoger 25 µl / pocillo y descartar. • De la misma forma, haga diluciones de la fila F sobre las filas G y H. • Las diluciones finales obtenidas se detallan en la tabla 3. Tabla 2. Planilla de localización de las diluciones ‘’madres’’ de hemolisina y SB 1 A B C D 2 3 4 5 6 7 8 9 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 550 µl 50 µl 50 µl de T1 de T1 de T1 de T2 de T2 de T3 de T3 de T4 de T4 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB 10 11 12 E F G H 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl de T5 de T5 de T6 de T7 de T8 de T9 de T10 de T11 de T12 de T13 de T14 de T15 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB 25 µl de 25 µl de 25 µl de 25 µl de 25 µl de 25 µl de 25 µl de 25 µl de 25 µl de 25 µl de 25 µl de 25 µl de SB SB SB SB SB SB SB SB SB SB SB MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS SB 55 �Tabla 3. Diluciones finales de hemolisina 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 1/50 1/50 1/50 1/100 1/100 1/150 1/150 1/200 1/200 B 1/100 1/100 1/100 1/200 1/200 1/300 1/300 1/400 1/400 C 1/200 1/200 1/200 1/400 1/400 1/600 1/600 1/800 1/800 D 1/400 1/400 1/400 1/800 1/800 1/1200 1/1200 1/1600 1/1600 F 1/250 1/250 1/500 1/1000 1/2000 1/3000 1/4000 1/5000 1/6000 1/7000 1/8000 1/9000 G 1/500 1/500 1/1000 1/2000 1/4000 1/6000 1/8000 1/10000 1/12000 1/14000 1/16000 1/18000 H 1/1000 1/1000 1/2000 1/4000 1/8000 1/12000 1/16000 1/20000 1/24000 1/28000 1/32000 1/36000 E Preparación y dispensado de la suspensión de glóbulos rojos Se prepara una suspensión de GR al 2 % según lo indicado anteriormente. En este ensayo se prepara una suspensión de 5 ml. 1. Dispensar la suspensión (25 µl/pocillo) en los pocillos de la microplaca. 2. Cubrir y agitar la microplaca en un agitador de placas durante 30 minutos a bajas revoluciones. Esto proporciona la sensibilización de los GR (unión con los anticuerpos presentes en las diluciones de hemolisina). 3. Dispense 25 µl/pocillo de SB en las filas A, B, C, D, F, G y H. En los pocillos de la columna 1 se dispensan adicionalmente otros 25 µl (esta columna actúa como control del poder hemolítico de la hemolisina). Preparación y dispensado de una solución de complemento El objeto es preparar una solución de complemento a una concentración tal que siempre haya reactivo disponible para detectar una posible unión de Ag (GR) Ac (hemolisina diluida). Para complementos (comerciales) que den un título (unidad de complemento) superior a 1/90, debe prepararse una solución de 1/30. Para complementos que den títulos inferiores, la solución que se deberá preparar será de 1/10 - 1/20 (tabla 4). MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 56 �Tabla 4: Dilución del complemento TV Complemento Solución de complemento 1/20 5,7 ml 0,3 ml Solución de complemento 1/30 5,8 ml 0,2 ml 1. Dispensar 25 µl/pocillo de la solución de complemento en las filas A, B, C, D, F, G y H, excepto en los pocillos de la columna 1. 2. Cubrir y agitar la placa durante 2-4 minutos en agitador de placas. Incubación Incubar a 37 ± 2 ° C, durante 30 minutos. Cálculos y expresión de resultados El resultado de la relación de cada pocillo se evalúa por el grado de hemólisis presente en el mismo y se consigna mediante un sistema de cruces (tabla 5). Tabla 5: Expresión de resultados ++++ Sobrenadante translúcido, en el fondo botón de depósito de GR 0 % de hemólisis +++ Sobrenadante rojizo en un 25 % de intensidad, en el fondo un deposito claro de GR 25 % de hemólisis ++ Sobrenadante rojizo en un 50 % de intensidad, en el fondo un deposito tenue de GR 50 % de hemólisis + Sobrenadante rojizo en un 75 % de intensidad, en el fondo un deposito muy tenue de GR 75 % de hemólisis Sobrenadante rojo cristalino, ausencia de depósito de GR 100 % de hemólisis Negativo Los resultados de la lectura se emiten en la hoja de laboratorio correspondiente. Cálculos de los resultados • Se define la unidad de hemólisis (UH) como la dilución más alta que permita la lisis del 100 % de los eritrocitos en el pocillo. • Sobre la hoja del laboratorio se comprueba la repetibilidad del análisis, constatando que los pocillos que contengan la misma dilución de hemólisis presentan un grado de hemólisis similar. • Se elige la UH de la dilución en la que se obtenga 100 % de hemólisis. Si existen dudas entre dos diluciones se elegirá la dilución más baja (mayor concentración de hemolisina). • La dilución de trabajo (DT) se establece multiplicando por 2 la UH, es decir 2 UH 100 %. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 57 �Ejemplo: Si la UH se ha establecido en 1/1000 DT= 2 x 1/1000= 1/500 • Los cálculos y las proporciones finales de reactivos se registran en hojas de trabajo. • Se podrá realizar una dilución 1/50 o 1/100 de la hemolisina en SB conservando a -20 ± 5 º C para luego diluirla al título de trabajo. Se registra el lote, fecha y cantidad de hemolisina diluida. IV: Sistema hemolítico • Para la preparación del sistema hemolítico, el volumen total del sistema depende del número de placas que se deberán utilizar (1 placa= 96 pocillos fondo en U). Ejemplo para dos placas: 2 placas x 2,4 ml = 4.8 ml = 5 ml (se prepara un volumen adicional en previsión de perdidas) • Dispensar en un frasco 2,5 ml de GR 2 % y luego 2,5 ml de hemolisina al título de uso agitando suavemente para homogenizar las dos suspensiones e incubar a 37 ± 2° C, durante 15 minutos. V: Titulación complemento Se llama complemento al suero de cobayo completo, que contiene el sistema enzimático denominado ‘’sistema complemento’’, cuya función en la técnica de fijación del complemento es la de detectar uniones especificas antígeno-anticuerpo. En el caso que en dichas uniones una de las partes sean glóbulos rojos, es capaz de lisarla, como en el caso del sistema hemolítico que se utiliza en la reacción de fijación del complemento, donde los hematíes de carnero hacen el papel de antígeno y el suero de conejo (hemolisina) de anticuerpos. El complemento que sea objeto de titulación debe descongelarse dejándolo llevar a temperatura de laboratorio. Una vez reconstituido o descongelado se mantendrá en refrigeración y solo se sacará de la heladera en el momento de su utilización. Si se prevé que se va a utilizar más de un vial, se juntarán todos en uno y se titulará el conjunto. Preparación de las soluciones “madres” del complemento 1. Realizar 6 diluciones “madres’’ del complemento, empleando para ello tubos de ensayo. Tabla 1 de este anexo. 2. En cada tubo se dispensan los siguientes volúmenes de SB y de complemento. La solución se homogeneiza perfectamente mediante un agitador. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 58 �Tabla 1. Diluciones “madre” del complemento Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 SB µl 725 850 975 1100 1225 1350 C µl 25 25 25 25 25 25 Preparación de las soluciones “hijas” en placas de ensayo y dispensado del SB 1. En la filas B, C y D de una placa fondo en U, dispense 25 µl/pocillo de SB (tabla 2). 2. En la filas A de la placa, dispense 50 µl/pocillo de las diluciones “madres’’ de complemento por duplicado según protocolo descripto en tabla 1. 3. Con una pipeta multicanal, recoja 25 µl/pocillo de la fila A y trasváselos a la fila B. La homogeneización de los dos componentes de cada dilución se propiciará mezclando mediante 5 golpes de aspirado y dispensación de la pipeta. Recoja 25 µl/pocillo de la fila B y páselo a la fila. 4. Vuelva a homogenizar. Recoja 25 µl/pocillo de la fila C y páselo al D. Homogenice y recoja 25 µl/pocillo y descártelos (las diluciones que han quedado preparadas en la placa se detallan en la tabla 3). 5. Dispense a continuación 50 µl/pocillo de SB en todas las filas de la placa. 6. Agite la placa durante 2-4 minutos en agitador de placas. Tabla 2. Planilla de localización de las diluciones “madres’’ de complemento y SB 1 A B C D 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl de T1 de T2 de T4 de T2 de T5 de T6 de T1 de T2 de T4 de T2 de T5 de T6 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB de SB E F G H MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 59 �Tabla 3. Diluciones finales del complemento 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 1/30 1/35 1/40 1/45 1/50 1/55 1/30 1/35 1/40 1/45 1/50 1/55 B 1/60 1/70 1/80 1/90 1/100 1/110 1/60 1/70 1/80 1/90 1/100 1/110 C 1/120 1/140 1/160 1/180 1/200 1/220 1/120 1/140 1/160 1/180 1/200 1/220 D 1/240 1/280 1/320 1/360 1/400 1/440 1/240 1/280 1/320 1/360 1/400 1/440 E F G H Cubra la placa para evitar evaporación excesiva e incube en estufa a 37 ± 2 °C durante 15 minutos. Dispensado del sistema hemolítico El sistema hemolítico habrá sido preparado según procedimiento descripto anteriormente. 1. Finalizada la incubación de la placa, dispense 25 µl / pocillo del SH en todos los pocillos de la placa. 2. Cubra y agite la placa durante 2-4 minutos en agitador de placas. 3. Incube en estufa a 37 ± 2 °C durante 30 minutos. Centrifugación de la placa Finalizada la incubación, centrifugue la placa a una fuerza de 1000 RPM durante 3 minutos. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 60 �Expresión de resultados El resultado de la reacción de cada pocillo se evaluará por el grado de hemolisis presente en el mismo y se consignará mediante un sistema de cruces: Tabla 4 ++++ Sobrenadante translúcido, en el fondo botón de depósito de GR 0 % de hemólisis +++ Sobrenadante rojizo en un 25 % de intensidad, en el fondo un deposito claro de GR 25 % de hemólisis ++ Sobrenadante rojizo en un 50 % de intensidad, en el fondo un deposito tenue de GR 50 % de hemólisis + Sobrenadante rojizo en un 75 % de intensidad, en el fondo un deposito muy tenue de GR 75 % de hemólisis Sobrenadante rojo cristalino, ausencia de depósito de GR 100 % de hemólisis Negativo Cálculos de los resultados 1. Se define la unidad de complemento (UC) o unidad hemolítica como la dilución más alta que permita la lisis del 100 % de los eritrocitos en el pocillo. 2. Sobre la hoja del laboratorio se comprobará la respetabilidad del análisis, constatando que los pocillos que contengan la misma dilución de complemento presentan un grado de hemólisis similar. 3. Se elige la UC con la dilución más alta que de 100 % de hemólisis. 4. La dilución de trabajo (DT) se establece multiplicando por 2 la UC. Ejemplo: supongamos que se necesite preparar una solución de complemento para utilizar en el análisis de 2 placas según el procedimiento descripto. Ello supone un volumen total de solución de complemento de 2 placas x 2,4ml / placa = 4,8 ml = 5 ml (se prepara un volumen adicional en previsión de pérdidas). a. Supongamos que UC = 1/100 DT= 2 x UC= 2 x 1/100 = 1/50 Si en 50 ml de SB se dispensa 1 ml de C puro: En 5 ml de SB se dispensan x. x= 5/50= 0,1 ml b. Por tanto las proporciones serán: 0,1 ml de complemento y 4,9 ml de SB. Tubo 1 (2 unidades) Tubo 2 (1,5 unidades) Tubo 3 (1 unidades) Tubo 4 (0,75 unidades) Tubo 5 (0,5 unidades) C: 2 unidades (µl) 400 300 200 150 100 SB (µl) 0 100 200 250 300 MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 61 �Control de dos unidades de complemento (2 UC) Una vez obtenida la dilución de trabajo, se realizarán diluciones del complemento que contengan 2 unidades; 1,5 unidades; 1 unidad; 0,75 unidades y 0,5 unidades. Para ello trabajaremos según la siguiente secuencia (tabla 5). Tabla 5. Diluciones del complemento Tubo 1 (2 unidades) Tubo 2 (1,5 unidades) Tubo 3 (1 unidades) Tubo 4 (0,75 unidades) Tubo 5 (0,5 unidades) C: 2 unidades (µl) 400 300 200 150 100 SB (µl) 0 100 200 250 300 Se dispensarán por duplicado 25 µl/pocillo de cada una de las diluciones en los correspondientes pocillos de una placa y luego se completan con 50 µl de SB (tabla 6). Tabla 6. Unidades del complemento en la placa 1 2 3 4 5 A 2U 1, 5U 1U 0,75 U 0,5 U B 2U 1, 5U 1U 0,75 U 0,5 U 6 7 8 9 10 11 12 C D E F G H 1. Cubra la placa para evitar evaporación excesiva, agite 2-4 minutos e incube en estufa a 37 ± 2 ° C durante 15 minutos. 2. Luego repita lo descripto agregando el SH Lectura del análisis: • Pocillo con 2 unidades: 100 % de hemólisis • Pocillo con 1,5 unidades: 100 % de hemólisis MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 62 �• Pocillo con 1 unidades: 100 % de hemólisis o traza de GR en suspensión • Pocillo con 0,75 unidades: 0 % a 75 % de hemólisis • Pocillo con 0,5 unidades: 0 % a 50 % de hemólisis Control de calidad El ensayo debe ser repetible: pocillos con diluciones iguales deben tener un grado de reacción similar. En caso contrario se repetirá el análisis. Debe observarse cada gama de reacciones posibles desde diluciones con el 100 % (N) de hemólisis (las más bajas), hasta diluciones con el 0 % (++++) de hemólisis (las más alta). En caso contrario se repetirá el análisis. En el control de 2 unidades de complemento deben dar los resultados preestablecidos. El análisis debe informarse como APROBADO / NO APROBADO en el apartado de observaciones de la planilla de titulación del complemento. En caso de no aprobado, se repite el proceso. VI: Titulación antígeno Se utiliza el antígeno de seroaglutinación en tubo (SAT) volumen celular aproximado de 4,5 %. Se trata de determinar lo que se denomina UA (unidad antigénica) que corresponde para cada lote de antígeno y será la dilución óptima de uso para garantizar la unión con los anticuerpos presentes en los sueros problema, en la cantidad suficiente para fijar el complemento. El antígeno formará el complejo antígeno-anticuerpo con los anticuerpos presentes de los sueros problema y que serán capaces de fijar el complemento. Esta reacción requiere un título mínimo para que se lleve a cabo, es decir, se debe garantizar una concentración mínima de antígeno que reaccione con los anticuerpos y sea capaz de fijar el complemento. Preparación de diluciones “madre” de antígeno Se preparan tres diluciones previas en tubos, luego se dispensarán: • en un tubo 500 µl de SB y 10 µl de antígeno; • en un segundo tubo 750 µl de SB y 10 µl de antígeno; • en un tercer tubo 1250 µl de SB y 10 µl de antígeno. Esto da una dilución de 1/50, 1/75 y 1/125, respectivamente. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 63 �Preparación de las diluciones “hijas” de antígeno En una placa de fondo en U se dispensan 25 µl de SB en todos los pocillos salvo en la columna 1 y los pocillos A10, A11, A12. La fila C y F no se utilizarán hasta la columna 9 (tabla 1). En la columna 1 se pondrán 50 µl de las soluciones madres del antígeno por duplicado y en los pocillos A10, A11, A12 de forma simple (tabla 1). Se diluye pasando 25 µl sucesivamente de estos pocillos a los siguientes consiguiendo diluciones al duplo del antígeno. Las diluciones se realizan de la columna 1 a la columna 9 y de los pocillos A10, A11, A12 hasta los pocillos H10, H11 y H12. Es decir, se pasan 25 µl de la columna 1 a la 2, se homogeniza y se pasan otros 25 µl a la columna 3 y así sucesivamente, y se eliminan los 25 µl que sobran en la columna 9 y lo mismo en vertical en las columna 10, 11 y 12. Tabla 1. Diluciones ‘’hijas’’ del antígeno 1 2 3 4 5 6 7 A 1/50 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 B 1/50 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 8 9 10 11 12 1/6400 1/12800 1/50 1/75 1/125 1/6400 1/12800 1/100 1/150 1/250 1/200 1/300 1/500 C D 1/75 1/150 1/300 1/600 1/1200 1/2400 1/4800 1/9600 1/19200 1/400 1/600 1/1000 E 1/75 1/150 1/300 1/600 1/1200 1/2400 1/4800 1/9600 1/19200 1/800 1/1200 1/2000 1/1600 1/2400 1/4000 1/8000 F G H 1/125 1/250 1/500 1/1000 1/2000 1/4000 1/8000 1/16000 1/32000 1/3200 1/4800 1/125 1/250 1/500 1/1000 1/2000 1/4000 1/8000 1/16000 1/32000 1/6400 1/9600 1/16000 Dispensado de sueros controles positivo y negativo Seguidamente se dispensan 25 µl de suero control positivo en los pocillos de la fila A, B, D, E, G y H salvo en las columnas 10, 11, 12 donde se dispensan 25 µl de suero control negativo y servirá como control de hemolisis. El suero control positivo debe ir a una dilución igual al título conocido (1/200) en la reacción de fijación del complemento. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 64 �Dispensado de una solución de complemento Posteriormente se dispensan 25 µl de complemento a todos los pocillos según el título obtenido previamente. Se agita la placa 2-4 minutos y se incuba durante 30 minutos a 37 ± 2°C. Dispensado del sistema hemolítico Tras la incubación de la placa se procede a dispensar 25 µl de sistema hemolítico a todos los pocillos. Luego se agita la placa 2-4 minutos e incubará durante otros 30 minutos a 37 ± 2°C. Centrifugación de la placa Finalizada la incubación, centrifugue la placa a una fuerza de 1000 RPM durante 3 minutos. Expresión de resultados El resultado de la reacción de cada pocillo se evaluará por el grado de hemólisis presente en el mismo y se consignará mediante un sistema de cruces. Tabla 2 ++++ Sobrenadante translúcido, en el fondo botón de depósito de GR 0 % de hemólisis +++ Sobrenadante rojizo en un 25 % de intensidad, en el fondo un depósito claro de GR 25 % de hemólisis ++ Sobrenadante rojizo en un 50 % de intensidad, en el fondo un depósito tenue de GR 50 % de hemólisis + Sobrenadante rojizo en un 75 % de intensidad, en el fondo un depósito muy tenue de GR 75 % de hemólisis Sobrenadante rojo cristalino, ausencia de depósito de GR 100 % de hemólisis Negativo Los resultados de la lectura se registran en la hoja de laboratorio correspondiente MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 65 �Cálculos de los resultados 1. Se define la unidad de antígeno (UA) como la dilución más alta que permita una fijación completa (0 % de hemolisis). 2. Sobre la hoja del laboratorio se comprueba la repetibilidad del análisis, constatando que los pocillos que contengan la misma dilución de antígeno presentan un grado de hemólisis similar. 3. Se elige la UA a dilución en la que se obtenga el 0 % de hemólisis. Si existen dudas entre dos diluciones se elegirá la dilución más baja (de mayor concentración de antígeno). 4. La dilución de trabajo (DT) se establece multiplicando por 2 la UA. Ejemplo: supongamos que la UA se ha establecido 1/800: DT= 2 x UA= 2 x 1/800 = 1/400 MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 66 �Anexo I Modelo de planilla de emisión de resultados MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 67 �Bibliografía MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 68 �Normativa vigente Ley 24.696 de año. Por la cual se declara de interés nacional el control y erradicación de la enfermedad reconocida como Brucelosis (Brucella abortus) en las especies bovina, suina, caprina y otras en todo el Territorio Nacional. 26 de septiembre de 1996. B.O. N.º 28.492. Norma Organización Internacional de Normalización [ISO/IEC 17025]. 2017 (España). Resolución 957 de 2024 [Senasa]. Por la cual se aprueba el uso de los inmunógenos RB51 y Delta PGM. 15 de agosto de 2024. Resolución 276 de 2023 [Senasa]. Por la cual se adopta el sistema de diagnóstico serológico para el Plan Nacional de Control y Erradicación de Brucelosis Bovina en la República Argentina. 14 de abril de 2023. Resolución 77 de 2021 [Senasa]. Por la cual se sustituye el articulo 9° y 10 de la Resolución N.° 67/19 y otras modificaciones. 19 de febrero de 2021. Resolución 67 de 2019 [Senasa]. Por la cual se aprueba el Plan Nacional De Control y Erradicación De Brucelosis Bovina en la República Argentina, de aplicación obligatoria en todo el territorio nacional, excepto en la provincia de Tierra Del Fuego, Antártida e islas del Atlántico Sur. 1.° de febrero de 2019. Resolución 857-E de 2017 [Senasa]. Por la cual se declara como zona libre de brucelosis ovina y caprina a Brucella melitensis, a la región patagónica y se establece el Programa De Vigilancia y Prevención. 27 de diciembre de 2017. Resolución 372-E de 2017 [Senasa]. Por la cual se aprueba el Plan Nacional de Control de Brucelosis Caprina en la República Argentina y se establecen las estrategias sanitarias básicas que deben ser aplicadas en cada zona o provincia. 14 de junio de 2017. Resolución 98 de 2016 [Senasa]. Por la cual se resuelve la comercialización de antígenos/kits para diagnóstico de brucelosis.18 de marzo de 2016. Resolución 63 de 2013 [Senasa]. Por la cual se crea el Registro Nacional de Establecimientos Oficialmente Libres de Brucelosis Porcina. 28 de febrero de 2013. Resolución 246 de 2007 [Senasa]. Por la cual se aprueban los requisitos de bioseguridad para los laboratorios que se dediquen a la elaboración de productos destinados al diagnóstico y a la prevención de la Brucelosis Animal y la Tuberculosis Animal. 04 de mayo de 2007. Resolución 438 de 2006 [Senasa]. Por la cual de adopta el Sistema de Diagnóstico Serológico para el Programa de Control y Erradicación de la Brucelosis. 4 de agosto de 2006. MANUAL DE PROCEDIMIENTO. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 69 �Resolución 736 de 2006 [Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos]. Por la cual se crea la Red Nacional de Laboratorios de Ensayo y Diagnóstico. 17 de noviembre de 2006. Resolución 79 de 2003 [Senasa]. Por la cual se aprueba el procedimiento para la supervisión de la aplicación de los tratamientos de fumigación oficial. 26 de enero de 2003. Resolución 1484 de 1993 [Senasa]. Por la cual se establecen las normas para la elaboración, fraccionamiento, distribución, expendedor para los reactivos destinados en el diagnóstico y prevención de la Brucelosis Animal. 28 de diciembre de 1993. Bibliografía consultada Alton, G.G., Jones, L.M., Angus, R.D. and Verger, J.M. (1988). Techniques for the Brucellosis Laboratory. INRA, Paris. Angus, R.D. & Barton, C.E. (1984). The production and evaluation of a buffered plate antigen for use in a presumptive test for brucellosis. Dev. Biol. Stand. (56,349-356). Centro Panamericano de Zoonosis (1968). Técnicas e interpretación de sero-aglutinación para el diagnóstico de la brucelosis bovina. Nota Técnica Nº2. Ramos Mejía. Ciocchini A.E., Rey Serantes D. A., Melli L.J., Iwashkiw J.A., Elena S., Franco C., Nicola A.M., Feldman M.F., Comerci D.J., Ugalde J.E. (2014) A bacterial engineered glycoprotein as a novel antigenic target for diagnosis of bovine brucellosis. Vet Microbiol. 172 (3-4):455-65. Cortina M.E., Balzano R.E., Rey Serantes D.A., Caillava A.J., Elena S., Ferreira A.C., Nicola A.M., Ugalde J.E., Comerci D.J., Ciocchini A.E (2016). A bacterial glycoengineered antigen for improved serodiagnosis of porcine brucellosis. Journal of Clinical Microbiology. 54(6), 1448-1455. Gall D., Nielsen K., Forbes L., Cook W., Leclair D., Balsevicius S., Kelly L.,Smith P. & Mallory M. (2001). Evaluation of the fluorescence polarization assay and comparison to other serological assays for detection of brucellosis in cervids. J. Wildl. Dis., 37,110-118. Gall D.,Nielsen K.,Forbes L.,Davis D.,Elzer P.,Olsen S.,Balsevicius S.,Kelly L., Smith P., Tan S. & Joly D. (2000). Validation of the fluorescence polarization assay and comparison to other serological tests for detection of serum antibody to Brucella abortus in bison. J. Wildl. Dis., 36, 469-476. Bagnat, Moras, Vibot, Samartino, T. De Echaide, Walsh, Diprodesa, Di Lorenzo, Nicola (2006). 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DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE BRUCELOSIS 72 �� Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Manual de procedimiento. Diagnóstico serológico de brucelosis (B. abortus, B. melitensis, B. suis) Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2025 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Coordinación de Bacteriología Dirección de Laboratorio Animal Dirección General de Laboratorios y Control Técnico Coordinación General de Comunicación Institucional Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Manual Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0177 Abstract A summary of the resource. El presente manual está dirigido a profesionales que se desempeñan en la Red de Nacional de Laboratorios del Senasa (Redlab) respecto a las técnicas relacionadas con el diagnóstico serológico de brucelosis. Técnicas reconocidas y recomendadas por la Organización Mundial de Sanidad Animal (OMSA) y el Senasa. Incluye nociones sobre medidas de bioseguridad y controles de calidad a aplicarse en los procedimientos técnicos de laboratorio. Table Of Contents A list of subunits of the resource. Introducción Objetivos Abreviaturas y definiciones Medidas generales de bioseguridad y seguridad en el laboratorio Principios de bioseguridad Prácticas operativas seguras y hábitos personales Limpieza y desinfección del laboratorio Eliminación de residuos peligrosos (patológicos/químicos) Aseguramiento de la calidad en el laboratorio Control de calidad de insumos Equipos Sobre la enfermedad Descripción de la enfermedad Infección por Brucella en ganado bovino Infección por Brucella en ovejas y cabras Infección por Brucella en cerdos Infección por Brucella en otras especies: domésticas, salvajes en cautiverio o en libertad Riesgo zoonótico y requisitos de bioseguridad Técnicas de diagnóstico Pruebas serológicas Procedimientos de trabajo para el diagnóstico de brucelosis en el laboratorio de red Registro de entrada de muestras Características y condiciones de las muestras Condiciones de recepción de las muestras Condiciones de rechazo o demora del procesamiento de las muestras Informes de resultados Pruebas screening con antígeno tamponado en placa (BPAT y RBT) para la detección de anticuerpos contra Brucella spp Desarrollo Ejecución del ensayo de BPAT Ejecución del ensayo de Rosa de Bengala Lectura e interpretación de resultados de las pruebas de screening con antígeno tamponado en placa Informes de resultados Pruebas de seroaglutinación lenta en tubo (SAT/2-ME) Desarrollo Ejecución del ensayo Incubación Lectura e interpretación de resultados Informes de resultados Preparación de soluciones para las pruebas de SAT/2-ME Prueba del anillo en leche (PAL o MRT) solo para bovinos Desarrollo Toma de la muestra Ejecución del ensayo Lectura Modificación de la prueba para tanques muy grandes Enzimoinmunoensayo indirecto (I ELISA) (para suero o leche) Etapas Desarrollo ELISA por competición / bloqueo Desarrollo Ensayo de polarización fluorescente para la detección de anticuerpos contra brucella en suero Desarrollo Ejecución del ensayo Lectura e interpretación Fijación de complemento Desarrollo Manejo y conservación de las muestras Condiciones del ensayo Ejecución Lectura de resultados Anexos Bibliografía Brucelosis Laboratorios https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/56541f1b5f1e36dc29eef0c7679b1b5f.pdf fac203e52e86bb4237914f4bb4703e42 PDF Text Text MANUAL DE PROCEDIMIENTO Uso correcto de bañaderos y productos veterinarios garrapaticidas Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (Senasa) �El Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria es un organismo descentralizado, responsable de ejecutar las políticas nacionales en materia de sanidad y calidad animal, vegetal y de la inocuidad de los alimentos de su competencia, así como de verificar el cumplimiento de la normativa vigente en la materia. Equipos de trabajo Programa de Garrapata del Bovino Dirección Nacional de Sanidad Animal Coordinación General de Comunicación Institucional Edición 2025 �Índice Introducción 4 Objetivo 4 Bañaderos: de inmersión y de aspersión 4 Emplazamiento común 4 Estructura básica común a ambos bañaderos 5 Infraestructura de bañaderos de inmersión 5 Especificaciones 5 Cubicación 7 Elementos 8 Manejo 9 Infraestructura de bañaderos de aspersión Principales características 13 13 Especificaciones 14 Limpieza de tropas para despacho y protocolos 16 Protocolo con baño de inmersión 16 Protocolo con productos pour on o inyectables 17 Uso de productos veterinarios garrapaticidas distintos de balneación 18 Uso racional de los PVG 18 Planificación de los tratamientos 19 Contacto 21 �Introducción La garrapata común del bovino es un parásito que posee un ciclo biológico caracterizado por una etapa ambiental y otra parasitaria (sobre el animal). Esta parasitosis se encuentra complejizada porque, en su etapa ambiental, los tiempos de sobrevida son muy variables, sumado a que la garrapata posee una resistencia innata a las moléculas (incluso a las que todavía no ha sido expuesta), con una gran capacidad reproductiva de las teleoginas (hembra adulta) y la posibilidad de ser potenciales vectores de enfermedades asociadas, como la tristeza bovina. Objetivo El presente manual está destinado a productores, veterinarios y profesionales del ámbito rural. Esta publicación tiene como propósito informar sobre tratamientos garrapaticidas prolijos y eficientes, para lograr que el producto aplicado exprese su máximo potencial de efecto ixodicida sobre la población de garrapatas presente en el animal, minimizando así los tiempos de aparición de la resistencia a las diferentes moléculas. Bañaderos: de inmersión y de aspersión Emplazamiento común Las instalaciones del bañadero deben contemplar las interacciones con el ambiente y estar ubicadas –preferentemente– en un sitio que sea central (respecto a los potreros del establecimiento), sobre un terreno elevado, para asegurar el drenaje y facilitar el desagote del baño (evitando la contaminación de cursos naturales de agua). Además, se debe contar con una buena disponibilidad de agua y acceso permanente a los caminos firmes del establecimiento. Estructura básica común a ambos bañaderos a. Corrales de encierre: deben tener una capacidad variable, de acuerdo al tamaño del rodeo involucrado. b. Manga de entrada al baño: es recomendable que cuente con un piso rugoso para favorecer la limpieza de las pezuñas, previo al ingreso del bañadero; preferentemente, construir un lavapatas. c. Escurridero: es una plataforma de drenaje donde se depositan los animales posteriormente al nado con el objetivo de que estos escurran todo el excedente líquido. Mide aproximadamente 4 x 5 metros y está conectado directamente a la salida del baño. Específicamente se recomienda: • Un escurridero dividido en dos partes, con una puerta que controle alternativamente el ingreso hacia las dos secciones (derecha e izquierda). USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 4 � • Un piso de concreto con peldaños en sus orillas y un desnivel adecuado para drenar el excedente hacia la pileta de decantación. • Que el bañadero se encuentre techado. De lo contrario, se debe prever una salida del agua de lluvia hacia el exterior. Cuando no se utilice el baño, esta salida debe permanecer abierta. Infraestructura de bañaderos de inmersión Especificaciones En la pileta, la pared frontal no debe tener un ángulo recto con el piso, por lo tanto, se sugiere una concavidad amplia, a fin de evitar que se deposite mucho sedimento. Por su parte, las paredes laterales –tanto en el ingreso como en el egreso del bañadero (sección de la rampa de despegue y hasta el final de la rampa de salida)– deberán ser rectas y tener 0,30 m de espesor y 1,75 m de alto desde el nivel del suelo. En la entrada del bañadero, las paredes laterales deben continuar por al menos 2 metros; en su salida, se recomienda que continúen por al menos 3 metros más, para que los animales no puedan ver hacia afuera. En la parte media, deben tener, al menos, entre 40 y 50 cm sobre el nivel del líquido; estas paredes pueden contar con un reborde cóncavo superior interno (a 40 USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 5 �cm del nivel de trabajo del líquido) para desviar y hacer rebotar hacia la pileta del bañadero el líquido que se levanta por las paredes. El largo deberá permitir un tiempo de nado correcto del animal; es decir, midiendo la pileta y estando al nivel de la superficie del líquido, no debería ser menor a 11/12 metros, llegando a unos 13/14 metros totales hasta el final de la escalera de salida. A nivel de la parte inferior, no menor a 7 metros. Preferentemente, el piso debe tener un declive leve (1 cm por cada metro de longitud total) hacia la escalera de salida, a los fines de facilitar el vaciado del líquido en momentos de limpieza y recambio del producto. Respecto a la profundidad del baño, la misma debe tener un nivel no menor a 2 metros, de forma tal que asegure la completa inmersión del animal. En cuanto al ancho del baño, en el nivel del agua debe ser entre 0,85 y 1,05 m; mientras que hacia el fondo debe disminuir a 0,45 - 0,60 m. La rampa de despegue es una plataforma desde la cual saltan los animales al baño. La misma debe contar con un largo de 1,2 a 1,5 m. y 0,85 m. de ancho, con desnivel hacia el baño y una superficie sutilmente áspera, para proporcionar el apoyo adecuado del bovino. El borde de la rampa estará convenientemente proyectado en forma de un labio redondeado hacia el tanque, con el objetivo de hacer rebotar las olas hacia adentro de la pileta principal. Para un apoyo más seguro, la salida de la rampa debe contar con gradas bajas, de 0,15 m de alto y 0,40 m de profundidad. La estructura del bañadero también debe precisar de dos piletas de decantación que, por su diseño y disposición, detienen las partículas más gruesas del retorno del líquido de baño. Es necesario corroborar la altura de los caños de ingreso y egreso de los líquidos, tapones, etc. Las dos piletas decantadoras (con medidas de 40 cm x 40 cm x 80 cm), que se ubican entre el escurridero y el bañadero conectando ambas secciones, permiten el retorno del líquido de los animales tratados con la menor cantidad posible de material orgánico. El techo –o algún tipo de cobertura– es obligatorio para el bañadero. Debe abarcar incluso el escurridero y la rampa de despegue para disminuir la evaporación y evitar el ingreso de agua de lluvia a la pileta principal. Cabe USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 6 �destacar que la altura del techo es clave para la actividad del baño, ya que el largo de los mangos de las horquillas y agitadores puede verse dificultado si se encuentra a menos de 4 m. Usualmente, el techo se construye con chapa galvanizada y a dos aguas. La pileta de cubicación debe tener al menos una capacidad de 1000 (un mil) litros, con medidas de 1m x 1m x 1m. La misma tiene que estar conectada con el baño cerca de su entrada, a través de un caño grueso de aproximadamente 4 pulgadas y con una llave de corte de paso de agua; en la pared de la pileta de cubicación deberán indicarse los volúmenes correspondientes a 500 y 1000 litros. Para realizar un óptimo mantenimiento edilicio, las estructuras de todo el bañadero deben mantenerse en buenas condiciones –arreglando y evitando fisuras en la construcción– sobre todo por debajo de la línea de agua del nivel de trabajo, que permitan el drenaje continuo del principio activo. Cubicación La cubicación de un bañadero es fundamental para determinar el volumen de agua necesario para el tratamiento y es un requisito para su habilitación. El baño estará oficialmente habilitado cuando la cubicación sea realizada por personal del Senasa o por los entes sanitarios que se encuentren capacitados. Sin una correcta cubicación del bañadero no podrá hacerse una eficaz aplicación del tratamiento. Una diferencia de 20 litros puede ocasionar cambios en la concentración del producto. La cubicación debe realizarse con una probeta, elemento de laboratorio calibrado de 1 o 5 litros. Con este instrumento se calibrará un volumen máximo de 20 litros en un balde de plástico, que luego permitirá cargar la pileta de cubicar y finalmente la pileta principal del baño. El balde deberá estar perforado y tener ranuras al llegar a los 20 litros de carga. Esto permitirá que el líquido que se requiera medir en el balde, nunca supere el volumen calibrado. USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 7 �La primera línea de cubicación de la regla debe marcarse –usualmente– a partir de los 5000 litros. Luego, las marcas se aplicarán cada 1000 litros hasta llegar a 8000 o 9000. A partir de este volumen, las marcas se realizarán cada 500 litros, hasta llegar al nivel de uso del baño, con la profundidad adecuada. Luego, siguiendo el mismo procedimiento, marcarán en la regla 2000 litros más de agua, que luego serán desechados. Esto se realiza para poder conocer y prever el volumen de agua ingresado por lluvias. Al confeccionar la regla, se debe tener la precaución de tomar las medidas (con una cinta métrica) de cada una de las marcas de la cubicación y registrarlas en una planilla, preferentemente un registro en papel. También se recomienda confeccionar una regla más de repuesto, para que en el caso de rotura o pérdida, esta pueda ser reemplazada. Elementos La regla es un elemento clave y muy importante del bañadero, ya que de su correcta calibración y uso depende –entre otras cosas– el buen funcionamiento del bañadero. Con la regla se lleva a cabo una correcta reposición y refuerzo del principio activo y, por lo tanto, el mantenimiento adecuado de su concentración. Para su construcción se puede utilizar madera, pero debe recordarse poner una chapa en la base (pie) para evitar el desgaste u opcionalmente una regla con forma de T, que llegue hasta unos 20 cm del piso del bañadero. Debe estar correctamente marcada, conforme la cubicación practicada en la pileta principal. Al confeccionar la regla, se debe tener precaución al momento de tomar las medidas de cada una de las marcas de la cubicación y USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 8 �registrarlas en una planilla. Esto permitirá, en caso de rotura o pérdida, que la misma pueda ser reemplazada. El agitador o removedor es la herramienta clave para mezclar y homogeneizar la preparación del líquido garrapaticida; debe tener un mango lo suficientemente largo –aproximadamente 2,50 m–, para garantizar que el operario llegue a los extremos inferiores de la pileta donde se produce la mayor concentración de sedimentos que secuestran partículas del producto. Las horquillas son otro elemento necesario y fundamental al momento de usar el bañadero, ya que permitirá sumergir al menos 2 veces la cabeza del animal durante el baño. Manejo La preparación de la formulación inicial se debe realizar según las indicaciones, cumpliendo con los volúmenes de agua calibrados. Un baño que no esté cubicado tendrá problemas en el manejo de los volúmenes de agua y consecuentemente en la concentración del principio activo. USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 9 �a. Pie de baño: es la carga inicial de un producto veterinario garrapaticida (PVG), es decir, la cantidad de producto incorporado en el agua al preparar un baño. Generalmente, se expresa como litros de producto por cada 1000 litros de agua. b. Reposición y refuerzo del principio activo. Se deberá realizar cada 1000 litros como máximo. Cuando el nivel de nado o trabajo sea inferior a este volumen, deberá hacerse la reposición de agua y refuerzo del PVG. Se recomienda siempre seguir las indicaciones del laboratorio. c. Es fundamental entender la importancia de la medición del pH del líquido garrapaticida. Para ello, se utilizan tiras reactivas comerciales o un peachímetro digital. Los productos a base de amitraz trabajan en medio alcalino (pH 12-14), razón por la cual su estabilizante es la cal (hidróxido de calcio). Si el pH alcanza o baja de 10, el amitraz se desnaturalizará rápidamente. Los piretroides, fosforados o combinaciones funcionan a pH neutro o ligeramente ácido (6.4-6.8, 7) y no requieren condiciones de manejo de pH, ya que naturalmente las soluciones tienden a acidificarse debido a su contaminación con materia orgánica (pelos, materia fecal y tierra). d. El análisis de concentración del principio activo se debe realizar previo a la utilización de un nuevo baño, cuando hayan pasado una cantidad considerable de animales que haga suponer problemas en la concentración del líquido garrapaticida, o luego de un tiempo de inactividad del bañadero. Esto último se debe a que los tiempos de inactividad del bañadero determinan la acción de descomposición de los principios activos, tanto por acción microbiana como por el cambio del pH de la preparación. Por ello, es clave realizar este análisis antes de reiniciar su uso. Lo correcto es realizar cada 90 a 180 días, establecido según criterio técnico. El líquido garrapaticida del bañadero se encuentra expuesto a factores ambientales externos, que modifican o perjudican la estabilidad de los principios activos y su acción ixodicida. DESGASTE DEL BAÑADERO Suciedad Acidez Arrastre Factores principales en la concentración del p.a. USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 10 �Esta muestra del líquido del baño debe ser tomada por personal capacitado inmediatamente finalizada la balneación de los animales. La extracción de la misma se realiza mediante la introducción de una botella descartable, que puede estar atada a la regla del baño; esta última se sumerge en la parte media del bañadero –a una altura equidistante entre el piso y la superficie– y se llena ¾ del envase con el líquido. Para finalizar el proceso de remisión de la muestra, se debe adjuntar el protocolo completo y enviarla a un laboratorio habilitado e inscripto en la Red Nacional de Laboratorios del Senasa (Redlab). El líquido será analizado mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), a los fines de obtener el dato preciso de la concentración del principio activo del bañadero al momento de la toma de muestra. Además, nos brinda información del pH y el porcentaje de sedimentos presentes, lo que permite luego realizar las correcciones adecuadas, según indicación del laboratorio o del profesional interviniente. e. Factores para tener en cuenta en el momento de la balneación • Balneaciones: previo a realizar los baños, agitar correctamente con el removedor y durante 10 minutos el líquido garrapaticida para obtener una correcta homogeneización del producto en todo el bañadero. Luego, se deberá realizar el pasaje de los animales antes de iniciar la rutina de su baño en los corrales. • Mojar todo el cuerpo del animal durante 15 segundos y sumergir al menos 2 veces la cabeza de cada animal, utilizando las horquillas. • Llevar un ritmo de baño constante, sin apuros y logrando que ningún animal quede sin ser tratado. • Recuperación del líquido de baño del escurridero. Una vez escurridos los animales (en un periodo acorde), verificar que se produzca una buena recuperación del líquido, con un declive correcto para el retorno del mismo. Se debe tener en cuenta no dejar un tiempo excesivo, ya que los animales defecan y orinan, lo cual afecta la calidad y composición del líquido recuperado. • Reposición y refuerzo. Luego del pasaje de determinada cantidad de animales y una vez que se han consumido 1000 litros del líquido de baño (o el 10% del volumen de trabajo), el bañadero debe volver a sus niveles iniciales mediante el agregado de agua y la cantidad necesaria del producto para recuperar la concentración del principio activo. • No mezclar distintos PVG aunque la molécula sea la misma ya que, de acuerdo a la marca comercial, la formulación será diferente (excepto extensión de marca). • En los bañaderos cargados con PVG elaborados con amitraz no se deben agregar otras sustancias diferentes del estabilizante específico. El producto requiere de un medio alcalino (pH 12 – 14). • En los bañaderos cargados con PVG elaborados con piretroides y/o mezclas piretroides y fosforados no se deben agregar sus- USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 11 �tancias acidificantes sin haber consultado previamente al laboratorio elaborador. El producto requiere de un medio ácido a neutro (pH 6.4-6.8 a 7). f. Planillas de registro: durante el uso del bañadero es fundamental llevar actualizadas las planillas de cubicación y de pasaje para registrar, de forma ordenada, el nivel del bañadero al inicio y finalización cada jornada de baño. Se deberá registrar la fecha, reposiciones y refuerzos, cantidades, litros de agua agregados, número de animales bañados y todo dato que favorezca a un efectivo control de manejo. Errores frecuentes cometidos en los baños • Instalaciones deficientes y personal insuficiente. • Baños parciales del lote (un solo animal sin bañar ya es un baño parcial). • Falta de control y supervisión del encargado (bañar animales sedientos o cansados). • Mala cubicación del baño. • Preparación incorrecta del pie de baño. • Tiempo de nado corto, sin respetar los tiempos mínimos (15 segundos por animal). • Incorrecta sumersión de la cabeza. • Poca profundidad del baño. • El uso del baño hasta descenso del nivel óptimo (más del 10%) complica la reposición. • Incorrectas reposiciones y refuerzos del producto activo. • Uso del baño vencido, por tiempo o número de animales bañados. • No identificar los animales bañados, mezclando tratados con no tratados. • Intervalo incorrecto entre baños. • Mezclar principios activos o productos comerciales (aunque sean de la misma familia química). • Bañar en días de lluvia o pronóstico de la misma. • Bañar a “manga abierta”, con apertura de las puertas de salida del escurridero. • Trabajar con corrales muy embarrados. • No dejar escurrir bien los animales luego del baño. • Arrear los animales recién bañados a un potrero con agua o que USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 12 �tengan agua en el trayecto. • No realizar los análisis periódicos del contenido recomendado. • No asegurar el cierre del retorno de agua del escurridero. • No llevar los registros del baño (pasaje, refuerzo, reposiciones). • No registrar el nivel al inicio, durante y después de cada baño (si se agrega agua o producto). • No agitar bien el contenido antes del inicio del baño. Infraestructura de bañaderos de aspersión Principales características El bañadero de aspersión o “manga de aspersión” para uso en rodeos o lotes chicos funciona como un túnel cerrado, en donde el techo, los laterales y –en algunos casos– el piso o los laterales inferiores operan como soporte para la instalación de las mangueras que cubrirán dichas superficies del túnel. En este último, se dispersará el líquido a presión, a través de picos de aspersión o perforaciones bien logradas, de modo tal que cuando se produce el pasaje de los animales por la manga, estos resulten mojados completamente. Factores para tener en cuenta en el uso del bañadero de aspersión • Método de aplicación amigable en cuanto al bienestar animal. Su manejo es más práctico, ya que no requiere de mucho personal. • Cuando la aplicación del producto exija dilución previa, se deben respetar los volúmenes recomendados y las indicaciones del laboratorio. • La pulverización de los animales no deberá ser realizada durante las horas más calurosas del día y deberá realizarse preferentemente a favor del viento (nunca en contra por peligro de intoxicación) y, en lo posible, a contra pelo. • Evitar pulverizar animales cansados, sedientos o debilitados. • El final del túnel debe terminar sin luz (escurridero techado) o con luz tenue. • Se estima que un bovino adulto necesita un mínimo de cinco (5) litros de preparación para mojar el animal entero. El volumen exacto dependerá del tamaño y la raza del animal en cuestión (se calcula aproximadamente en el 1% del peso vivo). • No requiere mayor preparación previa, –como medir o completar nivel, refuerzo y reposición, pH–. USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 13 � • Mejor aprovechamiento del agua, ya que solo se prepara un volumen de líquido específico para la cantidad de animales que se bañarán. • Menor contaminación ambiental. • No requiere monitoreo. • Se utiliza producto en concentración de pie de baño. Así, mantiene su estabilidad asegurando la eficacia. • No hay posibilidad de degradación o metabolización (bacterias, hongos) que altere su estructura y su eficacia. • Prolonga la vida útil de los productos. • Permite la fácil rotación de los principios activos, ya que en cada ronda de baño se puede utilizar un producto garrapaticida distinto. • Se recomienda trabajar sin recupero para su reutilización. Solamente se realiza el recupero para proceder a la inactivación del garrapaticida, previo a su descarte. • La velocidad de pasaje de los animales debe ser regulada mediante el uso de un sistema de peine y banderas a la salida o cortina de nylon. • En caso de que los animales no resulten totalmente mojados, se puede repetir la ronda de pasaje. Especificaciones El bañadero debe tener una estructura similar a una manga (de madera o aluminio), con la condición de que sea diseñado como un túnel cerrado, considerando las siguientes especificaciones: a. Medidas de la manga (largo/ancho/alto): 6/1.22/2 metros. b. Piso: preferentemente de hormigón, aunque existen también de madera y acero inoxidable. c. Paredes: conservarán las mismas medidas que la manga, continuando en un túnel cerrado y cubiertas de chapa galvanizada u otro material impermeable. d. Presión de la bomba: mínimo 2 pulgadas y 10 HP. e. Picos de aspersión: muchas veces dependerán del largo de la manga, variando en la cantidad; pero deben ser distribuidos de manera uniforme, tanto en los laterales como arriba y abajo, de manera tal de que sean suficientes como para verificar el total mojado del animal. f. Dirección de los picos: no debe estar enfrentada sino en dirección oblicua/diagonal, mirando hacia adentro de la manga. USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 14 �g. Escurridero: mismos requisitos descriptos para el bañadero de inmersión. h. Pileta o cisterna de preparación del líquido garrapaticida: mínimo mil (1000) litros. i. Cisterna de recupero: deberá ser del mismo volumen que la cisterna de preparación. Prestar especial atención a las indicaciones de uso del laboratorio, ya que las concentraciones para la preparación del producto podrían variar con respecto al uso por inmersión. Se recomienda no desarrollar o utilizar estructuras muy caseras, ya que se incurriría en el mismo efecto que al usar una mochila de aspersión. Una de las principales debilidades del método de aplicación por aspersión radica en su capacidad limitada para mojar completamente al animal o en la insuficiente impregnación de áreas específicas del cuerpo, como puede ser la región inguinal, las ubres y el interior de las orejas. Esta debilidad se minimiza con: • un mayor largo de la manga de aspersión, ya que existe una correlación entre el largo y la cantidad de picos; • sistema de tuberías y boquillas suficientes (arriba, laterales, abajo); • buena presión constante de agua, a través de una bomba; • debe contar con tanque para la preparación de la formulación, suministro de energía o motor generador para la bomba; • que sea una manga cubierta (túnel); • asegurar el correcto mojado (para ello se pueden realizar dos pasadas de los animales por la manga). USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 15 �Una buena aspersión debe generar una nube que dificulte la visión de un lado al otro de la manga. Limpieza de tropas para despacho y protocolos Antes de realizar los tratamientos, es fundamental tener en cuenta que: • Todos los animales deben estar identificados con caravanas oficiales, registradas ante el Senasa. • Antes de elegir PVG aprobados por el Senasa, es necesario asesorarse con un veterinario privado. • Los tratamientos funcionarán siempre y cuando la población de garrapatas que estemos tratando sea susceptible al principio activo. • Verificar la disponibilidad de un bañadero con análisis actualizado en el establecimiento. Protocolo con baño de inmersión La limpieza de tropas con baños de inmersión debe realizarse de la siguiente manera: • Aplicar dos (2) baños, con un intervalo de nueve (9) días. • Revisar al animal cinco (5) días después del último baño. • Si el animal resulta limpio se podrá despachar. • Previo al carguío de la tropa, realizar el tratamiento precaucional. USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 16 �Protocolo con productos pour on o inyectables La aplicación de PVG autorizados por el Senasa, distintos a los de inmersión, son una opción válida cuando no se cuenta con un bañadero de inmersión o aspersión o cuando detectamos resistencia de la garrapata a las drogas de contacto (amitraz, cipermetrina, etc.) Para pour on, utilizar formulaciones que contengan fluralaner, fipronil o piretroides como principio activo. Existen también otros productos combinados con fipronil + avermectinas (ivermectina o abamectina). Para la aplicación de inyectables existen productos monodroga, es decir, formulaciones que contienen un solo principio activo. Por ejemplo, dentro de la familia de las avermectinas se encuentran varios productos que contienen ivermectinas en diferentes concentraciones, algunos otros con doramectina. En general, los PVG de tipo inyectable no son los más aptos para lograr una correcta limpieza de los animales. Si elegimos estos productos, se recomienda –previo a su aplicación– asesorarse sobre la capacidad de volteo que poseen. La aplicación conjunta de inyectables y pour on puede eventualmente ser también una opción, siempre que no se traten de los mismos principios activos o sean moléculas con el mismo mecanismo de acción. En conclusión, los tratamientos para despacho de animales con destino distinto a la faena deben realizarse con suficiente anticipación y funcionarán según lo esperado, en relación a la sensibilidad de la población de garrapatas del campo a uno o varios principios activos utilizados. Así, los productos más eficaces suelen ser los utilizados en forma de balneación, al actuar en forma de contacto directo. El resto de los PVG (pour on o inyectables) actúan por ingestión (cuando la garrapata se alimenta) y es necesario un cierto tiempo para conseguir la letalidad adecuada. También, deben considerarse los tiempos de espera para realizar las revisaciones que demuestren el resultado obtenido. De acuerdo a la variedad de PVG aprobados para su uso, se pueden establecer los siguientes plazos de revisión: - Amidinas (amitraz), piretroides o mezclas piretroides-fosforados deben revisarse 5 días después del segundo baño. - Lactonas macrociclicas (avermectinas) y fipronil como monodroga (o en mezclas comerciales) deben revisarse entre los 7 a 10 días posteriores a la aplicación, según su poder de volteo. - Fluralaner tiene un período de espera para inspección de 10 días. El fluazurón no se considera un producto apto para su utilización en procedimientos de limpieza. Se recomienda organizar las tareas con anticipación al despacho, teniendo en cuenta que cuando se aplica un tratamiento garrapaticida se debe esperar un tiempo prudente para que el producto actúe. USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 17 �Los tiempos de espera para la inspección del animal deben respetarse o se estará haciendo una lectura errónea del efecto ixodicida. Uso de productos veterinarios garrapaticidas distintos de balneación Los factores que se deberán tener en cuenta cuando se aplican productos pour on (derrame dorsal) e inyectables son los siguientes: • Utilizar solo PVG aprobados por el Senasa. • Respetar estrictamente las recomendaciones de uso del laboratorio elaborador. • Realizar el pesaje de la totalidad del lote de los animales para tratar (en caso de que sean pocos). • Tratar la totalidad del lote o potrero. • Trabajar a manga cerrada y de forma pausada para una correcta aplicación. • Evitar la sub y sobredosificación de los animales. • Aplicar el producto a conciencia. • En el caso de inyectables, desinfectar entre cada aplicación y verificar que la jeringa esté bien regulada. • En el caso de pour on, aplicar sin apuros y con cuidado para no perder producto (no aplicar en días de lluvia o pronóstico de la misma). Previo a la implementación de un cronograma de tratamientos, realizar un bioensayo para evitar fallas en la eficacia del PVG. Uso racional de los PVG El control integrado de garrapatas engloba muchas herramientas; entre ellas, se encuentran el uso racional estratégico y táctico de los PVG dentro del plan sanitario de un establecimiento, diseñado de acuerdo a las condiciones agroecológicas de la zona a lo largo del año y las generaciones de garrapatas presentes en la región. Por uso racional de productos veterinarios garrapaticidas se entiende la correcta selección de los productos veterinarios (según la familia de principios activos), aplicado a un plan sanitario para el control de la garrapata, en el cual se respetan las dosis, vías e indicaciones de uso, considerando al mismo tiempo la alternancia o rotación necesaria del PVG a lo largo del tiempo. Esta variación del producto dependerá del seguimiento de eficacia de los trata- USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 18 �mientos realizados y los diferentes mecanismos de acción. Como resultado, se promueve la máxima extensión de los plazos hasta la aparición de cepas resistentes a las distintas moléculas, preservando los PVG y previniendo la aparición de residuos químicos en los productos cárnicos y lácteos, que atentan contra la inocuidad de los alimentos. Es esencial contar, por un lado, con un bioensayo previo a la selección de los productos que se utilizarán y, por el otro, con un asesoramiento profesional veterinario para el diseño, implementación y seguimiento del plan sanitario para realizar, bajo un control integrado de garrapata en cada establecimiento productivo. Planificación de los tratamientos El propietario de un establecimiento o responsable de los animales, en conjunto con el veterinario asesor sanitario, debe llevar adelante una planificación adecuada. a. Diseñar el plan sanitario anual para los tratamientos garrapaticidas, considerando: • La historia zootécnica del establecimiento y de aplicación de productos. • La rotación de los principios activos, con diferente mecanismo de acción y diferente vía de administración, según la evaluación de la eficacia de los productos ya aplicados (bioensayo). • La bioecología del parásito en la zona donde se encuentra el establecimiento. b. Considerar la realización de un bioensayo antes de la elección de los PVG que se aplicarán, siempre y cuando se puedan recolectar las garrapatas necesarias para ello. c. Gestionar un plan sanitario asociado al control de la garrapata que debe abarcar, al menos, un (1) año calendario e incorporar la menor cantidad de tratamientos posibles. d. Para el caso de los tratamientos garrapaticidas por baños de inmersión: • realizar una correcta cubicación del bañadero de inmersión; • garantizar el uso de la técnica y la preparación correcta, según indicaciones de uso del laboratorio; • considerar el tiempo de inmersión de los animales para un trata- USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 19 �miento adecuado; • respetar la cantidad de pasajes de animales en cada preparación, hasta la reposición y refuerzo del producto (frecuencia de recambio). e. Garantizar la correcta dosificación por animal y el uso estratégico en el caso de los productos inyectables, pour on u otro tipo de aplicación, en conjunto con los baños. f. Planificar los tratamientos endectocidas y de otros ectoparásitos dentro de un plan sanitario, ya que comparten moléculas que afectan a las garrapatas. Por ejemplo, la familia de lactonas macrociclicas, piretroides y fosforados, entre otros (tratamiento químico integrado). g. Seleccionar el PVG y el tipo de aplicación que se realizará según el establecimiento involucrado (disponibilidad de instalaciones), las condiciones agroecológicas (estación del año, temperatura, humedad y nivel de precipitaciones) y el objetivo sanitario (erradicación, control o limpieza de tropas). h. Respetar las indicaciones de cada PVG, en cuanto a los períodos de retiro a faena o periodo de restricción, a fin de garantizar la inocuidad de los productos cárnicos o lácteos, lo cual se evidencia en el cumplimiento de los límites máximos de residuos (LMR), establecidos en la legislación nacional. i. Adoptar estrategias de control que contemplen la convivencia con niveles parasitarios bajos en establecimientos ubicados en zona endémica. j. Realizar la limpieza total de las tropas, de manera selectiva, cuando sean despachadas hacia zonas sin garrapatas. j. Revisar periódicamente los niveles de eficacia de los tratamientos en el rodeo para evaluar la evolución del estatus sanitario y evidenciar una posible resistencia parasitaria. Evitar los tratamientos parciales y tratar a los animales antes del cambio de potrero k Ante la aparición de fallas en la eficacia en los tratamientos garrapticidas y la posterior confirmación de resistencia parasitaria, realizar un análisis integral del plan sanitario y un rediseño de la estrategia de uso de PVG, en la que se tengan en cuenta el control integrado de garrapatas y la bioecología parasitaria en la zona donde se encuentra el establecimiento. En todos los casos, deben leerse las indicaciones e información provista en los impresos (rótulos) de cada producto, para conocer los cuidados y carencias que deben respetarse. Además, se recuerda que el envío de animales a faena debe realizarse respetando los períodos de carencia de cada principio activo, los cuales pueden ser consultados en cada prospecto del producto veterinario aplicado. Se recomienda complementar la lectura del presente manual con el “Instructivo de toma de muestra de interés en garrapata” y la “Guía de manejo responsable de residuos por el uso de garrapaticidas”. USO CORRECTO DE BAÑADEROS Y PRODUCTOS VETERINARIOS GARRAPATICIDAS 20 �Contacto Programa de Garrapata del Bovino Correo electrónico: garrapatas@senasa.gob.ar Teléfono: (11) 3144-1973 �� Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Manual de procedimiento. Uso correcto de bañaderos y productos veterinarios garrapaticidas Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2025 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Programa de Garrapata del Bovino Dirección Nacional de Sanidad Animal Coordinación General de Comunicación Institucional Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Manual Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0174 Abstract A summary of the resource. El presente manual está destinado a productores, veterinarios y profesionales del ámbito rural. Esta publicación tiene como propósito informar sobre trata�mientos garrapaticidas prolijos y eficientes, para lograr que el producto apli�cado exprese su máximo potencial de efecto ixodicida sobre la población de garrapatas presente en el animal, minimizando así los tiempos de aparición de la resistencia a las diferentes moléculas. Table Of Contents A list of subunits of the resource. Introducción Objetivo Bañaderos: de inmersión y de aspersión Emplazamiento común Estructura básica común a ambos bañaderos Infraestructura de bañaderos de inmersión Especificaciones Cubicación Elementos Manejo Infraestructura de bañaderos de aspersión Principales características Especificaciones Limpieza de tropas para despacho y protocolos Protocolo con baño de inmersión Protocolo con productos pour on o inyectables Uso de productos veterinarios garrapaticidas distintos de balneación Uso racional de los PVG Planificación de los tratamientos Contacto Enfermedades de los Bovinos Garrapatas https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/848a0e5d8a8611834710991c4a3e656d.pdf d100bf121cb81b9837b296fb7987ad3c PDF Text Text Dirección Nacional de Sanidad Animal Dirección de Luchas Sanitarias Manual de procedimientos mixomatosis del conejo www.senasa.gov.ar Programa de aves y granja �MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO. 2005 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO 2005 PROGRAMA DE AVES Y ANIMALES DE GRANJA Dirección de Luchas Sanitarias Dirección Nacional de Sanidad Animal Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria 1 �MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO. 2005 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO Prefacio El presente manual de procedimientos fue redactado por el Programa Aves y Animales de Granja de la Dirección de Luchas Sanitarias y revisado en la Dirección de Epidemiología y la Coordinación General de Campo, todas dependencias de la Dirección Nacional de Sanidad Animal. Corresponde mencionar que se han extractado recomendaciones efectuadas por el Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria y otras redactadas por el Dr. Sergio Samus. Finalidad Está dirigido principalmente a los Veterinarios Locales de la Dirección Nacional de Sanidad Animal y a las autoridades provinciales, municipales y nacionales locales encargadas de la aplicación de las normas de policía sanitaria; por tanto, se centra en los principios de la enfermedad, su descripción, aplicaciones de las pruebas de laboratorio, evaluación de sus resultados, atención de sospechas y focos, etc. Policía Sanitaria Esta enfermedad se encuentra incorporada por la Resolución de la Secretaría de Agricultura y Ganadería nº 802 del 18 de Octubre de 1974, al grupo de enfermedades a que se refiere el Articulo 6° del Reglamento General de Policía Sanitaria, reglamentario de la Ley N° 3959 de Policía Sanitaria de los Animales, por lo tanto son de aplicación para la misma las regulaciones previstas en la Ley N° 3959 y su Decreto reglamentario, entre las que se incluye la denuncia obligatoria, interdicción preventiva ante la presencia de casos, vacunación, sacrificio, etc. Características La mixomatosis del conejo es una enfermedad vírica caracterizada por la presentación de múltiples lesiones tisulares mixomatosas; afecta al conejo europeo silvestre Oryctolagus cuiiiculi L. y a los conejos domésticos que de él derivan, así como a conejos americanos del género Sylvilagus, en los que se presenta con carácter enzoótico y siguiendo un curso benigno. El plazo de incubación es de 3-6 días en el curso agudo, y de 2-3 semanas o más tiempo en los cuadros más lentos de la enfermedad. La mixomatosis cursa en su forma epizoóticamente característica, pudiendo ser la morbilidad y mortalidad hasta del 100% al principio de la enfermedad. A medida que progresa el curso epizoótico van disminuyendo las tasas de morbilidad y mortalidad, a la vez que el cuadro patológico se va haciendo poco característico. Las pérdidas económicas provocadas por la mixomatosis 2 �MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO. 2005 pueden ser extraordinariamente elevadas, sobrepasando con frecuencia en el momento cumbre de un brote epizoótico los daños originados por otras epizootias. Esta enfermedad fue descripta en nuestro país en 1919. La transmisión se produce principalmente a través del mosquito. Debido a la aparición estacional de estos insectos, la incidencia de la mixomatosis es mayor en los meses calurosos y húmedos. Etiología La Mixomatosis es una enfermedad vírica, altamente contagiosa; causada por un virus originario del continente americano, distribuida por todo el mundo; que afecta de forma leve al género Sylvilagus; en el que están incluidos los conejos salvajes americanos y las liebres, los cuales salvo raras excepciones son portadores sanos; pero que origina una enfermedad grave en los conejos del género Oryctolagus cuniculus; al que pertenecen las numerosas razas de conejos europeos tanto domésticos como silvestres (incluidas las explotaciones comerciales existentes en nuestro país.) El agente causal de la mixomatosis es un virus DNA de la familia Poxviridae, género Leporipoxvirus, de gran semejanza al virus de la viruela y relacionado antigénicamente con el virus del fibroma de Shope. La mixomatosis del conejo es la enfermedad epidémica más importante del conejo, al menos de las enfermedades que afectan la producción cunícola en nuestro país, y a nivel mundial solo se compara con la Enfermedad Hemorrágica Vírica del Conejo. El agente causal es sensible al formol al 1% (el cual se recomienda para desinfectar el material) y a una temperatura entre los 50 y 60° C. Transmisión El conejo domestico puede contraer la mixomatosis a través de dos vías de contagio: Indirecta, la enfermedad se trasmite principalmente a través de artrópodos hematófagos (mosquitos, tábanos, pulgas, piojos y otros) que actúan como vectores trasmitiendo el virus desde un conejo enfermo a uno sano; también a través de agujas; instrumental utilizado en la inseminación artificial y otros fomites (contacto con material infectado como jaulas, comederos y alimentos contaminados por las secreciones y exudados oculares y nasales de conejos enfermos). Debido a la aparición estacional de estos insectos, la incidencia de la mixomatosis es mayor en los meses calurosos y húmedos (verano y otoño, 3 �MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO. 2005 sujeta a variaciones regionales), cuando se produce mayor aparición de mosquitos. Se han citado como trasmisores varias especies de mosquitos: Culex (C. Annulirostris; C. Fatigans), Aedes y Anopheles. En lugares donde no hay mosquitos se atribuye la trasmisión de la enfermedad a las picaduras de pulgas del conejo, (en EEUU a: Cediopsylla simplex y Odontopsyllus multispinosus; y en Europa a: Spilopsyllus cuniculi) Según investigadores (Jacocot y Vallée) los conejos mixomatosos son capaces de infectar a los mosquitos por espacio de una semana, y que éstos quedan en condiciones de trasmitir la enfermedad a otros conejos, durante dos semanas. Otros insectos como pulgas, piojos y otros simúlidos, parece que sólo pueden trasmitir la enfermedad en forma ocasional. Directa, a través del contacto entre conejos enfermos y susceptibles. El virus puede penetrar a través de la piel y, sobre todo, de las mucosas externas, en especial de la conjuntiva palpebral. Existe la posibilidad de transmisión por vía aerógena en criaderos con poca ventilación o en combinación con otras enfermedades, como por ejemplo la Pasteurellosis. El virus puede trasmitirse también a través del coito, a expensas del virus existente en la región ano-genital de la pareja infectada. También es posible adjudicar la aparición de un brote o foco a la presencia de conejos silvestres portadores, ya que las dos especies, Orictolagus y Sylvilagus, se encuentran en la naturaleza y bien pueden ser quienes mantienen la enfermedad el resto del año. Signos clínicos Las manifestaciones clínicas de la mixomatosis varían de acuerdo a la virulencia de la cepa y la resistencia del animal receptor. Los gazapos menores de un mes aparentemente son resistentes a la enfermedad. Los gazapos que tienen más de un mes de vida y se ven afectados pueden recuperarse pero quedan con deformaciones. Los adultos que enferman por lo general presentan un 95% o más de mortandad. No existe tratamiento alguno para esta enfermedad. El período de incubación promedio es de 3 a 6 días (oscilando entre dos a quince días.) Desde que comienzan los síntomas hasta que sobreviene la muerte, el animal representa una fuente de contagio para todo el criadero. En general se pueden reconocer dos formas clínicas: 4 �MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO. 2005 ⇒ Forma clásica o nodular: luego del período de incubación el conejo presenta edemas y nódulos o mixomas en cara y genitales, posteriormente en el resto del cuerpo. La muerte se produce entre los 10 a 12 días posteriores a la infección. Los síntomas muestran tres localizaciones patognomónicas de la enfermedad: la cara, la región ano-genital y el tejido conjuntivo subcutáneo. La aparición de los síntomas tiene generalmente la siguiente secuencia: 1) 2) 3) 4) 5) Decaimiento Anorexia Secreción nasal serosa. Intensa blefaroconjuntivitis con congestión, edema y exudación. Edema / inflamación de párpados. El globo ocular y la comisura palpebral permanecen cerradas. 6) Conjuntivitis bilateral mucosa conjuntival enrojecida y con intensa secreción serosa y /o mucopurulenta). El edema e inflamación se extiende finalmente a la totalidad de la cabeza. Especialmente se tumefactan los labios, el hocico y la base de las orejas, las cuales se caen por el peso del edema, por lo que la cara toma un aspecto macizo y deforme ( “cabeza de león”). Aparte de los párpados, labios y hocico el edema se desarrolla en zonas de transición entre la piel y las mucosas como la zona ano-genital (vulva, prepucio, escroto y zona perianal aparecen inflamados), también puede haber orquitis. Entre los 5 a 6 días posteriores de detectarse los primeros síntomas, aparecen en diferentes partes del cuerpo, pero esencialmente en cabeza, orejas, hocico, mentón, párpados, espalda y en menor medida en las extremidades, neoformaciones o mixomas – nódulos de consistencia primero dura y luego blanda – gelatinosa, desde el tamaño de un grano de trigo al de una nuez, que crecen notablemente en el interior del subcutáneo (son en realidad las zonas donde se replica el virus y suelen coincidir con el lugar donde el artrópodo picó al conejo y le inoculó el virus). Tres o cuatro días antes de la muerte la delgadez es extrema. Puede haber hipertermia. La morbilidad y mortalidad es alta. ⇒ Forma atípica o respiratoria: en estos casos se presenta la enfermedad con síntomas respiratorios y oculares, sin la presencia de los típicos mixomas, en cuyo caso el diagnóstico clínico es muy difícil. Lesiones 5 �MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO. 2005 Forma clásica o nodular: blefaroconjuntivitis y mixomas (tumoraciones de aspecto gelatinoso, muy ricas en vasos sanguíneos las cuales desprenden gran cantidad de líquido, constituidas por células de tipo mixomatoso). Forma atípica o respiratoria: blefaritis, conjuntivitis, rinitis, hemorragias en pulmones y neumonía complicada con agentes bacterianos secundarios (Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica). En los órganos internos no se observan modificaciones apreciables, sin embargo el bazo y los linfonódulos submaxilares e inguinales pueden presentarse hipertrofiados. Diagnóstico Se efectúa por identificación del agente causal por medio de la inoculación en animal vivo o en cultivo celular, por métodos imunológicos (AGID, IFI) y por microscopía electrónica. También se utiliza CF y ELISA en suero y la histopatología. PROCEDIMIENTOS A ADOPTAR ANTE UN FOCO Protocolización La protocolización de un caso de Mixomatosis es el paso inicial y trascendente por el cual se disparan una serie de procesos, entre los que la epidemiología descriptiva y analítica resultan de importancia capital, y al mismo tiempo la información contenida en ellos conformará el curso de la enfermedad, permitiendo la realización de estudios retrospectivos. Se aplicarán las pautas contenidas en el Manual de Procedimientos de Atención de casos y focos de Enfermedad y además: 1. Proceder a la interdicción 2. Inmovilización de todos los conejos de la explotación en sus lugares de alojamiento. 3. Recuento de todas las categorías de conejos y que para cada una de ellas se precise el número de animales ya muertos, infectados o que puedan estar infectados o contaminados. 4. Prohibición de toda entrada o salida de la explotación de cadáveres de conejos, alimentos de los animales, utensilios u otras materias capaces de transmitir la enfermedad. 5. Si al concurrir al establecimiento se observa una baja morbilidad se procederá a : 5.1. Sacrificio de todos los animales con síntomas de mixomatosis, inclusive aquellos que posean los más leves, como por ejemplo, lagrimeo o conjuntivitis. 6 �MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO. 2005 5.2. La eliminación de cadáveres debe realizarse por medio del enterramiento y posterior cobertura con cal viva o mediante la cremación de los mismos. 5.3. Tener en cuenta que debido al período de incubación, que varía entre 4 a 6 días, aparecerán nuevos casos durante los próximos 6 días, es decir, animales que se deben sacrificar, asimismo se debe suspender la reproducción de los conejos. 5.4. Vacunar a todos los conejos mayores de 40 días que estén en buenas condiciones de salud. 5.4.1. Entre animal y animal cambiar de aguja para no transmitir la enfermedad. 6. En el caso de que la morbilidad supere el 70%, es conveniente proceder al vacío sanitario. 6.1. Para tal caso es factible autorizar por parte del Veterinario Local el traslado con destino exclusivamente a faena en un transporte cerrado y con previo aviso al frigorífico receptor, indicando en el DTA la leyenda “Mixomatosis”. 6.2. Aquellos animales que no serán llevados a faena se sacrificarán de la manera indicada anteriormente. Medidas Profilácticas en el foco: ⇒ Combatir el agente trasmisor (mosquitos) y eventualmente las pulgas. ⇒ Control de pastizales y estancamientos de agua. ⇒ Detener la reproducción de los conejos, no mover los animales, no vender ni ingresar animales de otro lado hasta 15 días después que no aparezcan más casos clínicos. ⇒ Implementar medidas de bioseguridad (pediluvio, rodoluvio, etc.) ⇒ Vacunación, en el caso que correspondiese, tomando la precaución de cambiar la aguja en cada aplicación. Extracción de Muestras Se aplicarán las indicaciones contenidas en el Manual de Procedimientos de Extracción y Envío de Muestras. Se remitirán conejos sospechosos agónicos o muertos de no más de 24 hs. Los conejos enviados para diagnóstico deben estar rigurosamente envueltos en triple bolsa de polietileno para evitar derrames, enfriados y en cajas de telgopor. Se remitirán en todos los casos, acompañados del protocolo de remisión de muestras al Laboratorio de Martinez del Senasa. Desinfección 7 �MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO. 2005 Se aplicarán las pautas contenidas en el Manual de Procedimientos de Desinfección. Para las instalaciones y jaulas se indica el flameado de las mismas y la aplicación de desinfectantes fuertes como formol al 1%, según Manual de Desinfección. Se deben esterilizar las jaulas, accesorios, herramientas, galpones y hacer un descanso del galpón afectado de no menos de 45 días. Levantamiento de la Interdicción: Se procederá al levantamiento de la misma transcurridos 15 días sin que aparezcan más signos clínicos o para el segundo caso, una vez finalizado el descanso del galpón, es decir 45 días. Repoblación La repoblación del criadero debe hacerse solamente con animales vacunados. Además puede usarse el Método del centinela, es decir, antes de repoblar un criadero en el que se efectuó un vacío sanitario se puede colocar un lote de animales testigos o centinelas sin vacunar, y se los observa durante no menos de 18 días, si en este tiempo no aparecieran casos clínicos de la enfermedad podemos suponer que el vacío fue efectivo. Tratamiento: No existen medicamentos ni tratamientos para curar esta enfermedad. Prevención: El procedimiento más eficaz para la prevención de la mixomatosis es la vacunación sistemática de todos los reproductores y reposición a los 45 días de vida, en septiembre octubre y una segunda dosis en febrero a los mismos animales pero sobre todo a los nuevos (reposición de verano). ⇒ Desinsectar el criadero periódicamente, especialmente en primavera, verano y principios de otoño. ⇒ No ingresar animales de otro criadero sin respetar las normas estrictas de cuarentena, lo que implica un período de observación no menor de 30 días durante el cual si apareciese algún o algunos de los síntomas descriptos con anterioridad, es razón suficiente para la eliminación y el no ingreso de esos animales al plantel. Vacunas frente a mixomatosis Existen dos tipos de vacunas a nivel mundial: 8 �MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MIXOMATOSIS DEL CONEJO. 2005 a) Vacuna heteróloga: no se fabrica en el país. a) Vacunas homólogas: son vacunas fabricadas a partir del virus de la mixomatosis. Ambos tipos de vacunas son a virus vivo, es decir, los virus que las componen están vivos, por lo que es imprescindible que para que mantenga su eficacia se deben conservar siempre en refrigeración hasta el momento de su utilización. Como cronograma de vacunación se recomienda la aplicación de una dosis en los meses de septiembre-octubre y otra en febrero-marzo. La vacunación se realiza sobre los animales de reposición y los reproductores. 9 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Manual de procedimientos mixomatosis del conejo Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2005 Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Dirección Nacional de Sanidad Animal Dirección de Luchas Sanitarias Programa de Aves y Animales de Granja Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Manual Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0160 Abstract A summary of the resource. Está dirigido principalmente a los Veterinarios Locales de la Dirección Nacional de Sanidad Animal y a las autoridades provinciales, municipales y nacionales locales encargadas de la aplicación de las normas de policía sanitaria; por tanto, se describe las características y etiología de la Mixomatosis de la enfermedad, su descripción, transmisión, signos clínicos, aplicaciones de las pruebas de laboratorio, evaluación de sus resultados, atención de sospechas y focos, etc. https://biblioteca.senasa.gov.ar/files/original/532c91e7da7e8a3960b4455c14b1f51a.pdf 45927513c980086b9a38b9b19603234a PDF Text Text ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 Manual de Procedimientos Arteritis Viral Equina Prefacio: El presente manual de procedimientos fue redactado por la Dirección de Luchas Sanitarias, a cargo del Dr. Marcelo de la Sota y el Programa de Enfermedades de los Equinos a cargo del Dr. Raúl González, el mismo cuenta con la revisión de la Comisión Nacional de Enfermedades de los Equinos Finalidad El presente manual se dirige principalmente a los Veterinarios Acreditados, privados, sectores interesados en la producción equina y a las autoridades provinciales, municipales y nacionales locales encargadas de las acciones sanitarias contra la AVE; por tanto, se centra en los principios de la enfermedad, descripción, aplicaciones de las pruebas de laboratorio, en la evaluación de sus resultados, atención de sospechas, focos y casos de infección. Arteritis Viral Equina Características La arteritis viral equina(AVE) es una enfermedad vírica general y febril de los équidos. A pesar de su elevada morbilidad, exhibe una baja mortalidad (inferior al 5%). El plazo de incubación es de 3-14 días. La OIE determina que el período de infecciosidad de la arteritis viral equina es de 28 días para las yeguas y los caballos castrados Esta enfermedad reviste especial importancia en las yeguadas, puesto que en ellas pueden abortar hasta el 80% de todas las yeguas gestantes del efectivo. Sin embargo, predominan generalmente los cursos latentes, con apariciones esporádicas de la enfermedad en animales aislados. Presentación El virus está presumiblemente muy difundido. Se ha informado sobre la existencia de casos en USA, Europa (salvo Alemania, Checoslovaquia, Hungría, Rumania y Bulgaria), India y algunos países africanos. Japón y Australia se consideran libres de esta enfermedad. En Argentina, sobre fines de 1997 se comienza a realizar la contraprueba serológica de equinos y material reproductivo importados, y en abril de 1998 se detecta un semen importado positivo, lo que derivó en la destrucción del mismo y la intervención oficial de los dos haras de destino involucrados. En octubre de 1998, ingresan tres padrillos importados certificados negativos en origen, resultando en las contrapruebas uno de ellos positivo serológico. Se 1 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 interviene oficialmente, el establecimiento - único afectado en todo el país - fue interdictado y puesto bajo saneamiento oficial. En este contexto, tres padrillos de este establecimiento fueron confirmados por prueba biológica como eliminadores y fueron retirados de la actividad reproductiva. Como resultado de la investigación epidemiológica se estableció que el posible ingreso del virus al establecimiento se produjo a través de un equino importado en el año 1997 que fue incorporado al plantel de sementales. El virus es aislado en diciembre de 2001 del semen conservado de uno de los padrillos eliminadores. La enfermedad solo ha sido detectada en un número reducido de establecimientos y solo pudo confirmarse en ellos hallazgos serológicos sin síntomas reproductivos ni respiratorios Sintomatología Sus síntomas principales son: apatía, conjuntivitis, flujo ocular y nasal seroso, edema en el bajo vientre y extremidades, y aborto en las yeguas gestantes. Estos síntomas se asemejan a los de la rinoneumonitis, si bien aparecen más marcados en el animal afectado La AVE cursa generalmente en forma benigna, con poca o ninguna fiebre, evoluciona espontáneamente sin dejar secuelas y deja inmunidad duradera: el equino que enfermó una vez ya no vuelve a contagiarse. En razón de los síntomas leves es común que pase desapercibida en animales a campo e incluso raramente se diagnostica en equinos bajo cuidados intensivos, los síntomas desaparecen en menos de 2 semanas. La enfermedad preocupa pues puede tener consecuencias graves para la reproducción: si una yegua enferma contagia a sus congéneres preñadas éstas pueden abortar. Fue justamente por esta grave complicación que la arteritis viral fue descubierta y definida en USA: ocurrieron “tormentas de abortos” en haras de trotadores americanos y luego de SPC y en ellos se aisló e identificó al virus causante, responsable de los abortos. No siempre la infección de la yegua preñada produce abortos, y cuando se producen, generalmente ocurren en yeguas que tienen 3 a 10 meses de preñez. En nuestro país, en los haras en los que se registraron hallazgos serológicos no se registraron descensos en el porcentaje de potrillos nacidos. En Europa tampoco acusan tener abortos atribuibles al virus de la AVE; tampoco en Norte América el virus produce siempre abortos. Diagnóstico Atendiendo a las manifestaciones clínicas, la AVE puede diferenciarse bastante 2 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 bien de las afecciones respiratorias de origen vírico que afectan al caballo (entre otros signos, son patognomónicos los edemas de párpados y extremidades), pero sólo con dificultad de la forma abortiva de la rinoneumonitis. Por ello, el diagnóstico de «arteritis infecciosa» del caballo se considera únicamente asegurado cuando se evidencia la presencia del virus causal, el cual es vertido al exterior con las secreciones serosas durante las fases agudas de la enfermedad. La arteritis viral se diagnostica con facilidad en el laboratorio con la prueba de seroneutralización que puede determinar si un animal ha tenido contacto con el virus. Esta prueba mide la presencia de anticuerpos contra el virus, que son justamente los que producen la protección contra una nueva infección. Así, si el caballo se contagió y curó, queda positivo en esa prueba, posiblemente para toda la vida, y él título de anticuerpos queda alto y constante; lo que significa que el equino está inmune y no volverá a enfermar. Si está recién contagiado y se hace una prueba antes del contagio que resulta negativa, pero 2 o más semanas después se hace positiva, el animal ha enfermado recientemente; por esto cuando se importan caballos éstos deben permanecer 3 semanas en el lazareto, para descartar que se hayan contagiado poco antes del viaje. En países endémicos, si el animal fue vacunado, la prueba arroja resultado positivo, pero él título es generalmente más bajo y puede descender con el tiempo si no se lo revacuna. Un padrillo serológicamente positivo puede ser portador o no. Si lo es, esto debe saberse antes de que sirva a una sola yegua y la contagie y, a través de ella, a muchos caballos más: esto se determina fácilmente buscando la presencia del virus en el semen, por PCR o aislamiento del virus o por medio de una prueba biológica, o sea, dando servicio a dos yeguas con serología negativa y repitiendo la prueba serológica 3 o 4 semanas después en esas yeguas: si siguen siendo negativas, significa que no se infectaron porque el padrillo no elimina virus en el semen. Los brotes de AVE que se producen en un haras a partir de uno o más servicios de un padrillo portador y eliminador, muchas veces desaparecen y se extinguen por si solos en poco tiempo. Etiología El virus RNA de la AVE antes se lo clasificaba como Togaviridae, ahora como Orden Nidovirales, Familia arteriviridae, Género arterivirus. Este virus parece ser serológicamente uniforme y genéticamente estable. Exhibe sólo escasa resistencia frente a las influencias ambientales y es sensible a todos los desinfectantes comerciales ordinarios. Algunas de las cepas de virus que actúan son más agresivas que otras. 3 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 Reservorios del virus: El virus causal de la AVE está muy adaptado a los équidos y tiene su reservorio exclusivamente en las poblaciones hospedadoras infectadas. Por ello, la principal fuente de contagio es el caballo excretor de virus. Transmisión: La transmisión se produce únicamente por contacto directo (luchas por establecer el dominio del grupo; coito) y aerógeno (infección por gotitas). Los insectos hematófagos no son capaces de transmitir las altas dosis necesarias para que se produzca el contagio, por lo que carecen de significación en el proceso epizoótico de la AVE. Los brotes de AVE se producen porque la enfermedad se transmite por vía aérea como otras enfermedades respiratorias, es decir de un animal a otro con el cual convive y a veces, indirectamente, con los que comparte bebederos, comederos, embocaduras, camas, caballerizo u otros elementos; la infección se transmite durante el periodo de incubación y de enfermedad clínica. De esta manera, una yegua que ha sido servida por un padrillo eliminador puede contagiar a todos los animales de la manada, incluyendo potrillos y potrancas, y también puede contagiar a animales de lotes vecinos o a caballos de trabajo o incluso en training. Esta es la forma en que una yegua puede contagiar a un padrillo, si, por ejemplo, se echa en una manada con padrillo, una yegua que ha sido servida poco tiempo antes por un padrillo portador y que tiene la enfermedad activa en el momento de entrar a la manada. Es decir, si un padrillo contagia a una yegua, ésta puede contagiar a todos los equinos del establecimiento, de cualquier edad o sexo, sin que medie acto sexual alguno. Población hospedadora: Son susceptibles los équidos de todas las edades y sexos. Tanto la superación de la enfermedad como las infecciones latentes generan una sólida inmunidad de varios años de duración, que incluso puede persistir toda la vida. Esta inmunidad protege frente a una nueva enfermedad, pero no garantiza que los animales convalecientes estén exentos de virus. Estado de portador En los padrillos que enferman luego de la pubertad (es decir, de un año o más de edad), el virus puede quedarse acantonado y viable en las glándulas sexuales accesorias, eliminarse con el semen y contagiar así a una yegua durante el servicio; es decir, el padrillo se convierte en un portador sano y puede contagiar, pero sólo por el acto sexual y solamente a las yeguas que no han padecido la enfermedad anteriormente. 4 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 En razón de lo anterior, se la considera una enfermedad venérea, pero no lo es realmente en todo el sentido etimológico de la palabra ya que la hembra no contagia al macho por el acto sexual. Nunca se encontró virus persistente en las yeguas, ni en los machos castrados o los machos enteros que se contagiaron antes de la madurez sexual. No todos los machos serológicamente positivos, es decir que se contagiaron y curaron, son necesariamente eliminadores. Por de pronto, la persistencia del virus depende de la presencia de testosterona, hormona que produce el testículo a partir de la pubertad, por lo que los potrillos que enferman antes del año de edad no se convierten normalmente en portadores. Entre los machos enteros que enferman después de la pubertad, mas del 40 o 60 % de ellos no quedan como portadores; no se ha demostrado hasta ahora que un padrillo que no elimina virus enseguida después de la enfermedad lo elimine un tiempo después, pero no se puede estar absolutamente seguro de que esto sea así. Un padrillo portador elimina cantidades muy grandes de virus en cada eyaculación y contagia al menos al 85% de las yeguas que sirve, salvo que sean inmunes. Pese a que puede haber ligeras variaciones en la cantidad de virus que se elimina según la época del año, un padrillo-portador contagia durante todo el año. Además, el virus de la AVE resiste el congelamiento: el semen congelado de un padrillo portador contagia tanto como el semen fresco. Se ha discutido sobre si los padrillos que si eliminan virus inmediatamente después del contagio pueden llegar a hacerse no infectantes con el tiempo. Si bien se demostró que algunos padrillos eliminan virus por un período muy corto, otros lo hacen permanentemente durante toda la vida por lo que hasta tanto existan más pruebas al respecto todo padrillo positivo debe considerarse de riesgo. Yeguas Positivas Las yeguas positivas, ya sean importadas o provenientes de otro predio, significa que han enfermado y curado y por lo tanto no se va a volver a infectar, ni siquiera si la sirve un padrillo portador y no va a contagiar a un padrillo sano ni a sus compañeras de manada. Estas son las yeguas que se utilizan en países endémicos para hacer servir con padrillos portadores sanos. Tampoco debemos tener miedo a su potrillo, aunque sea hijo de una madre positiva o de un padrillo portador: el contagio “in útero” es rarísimo. Si hemos enviado una yegua a servicio a un haras o a un centro de inseminación en el que luego se detectó un brote, sí debemos tomar precauciones a su regreso, en realidad son las precauciones que deberíamos tornar con todos los animales que ingresan o reingresan a un predio, cualquiera 5 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 fuera su origen, efectuando una cuarentena con él o los equinos aislados en un corral o piquete propio y realizando doble prueba serológica con dos semanas de intervalo entre ellas para verificar paridad o descenso de títulos entre ambas. Las yeguas negativas, que provienen de un haras en el cual sospechamos que puede haber virus activo o latente son las más peligrosas. A estas debemos exigirle una cuarentena con dos pruebas separadas por dos semanas, en que la segunda no tenga un título mayor que la primera. Cuando en los casos descriptos, el título esta subiendo, quiere decir que la yegua se contagió recientemente. Entonces hay que esperar otras dos semanas, repetiendo hasta que se estabilice el título, lo que nos asegura que ya está curada y que no va a contagiar más. Es decir que ante cualquier sospecha debemos actuar como se hace con los caballos que se importan: si son negativos, dos pruebas separadas por 15 días, ambas negativas. Si son positivos, una segunda prueba, que debe dar un resultado igual o menor que el primero, lo que nos asegura la curación e inmunidad del animal. Prevención y lucha Cuando se producen movimientos de caballos deportivos o reproductores que van más allá de las fronteras, los efectivos equinos libres de AVE se ven especialmente amenazados por animales con la infección latente. Por ello, la finalidad de las medidas de lucha contra la AVE es reducir sobre todo el riesgo de que se introduzca el virus en la población, así como aislar de manera inmediata y radical cualquier brote de AVE que se produzca. La República Argentina está en condiciones de sostener el sistema de declaración obligatoria y monitoreo permanente y de garantizar a sus países compradores la ausencia de riesgo sanitario para lo cual se cumple con la aplicación de las medidas previstas en los artículos 3.4.10.2 y 3.4.10.3 del Capítulo 3.4.10, parte 3, del Código Zoosanitario Internacional (ver más adelante). Medidas a adoptar en los brotes de arteritis infecciosa Cuando aparezcan manifestaciones clínicas que permiten sospechar la existencia de AVE, se aislará de inmediato el efectivo y se procurará aclarar el diagnóstico por procedimientos anatomopatológicos, virológicos y serológicos. Debido a la baja contagiosidad de la AVE, al contrario de lo que sucede en la influenza A y en la rinoneumonitis, resulta conveniente en todos los casos efectuar rápidamente el aislamiento de los caballos enfermos y de los animales que estuvieron en contacto inmediato con ellos. La limpieza y desinfección a fondo de las cuadras ocupadas por los équidos enfermos, acompañadas de una desinfección intermedia diaria en la zona de aislamiento, evitan la difusión del virus en el seno del establecimiento. El grupo 6 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 de animales aislados será cuidado por personal independiente. Reduciendo al mínimo los esfuerzos corporales del núcleo de caballos enfermos, creando unas condiciones ambientales óptimas y adoptando medidas generales de higiene veterinaria, pueden disminuirse tanto la predisposición y exposición de la fracción no enferma de la población, llegándose a un momento en el que ya no aparecen más casos. El secuestro de los efectivos y el aislamiento de los animales convalecientes sólo pueden levantarse como mínimo 6 semanas después de desaparecer la fiebre en el último caso clínico. No obstante lo dicho, dependiendo del número de animales, el manejo, la cercanía entre lotes, las oportunidades de infección entre grupos de diferentes edades o sexos y, por sobre todo, del movimiento interno de animales en el haras, el virus puede ir pasando lentamente entre individuos o grupos de individuos y quedar activo en el campo durante un tiempo más o menos prolongado. Para evitar esto, cuando hubo un brote, lo mejor es, a. realizar una primera prueba serológica en todos los equinos del predio dentro de un plazo no mayor a 30 días corridos, b. de acuerdo a lo hallado separar los animales en grupos de positivos y negativos y c. impedir en este período todo movimiento interno de equinos, no sólo de los que entran o salen, sino de los grupos entre ellos y de un potrero a otro. Si después de seis semanas, se realizan nuevos estudios serológicos en los animales previamente negativos y no ha aparecido un caso nuevo, es decir ninguno de los negativos se hizo positivo, es posible que el virus haya desaparecido. La única manera de asegurarse de que un brote se ha extinguido definitivamente en un campo, es controlar serológicamente en forma repetida a los animales y asegurarse de que no están apareciendo casos nuevos. Hay que controlar a todos los animales, especialmente a todos los machos, nacidos o criados en el haras, hasta asegurarse de que no hay casos nuevos, y eliminar constantemente a los machos enteros positivos. Acciones preventivas 9 Conozca la enfermedad. Sepa qué es la AVE y como se transmite. Se dará cuenta que puede ser fácilmente controlada si se toman ciertas precauciones y se actúa con seriedad y honestidad. 9 Manténgase informado: averigüe cuáles son los haras o establecimientos en los que hay o hubo virus activo y si se ha eliminado el brote o no. 9 Realice controles periódicos entre sus animales. 9 Controle anualmente sus padrillos antes de dar el primer servicio de la temporada, aunque SENASA sólo lo exige al presentar la declaración de servicios. 9 No use ninguna partida de semen importado que no haya sido debidamente controlada por SENASA. 7 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 9 Recuerde que un padrillo positivo contagia a las hembras por vía sexual, pero la enfermedad se disemina después por vía aérea. Qué hacer si quiere servir su yegua con un padrillo de otro haras. Debe asegurarse no sólo de que el padrillo sea negativo sino también de que ese haras no tuvo nunca un brote de AVE o que, si lo ha tenido, éste a sido perfectamente controlado y no siguen apareciendo animales positivos. Si se tienen dudas, y si tiene la infraestructura necesaria, puede adquirirse el semen del padrillo que interesa y realizar la inseminación artificial en el campo, pero previamente debe realizarse una prueba biológica con el semen adquirido dando servicio a dos yeguas con serología negativa y repitiendo la prueba serológica 4 semanas después en esas yeguas que deberán seguir siendo negativas. Que hacer si quiere enviar su yegua a un centro de inseminación o transferencia. Estos centros ponen en contacto a muchas yeguas y pueden ser el origen de la diseminación de la enfermedad. Debe asegurarse de que en ese centro no utilicen semen de padrillos positivos ni vayan yeguas provenientes de un haras con virus activo. De todas maneras, al volver del centro se mantendrá aislada y se le realizarán dos pruebas serológicas separadas por 14 días. Si ambas son negativas o con títulos iguales o decrecientes se puede juntar la yegua con sus compañeras. Si la segunda tiene un título más alto que la primera, se dejará la yegua aislada y se realizarán nuevos controles hasta que el título no suba más. Qué hacer si le envían yeguas a servir a su haras. Si la yegua tiene un resultado positivo en un análisis que tenga más de un mes de realizado no existe riesgo sanitario. Esta yegua ya enfermó y curó y no va a volver a enfermar ni va a contagiar a otras yeguas ni al padrillo del establecimiento. Ante la duda, se solicitará un segundo análisis, el que debe mostrar titulo igual o menor que el primero. Si la yegua es negativa a una sola prueba, en todos los casos se debe exigir una segunda prueba separada por 15 días y confirmar que sigue siendo negativa. Medidas ante la sospecha de infección (hallazgo de serología) 9 Notificar al veterinario local de la Dirección Nacional de Sanidad Animal 9 Interdicción del predio. 9 Inmovilizar la totalidad de los equinos dentro del predio, aislar a los padrillos de todos los otros caballos, machos o hembras. 9 Realizar el control serológico del total de los animales. 9 Efectuar la correspondiente investigación epidemiológica. 8 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 Procedimiento y Acciones Se indican los procedimientos y acciones que deberán llevarse a cabo ante la detección de un equino positivo serológico a la AVE: 1) INTERDICCIÓN preventiva del establecimiento bajo acta, con estricta prohibición de todo tipo de ingresos y egresos de equinos. 2) PADRILLOS: La totalidad de los padrillos serán sangrados oficialmente de inmediato (dos muestras de suero por animal con intervalo mínimo de 14 días) y los sueros remitidos exclusivamente al Laboratorio de SENASA. Los positivos serológicos (a una prueba y cualquier título), serán retirados de su actividad reproductiva y sometidos dentro de los 30 días a una prueba biológica (servicio a dos yeguas seronegativas con tomas de muestras antes y a los 28 días del servicio) ó de PCR en semen. 3) RELEVAMIENTO Y ENCUESTA: a) IDENTIFICACIÓN: Todas las existencias equinas deberán estar identificadas o identificarse de manera fehaciente, debiendo controlarse periódicamente la existencia total y las filiaciones (en forma aleatoria) mientras dure la interdicción. b) ORIGEN DE LOS INDIVIDUOS: el propietario o responsable a cargo, deberá proveer información de cada equino residente respecto de: I. El origen de cada equino (nacido en el establecimiento o en su defecto procedencia y año de ingreso). II. Si es producto de servicio natural (aclarar: padrillo propio o de terceros) o de inseminación artificial (en este caso, si el semen: nacional o importado). III. Identificación del padre o dador seminal. c) MOVIMIENTOS realizados en los últimos 6 (SEIS) meses: Se informará, los ingresos y egresos registrados en la oficina local si los hubiere y los que declare el propietario o responsable. d) ANTECEDENTES SANITARIOS: recabar información sobre cualquier registro de casos clínicos en los últimos 6 (seis) meses (con particular atención en antecedentes de cuadros respiratorios o reproductivos). De constatarse signos/síntomas, se deberá tomar contacto con los laboratorios habilitados para la adecuada remisión de muestras específicas (tejidos fetales, hisopados, etc.). 4) FIN DE LA INTERDICCIÓN: Se basará en los resultados de un doble sangrado de la totalidad de los equinos en el cual no se registre ningún caso de seroconversión. El momento para la recolección de los sueros será planificada por el propietario y deberá ser realizada dentro de un período de 30 días corridos (con 15 días de diferencia entre extracciones) y ambos análisis efectuarse en un mismo laboratorio habilitado a elección del propietario. Estas pruebas serán cargo del propietario. Las extracciones y la remisión de las muestras serán fiscalizadas oficialmente. 9 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 Obtenidos los resultados, la Oficina local los remitirá a la Dirección de Luchas Sanitarias quien comunicará el fin de la interdicción si corresponde. 4) EGRESOS OCASIONALES: hasta tanto se cumpla con la condición anterior y durante el tiempo que dure la interdicción, solo se autorizarán egresos de equinos lo que se hará bajo las siguientes pautas: a) Solicitud por escrito a la Oficina Local con treinta días de anticipación expresando los motivos, la que deberá ser autorizada por la Dirección de Luchas Sanitarias. b) Autorizado el egreso, se deberá expedir una Certificación conjunta del veterinario oficial y del veterinario responsable del establecimiento en laque conste: I. Aislamiento riguroso de los equinos. Para esto se asignará un corral/ potrero situado a más de 100 metros para realizar la cuarentena. II. Que el lote cumplió en forma efectiva con un período mínimo de aislamiento de 30 días, período dentro del cual fueron extraídas las dos muestras de suero por equino (con intervalo mínimo de 14 días) para diagnóstico de Arteritis Viral. III. Que no han manifestado ningún signo / síntoma de enfermedad infecto contagiosa, en los últimos 30 días los equinos del lote IV. Que la curva térmica individual, se mantuvo dentro de parámetros fisiológicos normales y fue realizada diariamente durante 14 días previos al despacho V. Ningún equino de la totalidad del lote presentó incrementos de títulos mayores a 2 (dos) diluciones en ambas pruebas. VI. En caso de ser padrillos solo podrán egresar con resultado negativo en ambas pruebas. Laboratorios Habilitados Para Arteritis Viral Equina: Laboratorio SENASA, Virología: Tel 4836-0062/1114, Fax 4836-1995/0065 e-mail: dilab@inea.com.ar. Contacto: Dra. Mónica Ayerbe. 2) INTA – Castelar: Tel 4621-1447, Fax 4621-1743 Contacto: Dra. María Barrandeguy. Area de Virología. e-mail: mbarrandeguy@cicv.inta.gov.ar 3) FCV de la Universidad de La Plata, Virología: Tel 0221-4236664, Fax 0221/-4253276. Contacto: Dr. Edgardo Nosetto. e-mail: nosetto@fcv.medvet.unlp.edu.ar 4) CEVAN – CONICET: Tel 4856-4495, Fax 4856-4495. e-mail: jltcevan@datamar.com.ar. Contacto: Dra. Marcela Iglesias. 10 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 Legislación aplicable: RESOLUCIÓN SENASA N° 434/01 BUENOS AIRES, 2 de octubre de 2001 VISTO el expediente Nº 10597/2001 del registro del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, y CONSIDERANDO: Que por el mencionado expediente la Dirección Nacional de Sanidad Animal propicia la continuación y adopción de nuevas acciones de Vigilancia Epidemiológica y Monitoreo Epidemiológico Permanente, con respecto a la Arteritis Viral Equina. Que oportunamente se cumplimentó lo dispuesto por la Resolución Nº 603 del 10 de junio de 1999 del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, efectuada en equinos machos enteros y sólo sobre algunas razas. Que está comprobado epidemiologicamente que los padrillos actúan como portadores asintomáticos y que, en esta condición, son la principal fuente de diseminación de la enfermedad. Que los resultados del relevamiento serológico efectuado, determinaron la inexistencia de reactores en el grupo testeado, pero que aún persiste la probabilidad de ingreso del virus de la Arteritis Viral Equina al país, como así también que otros padrillos importados podrían haber estado naturalmente expuestos. Que la Comisión Nacional de Sanidad Equina, a través de sus representantes, ha manifestado preocupación y ha solicitado la continuación de las acciones de Vigilancia Epidemiológica activa, incluyendo un amplio y detallado diagnóstico de situación, que complemente lo ya actuado al respecto. Que la Dirección de Asuntos Jurídicos ha tomado la intervención que le compete. Que la Comisión Nacional de Sanidad Equina, creada por Resolución Nº 80 del 19 de enero de 1999 del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, se ha expresado favorablemente sobre el particular. Que corresponde en consecuencia dictar las normas que permitan continuar el conjunto de acciones iniciadas que propendan al cumplimento del objetivo citado en el primer considerando. Que el suscripto es competente para resolver en esta instancia de conformidad 11 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 con las atribuciones conferidas por el artículo 8º, inciso e) del Decreto Nº 1585 de fecha 19 de diciembre de 1996, modificado por su similar Decreto Nº 394 del 1º de abril de 2001. Por ello, EL PRESIDENTE DEL SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA RESUELVE: ARTICULO 1º - Las entidades privadas responsables del registro de las distintas razas equinas, exigirán a las personas físicas o jurídicas, responsables o propietarias de padrillos o su material seminal, sea éste de equinos nativos o semen importado, el diagnóstico de laboratorio que acredite el resultado negativo a una prueba de seroneutralización a la enfermedad "Arteritis Viral Equina", como condición previa al registro anual de servicios. ARTICULO 2º - En los casos en que un padrillo dador del material seminal resultara positivo a la prueba de seroneutralización y, a efectos de comprobar que no elimina el virus de la Arteritis Viral Equina por semen, se realizará bajo supervisión oficial una prueba biológica consistente en el servicio (natural o artificial) de DOS (2) yeguas con resultado negativo a la prueba de seroneutralización, en las que se deberá observar igual título serológico en los resultados de las pruebas efectuadas a los VEINTIOCHO (28) días de servidas o inseminadas. ARTICULO 3º - Si el servicio que se registra fuera realizado con semen importado ingresado al país con anterioridad al 31 de diciembre de 1997 o proviene de padrillos nativos fallecidos, se efectuará la prueba biológica en los términos descriptos en el artículo precedente. ARTICULO 4º - La remisión de muestras de suero o semen a los laboratorios, se efectuará en el formulario que, como Anexo, forma parte de la presente resolución. En el formulario y a título de Declaración Jurada, certificarán con su firma, sello aclaratorio y número de matrícula, tanto el profesional veterinario que extrajo la muestra, como el laboratorista que certifica el resultado diagnóstico y, asimismo el propietario o responsable del equino, dando fe de los datos consignados. ARTICULO 5º - Los únicos laboratorios habilitados para realizar las pruebas de seroneutralización serán los expresamente autorizados por la Dirección de Laboratorios y Control Técnico de este Servicio Nacional, para el diagnóstico específico de esta enfermedad. ARTICULO 6º - Los responsables de los laboratorios remitirán a la Dirección Nacional de Sanidad Animal del SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA, las copias de las certificaciones emitidas con resultado negativo en forma mensual, mientras que los diagnósticos positivos que eventualmente surjan deberán ser notificados en forma fehaciente, a la 12 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 misma dependencia oficial, dentro de las SETENTA Y DOS (72) horas subsiguientes a su hallazgo. ARTICULO 7º - Los padrillos que resulten positivos a la prueba de eliminación de virus por semen, serán retirados de la actividad reproductiva, pudiendo el propietario optar por el sacrificio o castración y, de tratarse de material seminal infectante, se procederá a la destrucción de la totalidad de las existencias del mismo. Estas acciones, de corresponder, serán llevadas a cabo bajo la supervisión y registro de personal afectado al SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD Y CALIDAD AGROALIMENTARIA. ARTICULO 8º - El incumplimiento de las obligaciones emergentes de las normas establecidas en la presente resolución, será pasible de las sanciones previstas en el artículo 18 del Decreto Nº 1585 del 19 de diciembre de 1996 y concordantes. ARTICULO 9º - La presente resolución entrará en vigencia a partir de su publicación en el Boletín Oficial. ARTICULO 10. - Comuníquese, publíquese, dése a la Dirección Nacional del Registro Oficial y archívese. Bernardo G. Cané RESOLUCION Nº 434/01 13 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 Código Zoosanitario Internacional - OIE: CAPÍTULO 2.5.10. ARTERITIS VIRAL EQUINA Artículo 2.5.10.1. El período de infecciosidad de la arteritis viral equina es de 28 días para las yeguas y los caballos castrados. Se comprobará la condición sanitaria de los sementales seropositivos para cerciorarse de que no segregan el virus de la arteritis viral equina con el semen. Las normas para las pruebas de diagnóstico y las vacunas están descritas en el Manual. Artículo 2.5.10.2. Las Administraciones Veterinarias de los países importadores deberán exigir: para los équidos machos no castrados importados temporalmente para la reproducción o importados definitivamente la presentación de un certificado veterinario internacional en el que conste que los animales: 1. no presentaron ningún signo clínico de arteritis viral equina el día del embarque ni durante los 28 días anteriores al embarque; 2. resultaron negativos a dos pruebas de diagnóstico para la detección de la arteritis viral equina efectuadas durante los 28 días anteriores al embarque a partir de muestras sanguíneas que se tomaron con más de 14 días de intervalo, o 3. resultaron negativos a una prueba de diagnóstico para la detección de la arteritis viral equina efectuada a partir de una muestra sanguínea que se tomó entre los 6 y los 12 meses de edad, y fueron inmediatamente vacunados contra la enfermedad y revacunados periódicamente, o 4. resultaron positivos a una prueba de diagnóstico para la detección de la arteritis viral equina y: a) fueron acoplados a dos yeguas que resultaron negativas a dos pruebas de diagnóstico efectuadas a partir de muestras sanguíneas; la primera muestra sanguínea se tomó el día de la monta y la segunda 28 días después, b) o su semen, tomado durante los 28 días anteriores al 14 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 embarque, resultó negativo a una prueba de aislamiento del virus (actualmente en estudio). Artículo 2.5.10.3. Las Administraciones Veterinarias de los países importadores deberán exigir: para los équidos machos no castrados importados temporalmente para fines distintos de la reproducción, y para équidos que no sean machos no castrados la presentación de un certificado veterinario internacional en el que conste que los animales: 1. no presentaron ningún signo clínico de arteritis viral equina el día del embarque ni durante los 28 días anteriores al embarque; 2. presentaron ausencia de anticuerpos o estabilidad o disminución de los títulos de anticuerpos en dos pruebas de diagnóstico efectuadas durante los 28 días anteriores al embarque a partir de muestras sanguíneas que se tomaron con más de 14 días de intervalo; 3. resultaron negativos a una prueba de diagnóstico para la detección de la arteritis viral equina efectuada a partir de una muestra sanguínea que se tomó entre los 6 y los 12 meses de edad, y fueron inmediatamente vacunados contra la enfermedad y revacunados periódicamente. Artículo 2.5.10.4. Las Administraciones Veterinarias de los países importadores deberán exigir: para el semen fresco la presentación de un certificado veterinario internacional en el que conste que los sementales: 1. permanecieron, durante los 30 días anteriores a la toma del semen, en una explotación en la que ningún équido presentó signos clínicos de arteritis viral equina durante ese período; 2. no presentaron ningún signo clínico de arteritis viral equina el día de la toma del semen; 3. resultaron negativos a una prueba de diagnóstico para la detección de la arteritis viral equina efectuada a partir de una muestra sanguínea que se tomó entre los 6 y los 12 meses de edad, y fueron inmediatamente vacunados contra la enfermedad y revacunados periódicamente, o 4. resultaron negativos a una prueba de diagnóstico para la detección 15 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 de la arteritis viral equina efectuada durante los 14 días anteriores a la toma del semen a partir de una muestra sanguínea y no fueron utilizados para la monta natural entre el momento de la toma de sangre y el de la toma del semen, o 5. resultaron positivos a una prueba de diagnóstico para la detección de la arteritis viral equina, y: a) fueron acoplados, durante el año anterior a la toma del semen, a dos yeguas que resultaron negativas a dos pruebas de diagnóstico efectuadas a partir de muestras sanguíneas; la primera muestra sanguínea se tomó el día de la monta y la segunda 28 días después, b) o su semen, tomado durante el año anterior a la toma del semen destinado a la exportación, resultó negativo a una prueba de aislamiento del virus (actualmente en estudio). Artículo 2.5.10.5. Las Administraciones Veterinarias de los países importadores deberán exigir: para el semen congelado la presentación de un certificado veterinario internacional en el que conste que los sementales: 1. no presentaron ningún signo clínico de arteritis viral equina el día de toma del semen; 2. resultaron negativos a una prueba de diagnóstico para la detección de la arteritis viral equina efectuada a partir de una muestra sanguínea que se tomó más de 14 días después de la toma del semen, o 3. resultaron negativos a una prueba de diagnóstico para la detección de la arteritis viral equina efectuada a partir de una muestra sanguínea que se tomó entre los 6 y los 12 meses de edad, y fueron inmediatamente vacunados contra la enfermedad y revacunados periódicamente, o 4. resultaron positivos a una prueba de diagnóstico para la detección de la arteritis viral equina y: a) fueron acoplados, durante el año anterior a la toma del semen o lo antes posible después de dicha toma, a dos yeguas que resultaron negativas a dos pruebas de diagnóstico efectuadas a partir de muestras sanguíneas; la primera muestra sanguínea se tomó el día de la monta y la segunda 28 días 16 �ARTERITIS VIRAL EQUINA. MARZO 2003 después, b) o su semen, tomado durante el año anterior a la toma del semen destinado a la exportación, o el mismo semen destinado a la exportación, resultó negativo a una prueba de aislamiento del virus (actualmente en estudio). 17 � Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Publicaciones SENASA Dublin Core The Dublin Core metadata element set is common to all Omeka records, including items, files, and collections. For more information see, http://dublincore.org/documents/dces/. Title A name given to the resource Manual de Procedimientos Arteritis Viral Equina Publisher An entity responsible for making the resource available Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 2003 Language A language of the resource Es Type The nature or genre of the resource Monografía Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context B.S.0036 Abstract A summary of the resource. El presente manual se dirige principalmente a los veterinarios acreditados, privados, sectores interesados en la producción equina y a las autoridades provinciales, municipales y nacionales locales encargadas de las acciones sanitarias contra la AVE; por tanto, se centra en los principios de la enfermedad, descripción, aplicaciones de las pruebas de laboratorio, en la evaluación de sus resultados, atención de sospechas, focos y casos de afección. Enfermedades de los Equinos